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化妝品用原料纖連蛋白

1范圍

本文件規(guī)定了化妝品用原料纖連蛋白的術(shù)語和定義、技術(shù)要求、試驗方法、檢驗規(guī)則和標(biāo)志、包裝、

運輸、貯存和保質(zhì)期。

本文件適用于作為化妝品原料的重組纖連蛋白的質(zhì)量要求。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

JJF1070定量包裝商品凈含量計量檢驗規(guī)則

QB/T1685化妝品產(chǎn)品包裝外觀要求

YY/T1849-2022重組膠原蛋白

《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》

《中華人民共和國藥典》

《已使用化妝品原料目錄》

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

纖連蛋白fibronectin

細(xì)胞外基質(zhì)的高分子非膠原性黏附糖蛋白，承擔(dān)機體細(xì)胞的黏附連接功能，具有由多個結(jié)構(gòu)域組成

的兩條肽鏈，并具有一定的生物學(xué)功能。

重組纖連蛋白recmbinantcibronecti

采用重組DNA技術(shù)，對編碼所需人纖連蛋白質(zhì)的基因進(jìn)行遺傳操作和（或）修飾，利用質(zhì)粒或病毒

載體將目的基因轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化進(jìn)入適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞（細(xì)菌、酵母或其它真核細(xì)胞等）中，表達(dá)并翻譯成纖

連蛋白或類似纖連蛋白的多肽，經(jīng)過提取和純化等步驟制備而成。

形態(tài)分類morphologicalclassification

化妝品用纖連蛋白原料分為固態(tài)和非固態(tài)兩大類。固態(tài)類包括噴干類纖連蛋白、凍干類纖連蛋白。

非固態(tài)類包括纖連蛋白溶液。

3.3.1

噴干類纖連蛋白spray-driedfibronectin

經(jīng)噴霧干燥工藝制得的纖連蛋白原料，如纖連蛋白噴干粉。

3.3.2

凍干類纖連蛋白freeze-driedfibronectin

經(jīng)冷凍干燥工藝制得的纖連蛋白原料，如纖連蛋白凍干粉等。

3.3.3

纖連原蛋白溶液fibrinogensolution

由經(jīng)純化、換液、濃縮后的纖連蛋白原液或由固態(tài)類重組纖連蛋白制得的液體狀纖連蛋白。

4質(zhì)量控制

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通則

纖連蛋白因氨基酸序列和表達(dá)體系的差異，產(chǎn)物形式多樣。與天然纖連蛋白相比，其氨基酸組成、

分子量和結(jié)構(gòu)會有顯著不同。可以是單一全長氨基酸序列的纖連蛋白，也可以是由兩種或多種功能域組

合而成的重組人源化纖連蛋白，或是與天然纖連蛋白氨基酸序列同源性較低的重組類纖連蛋白。

纖連蛋白的質(zhì)量控制與分子量大小、結(jié)構(gòu)特性、質(zhì)量屬性復(fù)雜程度以及生產(chǎn)工藝相關(guān)。本文件涉及

到的質(zhì)量控制體系為化妝品原料成品檢測，在生產(chǎn)過程中的原輔料質(zhì)量控制、生產(chǎn)工藝和過程控制應(yīng)確

保各類雜質(zhì)已去除或降低至可接受水平。

劑型

根據(jù)纖連蛋白的形態(tài)，可分為溶液、粉末等不同劑型。其中粉末類固體應(yīng)為溶液劑型經(jīng)冷凍或噴霧

干燥等工藝制得。

質(zhì)量要求

使用的原料應(yīng)符合《已使用化妝品原料目錄》和《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》的規(guī)定。

感官指標(biāo)

感官指標(biāo)應(yīng)符合表1的規(guī)定。

表1感官指標(biāo)

指標(biāo)

