姜黃素對膀胱腫瘤胰島素樣生長因子-1通路影響

1姜黃素對膀胱腫瘤胰島素樣生長因子-1通路影響姜黃素對

膀胱腫瘤胰島素樣生長因子T通路影響［摘要］目的視察姜黃

素對膀胱腫瘤T24細(xì)胞中胰島素樣生長因子T(IGF-1)表達(dá)的影響。

方法用不同濃度的姜黃素作用于膀胱腫瘤細(xì)胞株T24,用MTT

法測定細(xì)胞抑制率，用流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞凋亡結(jié)果，用RT-PCR測

定不同姜黃素濃度對腫瘤細(xì)胞株胰島素樣生長因子-1(IGF-1)及胰

島素樣生長因子T受體(1GFTR)mRNA表達(dá)量的影響。

結(jié)果姜黃素對膀胱腫瘤細(xì)胞株的作用具有時間和劑量依從性，

姜黃素能夠誘導(dǎo)膀胱腫瘤細(xì)胞株凋亡，姜黃素可使腫瘤細(xì)胞株的

IGF-1mRNA表達(dá)量降低。

結(jié)論姜黃素可能會通過胰島素樣生長因子-1(IGF-1)通路抑制

膀胱腫瘤T24細(xì)胞的生長，促進(jìn)其凋亡。

［關(guān)鍵詞］膀胱腫瘤；姜黃素；胰島素樣生長因子-1

(IGF-1)［中圖分類號］R737.14［文獻(xiàn)標(biāo)識碼］A［文章編號］

1673-9701(2009)13-36-02TheEffectofCurcuminon

Insulin-likeGrowthFactor-1ActionirT24HumanBladderTumor

CellsGUOZhiqianglLIUHongyaolZHANGHuaping2XINGTaol

1.TheFirstHospitalofShanxiMedicalUniversity；22.Shanxi

MedicalUniversity,Taiyuan030001［Abstract］ObjectiveTo

observetheeffectofcurcuminoninsulin-likegrowthfactcr-1

actioninT24humanbladdertumorcells.MethodsThebladder

tumorcelllineswereadministereddifferconcentrationof

curcumin.Therateofcellinhibition,therateofapoptosis

andexpressofTGF-landIGF-1RmRNAweredeterminedwithMTT，

flowcytometerandRT-PCR,respectively.ResultsEitherthe

rateofcellinhibitionortheratesofapoptosisdependonthe

curcumindoseandtheactiontimeofcurcumin.Thequantity

IGF-1mRNAwasreducedwhenthecurcumindosesincreased.

ConclusionThecurcumincandepressthegrowthandenhancethe

apoptosisoninsulin-likegrowthfactor-1actioninT24human

bladdertumorcells.[KeyWords]Bladderneoplasm；

Curcumin；Tnsulin-likegrowthfactor-1胰島素樣生長因

子家族(Insulin-likeGrowthFactor,IGFs)是一類具有促進(jìn)細(xì)胞

增殖、分化以及血管形成等多種生物活性的多肽生長因子，1GF-1及

其IGF-1R是該家族的重要成員，兩者與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有親

密關(guān)系。

姜黃素(Curcumin)是從姜科植物中提取的一種酚性色素，在其

他3腫瘤治療性探討中表明，與以往化學(xué)治療藥物較單一的作用途

徑相比，它具有抗氧化、抗突變、抗促癌和抗炎癥等多方面的作用。

但有關(guān)姜黃素的機(jī)制方面，特殊是對膀胱腫瘤IGF-1通路影晌的

探討鮮有報道。

本文初步探討了姜黃素在膀胱腫瘤中對IGFT通路的作用。

1材料與方法1.1材料L1.1細(xì)胞株膀胱癌

細(xì)胞株T24人膀胱移形細(xì)胞癌細(xì)胞，購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞生化

