CCSB05DB44032024-11-15發(fā)布深圳市市場監(jiān)督管理局發(fā)布IDB4403/T528—2024前言 2規(guī)范性引用文件 3縮略語 4術(shù)語和定義 5儀器與試劑 6水稻EMS誘變育種程序 7供試材料選擇 8水稻種子預(yù)處理 9EMS誘變處理 10發(fā)芽試驗 11誘變后代的種植與篩選 12優(yōu)良株系鑒定 13育種檔案 參考文獻 DB4403/T528—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由深圳市市場監(jiān)督管理局提出并歸口。本文件起草單位：深圳市農(nóng)業(yè)科技促進中心、深圳潔田模式生物科技有限公司。本文件主要起草人：楊曉懷，唐曉艷，金曼，張維樂，陳子晟，陳雷，曾艷紅，李永紅，陳紅娜，周志豪，曹孔江，陳敏，魯勇，劉志宏。DB4403/T528—20241水稻高效誘變育種技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了水稻EMS誘變育種涉及的儀器與試劑、水稻EMS誘變育種程序、供試材料選擇、水稻種子預(yù)處理、EMS誘變處理、發(fā)芽試驗、誘變后代的種植與篩選、優(yōu)良株系鑒定以及育種檔案等方面的技術(shù)要求。本文件適用于利用EMS誘變育種技術(shù)進行水稻品種選育。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T3543.4—1995農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程發(fā)芽試驗GB4404.1糧食作物種子第1部分：禾谷類3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1甲基磺酸乙酯ethylmethanesulfone一種強效化學誘變劑，屬于烷化劑誘變最常用的一種，需避光保存。3.2水稻EMS誘變EMSmutagenesisofrice利用甲基磺酸乙酯（4.1）處理水稻種子。4縮略語下列縮略語適用于本文件。EMS：甲基磺酸乙酯（EthylMethaneSulfone）5儀器與試劑5.1儀器設(shè)備儀器包括但不限于以下內(nèi)容：a）通風櫥；b）數(shù)種設(shè)備：數(shù)粒板或電子自動數(shù)粒儀等；DB4403/T528—20242c）發(fā)芽器具：發(fā)芽箱、發(fā)芽室、發(fā)芽皿、發(fā)芽盤等。5.2試劑EMS、50mmol磷酸鈉緩沖液（pH7.0）、氫氧化鈉或硫代硫酸鈉等。6水稻EMS誘變育種程序水稻EMS誘變育種程序應(yīng)包括供試材料選擇、水稻種子預(yù)處理、EMS誘變處理、發(fā)芽試驗、誘變后代的種植與篩選以及優(yōu)良株系鑒定六個階段。7供試材料選擇應(yīng)選擇符合GB4404.1規(guī)定的水稻種子作為供試材料。8水稻種子預(yù)處理8.1水稻種子應(yīng)在25～30℃條件下，用清水浸泡48小時，每24小時換一次水。8.2水稻種子浸泡48小時后，用清水沖洗干凈并稍晾干。9EMS誘變處理9.1EMS處理液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用。應(yīng)在通風櫥中用50mmol磷酸鈉緩沖液（pH7.0）配制體積分數(shù)為80%的EMS處理液。9.2水稻種子應(yīng)完全浸沒于EMS處理液中，并在28℃暗條件下浸泡處理12小時，期間每隔1小時攪拌混勻。9.3EMS誘變處理結(jié)束后，倒出EMS處理液。用清水清洗水稻種子后控干水分，重復(fù)不少于5次，除去EMS殘留。9.4EMS處理液及清洗廢水應(yīng)統(tǒng)一收集并裝入廢液桶中，可采用氫氧化鈉（終濃度1mol）中和處理，并在陽光下暴曬2～3天；或5%硫代硫酸鈉，作為解毒劑和終止劑處理廢液。9.5廢棄物及廢液應(yīng)按照實驗室管理要求集中標記存放，并通過具有資質(zhì)的固廢危廢處理公司進行回收處理。9.6操作者應(yīng)穿著實驗服，佩戴防護手套、口罩、護目鏡等。10發(fā)芽試驗10.1按照GB/T3543.4-1995要求，對EMS誘變處理后的水稻種子進行發(fā)芽試驗。10.2統(tǒng)計1000粒水稻種子的發(fā)芽率，每200粒水稻種子作為一個樣品，做好發(fā)芽率結(jié)果統(tǒng)計記錄。10.3經(jīng)EMS誘變后的水稻種子發(fā)芽率在50～70%范圍內(nèi)，誘變材料可進行苗床播種。11誘變后代種植與篩選11.1M代種植DB4403/T528—20243誘變后的材料進行苗床播種，秧齡25～30天進行單株插秧，行株距20cm×20cm。田間管理按照當?shù)卣Ｋ具M行，在水稻三葉期至五葉期出現(xiàn)約1%的白化苗，則誘變成功。成熟后收獲水稻種子。11.2M2代種植與篩選種植方法與M1代相同。根據(jù)目標性狀篩選變異植株，收獲單株水稻種子。11.3M3代種植與考察取M2代變異水稻種子進行苗床播種，秧齡25～30天進行單株插秧，行株距20cm×20cm。田間管理應(yīng)按照當?shù)卣Ｋ具M行?？疾霱3代目標性狀的穩(wěn)定性。12優(yōu)良株系鑒定選擇目標性狀穩(wěn)定的優(yōu)良株系鑒定、評比。每個株系種植150m2，3次重復(fù)。通過田間觀察和室內(nèi)考種評定，篩選出具備目標性狀的品系。13育種檔案13.1為提供可追溯證據(jù)，應(yīng)同時建立紙質(zhì)和電子育種檔案，內(nèi)容包括：水稻品種、誘變劑使用記錄、誘變過程記錄、發(fā)芽率記錄、誘變后代的種植管理記錄及優(yōu)良株系鑒定文件。13.2