專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題3分解纖維素的微生物的分離主要成分-------纖維素草中含有纖維素課題3分解纖維素的微生物的分離

【學(xué)習(xí)目標(biāo)】知識(shí)與技能1、簡(jiǎn)述纖維素酶的種類及作用。2、掌握從土壤中分離某種特定微生物的操作技術(shù)。過(guò)程與方法1、分析分離分解纖維素的微生物的實(shí)驗(yàn)流程。2、掌握實(shí)驗(yàn)操作的原理。情感、態(tài)度與價(jià)值觀1、通過(guò)自主設(shè)計(jì)、完成實(shí)驗(yàn)，培養(yǎng)勇于探究的科學(xué)精神。2、通過(guò)了解土壤中能分解纖維素的微生物在保護(hù)環(huán)境中的作用，增強(qiáng)社會(huì)責(zé)任感。纖維素

服裝面料處理利用纖維素生產(chǎn)酒精草食性動(dòng)物從草中獲取營(yíng)養(yǎng)纖維素酶纖維素酶

纖維二糖C1酶、Cx酶葡萄糖苷酶葡萄糖纖維素①取二支20mL的試管小實(shí)驗(yàn)：纖維素酶分解纖維素的實(shí)驗(yàn)②各加入一張濾紙條③分別加入pH4.8，物質(zhì)量為0.1mol/L的醋酸－醋酸鈉緩沖液11ml和10ml甲乙④在乙試管中加入1mL纖維素酶⑤兩支試管固定在錐形瓶中，放在140r/min的搖床上振蕩1h⑥結(jié)果：乙試管的濾紙條消失變渾濁菌落透明圈土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上挑選產(chǎn)生透明圈的菌落實(shí)驗(yàn)流程純化培養(yǎng)纖維素分解菌大多分布在____________的環(huán)境中。采集土樣時(shí)，應(yīng)選擇富含纖維素的環(huán)境。如樹(shù)林中多年落葉形成的腐殖土，多年積累的枯枝敗葉等等。也可將濾紙埋在土壤中一個(gè)月左右，這樣會(huì)有能分解纖維素的微生物生長(zhǎng)?！疽弧客寥廊痈缓w維素〖思考題〗將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋進(jìn)土壤多深？人工設(shè)置適宜環(huán)境，使纖維素分解菌相對(duì)聚集。將紙埋于深約10cm的腐殖土壤中?！疽弧客寥廊优囵B(yǎng)基成分分析培養(yǎng)基組成提供主要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)纖維素粉5g碳源（能源）NaNO31g氮源、無(wú)機(jī)鹽KCl0.5gNa2HPO4·7H2O1.2gKH2PO40.9gMgSO4·7H2O0.5g無(wú)機(jī)鹽酵母膏0.5g生長(zhǎng)因子、氮源、碳源（極少）水解酪素0.5g氮素、生長(zhǎng)因子溶解后，蒸餾水定容至1000mL水葡萄糖2、該培養(yǎng)基對(duì)微生物________（具有，不具有）選擇作用。如果具有，其選擇機(jī)制是_______________________________________________________。以纖維素粉為唯一碳源，能分解纖維素的微生物可以大量繁殖具有【二】選擇培養(yǎng)為什么選擇培養(yǎng)能夠“濃縮”所需的微生物？在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮”的作用。按照課題1的稀釋操作方法，將選擇培養(yǎng)后的培養(yǎng)基進(jìn)行等比稀釋101～107倍。梯度稀釋101102103104105106將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上（1）制備鑒別培養(yǎng)基:（2）涂布平板：將稀釋度為104～106的菌懸液各取0.1ml涂布到平板培養(yǎng)基上，30℃倒置培養(yǎng)。培養(yǎng)基組成分提供的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)CMC-Na5~10g碳源酵母膏1g碳源、氮源、生長(zhǎng)因子KH2PO40.25g無(wú)機(jī)鹽土豆汁

100mL碳源瓊脂15g凝固劑上述物質(zhì)溶解后，加蒸餾水定容至1000mL水鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基(水溶性羧甲基纖維素鈉)NaCl溶液的作用：漂洗作用，洗去與纖維素結(jié)合不牢的剛果紅，以免出現(xiàn)的透明圈不夠清晰。染色法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)方法一

方法二

顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用操作繁瑣，剛果紅會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜操作簡(jiǎn)便，不存在菌落混雜問(wèn)題產(chǎn)生淀粉酶的微生物也產(chǎn)生模糊透明圈，有些微生物能降解色素，形成明顯的透明圈。兩種方法的優(yōu)點(diǎn)與不足分解纖維素的微生物的分離纖維素酶種類、作用剛果紅染色篩選原理實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣選擇培養(yǎng)純化培養(yǎng)涂布培養(yǎng)富含纖維素土壤增大分解菌含量染色鑒別分離出分解菌課堂總結(jié)14．下表為纖維素分解菌的鑒別培養(yǎng)基配方，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)試驗(yàn)測(cè)定培養(yǎng)基用于鑒定纖維素分解菌的最適pH。CMC-Na酵母膏KH2PO4瓊脂土豆汁蒸餾水5-10g1g0.25g15g100mL1000mL實(shí)驗(yàn)步驟：（1）按配方表配制培養(yǎng)基，并平均分配到5個(gè)培養(yǎng)皿中。

（2）____________________________________。

（3）將培養(yǎng)基滅菌。

（4）________________________________________。

（5）放在適宜條件下培養(yǎng)，觀察并記錄結(jié)果。（6）僅憑一次實(shí)驗(yàn)?zāi)芊駵?zhǔn)確測(cè)出培養(yǎng)基的最適pH?為什么？

將培養(yǎng)基的pH分別控制在3、5、7、9、11將等量的纖維素分解菌分別接種到上述培養(yǎng)基中不能，實(shí)驗(yàn)所控制的pH并不是準(zhǔn)確的，況且這一次實(shí)驗(yàn)也可能有誤差。

酵母膏實(shí)際上是膏狀的酵母抽提物，酵母抽提物是國(guó)家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定名稱。

酵母抽提物以酵母為原料，采用自溶法或加酶水解法工藝，經(jīng)分離、脫色（或精制濃縮、噴霧干燥）而成的，含氨基酸、肽、多肽及酵母細(xì)胞水溶性成分的產(chǎn)品。包含粉狀、與膏狀的產(chǎn)品。