所。

1.1.2試驗設(shè)備及儀器超凈工作臺，蘇州市漢達(dá)工業(yè)自動

化有限公司；二氧化碳培育箱，AshevilleNCUSA；倒置顯微鏡，奧

特光學(xué)；酶標(biāo)定量儀，BIO-RADN0VAPAT11MICROPLATEREADER；流式

細(xì)胞儀，BDFACSCalibur；低速離心機(jī),北京市醫(yī)用離心機(jī)廠；培育

板（96孔，24孔，6孔），Costar公司。

1.1.3藥物小牛血清、RPMI1640液，Gibco公司；嘎喋

藍(lán)，上?；瘜W(xué)試劑廠；二甲基亞楓（DMSO）,上?；瘜W(xué)試劑廠；姜黃

素，Sigma公司；重組人IGF-1,Peprotech公司。

1.2試驗方法1.2.1細(xì)胞培育T24細(xì)胞置于含10%

小牛血清的RPMI1640培育液中，于37C、5%Co2培育箱中培育，

每2天更換培育液一次。

細(xì)胞傳代時，先棄去培育液，PBS洗兩次，加4入適量的0.25%

胰蛋白酣消化并制成單細(xì)胞懸液，分裝培育瓶中，并加入適量培育液。

均取對數(shù)生長期中狀態(tài)良好的細(xì)胞用于試驗。

1.2.2MTT比色法分析細(xì)胞活力取對數(shù)生長期中狀態(tài)良好

的T24細(xì)胞,用0.25%胰蛋白酶消化,調(diào)整細(xì)胞濃度為5104/mL,

以每孔1001（5000個/孔）接種于96孔板，培育24h貼壁后加入

含有不同濃度的姜黃素和IGF-1的培育液。

IGF-1的濃度依次為50、40、20、10、5、2ng/mL,姜黃素的濃

度依次取80、40、20Mo

引物序列如下：

TGF-1RUP：

gTTgggAAggggATCATTTTTGF-1R,DOWN：

CATgAAAACCATTggCTgTg；IGF-1UP：

ggCTgAC-CAAgCTgAAACTC,DOWN：

ATCgCTTAAACCCAggAggT,將含有引物的PCR反應(yīng)混合液(251)

放入SmarteyclerII型PCR儀(TaKaRa,USA)進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，

PCR反應(yīng)參數(shù)如下：

95℃,10s；95℃,5s；60℃,20s,共45個循環(huán)。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法全部數(shù)據(jù)以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差表示，統(tǒng)

計分析采納SPSS13.0統(tǒng)計軟件，組間比較用SNK-q

(Student-Newman-Keuls)多重比較檢驗,量效關(guān)系用Spearman等

級相關(guān)檢驗，以二0.05為檢驗水準(zhǔn)。

2結(jié)果姜黃素抑制T24細(xì)胞生長：

運用MTT法分析姜黃素對T24細(xì)胞的作用，結(jié)果顯示姜黃素可以

抑制T24細(xì)胞的活性，并6呈劑量和時間依靠關(guān)系。

作用24h后，比較比照組，20、40、80M的姜黃素對IGF-1

(50ng/mL)T24細(xì)胞的抑制率分別為(26.73.44)%、(45.82.79)%

和(54.95.43)%(P<0.05)o

48h后，20、40、80M的姜黃素對IGFT(50ng/mL)T24細(xì)胞

的抑制率分別為(28.62.34)%、(47.83.16)%和(58.94.73)%(P

V。05),抑制率隨培育時間的延長呈增長趨勢(P<0.05)o

姜黃素誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡:

40M姜黃素作用6h,早期凋亡(AV+/PI)的T24細(xì)胞達(dá)