項目

固態(tài)類非固態(tài)類

顏色白色至淡黃色無色至淡黃色透明

性狀粉末透明液體

感官指外觀

標(biāo)可見異物a無正常視力可見異物

氣味b符合規(guī)定氣味

a非固態(tài)類液體纖連蛋白低溫儲存時允許有少量絮狀懸浮物。

b標(biāo)示值應(yīng)符合制造商的聲稱值。

理化指標(biāo)

理化指標(biāo)應(yīng)符合表2的規(guī)定。

表2理化指標(biāo)

指標(biāo)

項目

固態(tài)類非固態(tài)類

氨基酸序列與纖連蛋白序列匹配度≥70%

鑒別

a蛋白質(zhì)分子量符合“標(biāo)示值±10kD”

pH6.0-9.0

a溶解性符合標(biāo)示溶解特性/

水分（%）≤8%/

a蛋白質(zhì)濃度（%）符合標(biāo)示值的80%-120%

蛋白質(zhì)純度（%）≥80%

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a標(biāo)示值應(yīng)符合制造商的聲稱值

微生物指標(biāo)

微生物指標(biāo)應(yīng)符合表3的規(guī)定。

表3微生物指標(biāo)

項目要求

a菌落總數(shù)，CFU/g或CFU/mL≤500

霉菌和酵母菌總數(shù)，CFU/g或CFU/mL≤100

耐熱大腸菌群，/g（或mL）不得檢出

銅綠假單胞菌，/g（或mL）不得檢出

金黃色葡萄球菌，/g（或mL）不得檢出

安全性物質(zhì)指標(biāo)

安全性物質(zhì)限量應(yīng)符合表4的規(guī)定。

表4安全性物質(zhì)指標(biāo)

項目要求

鉛，mg/kg≤10

砷，mg/kg≤2

鎳，mg/kg≤50

汞，mg/kg≤1

鎘，mg/kg≤5

a甲醇，mg/kg≤2000

a甲醇營養(yǎng)型酵母發(fā)酵來源纖連蛋白需測定甲醇含量。

生物學(xué)活性

纖連蛋白的生物學(xué)活性是指以重組纖連蛋白生物學(xué)特性相關(guān)的屬性為基礎(chǔ)的生物學(xué)作用。纖連蛋

白是皮膚真皮層細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分，主要生物學(xué)功能是為細(xì)胞提供黏附、連接和良好的微環(huán)境，如

促進(jìn)細(xì)胞黏附、增殖、遷移及組織修復(fù)等。

可進(jìn)行測定的任意一個或多個生物學(xué)活性指標(biāo)中，重組纖連蛋白處理組與未經(jīng)處理的對照組相比，

表現(xiàn)出具有統(tǒng)計學(xué)意義的提升效果，可表明重組纖連蛋白具有生物學(xué)活性。例如：可通過評價細(xì)胞-纖

連蛋白相互作用來評價重組纖連蛋白的生物學(xué)活性。

凈含量

應(yīng)符合JJF1070的規(guī)定。

包裝外觀

應(yīng)符合QB/T1685的規(guī)定。

5試驗方法

本文件所用試劑和水，在沒有注明其他要求時，均指分析純試劑和GB/T6682規(guī)定的一級水。實

驗中所用標(biāo)準(zhǔn)溶液、制劑及制品，參引《中華人民共和國藥典》2020版四部的，均按《中華人民共和國

藥典》2020版四部的規(guī)定制備。

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感官指標(biāo)

溶液樣品解凍完全后，直接取樣50mg混合均勻，粉末類固體樣品稱取50mg加水制成10mg/mL的待

測溶液，將被測樣品置于無色透明的容器內(nèi)，在自然光下觀察色澤、性狀，可見異物和鑒別氣味。

理化指標(biāo)

