油桐尺蛾核型多角體病毒殺蟲劑生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程2013-12-06發(fā)布2014-03-06實(shí)施本標(biāo)準(zhǔn)按GB/T1.1-2009的規(guī)定編寫。本標(biāo)準(zhǔn)由廣東省林業(yè)廳科技與交流合作處提出。本標(biāo)準(zhǔn)由廣東省林業(yè)廳歸口。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草單位：茂名市林業(yè)科學(xué)研究所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：馬沛沛、柯沛強(qiáng)、林思誠(chéng)、卜蜜源、林明輝。本標(biāo)準(zhǔn)首次發(fā)布。1本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了油桐尺蛾核型多角體病毒殺蟲劑的生產(chǎn)、質(zhì)量檢測(cè)、包裝及貯存等技術(shù)要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于油桐尺蛾核型多角體病毒殺蟲劑的生產(chǎn)。2術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。核型多角體病毒nucleopolyhedrovirus核型多角體病毒由多角體蛋白和病毒粒子共同組成。以油桐尺蛾活體為宿主并對(duì)其具有專一致病性，在油桐尺蛾血、脂肪等細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)增殖的核型多角體病毒。病毒增殖reproductionofvirus以病毒核酸為模板，在DNA多聚酶或RNA多聚酶及其他必要因素作用下，合成子代病毒的核酸和蛋白質(zhì)，裝配成完整病毒顆粒并釋放至細(xì)胞外。一般可分為吸附、穿入、脫殼、生物合成及裝配與釋放5個(gè)階段。病毒經(jīng)過(guò)增殖產(chǎn)生大量的子代病毒，宿主細(xì)胞的生物合成則受到不同程度的抑制和破壞。病毒對(duì)宿主致死作用大小的指標(biāo)之一，是病毒對(duì)宿主所具有的內(nèi)在致死能力。通常用致死中濃度(LC?0)表示。林間病毒增殖forestreproductionofvirus在油桐尺蛾蟲口密度較高的林中噴灑病毒種源，感染油桐尺蛾林間種群，使病毒在林間增殖的方2為改善油桐尺蛾核型多角體病毒殺蟲劑的生產(chǎn)過(guò)程，提高質(zhì)量和產(chǎn)量，或賦予油桐尺蛾核型多角體病毒殺蟲劑某種特有的應(yīng)用性能或形態(tài)所添加的輔助化學(xué)品。3生產(chǎn)3.1病毒來(lái)源林間采集或室內(nèi)飼養(yǎng)的病死蟲，經(jīng)分離、純化后多角體含量達(dá)10?PIB/ml以上，-6℃恒溫保存。3.2病毒增殖3.2.1林間增殖用作增殖病毒的林地，應(yīng)滿足以下條件：——桉樹等被油桐尺蛾為害的純林分，面積10hm2以上，交通方便；——樹高6m～8m,樹葉豐富，樹下植被一般；——近3年內(nèi)未使用油桐尺蛾核型多角體病毒；——平均蟲口密度40頭/株～100頭/株，蟲體發(fā)育正常，無(wú)明顯的流行病跡象。接種宜在油桐尺蛾幼蟲4齡～5齡，天氣晴朗的傍晚進(jìn)行，蟲口密度較高時(shí)可適當(dāng)提前。用機(jī)動(dòng)噴霧器作常量噴霧，均勻噴灑，噴后第2d重噴一次。病毒多角體濃度為5×101?PIB/ml,每公頃用量75ml～90ml,即每公頃用量達(dá)3.75×101PIB～4.5×1011PIB。第一次噴藥后，從第2d開始抽查林間油桐尺蛾幼蟲食葉量、蟲體顏色和蟲身硬度的變化。第3d~5d,幼蟲活動(dòng)停止，瀕死或已死幼蟲倒掛于樹枝或樹葉、樹叉處，此時(shí)用攝子輕輕采收感病幼蟲即可。