第51課時(shí)微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用1．闡明無(wú)菌技術(shù)是在操作過(guò)程中，保持無(wú)菌物品和無(wú)菌區(qū)域不被微生物污染的技術(shù)。2.舉例說(shuō)明通過(guò)調(diào)整培養(yǎng)基的配方可有目的地培養(yǎng)某種微生物。3.概述平板劃線(xiàn)法和稀釋涂布平板法是實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行微生物分離和純化的常用方法。4.概述稀釋涂布平板法和顯微鏡計(jì)數(shù)法是測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法?？键c(diǎn)一微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)1．培養(yǎng)基的配制(1)概念：人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。(2)用途：用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或積累其代謝物。(3)培養(yǎng)基的種類(lèi)（按物理性質(zhì)分）培養(yǎng)基種類(lèi)培養(yǎng)基特點(diǎn)作用固體培養(yǎng)基加凝固劑，如瓊脂微生物的分離與鑒定，活菌計(jì)數(shù)，保藏菌種半固體培養(yǎng)基容器放倒不致流出，劇烈震動(dòng)則破散觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類(lèi)鑒定液體培養(yǎng)基不加凝固劑常用于工業(yè)生產(chǎn)、微生物的擴(kuò)大培養(yǎng)(4)營(yíng)養(yǎng)組成①成分成分含義作用來(lái)源碳源提供碳元素的物質(zhì)構(gòu)成生物體的細(xì)胞的物質(zhì)和一些代謝物，有些也是異養(yǎng)生物的能源物質(zhì)無(wú)機(jī)碳源：CO2、NaHCO3等；有機(jī)碳源：糖類(lèi)、牛肉膏等氮源提供氮元素的物質(zhì)合成蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)無(wú)機(jī)氮源：N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽等；有機(jī)氮源：蛋白胨等無(wú)機(jī)鹽為微生物提供除了碳、氮之外的各種重要元素，包括大量元素和微量元素為微生物提供無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH等無(wú)機(jī)化合物：KH2PO4、K2HPO4、NaCl等水生物體含量最高的無(wú)機(jī)化合物良好的溶劑，參與化學(xué)反應(yīng)等培養(yǎng)基、代謝物②在提供上述幾種主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的基礎(chǔ)上，還需要滿(mǎn)足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及O2的需求。微生物對(duì)培養(yǎng)基的需求乳酸桿菌添加維生素霉菌一般將培養(yǎng)基調(diào)至酸性細(xì)菌一般將培養(yǎng)基調(diào)至中性或弱堿性厭氧微生物提供無(wú)氧的條件2.無(wú)菌技術(shù)(1)目的：獲得純凈的培養(yǎng)物。(2)關(guān)鍵：防止雜菌污染。(3)消毒和滅菌比較項(xiàng)目條件結(jié)果常用方法應(yīng)用范圍消毒較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物（不包括芽孢和孢子）煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高溫的液體化學(xué)藥物消毒法操作空間、操作者的衣物和手等紫外線(xiàn)消毒法接種室、接種箱或超凈工作臺(tái)滅菌強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子濕熱滅菌法培養(yǎng)基、容器等干熱滅菌法玻璃器皿、金屬用具等灼燒滅菌法接種工具等3.微生物的純培養(yǎng)概念辨析4．純培養(yǎng)的過(guò)程（以酵母菌為例）：包括配制培養(yǎng)基、滅菌、接種、分離和培養(yǎng)等步驟。(1)制備培養(yǎng)基倒平板注意事項(xiàng)：①溫度：50℃左右；②操作：在酒精燈火焰附近；③冷凝后平板倒置。平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，將平板倒置，既可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，又可以避免培養(yǎng)基中的水分過(guò)快揮發(fā)。