5.2.1鑒別

5.2.1.1氨基酸序列

對目標(biāo)蛋白的基因片段進(jìn)行全長測序和分析，測序結(jié)果在NCBI中進(jìn)行BlastX比對，與NCBI中

人源纖連蛋白的氨基酸序列同源性≥70%。

5.2.1.2蛋白質(zhì)分子量

按照附錄A規(guī)定的方法進(jìn)行測定。

注：對于易發(fā)生降解的纖連蛋白，在描述分子量時，應(yīng)考慮降解產(chǎn)物在電泳圖中的位置，可標(biāo)示為范圍值。

5.2.2pH值

按《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》2015年版第四章1.1pH值中的方法測定，溶液樣品解凍完全后可采用

直測法測定，固體樣品稱取50mg加水制成1mg/mL的待測溶液進(jìn)行測定。

5.2.3溶解性（固態(tài)類測定）

按《中華人民共和國藥典》2020年版四部凡例十五規(guī)定的方法進(jìn)行測定。

5.2.4水分（固態(tài)類測定）

按《中華人民共和國藥典》2020年版四部通則0832“水分測定法”規(guī)定的方法進(jìn)行測定。

蛋白質(zhì)濃度

按照附錄B規(guī)定的方法進(jìn)行測定。

蛋白質(zhì)純度

按照附錄C規(guī)定的方法進(jìn)行測定。

微生物指標(biāo)

按《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》規(guī)定的方法進(jìn)行測定。

安全性物質(zhì)指標(biāo)

5.6.1鉛、砷、鎳、汞、鎘

按《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》規(guī)定的方法進(jìn)行測定。

5.6.2甲醇

按《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》規(guī)定的方法進(jìn)行測定。

生物學(xué)活性測定

細(xì)胞增殖、分化、黏附和遷移生物學(xué)活性可參照YY/T1849-20225.8中規(guī)定的方法進(jìn)行測定，其

他的生物學(xué)活性可參照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定方法進(jìn)行。

6檢驗規(guī)則

組批

以同一原料、同一生產(chǎn)線、同一班次生產(chǎn)的同一規(guī)格，具有同一性質(zhì)質(zhì)量的產(chǎn)品為一批。

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出廠檢驗

6.2.1本產(chǎn)品由生產(chǎn)廠的質(zhì)量檢驗部門按本文件的規(guī)定進(jìn)行檢驗，合格后方可出廠。生產(chǎn)廠應(yīng)保證所

有出廠的產(chǎn)品都均符合本文件的要求。每批出廠的產(chǎn)品都應(yīng)有合格標(biāo)識。

6.2.2出廠檢驗項目為：感官指標(biāo)、理化指標(biāo)（鑒別和純度除外）、微生物指標(biāo)中的菌落總數(shù)、霉菌

及酵母菌總數(shù)。

型式檢驗

有下列情況之一應(yīng)進(jìn)行型式檢驗：

——新產(chǎn)品或老產(chǎn)品轉(zhuǎn)廠生產(chǎn)的試制定型鑒定；

——正式生產(chǎn)后，如結(jié)構(gòu)、材料、工藝有較大改變，可能影響產(chǎn)品性能時；

——正常生產(chǎn)時，對批量產(chǎn)品進(jìn)行抽樣檢查，每年至少一次；

——產(chǎn)品停產(chǎn)半年以上，恢復(fù)生產(chǎn)時；

——出廠檢驗結(jié)果與上次型式檢驗有較大差異時；

——國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗機構(gòu)提出進(jìn)行型式檢驗要求時。

