2025/7/201實(shí)驗(yàn)3

薄層色譜法現(xiàn)在是1頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期三2025/7/2021.了解色譜分離的原理及其應(yīng)用。2.初步掌握薄層色譜的操作技能。目的和要求現(xiàn)在是2頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期三2025/7/203色譜法概述

1938年俄國(guó)人首先實(shí)現(xiàn)了在氧化鋁薄層上分離一種天然藥物。1965年德國(guó)化學(xué)家出版了“薄層色譜法”一書(shū)，推動(dòng)了這一技術(shù)的發(fā)展。

現(xiàn)在是3頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期三2025/7/204

色譜法（Chromatography）亦稱(chēng)色層法、層

析法等。色譜法是分離、純化和鑒定有機(jī)化合物的重要方法之一。色譜法的基本原理是利用混合物各組分在某一物質(zhì)中的吸附或溶解性能（分配）的不同，或其親和性的差異，使混合物的溶液流經(jīng)該種物質(zhì)進(jìn)行反復(fù)的吸附或分配作用，從而使各組分分離。色譜法原理現(xiàn)在是4頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期三2025/7/2051.按固定相所處的狀態(tài)分類(lèi)：薄層色譜（ThinLayerChromatography）柱色譜（ColumnChromatography）紙色譜（PaperChromatography）2.按分離機(jī)理分類(lèi)：吸附色譜（AdsorptionChromatography）

分配色譜（PartitionChromatography）離子交換色譜（IEC）凝膠色譜（GPC）

分類(lèi)現(xiàn)在是5頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期三2025/7/2066如上色譜都屬吸附色譜類(lèi)型，用固體吸附劑作固定相，以不同溶劑作流動(dòng)相，依據(jù)樣品中各組分在吸附劑上吸附性能的差別來(lái)實(shí)現(xiàn)分離儀器分析實(shí)驗(yàn)高效液相色譜(HPLC)氣相色譜(GC)現(xiàn)在是6頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期三2025/7/207色譜法三要素吸附劑（固定相）：用于與樣品發(fā)生吸附作用的固定不動(dòng)的

物質(zhì)。在混合物樣品流經(jīng)固定相的過(guò)程

中，由于各組分與固定相吸附力的不同，

就產(chǎn)生了速度的差異，從而將混合物中

的各組分分開(kāi)?，F(xiàn)在是7頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期三2025/7/208⑴氧化鋁（alumina）氧化鋁的吸附活性來(lái)源于鋁原子上未成鍵電子對(duì)。氧化鋁的活性與含水量有關(guān)，含水量越低，活性越大，吸附力越強(qiáng)。無(wú)水氧化鋁吸附活性特別強(qiáng)。根據(jù)氧化鋁的含水量可將氧化鋁的活性分為五級(jí)。吸附色譜三要素－吸附劑現(xiàn)在是8頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期三2025/7/209*酸性氧化鋁（pH＝5-4），適用于分離酸性化合物和對(duì)酸穩(wěn)定的中性化合物，如酚類(lèi)物質(zhì)和某些氨

基酸類(lèi)等。*中性氧化鋁（pH＝7.5），適用與分離生物堿、揮發(fā)油、萜類(lèi)、甾類(lèi)、蒽醌以及在酸堿中不穩(wěn)定甙

類(lèi)、酯、內(nèi)酯等化合物。凡是能用酸性或堿性氧

化鋁層析分離的物質(zhì)，中性氧化鋁也都適用。*堿性氧化鋁（pH＝9-10），適用于堿性，如生物堿和中性化合物的分離。

吸附色譜三要素－吸附劑現(xiàn)在是9頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期三2025/7/2010⑵硅膠silicagel它的吸附性來(lái)源于硅膠氧原子上未成鍵的電子對(duì)和可以形成氫鍵的羥基。羥基有結(jié)合型（Ⅰ）、活性型（Ⅱ）和游離型（Ⅲ）三種吸附色譜三要素－吸附劑現(xiàn)在是10頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期三2025/7/2011活性氧化鋁含水量（％）硅膠含水量（％）Ⅰ00Ⅱ35Ⅲ815Ⅳ1025Ⅴ1538吸附色譜三要素－吸附劑現(xiàn)在是11頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期三2025/7/2012洗脫劑（流動(dòng)相）：