(2)接種和分離酵母菌①平板劃線(xiàn)法的原理：通過(guò)接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線(xiàn)的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。經(jīng)數(shù)次劃線(xiàn)后培養(yǎng)，可以分離得到單菌落。②平板劃線(xiàn)法的操作步驟(3)培養(yǎng)酵母菌將接種后的平板和一個(gè)未接種的平板倒置，放入28℃左右的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48h。(1)不含氮源的平板不能用于微生物培養(yǎng)。（2023·山東卷）(×)(2)接種后未長(zhǎng)出菌落的培養(yǎng)基可以直接丟棄。（2023·山東卷）(×)(3)培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，可選用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基。（2022·海南卷）(√)(4)用作培養(yǎng)基的草本植物給食用菌提供碳源和氮源。（2021·北京卷）(√)(5)將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿后，應(yīng)立即將培養(yǎng)皿倒過(guò)來(lái)放置。(×)(6)配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)先滅菌再調(diào)pH。(×)(7)（選擇性必修3P10“旁欄思考”）無(wú)菌技術(shù)除用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還具有能有效避免操作者自身被微生物感染的作用。(8)（選擇性必修3P10正文）所有微生物的培養(yǎng)基中都需要加入碳源、氮源嗎？提示：自養(yǎng)微生物能利用無(wú)機(jī)碳源（比如空氣中的CO2），培養(yǎng)基中不用添加碳源；固氮微生物可利用N2作為氮源，培養(yǎng)基中不用加入氮源?！厩榫硲?yīng)用】甲、乙兩位同學(xué)學(xué)習(xí)完微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)后，要利用所學(xué)知識(shí)研究水中微生物的情況。Ⅰ.甲同學(xué)為了檢測(cè)飲用水中是否含有某種細(xì)菌，配制如下培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)：蛋白胨10g乳糖5g蔗糖5gK2HPO42g蒸餾水1000mL將pH調(diào)到7.2【問(wèn)題探究】(1)該培養(yǎng)基所含有的碳源有蔗糖、乳糖、蛋白胨，其功能是主要用于提供能量以及構(gòu)成微生物的細(xì)胞物質(zhì)和代謝物。(2)該培養(yǎng)基所含有的氮源有蛋白胨，其功能是主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮的代謝物。(3)用該培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物時(shí)，還需要控制哪些理化條件？提示：溫度、氧氣濃度和pH等。Ⅱ.乙同學(xué)為了調(diào)查湖水中細(xì)菌的污染情況而進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)包括制備培養(yǎng)基、滅菌、平板劃線(xiàn)接種及培養(yǎng)、菌落觀察?！締?wèn)題探究】(4)對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時(shí)，應(yīng)該采用的方法是高壓蒸汽滅菌。(5)用圖中字母和箭頭表示平板劃線(xiàn)操作的正確步驟：d→b→f→a→e→c→h→g。(6)在劃線(xiàn)操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？提示：需要。劃線(xiàn)結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者。(7)在第二次以及其后的劃線(xiàn)操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線(xiàn)的末端開(kāi)始劃線(xiàn)？提示：劃線(xiàn)后，線(xiàn)條末端細(xì)菌的數(shù)目比線(xiàn)條起始處要少，每次從上一次劃線(xiàn)的末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線(xiàn)次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。(8)接種結(jié)束后，為什么要將一個(gè)未接種的培養(yǎng)基和一個(gè)已接種的培養(yǎng)基放在一起培養(yǎng)，未接種的培養(yǎng)基表面如果有菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明了什么？