型式檢驗項目為本文件技術(shù)要求的全部項目。

抽樣

樣品應(yīng)從包裝完好的成品中隨機抽取，凈含量偏差按JJF1070的規(guī)定執(zhí)行，其他項目樣品量應(yīng)滿

足檢驗需求。

判定規(guī)則

檢驗項目全部符合本文件時，判定為合格。檢驗結(jié)果中如有一項指標(biāo)（微生物指標(biāo)除外）不符合本

文件要求時，應(yīng)在同批產(chǎn)品中重新抽取雙倍樣品，進(jìn)行不合格項目的復(fù)檢，復(fù)檢結(jié)果符合要求時，作合

格結(jié)論，如仍不合格，則判產(chǎn)品為不合格品。如微生物指標(biāo)不合格，則判產(chǎn)品為不合格品，不再復(fù)檢。

7標(biāo)簽、包裝、運輸、貯存、保質(zhì)期

標(biāo)簽

原料應(yīng)有標(biāo)簽，內(nèi)容宜包括，但不限于原料名稱、生產(chǎn)商基本信息、原料規(guī)格、貯存條件、使用期

限（生產(chǎn)日期和保質(zhì)期或生產(chǎn)批號和限期使用日期），以及必要的安全或警示信息等內(nèi)容。并能通過標(biāo)

簽追溯到原料的基本信息（包括但不限于原料標(biāo)準(zhǔn)中文名稱、INCI名稱）、生產(chǎn)商名稱、純度或含量、

生產(chǎn)批號或生產(chǎn)日期、保質(zhì)期等中文標(biāo)識。

包裝

產(chǎn)品采用適宜要求包裝，產(chǎn)品根據(jù)用戶要求包裝。實際凈重應(yīng)不低于標(biāo)稱質(zhì)量，各種包裝應(yīng)封口嚴(yán)

密不滲漏。包裝外觀要求應(yīng)符合QB/T1685的規(guī)定。

運輸

作為蛋白制品，產(chǎn)品運輸過程中的溫度條件與劑型有關(guān)，溶液劑型和凝膠劑型運輸環(huán)境為0℃～10℃，

固體劑型可在常溫下短時間運輸，長時間運輸應(yīng)在0℃～10℃環(huán)境中。產(chǎn)品運輸時應(yīng)輕裝、輕卸，按箱

子圖示標(biāo)志堆放，不應(yīng)倒置，避免劇烈震動、撞擊、日曬雨淋，避免高溫或冰凍，嚴(yán)禁在箱上踩踏和堆

放重物。

貯存

作為蛋白制品，產(chǎn)品貯存過程中的溫度條件與劑型有關(guān)，溶液劑型貯存環(huán)境為-25℃～-15℃，凝膠

劑型貯存環(huán)境為0℃～10℃，固體劑型可在常溫下短時間貯存，長時間貯存應(yīng)在0℃～10℃冷庫中。

產(chǎn)品不得與易燃、易爆品混放。貯存時應(yīng)距離地面至少20cm，距內(nèi)墻至少50cm，中間應(yīng)留有通道，

按箱子圖示標(biāo)志堆放，且堆垛應(yīng)采取必要的防護(hù)措施，堆垛高度應(yīng)適當(dāng)，避免損壞大包裝，并嚴(yán)格執(zhí)行

先進(jìn)先出原則。

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保質(zhì)期

在符合規(guī)定的運輸和貯存條件下，產(chǎn)品在包裝完整和未經(jīng)啟封的情況下，保質(zhì)期按銷售包裝標(biāo)注執(zhí)

行。

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附錄A

（規(guī)范性）

蛋白質(zhì)分子量的測定

A.1原理

SDS法是一種變性的聚丙烯胺凝膠電泳方法。本法分離蛋白質(zhì)的原理是根據(jù)多數(shù)蛋白質(zhì)都能

與陰離子表面活性劑十二烷基硫酸鈉（SDS）按重量比結(jié)合成復(fù)合物，使蛋白質(zhì)分子所帶的負(fù)電荷遠(yuǎn)超

過天然蛋白質(zhì)分子的凈電荷，消除了不同蛋白質(zhì)分子的電荷效應(yīng)，使蛋白質(zhì)按分子大小分離。

A.2主要儀器、設(shè)備

A.2.1恒壓或恒流電源。

A.2.2垂直板電泳槽。

A.2.3制膠模具。

A.3試劑和材料

A.3.1實驗室用水：除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水為符合GB/T6682中規(guī)定的一級水。