也稱(chēng)展開(kāi)劑，在色譜過(guò)程中起到將吸附

在固定相上的樣品洗脫的作用。乙酸>吡啶>水>醇類(lèi)（甲醇>乙醇>正丙醇）>丙酮>乙酸乙酯>乙醚>氯仿>二氯甲烷>甲苯>環(huán)己烷>正己烷>石油醚

*從前到后-洗脫能力降低。現(xiàn)在是12頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期三2025/7/2013試樣：在給定的條件下，各個(gè)成分的分離情況，與被分離物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)有關(guān)，對(duì)極性吸附劑而言，被分離物質(zhì)的極性越大，兩者吸附作用也越強(qiáng)。具有極性基團(tuán)的化合物，其吸附能力按下列順序增加：

Cl,Br,I<C=C<OCH3<CO2R<C=O,

CHO<-SH-<-NH2<-OH<-CO2H結(jié)論：若樣品極性越小，或流動(dòng)相極性越大，樣品

在固定相上的移動(dòng)速度則越快。現(xiàn)在是13頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期三2025/7/2014在吸附層析中，試樣、洗脫劑和吸附劑三者關(guān)系。它們?nèi)叩年P(guān)系如下圖。Stahl簡(jiǎn)圖（1）離化合物的極性；（2）吸附劑的活度；（3）展開(kāi)劑的極性。若將這三個(gè)因素各自固定在圓周的三分之一，轉(zhuǎn)動(dòng)圓盤(pán)正中的三角形，如果角A指向極性物質(zhì)，則角B指向活度小的吸附劑，角C就指向選用極性展開(kāi)劑；A’,B’,C,處則是合理的選擇組合。現(xiàn)在是14頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期三15有機(jī)化學(xué)中的應(yīng)用*分離混合物：一些結(jié)構(gòu)類(lèi)似、理化性質(zhì)也相似的化合物組成的混合物，一般應(yīng)用化學(xué)方法分離很困難，但應(yīng)用色譜法分離，有時(shí)可得到滿(mǎn)意的結(jié)果。*精制提純化合物：有機(jī)化合物中含有少量結(jié)構(gòu)類(lèi)似的雜質(zhì)，不易除去，可利用色譜法分離以除去雜質(zhì)，得到純品?，F(xiàn)在是15頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期三2025/7/2016*鑒定化合物：在條件完全一致的情況，純粹的化合物在薄層色譜呈現(xiàn)一定的移動(dòng)距離，稱(chēng)比移值（Rf值），所以利用色譜法可以鑒定化合物的純度或確定兩種性質(zhì)相似的化合物是否為同一物質(zhì)。*跟蹤一些化學(xué)反應(yīng)進(jìn)程：可以利用薄層色譜或紙色譜觀察原料色點(diǎn)的逐步消失，以證明反應(yīng)完成與否?，F(xiàn)在是16頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期三2025/7/2017薄層色譜

薄層色譜又叫薄板層析，是色譜法中的一種，是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，屬固-液吸附色譜，它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)，一方面適用于少量樣品（幾到幾微克，甚至0.01微克）的分離；另一方面在制作薄層板時(shí)，把吸附層加厚加大，又可用來(lái)精制樣品，此法特別適用于揮發(fā)性較小或較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物質(zhì)。此外，薄層色譜法還可用來(lái)跟蹤有機(jī)反應(yīng)及進(jìn)行柱色譜之前的一種“預(yù)試”。現(xiàn)在是17頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期三2025/7/2018一、實(shí)驗(yàn)步驟薄層板的制備展開(kāi)劑的選擇點(diǎn)樣展開(kāi)顯色比移值干鋪法傾注法紫外光顯色法碘蒸氣顯色法試劑顯色法現(xiàn)在是18頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期三2025/7/20191.制薄層板硬板制備：50mL燒杯中放置10g硅膠GF254，逐漸加入5%羧甲基纖維素鈉（CMC）水溶液7mL，調(diào)成均勻的糊狀。將其涂于三片玻璃板（7.5×2.5cm)上，室溫放置半小時(shí)后，放入烘箱中在110℃恒溫半小時(shí)，即制得硬板?，F(xiàn)在是19頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期三202.點(diǎn)樣樣品準(zhǔn)備：偶氮苯的純化