提示：培養(yǎng)未接種的培養(yǎng)基的作用是對(duì)照，未接種的培養(yǎng)基經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后無(wú)菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的；若有菌落形成，說(shuō)明培養(yǎng)基滅菌不徹底，或培養(yǎng)基被污染了，需要重新制備?？枷?圍繞無(wú)菌技術(shù)考查科學(xué)探究、社會(huì)責(zé)任1．（2022·湖北卷）滅菌、消毒、無(wú)菌操作是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)的操作。下列敘述正確的是(D)A．動(dòng)、植物細(xì)胞DNA的提取必須在無(wú)菌條件下進(jìn)行B．微生物、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中需添加一定量的抗生素以防止污染C．為防止蛋白質(zhì)變性，不能用濕熱滅菌法對(duì)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌D．可用濕熱滅菌法對(duì)實(shí)驗(yàn)中所使用的微量離心管、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等進(jìn)行滅菌解析：動(dòng)、植物細(xì)胞DNA的提取不需要在無(wú)菌條件下進(jìn)行，A錯(cuò)誤；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中需添加一定量的抗生素以防止污染，保證無(wú)菌環(huán)境，而微生物的培養(yǎng)不能加入抗生素，B錯(cuò)誤；一般用濕熱滅菌法對(duì)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，以防止雜菌污染，C錯(cuò)誤。2．（2025·江蘇鎮(zhèn)江開(kāi)學(xué)考）防止雜菌污染是獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵。下列敘述錯(cuò)誤的是(C)A．利用微生物能夠寄生于多種細(xì)菌體內(nèi)使細(xì)菌裂解，可實(shí)現(xiàn)生物消毒B．利用紫外線(xiàn)對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行消毒前，噴灑消毒液可加強(qiáng)消毒效果C．利用干熱滅菌箱對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌時(shí)，應(yīng)在160～170℃的熱空氣中維持1～2hD．利用酒精燈對(duì)金屬用具進(jìn)行灼燒滅菌時(shí)，應(yīng)在酒精燈火焰充分燃燒層進(jìn)行解析：應(yīng)用高壓蒸汽滅菌法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，C錯(cuò)誤?？枷?圍繞微生物的純培養(yǎng)考查科學(xué)思維、科學(xué)探究3．（2024·湖南卷）微生物平板劃線(xiàn)和培養(yǎng)的具體操作如圖所示，下列操作正確的是(D)A.①②⑤⑥ B．③④⑥⑦C．①②⑦⑧ D．①③④⑤解析：由題圖可知，②中拔出棉塞后應(yīng)握住棉塞上部；⑥中劃線(xiàn)時(shí)不能將培養(yǎng)皿的皿蓋完全打開(kāi)，應(yīng)只打開(kāi)一條縫隙；⑦中劃線(xiàn)時(shí)第5次的劃線(xiàn)不能與第1次的劃線(xiàn)相連；⑧中平板應(yīng)倒置培養(yǎng)。①③④⑤正確。4．為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線(xiàn)接種纖維素降解細(xì)菌，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列敘述正確的是(B)A．倒平板后需間歇晃動(dòng)，以保證表面平整B．圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落C．該實(shí)驗(yàn)結(jié)果因單菌落太多，不能達(dá)到菌種純化的目的D．菌落周?chē)睦w維素被降解后，可被剛果紅染成紅色解析：倒平板后無(wú)須間歇晃動(dòng)，A錯(cuò)誤；由題圖可知，隨著劃線(xiàn)次數(shù)增多，細(xì)菌密度逐漸減小，Ⅲ區(qū)開(kāi)始出現(xiàn)單菌落，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落，B正確；該實(shí)驗(yàn)的Ⅲ區(qū)已經(jīng)出現(xiàn)由單個(gè)細(xì)菌繁殖而形成的菌落，因此已經(jīng)達(dá)到菌種純化的目的，C錯(cuò)誤；剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物，菌落周?chē)睦w維素被降解后紅色消失，出現(xiàn)透明圈，D錯(cuò)誤。