A.3.2丙烯酰胺。

A.3.3亞甲基雙丙烯酰胺。

A.3.4N-N-甲叉雙丙稀酰胺。

A.3.5三羥基甲基氨基甲烷(Tris)。

A.3.6濃鹽酸（HCl）。

A.3.7十二烷基硫酸鈉（SDS）。

A.3.8甘氨酸（Gly）。

A.3.9β-巰基乙醇。

A.3.10溴酚藍(lán)。

A.3.11甘油。

A.3.12考馬斯亮藍(lán)R-250。

A.3.13甲醇。

A.3.14冰醋酸。

A.3.1514N-N-N`-N`-四甲基乙二胺。

A.4試劑配置

A.4.130%丙稀酰胺(WN)

丙烯酰胺29.2g，N-N-甲又雙丙稀酰胺0.8g，加入去離子水定容至100mL，pH值不能超過7.0，過濾

于棕色玻璃瓶中4℃貯存。

A.4.21.5mol/LTris-HCI，pH8.8

取18.17gTirs，溶于60mL去離子水中，加入約3mL以上的濃鹽酸（HCI）調(diào)節(jié)pH值至8.8，去離

子水定容至100mL。

A.4.31mol/LTris-HCl，pH6.8

取12.1gTirs，加雙蒸水溶解，6mol/LHCI調(diào)pH6.8，定容100mL。4℃冰箱保存。

A.4.410%十二烷基硫酸鈉（SDS）

取10gSDS溶于去離子水中，定容至100mL，加熱至68℃助溶。

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A.4.510%過硫酸銨（AP）

取5g過硫酸銨，溶于50mL去離子水中?，F(xiàn)配現(xiàn)用或分裝至0.5mL離心管中冷凍備用。

A.4.6TEMED(N-N-N`-N`-四甲基乙二胺)原液

低溫保存。

A.4.7分離膠緩沖液(1.5mol/LTris-HCl)

取Tris18.17g，加雙蒸水溶解，6mol/LHCI調(diào)pH8.8，定容100mL。4℃冰箱保存

A.4.8濃縮膠緩沖液(1mol/LTris-HCl)

取Tris12.12g，加雙蒸水溶解，6mol/LHCI調(diào)8，并定容到100mL。4℃冰箱保存。

A.4.9還原型蛋白上樣緩沖液

取5mol/LTris-HClpH6.81.25mL，甘油2mL，10%SDS2mL，β-巰基乙醇1mL，0.1%溴酚藍(lán)0.5mL，

加蒸餾水定溶至10mL。

A.4.10考馬斯亮藍(lán)R-250染色液(1L)

取1g考馬斯亮藍(lán)R250，加入450mL甲醇，100mL冰醋酸，去離子水定容至1L。

A.4.11脫色液(1L)

取250ml乙醇，80mL冰醋酸，去離子水定容至1L。

A.5試驗步驟與方法

A.5.1樣品前處理

將蛋白溶液按照4:1的比例加入5×還原型蛋白上樣緩沖液，沸水浴10min，使樣品中的蛋白變性，

等待上樣。

A.5.2制備蛋白膠

按照目的蛋白分子量依據(jù)表A.1制定相應(yīng)濃度的蛋白分離膠。

表A.1蛋白膠制備比例表

分離膠配比濃縮膠

試劑8%10%12%15%5%

H2O/mL4.6343.32.32

30％丙烯酰胺2.673.3450.5

1.5MTris-Hcl

2.52.52.52.5-

(pH8.8)/mL

1MTris-Hcl

----0.5

(pH6.8)/mL

10％SDS/mL0.10.10.10.140uL

AP/mL0.10.10.10.130uL

TEMED/uL55554

總體積/mL103

分離范圍30-90kD20-80kD12-60kD10-40kD-

A.5.3上樣電泳

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等濃縮膠凝固好，取下制膠器，裝膠，將制膠器放入電泳槽后加足夠的電泳液后上樣電泳，小心拔