樣品：1%偶氮苯溶液；展開(kāi)劑：9:1石油醚/乙酸乙酯

1:3石油醚/乙酸乙酯2.蘇丹Ⅲ的純化

樣品：1%蘇丹Ⅲ的溶液；展開(kāi)劑：9:1石油醚/乙酸乙酯

1:3石油醚/乙酸乙酯3.混合樣品的分離樣品：1%偶氮苯和1%蘇丹Ⅲ溶液混合樣品展開(kāi)劑：9:1石油醚/乙酸乙酯現(xiàn)在是20頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期三2025/7/2021點(diǎn)樣操作：1.可利用鉛筆畫(huà)一條線(xiàn)；

2.樣品溶液要點(diǎn)在0.7-0.8mm處；3.采用多次點(diǎn)樣時(shí)，應(yīng)待前一次點(diǎn)加的溶劑揮發(fā)后再進(jìn)行;4.點(diǎn)量應(yīng)適中，避免斑點(diǎn)拖尾;5.配制樣品的溶劑具有揮發(fā)性和

小極性?，F(xiàn)在是21頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期三2025/7/20223.展開(kāi)

選洗脫劑可利用微量圓環(huán)技術(shù)；配制樣品的溶劑具有揮發(fā)性和小極性，以免斑點(diǎn)擴(kuò)展,不利于分離;洗脫劑的高度不超過(guò)0.5cm,以免樣品被洗脫劑擴(kuò)散；

微量圓環(huán)技術(shù)

1用環(huán)己烷展開(kāi)

2用苯展開(kāi)

3用氯仿展開(kāi)現(xiàn)在是22頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期三2025/7/2023展開(kāi)槽普通展開(kāi)槽雙底展開(kāi)槽現(xiàn)在是23頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期三2025/7/2024

多次展開(kāi)—

一次展開(kāi)未達(dá)滿(mǎn)意分離時(shí)，可將薄層板干燥后再次用同一種溶劑展開(kāi)，可重復(fù)多次，直到混合物分離為止。

梯度展開(kāi)—混合物性質(zhì)差別較大時(shí)，一種流動(dòng)相不能有效分離時(shí)，可采用不同溶劑依次展開(kāi)不同距離。

二維展開(kāi)—在兩個(gè)垂直的方向上進(jìn)行展開(kāi)。將樣品點(diǎn)在薄層板的一個(gè)角上，展開(kāi)適當(dāng)距離后，揮干溶劑，再將薄層板以與原展開(kāi)方向成90

的方向進(jìn)行展開(kāi)?，F(xiàn)在是24頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期三2025/7/2025原點(diǎn)12現(xiàn)在是25頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期三2025/7/2026薄層色譜示意圖12-132-22-32-4現(xiàn)在是26頁(yè)\一共有29頁(yè)\編輯于星期三2025/7/20274.顯色及數(shù)據(jù)記錄物理方法—紫外光下顯示熒光或熒光淬滅。化學(xué)方法—加化學(xué)試劑顯色，要求顯色穩(wěn)定、持久、

專(zhuān)屬、靈敏、線(xiàn)性良好。碘蒸氣法—靈敏、簡(jiǎn)便，為通用顯色法。將碘結(jié)晶放在密封的展開(kāi)缸中，碘的升華，使缸內(nèi)充滿(mǎn)紫色的碘蒸氣。

*樣品均有顏色，可直接觀測(cè)，故本實(shí)驗(yàn)不需顯色。

*每個(gè)樣品均需記錄Rf值，列表記錄?，F(xiàn)在是27頁(yè)\一共有2