考點(diǎn)二微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)1．選擇培養(yǎng)基2．微生物的選擇培養(yǎng)(1)取樣：鏟取土樣，將樣品裝入紙袋中。(2)稀釋涂布平板法的步驟①系列稀釋操作：將10g土樣加入盛有90mL無(wú)菌水的錐形瓶中，充分搖勻。取1mL上清液加入盛有9mL無(wú)菌水的試管中，依次等比稀釋。②涂布平板操作3．微生物的數(shù)量測(cè)定(1)利用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)單菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。②計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)：為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)為30～300、適于計(jì)數(shù)的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，并且在同一稀釋度下，應(yīng)至少對(duì)3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出平均值，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。③計(jì)數(shù)方法：用此種方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目少，這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來(lái)表示。(2)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法4．土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)(1)實(shí)驗(yàn)原理(2)操作步驟(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評(píng)價(jià)5．分解纖維素的微生物的分離(1)分離方法與原理(2)纖維素分解菌的培養(yǎng)基成分及鑒定原理(1)平板涂布時(shí)涂布器使用前必須進(jìn)行消毒。（2023·山東卷）(×)(2)利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物。（2023·山東卷）(√)(3)稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時(shí)，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目少。(√)(4)測(cè)定土壤中細(xì)菌的數(shù)量，一般選用1×102、1×103、1×104倍數(shù)的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)。(×)(5)以未接種的培養(yǎng)基為對(duì)照組，可判斷選擇培養(yǎng)基是否具有選擇作用。(×)(6)在含有剛果紅的培養(yǎng)基上，纖維素分解菌菌落周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)抑菌圈。(×)(7)在某一濃度下涂布三個(gè)平板，若三個(gè)平板統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)差別不大，則應(yīng)以它們的平均值作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果。(√)(8)（選擇性必修3P19“探究·實(shí)踐”延伸思考）能分解尿素的細(xì)菌不能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源，原因是分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)生物，不能利用CO2來(lái)合成有機(jī)物?？枷?圍繞微生物的選擇培養(yǎng)考查科學(xué)探究1．（2024·重慶卷）養(yǎng)殖場(chǎng)糞便是農(nóng)家肥的重要來(lái)源，其中某些微生物可使氨氮化合物轉(zhuǎn)化為尿素進(jìn)而產(chǎn)生NH3，影響畜禽健康。為篩選糞便中能利用氨氮化合物且減少NH3產(chǎn)生的微生物。興趣小組按圖進(jìn)行實(shí)驗(yàn)獲得目的菌株，正確的是(C)A．①通常在等比稀釋后用平板劃線(xiàn)法獲取單個(gè)菌落B．