掉梳子，上樣，即可準(zhǔn)備開始電泳；濃縮膠電壓90V，分離膠用150V。電泳至溴酚藍(lán)里最底部大約1cm

即可終止電泳，拆膠。

A.5.4染色

取A.4.10配制完成的考馬斯亮藍(lán)染色。置于搖床上，室溫染色30min。

A.5.5脫色

取A.4.11配制完成的脫色液。置于搖床上，室溫脫色至背景清晰。

A.5.6顯影

利用凝膠電泳成像儀拍照，示意圖見圖A.1。

注：條帶序號1、2、3為纖連蛋白，進(jìn)樣量為15μL。

。

圖A.1SDS蛋白膠圖

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附錄B

（規(guī)范性）

蛋白質(zhì)濃度測定（BCA法）

B.1原理

銅與堿性環(huán)境中的蛋白質(zhì)(鍵)合形成藍(lán)色復(fù)合物。

BCA試劑是一種高靈敏度、高選擇性的比色檢測試劑，與第一步形成的亞銅陽離子(Cu+)反應(yīng)產(chǎn)

生紫色的BCA-銅復(fù)合物，在562nm處具有強線性吸收，吸收度隨蛋白濃度增加而升高。在550nm～

570nm波長范圍內(nèi)，可對紫色進(jìn)行測量。通過標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)而根據(jù)擬合方程計算樣本中蛋

白的濃度。

B.2主要儀器、設(shè)備

B.2.1酶標(biāo)儀。

B.2.2恒溫培養(yǎng)箱。

B.3試劑和材料

B.3.1實驗室用水：除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水為符合GB/T6682中規(guī)定的一級水。

B.3.2試劑：試劑盒型號為碧云天（Beyotime）-P0010。

B.3.3材料：96孔酶標(biāo)板。

B.3.4BCA工作液的配制：根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工

作液，充分混勻。

B.4樣品處理

B.4.1標(biāo)準(zhǔn)樣品制備

取1.2mL蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液加入到一管蛋白標(biāo)準(zhǔn)(30mgBSA)中，充分溶解后配制成25mg/mL的蛋白標(biāo)

準(zhǔn)溶液。配制后可立即使用，也可以-20℃長期保存。取適量25mg/mL蛋白標(biāo)準(zhǔn)，稀釋至終濃度為0.5

mg/mL。

B.4.2樣品制備

將待測樣品去離子水稀釋至檢測范圍在標(biāo)準(zhǔn)曲線內(nèi)。

B.5試驗步驟與方法

B.5.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：取一塊96孔酶標(biāo)板，按下表B.1數(shù)據(jù)加入試劑。

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表B.1標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

孔號12345678

蛋白標(biāo)準(zhǔn)

01248121620

（μL）

去離子水

2019181612840

（μL）

BCA工作液

200200200200200200200200

（μL）

蛋白濃度(mg/mL)00.0250.050.10.20.30.40.5

B.5.2樣品制備：將待測蛋白樣品用去離子水稀釋，取20μL樣品后，加入200μLBCA工作液。

B.5.3振蕩混勻后，37℃孵育30min。

B.5.4用酶標(biāo)儀測定562nm處的吸光值，以不含BCA的吸光值為空白對照。

B.5.5以蛋白濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

B.5.6根據(jù)測得的吸光值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上計算出樣品的蛋白濃度。