3.2.2套籠增殖用尼龍網(wǎng)圍成長(zhǎng)×寬×高為200cm×150cm×80cm的圍欄，四角用插桿固定，下方用土壓實(shí)，上方設(shè)尼龍網(wǎng)。欄內(nèi)架設(shè)長(zhǎng)160cm的橫桿2根(離地面高60cm),橫桿上懸掛有豐富新鮮的樹葉，樹柄處包裹濕潤(rùn)的棉花球來(lái)保持樹葉的新鮮度及含水量。自林間采集油桐尺蛾4齡～5齡幼蟲，投入圍欄內(nèi)飼養(yǎng)，每欄投入約300頭。用10?PIB/ml的病毒懸浮液噴灑葉片，至產(chǎn)生液滴為止，第二天換新鮮桉樹葉按同等濃度再次進(jìn)行接毒。3從第2d開始抽查油桐尺蛾感病情況，當(dāng)染病蟲體色變成深褐色即可采收。從林間采集油桐尺蛾卵塊，待卵變深色后，在潔凈工作間用1%甲醛水溶液消毒，無(wú)菌水漂洗、晾干，放入盛有人工飼料的養(yǎng)蟲盒內(nèi)。室內(nèi)溫度25℃~26℃,濕度60%～70%。幼蟲孵化1d~3d后將用10?PIB/ml的病毒懸浮液噴灑于已盛有人工飼料的養(yǎng)蟲杯內(nèi)，噴灑均勻即可。放入4齡～5齡油桐尺蛾幼蟲，每杯3頭～5頭，并內(nèi)置爬蟲網(wǎng)。將感病幼蟲蟲體按照重量1:2比例加入清水，放入碎肉機(jī)內(nèi)研磨。經(jīng)過(guò)粉碎的蟲體病毒混合液加入10倍清水置于攪拌機(jī)內(nèi)，以80r/min～100r/min的速度攪拌30放出蟲體病毒混合液，用120目尼龍紗濾網(wǎng)過(guò)濾，濾液進(jìn)入貯藏罐，濾渣經(jīng)脫水機(jī)脫水10min,用水泵將貯藏罐中的濾液抽至漏斗型沉降塔，靜置。沉降塔設(shè)透明的觀察窗，當(dāng)觀察到塔內(nèi)液體明顯分層時(shí)，可放出漏斗上層清液進(jìn)入離心機(jī)離心；漏斗下層濁液用240目絹紗過(guò)濾，并對(duì)濾渣進(jìn)行無(wú)害化處理；濾液重回?cái)嚢铏C(jī)，與后面的初濾液一起再次沉降。當(dāng)天最后一次沉降產(chǎn)生的下層濁液，經(jīng)240目絹紗過(guò)濾后，濾液直接進(jìn)入離心機(jī)離心。4在離心沉淀物中加入等質(zhì)量10%NaCl或等量中性甘油，勻漿機(jī)攪勻。待該批次蟲體加工完畢后，將所有離心沉淀物混合，用磨漿機(jī)磨碎，逐次調(diào)低磨漿機(jī)的間隙，重復(fù)磨漿三次，最終的細(xì)度應(yīng)達(dá)到油桐尺蛾核型多角體病毒加填料抽空脫水，加入填充劑和濕潤(rùn)劑，制成20%可濕性粉劑。每批次制劑多角體含量在5×10?PIB/g以上為合格。在測(cè)定每批次的油桐尺蛾核型多角體病毒含量后，按3×10?PIB/g～5×10?PIB/g,常規(guī)用量1.5×101?PIB/公頃，深色塑料或玻璃瓶，500g/瓶規(guī)格進(jìn)行分裝及包裝，每公頃用量為60g。在包裝說(shuō)明上標(biāo)明產(chǎn)品名稱、廠名、廠址、批號(hào)、凈重、毛重、執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)、質(zhì)檢人、出廠日期、置于陰涼、干燥、通風(fēng)處，保存期1年。置于-6℃以下冷庫(kù)或冰柜中，保存期3年。生產(chǎn)人員應(yīng)做好生產(chǎn)記錄，將有關(guān)數(shù)據(jù)記入附錄A的記錄表。5(規(guī)范性附錄)油桐尺蛾核型多角體病毒殺蟲劑生產(chǎn)情況記錄表病蟲來(lái)源：接種時(shí)間：增殖方法：接種蟲齡：接種濃度：采收時(shí)間：日期量(kg)沉淀時(shí)間生產(chǎn)班組：質(zhì)檢人員：檢驗(yàn)時(shí)間：6(規(guī)范性附錄)油桐尺蛾幼蟲飼料配方按重量份數(shù)計(jì)，該飼料由如下組分組成：麥胚粉120份～160份、黃豆粉25份~35份、酵母粉12份~18份、