②挑取在2種培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)的用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)C．③可通過(guò)添加脲酶并檢測(cè)活性，篩選得到甲、乙D．糞便中添加菌株甲比乙更有利于NH3的減少解析：用平板劃線(xiàn)法獲取單個(gè)菌落時(shí)無(wú)須稀釋菌液，A錯(cuò)誤；由題圖可知，②的目的是篩選不能在尿素唯一氮源培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，而能在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌株用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)，B錯(cuò)誤；所篩選出的菌株之所以不能利用尿素，可能是由于不產(chǎn)生脲酶或分泌脲酶抑制劑，所以③可通過(guò)添加脲酶并檢測(cè)活性，篩選得到甲、乙，C正確；由題圖可知，甲不產(chǎn)生脲酶，乙分泌脲酶抑制劑，糞便中可能還含有其他能產(chǎn)生脲酶的菌株使甲能夠產(chǎn)生NH3，所以糞便中添加菌株乙比甲更有利于NH3的減少，D錯(cuò)誤。兩種純化方法的比較項(xiàng)目平板劃線(xiàn)法稀釋涂布平板法分離結(jié)果關(guān)鍵操作接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線(xiàn)一系列的梯度稀釋?zhuān)煌坎计桨宀僮鹘臃N用具接種環(huán)涂布器優(yōu)點(diǎn)可以觀察菌落特征，對(duì)混合菌進(jìn)行分離可以計(jì)數(shù)，可以觀察菌落特征缺點(diǎn)不能計(jì)數(shù)操作復(fù)雜，需要涂布多個(gè)平板共同點(diǎn)都要用到固體培養(yǎng)基；都需進(jìn)行無(wú)菌操作；都會(huì)在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落；都可用于觀察菌落特征2．（2022·廣東卷）研究深海獨(dú)特的生態(tài)環(huán)境對(duì)于開(kāi)發(fā)海洋資源具有重要意義。近期在“科學(xué)號(hào)”考察船對(duì)中國(guó)南?？瓶贾校袊?guó)科學(xué)家采集了某海域1146米深海冷泉附近沉積物樣品，分離、鑒定得到新的微生物菌株并進(jìn)一步研究了其生物學(xué)特性?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)研究者先制備富集培養(yǎng)基，然后采用高壓蒸汽滅菌法滅菌，冷卻后再接入沉積物樣品，28℃厭氧培養(yǎng)一段時(shí)間后，獲得了含擬桿菌的混合培養(yǎng)物，為了獲得純種培養(yǎng)物，除了稀釋涂布平板法，還可采用平板劃線(xiàn)法。據(jù)圖分析，擬桿菌新菌株在以纖維素為碳源時(shí)生長(zhǎng)狀況最好。(2)研究發(fā)現(xiàn)，將采集的樣品置于各種培養(yǎng)基中培養(yǎng)，仍有很多微生物不能被分離篩選出來(lái)，推測(cè)其原因可能是某些微生物只有利用深海冷泉中的特有物質(zhì)才能生存（或需要在深海冷泉的特定環(huán)境中才能存活）。（答一點(diǎn)即可）(3)藻類(lèi)細(xì)胞解體后的難降解多糖物質(zhì)，通常會(huì)聚集形成碎屑沉降到深海底部。從生態(tài)系統(tǒng)組成成分的角度考慮，擬桿菌對(duì)深海生態(tài)系統(tǒng)碳循環(huán)的作用可能是擬桿菌作為分解者，將沉降到深海底部的難降解多糖物質(zhì)分解為無(wú)機(jī)物，歸還到無(wú)機(jī)環(huán)境中，有利于碳循環(huán)的順利進(jìn)行。(4)深海冷泉環(huán)境特殊，推測(cè)此環(huán)境下生存的擬桿菌所分泌的各種多糖降解酶，除具有酶的一般共性外，其特性可能還有耐低溫。解析：(1)培養(yǎng)基配制后通常采用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌。接種時(shí)，可以采用稀釋涂布平板法或平板劃線(xiàn)法，將菌種分散在固體培養(yǎng)基上，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)得到單菌落，從而獲得純種培養(yǎng)菌。分析圖中曲線(xiàn)可知，在以纖維素為碳源的培養(yǎng)基中，細(xì)胞數(shù)量最多，可推知擬桿菌新菌株在以纖維素為碳源時(shí)生長(zhǎng)狀況最好。(2)深海冷泉中可能存在某些微生物，只有利用冷泉中的特有物質(zhì)才能生存，或者只能在深海冷泉的特定環(huán)境中才能存活，故將采集的樣品置于各種培養(yǎng)基中培養(yǎng)，仍可能有很多微生物不能被分離篩選出來(lái)。(3)擬桿菌為異養(yǎng)生物，作為深海冷泉生態(tài)系統(tǒng)的分解者，能將沉降到深海底部的難降解多糖物質(zhì)分解為無(wú)機(jī)物，歸還到無(wú)機(jī)環(huán)境中，有利于碳循環(huán)的進(jìn)行。