(13.51.06)%,明顯高于比照組的(3.40.31)%(PV0.05)。

IGFT(50g/L)作用組的細(xì)胞基本上在第三象限，說明IGF-1具

有抗細(xì)胞凋亡作用。

與姜黃素同時作用后，T24細(xì)胞的早期凋亡率分別增至

(7.61.09)%,與IGF-1(50g/L)作用組有顯著性差異(PV0.05)。

姜黃素對T24細(xì)胞IGF-1與IGF-1RmRNA表達(dá)的影響：

姜黃素按80、40、20M/L濃度給藥后6h測定細(xì)胞IGFTmRNA相

對與對照組表達(dá)量分別為(76.671.15)%、

(58.512.47)%、(42.181.94)%(P<0.05)；IGF-1RmRNA相對

表達(dá)量為(54.62.27)%、(40.124.20)%、(23.06.50)%

(PV0.05),可見IGF-1與IGF-1R的mRNA表達(dá)量隨姜黃素的濃

度增加而削減(PV0.05)。

3探討7IGF-1是一種多功能細(xì)胞因子，參加細(xì)胞的

生長、發(fā)育和分化，具有促進(jìn)多種細(xì)胞生長及增殖的實力。

IGF-1在多種組織和細(xì)胞中表達(dá)，可能與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展

有關(guān)［口。

眾多細(xì)胞試驗和動物試驗證明了姜黃素的抗癌活性［2］,大量探

討表明姜黃素不僅能夠阻遏細(xì)胞周期，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、分化，還

可通過調(diào)整多種細(xì)胞信號途徑抑制細(xì)胞生長。

夏艷秋等［3］的體外試驗表明，姜黃素減弱了IGFT對MCF-7細(xì)

胞生長的刺激作用，并且逆轉(zhuǎn)了IGFT介導(dǎo)的抗凋亡作用。

Patel等［4］探討表明，在結(jié)腸癌細(xì)胞中，姜黃素通過調(diào)整EGFR

和TGF-1R可以增加5-氟尿喀咤和奧沙利伯的作用。

但是，姜黃素與生長因子IGF-1及其系統(tǒng)的關(guān)系尚未闡明，有

關(guān)姜黃素能否通過調(diào)控1GFT通路抑制腫瘤細(xì)胞生長和誘導(dǎo)凋亡值

得深化探討。

本探討以MTT法檢測細(xì)胞活力作為衡量腫瘤細(xì)胞增殖的

指標(biāo)、以AnnexinV-PI雙染色作為衡量細(xì)胞凋亡的指標(biāo)，探討姜黃

素對IGF-1通路的影響。

IGF-1處理后，不僅可明顯提高細(xì)胞活力、促進(jìn)T24細(xì)胞增殖,

還可以抑制細(xì)胞凋亡。

這些結(jié)果均證明IGFT是腫瘤細(xì)胞有絲分裂的重要激活劑［5］,

是腫瘤發(fā)展的重要刺激因子。

更重要的是姜黃素能明顯延緩IGFT促細(xì)胞增殖的速度，并抑

制IGFT的抗凋亡作用。

提示姜黃素抑制T24細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)凋亡作用可能部分通過

抑制IGFT通路作用而實現(xiàn)［6］。

另外，無血清培育8條件T24細(xì)胞均具有肯定的增殖實力，這

可能依靠于腫瘤細(xì)胞本身分泌的1GFT的刺激作用。

上述結(jié)果將會對姜黃素抗腫瘤作用機(jī)制方面做肯定的貢獻(xiàn)。

［參考文獻(xiàn)］［1］BustinSA,DorudiS,PhillipsSM,

etal.Localexpressionofinsulin-likegrowthfactor-1affects

angiogenesisincolorectalcancer[J].TumourBiol,2002,23

(3)：

130-138.[2]SuCC,LinJG,LiTM,etal.

Curcumin-inducedapoptosisofhumancoloncancercolo205cells

throughtheproductionofROS,Ca2+andtheactivationof

caspase-3[J].AnticancerRes,2006,26(6B)：

4379-4389.[3]XiaY,JinL,ZhangB,etal.The

potentiationofcurcuminoninsulin-likegrowthfactcr-1

actioninMCF-7humanbreastcarcinomacelIs[J].LifeSciences,

2007,80(23)：

2161-2169.[4]PatelBB,SenguptaR,QaziS,etal.

Curcuminenhancestheeffectsof5-fluorouraciland