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T/GDCA***—2023

附錄C

（規(guī)范性）

蛋白質(zhì)純度測定（分子排阻色譜法HPSEC）

C.1原理

分子排阻色譜法是根據(jù)待測組分的分子大小進(jìn)行分離的一種液相色譜技術(shù)。分子排阻色譜法的分

離原理為凝膠色譜柱的分子篩機制。色譜柱多以親水硅膠、凝膠或經(jīng)過修飾的凝膠如葡聚糖凝膠

（Sephadex）和瓊脂糖凝膠（Sepharose）等為填充劑，這些填充劑表面分布著不同孔徑尺寸的孔，藥

物分子進(jìn)入色譜柱后，它們中的不同組分按其分子大小進(jìn)入相應(yīng)的孔內(nèi)，大于所有孔徑的分子不能進(jìn)入

填充劑顆粒內(nèi)部，在色譜過程中不被保留，最早被流動相洗脫至柱外，表現(xiàn)為保留時間較短；小于所有

孔徑的分子能自由進(jìn)入填充劑表面的所有孔徑，在色譜柱中滯留時間較長，表現(xiàn)為保留時間較長；其余

分子則按分子大小依次被洗脫。

C.2主要儀器、設(shè)備

液相色譜。

C.3試劑和材料

C.3.1實驗室用水

除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水為符合GB/T6682中規(guī)定的一級水。

C.3.2試劑

C.3.2.1氯化鈉。

C.3.2.2氨丁三醇。

C.3.3材料

凝膠色譜柱：安捷倫AdvanceBioSEC130A2.7μm。

C.3.4流動相的配制

按配方氯化鈉0.9%和氨丁三醇0.36%配置流動性，調(diào)整流動相pH至8.0。

C.3.5色譜柱裝填

裝柱前先將約15g葡聚糖凝膠SephadexG-10用水浸泡48h，使之充分溶脹，攪拌除去空氣泡，徐徐

傾入玻璃或其他適宜材質(zhì)的柱，一次性裝填完畢，以免分層，然后用水將附著玻璃管壁的SephadexG-

10洗下，使色譜柱面平整，新填裝的色譜柱要先用水連續(xù)沖洗4h～6h，以排出柱中的氣泡。

C.4樣品處理

C.4.1樣品制備

待測樣品溶解完全后，用0.22μm濾膜過濾，備用進(jìn)樣。

C.4.2樣品進(jìn)樣

進(jìn)樣可以采用自動進(jìn)樣閥，也可以直接將供試品加在床的表面（此時，先將床表面的流動相吸干或

滲干，立即將供試品溶液沿著色譜管壁轉(zhuǎn)圈緩緩加入，注意勿使填充劑翻起，待之隨著重力的作用滲入

固定相后，再沿著色譜管壁轉(zhuǎn)圈緩緩加入3~5ml流動相，以洗下殘留在色譜管壁的樣品溶液）。

C.5試驗步驟與方法

C.5.1配制樣品溶液，取10μL進(jìn)樣，測試波長為280nm，流速：1mL/min，記錄色譜圖。

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T/GDCA***—2023

C.5.2測量各峰的面積和色譜圖上除溶劑峰以外的總色譜峰面積，計算各峰面積占總峰面積的百分率,

示意圖見圖C.1、圖C.2。

圖C.1液相圖譜

圖C.2峰面積結(jié)果

C.6結(jié)果判定

根據(jù)圖C.1液相色譜圖和圖C.2峰面積結(jié)果，峰面積最大和峰高最高的即為目標(biāo)蛋白的色譜峰，其面

積占比即為目標(biāo)蛋白純度。

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ICS71.100.70

CCSY42

GDCA

廣東省化妝品學(xué)會團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/GDCA***—2023

化妝品用原料纖連蛋白

Cosmeticingredients-Fibronectin

（征求意見稿）

在提交反饋意見時，請將您知道的相關(guān)專利連同支持性文件一并附上。

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實施

廣東省化妝品學(xué)會發(fā)布

T/GDCA***—2023

化妝品用原料纖連蛋白

1范圍

本文件規(guī)定了化妝品用原料纖連蛋白的術(shù)語和定義、技術(shù)要求、試驗方法、檢驗規(guī)則和標(biāo)志、包裝、

運輸、貯存和保質(zhì)期。

本文件適用于作為化妝品原料的重組纖連蛋白的質(zhì)量要求。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

