2022pcr考試試題及答案

一、單項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的創(chuàng)始人是（）A.穆利斯B.沃森C.克里克D.桑格2.PCR反應(yīng)體系中不包括（）A.模板DNAB.dNTPC.限制性內(nèi)切酶D.Taq酶3.下列哪種堿基不是構(gòu)成DNA的堿基（）A.AB.UC.GD.C4.PCR反應(yīng)的基本步驟不包括（）A.變性B.復(fù)性C.延伸D.轉(zhuǎn)錄5.Taq酶的特點是（）A.耐高溫B.耐低溫C.催化效率低D.特異性差6.引物的長度一般為（）A.5-10bpB.10-15bpC.15-30bpD.30-50bp7.以下哪種物質(zhì)可以作為PCR反應(yīng)的模板（）A.蛋白質(zhì)B.RNAC.多糖D.脂肪8.PCR技術(shù)主要用于（）A.基因克隆B.蛋白質(zhì)表達C.細胞培養(yǎng)D.組織切片9.退火溫度一般比引物的Tm值低（）A.1-2℃B.3-5℃C.5-10℃D.10-15℃10.進行PCR反應(yīng)的儀器是（）A.離心機B.移液器C.PCR儀D.酶標(biāo)儀答案：1.A2.C3.B4.D5.A6.C7.B8.A9.B10.C二、多項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)體系包含以下哪些成分（）A.模板DNAB.引物C.dNTPD.Taq酶E.緩沖液2.影響PCR反應(yīng)的因素有（）A.模板濃度B.引物設(shè)計C.退火溫度D.循環(huán)次數(shù)E.Taq酶活性3.引物設(shè)計的原則包括（）A.長度適宜B.GC含量合理C.避免引物二聚體D.特異性強E.3'端不能互補4.以下哪些可以作為PCR的模板來源（）A.基因組DNAB.cDNAC.線粒體DNAD.葉綠體DNAE.病毒核酸5.PCR技術(shù)可應(yīng)用于（）A.疾病診斷B.基因分型C.法醫(yī)鑒定D.物種鑒定E.基因克隆6.Taq酶具有以下哪些特性（）A.耐熱性B.5'→3'聚合酶活性C.3'→5'外切酶活性D.無校對功能E.催化效率高7.PCR反應(yīng)中常用的緩沖液成分有（）A.Tris-HClB.KClC.MgCl?D.NaClE.EDTA8.進行PCR實驗時需要注意（）A.防止污染B.準(zhǔn)確加樣C.合理設(shè)置反應(yīng)條件D.正確操作儀器E.做好防護9.引物的作用是（）A.引導(dǎo)DNA合成B.確定擴增片段C.提高反應(yīng)特異性D.加快反應(yīng)速度E.增加產(chǎn)物產(chǎn)量10.以下屬于PCR技術(shù)衍生技術(shù)的有（）A.實時熒光定量PCRB.巢式PCRC.反向PCRD.多重PCRE.原位PCR答案：1.ABCDE2.ABCDE3.ABCDE4.ABCDE5.ABCDE6.ABD7.ABC8.ABCDE9.ABC10.ABCDE三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)可以擴增任意長度的DNA片段。（）2.Taq酶有3'→5'外切酶活性，所以保真性高。（）3.引物濃度越高，PCR反應(yīng)效果越好。（）4.模板DNA的純度對PCR反應(yīng)沒有影響。（）5.退火溫度越高，PCR反應(yīng)的特異性越強。（）6.PCR產(chǎn)物的特異性只取決于引物。（）7.循環(huán)次數(shù)越多，PCR產(chǎn)物產(chǎn)量一定越高。（）8.進行PCR實驗時不需要無菌操作。（）9.實時熒光定量PCR可以對核酸進行絕對定量。（）10.引物的GC含量應(yīng)盡量高，以提高引物的穩(wěn)定性。（）答案：1.×2.×3.×4.×5.√6.×7.×8.×9.√10.×四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述PCR技術(shù)的基本原理。答案：PCR技術(shù)是模擬體內(nèi)DNA復(fù)制過程，通過高溫變性使模板DNA雙鏈解開，低溫退火讓引物與模板結(jié)合，適溫延伸在Taq酶作用下合成新的DNA鏈，經(jīng)多次循環(huán)擴增特定DNA片段。2.引物設(shè)計的要點有哪些？答案：長度15-30bp為宜；GC含量40%-60%；避免引物自身或引物間互補形成二聚體；3'端不能有互補；特異性要強，與模板準(zhǔn)確結(jié)合。3.影響PCR反應(yīng)特異性的因素有哪些？答案：引物特異性，若引物與非目的序列結(jié)合會降低特異性；退火溫度，不合適會導(dǎo)致引物錯配；模板純度，雜質(zhì)可能干擾反應(yīng)；酶的特異性，酶的質(zhì)量和活性也有影響。4.簡述實時熒光定量PCR的原理。答案：在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，隨著PCR擴增，熒光信號強度增加，通過監(jiān)測熒光信號積累實時監(jiān)測PCR進程，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對起始模板進行定量分析。五、討論題（每題5分，共4題）1.在進行PCR實驗時，出現(xiàn)非特異性擴增條帶，可能的原因及解決方法有哪些？答案：原因可能是引物特異性差、退火溫度低、模板有雜質(zhì)、酶量過多等。解決方法：重新設(shè)計引物；提高退火溫度；純化模板；調(diào)整酶的用量。同時要注意操作規(guī)范，防止污染。2.對比傳統(tǒng)PCR和實時熒光定量PCR的優(yōu)缺點。答案：傳統(tǒng)PCR優(yōu)點是操作簡單、成本低，可擴增特定片段；缺點是不能精確定量，終點檢測易有誤差。實時熒光定量PCR優(yōu)點是能實時定量、靈敏度高、特異性強；缺點是儀器和試劑成本高，對操作要求嚴格。3.如何確保PCR實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性？答案：要設(shè)計合適引物保證特異性；準(zhǔn)確配置反應(yīng)體系；規(guī)范操作防止污染；優(yōu)化反應(yīng)條件如溫度、循環(huán)次數(shù)；對儀器定期校準(zhǔn)維護；同時