JJF1070定量包裝商品凈含量計量檢驗規(guī)則

QB/T1685化妝品產(chǎn)品包裝外觀要求

YY/T1849-2022重組膠原蛋白

《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》

《中華人民共和國藥典》

《已使用化妝品原料目錄》

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

纖連蛋白fibronectin

細(xì)胞外基質(zhì)的高分子非膠原性黏附糖蛋白，承擔(dān)機體細(xì)胞的黏附連接功能，具有由多個結(jié)構(gòu)域組成

的兩條肽鏈，并具有一定的生物學(xué)功能。

重組纖連蛋白recmbinantcibronecti

采用重組DNA技術(shù)，對編碼所需人纖連蛋白質(zhì)的基因進(jìn)行遺傳操作和（或）修飾，利用質(zhì)?；虿《?/p>

載體將目的基因轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化進(jìn)入適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞（細(xì)菌、酵母或其它真核細(xì)胞等）中，表達(dá)并翻譯成纖

連蛋白或類似纖連蛋白的多肽，經(jīng)過提取和純化等步驟制備而成。

形態(tài)分類morphologicalclassification

化妝品用纖連蛋白原料分為固態(tài)和非固態(tài)兩大類。固態(tài)類包括噴干類纖連蛋白、凍干類纖連蛋白。

非固態(tài)類包括纖連蛋白溶液。

3.3.1

噴干類纖連蛋白spray-driedfibronectin

經(jīng)噴霧干燥工藝制得的纖連蛋白原料，如纖連蛋白噴干粉。

3.3.2

凍干類纖連蛋白freeze-driedfibronectin

經(jīng)冷凍干燥工藝制得的纖連蛋白原料，如纖連蛋白凍干粉等。

3.3.3

纖連原蛋白溶液fibrinogensolution

由經(jīng)純化、換液、濃縮后的纖連蛋白原液或由固態(tài)類重組纖連蛋白制得的液體狀纖連蛋白。

4質(zhì)量控制

3

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通則

纖連蛋白因氨基酸序列和表達(dá)體系的差異，產(chǎn)物形式多樣。與天然纖連蛋白相比，其氨基酸組成、

分子量和結(jié)構(gòu)會有顯著不同?？梢允菃我蝗L氨基酸序列的纖連蛋白，也可以是由兩種或多種功能域組

合而成的重組人源化纖連蛋白，或是與天然纖連蛋白氨基酸序列同源性較低的重組類纖連蛋白。

纖連蛋白的質(zhì)量控制與分子量大小、結(jié)構(gòu)特性、質(zhì)量屬性復(fù)雜程度以及生產(chǎn)工藝相關(guān)。本文件涉及

到的質(zhì)量控制體系為化妝品原料成品檢測，在生產(chǎn)過程中的原輔料質(zhì)量控制、生產(chǎn)工藝和過程控制應(yīng)確

保各類雜質(zhì)已去除或降低至可接受水平。

劑型

根據(jù)纖連蛋白的形態(tài)，可分為溶液、粉末等不同劑型。其中粉末類固體應(yīng)為溶液劑型經(jīng)冷凍或噴霧

干燥等工藝制得。

質(zhì)量要求

使用的原料應(yīng)符合《已使用化妝品原料目錄》和《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》的規(guī)定。

感官指標(biāo)

感官指標(biāo)應(yīng)符合表1的規(guī)定。

表1感官指標(biāo)

指標(biāo)

項目

固態(tài)類非固態(tài)類

顏色白色至淡黃色無色至淡黃色透明

性狀粉末透明液體

感官指外觀

標(biāo)可見異物a無正常視力可見異物

氣味b符合規(guī)定氣味

a非固態(tài)類液體纖連蛋白低溫儲存時允許有少量絮狀懸浮物。

b標(biāo)示值應(yīng)符合制造商的聲稱值。

理化指標(biāo)

理化指標(biāo)應(yīng)符合表2的規(guī)定。

表2理化指標(biāo)

指標(biāo)

項目

固態(tài)類非固態(tài)類

氨基酸序列與纖連蛋白序列匹配度≥70%

鑒別

a蛋白質(zhì)分子量符合“標(biāo)示值±10kD”

pH6.0-9.0