(4)深海冷泉溫度較低，故生活在其中的擬桿菌所分泌的各種多糖降解酶，應(yīng)具有耐低溫的特性，才能高效降解多糖，保證擬桿菌的正常生命活動(dòng)所需?？枷?圍繞微生物的分離和計(jì)數(shù)考查科學(xué)思維、科學(xué)探究3．（2023·遼寧卷）細(xì)菌氣溶膠是由懸浮于大氣或附著于顆粒物表面的細(xì)菌形成的。利用空氣微生物采樣器對(duì)某市人員密集型公共場(chǎng)所采樣并檢測(cè)細(xì)菌氣溶膠的濃度（菌落數(shù)/m3）。下列敘述錯(cuò)誤的是(D)A．采樣前需對(duì)空氣微生物采樣器進(jìn)行無(wú)菌處理B．細(xì)菌氣溶膠樣品恒溫培養(yǎng)時(shí)需將平板倒置C．同一稀釋度下至少對(duì)3個(gè)平板計(jì)數(shù)并取平均值D．稀釋涂布平板法檢測(cè)的細(xì)菌氣溶膠濃度比實(shí)際值高解析：為防止雜菌污染，接種前需要對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、微生物采樣器進(jìn)行滅菌，對(duì)實(shí)驗(yàn)操作者的雙手進(jìn)行消毒，A正確；純化培養(yǎng)時(shí)，為防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基和避免培養(yǎng)基中的水分過(guò)快蒸發(fā)，培養(yǎng)皿應(yīng)倒置放在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，B正確；微生物計(jì)數(shù)時(shí)在同一稀釋度下，需要對(duì)至少3個(gè)菌落數(shù)目在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，以確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，C正確；使用稀釋涂布平板法對(duì)微生物計(jì)數(shù)，數(shù)值往往偏低，原因是兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，在平板上只能觀察到一個(gè)菌落，D錯(cuò)誤。4．（2024·全國(guó)甲卷）合理使用消毒液有助于減少傳染病的傳播。某同學(xué)比較了3款消毒液A、B、C殺滅細(xì)菌的效果，結(jié)果如圖所示。回答下列問(wèn)題：(1)該同學(xué)采用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法和菌落計(jì)數(shù)法分別測(cè)定同一樣品的細(xì)菌數(shù)量，發(fā)現(xiàn)測(cè)得的細(xì)菌數(shù)量前者大于后者，其原因是前者活菌和死菌一起計(jì)數(shù)，后者存在多個(gè)活菌形成一個(gè)菌落的情況且只計(jì)數(shù)活菌。(2)該同學(xué)從100mL細(xì)菌原液中取1mL加入無(wú)菌水中得到10mL稀釋菌液，再?gòu)南♂尵褐腥?00μL涂布平板，菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果為100，據(jù)此推算細(xì)菌原液中細(xì)菌濃度為5000個(gè)/mL。(3)菌落計(jì)數(shù)過(guò)程中，涂布器應(yīng)先在酒精燈上灼燒，冷卻后再涂布。灼燒的目的是殺死涂布器上可能存在的微生物，防止雜菌污染，冷卻的目的是防止溫度過(guò)高殺死菌種。(4)據(jù)圖可知?dú)⒕Ч詈玫南疽菏茿，判斷依據(jù)是A消毒液活細(xì)菌減少量最多；殺菌時(shí)間較短，效率最高。（答出2點(diǎn)即可）(5)鑒別培養(yǎng)基可用于反映消毒液殺滅大腸桿菌的效果。大腸桿菌在伊紅—亞甲藍(lán)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落呈深紫色。解析：(1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法把死菌和活菌一起計(jì)數(shù)。菌落計(jì)數(shù)法只計(jì)活菌數(shù)，還可能存在多個(gè)活菌形成一個(gè)菌落的情況，故測(cè)得的細(xì)菌數(shù)量前者大于后者。(2)從100mL細(xì)菌原液中取1mL加入無(wú)菌水中得到10mL稀釋菌液，即稀釋了10倍，1mL細(xì)菌原液中所含細(xì)菌數(shù)量＝（菌落數(shù)÷菌液體積）×稀釋倍數(shù)＝100÷(200×10-3)×10＝5000（個(gè)），所以細(xì)菌原液中細(xì)菌濃度為5000個(gè)/mL。(3)菌落計(jì)數(shù)過(guò)程中，涂布器應(yīng)先在酒精燈上灼燒，冷卻后再涂布。灼燒的目的是殺死涂布器上可能存在的微生物，防止雜菌污染，冷卻的目的是防止溫度過(guò)高殺死菌種。(4)A消毒液活細(xì)菌減少量最多，且殺菌時(shí)間較短，效率最高，因此A消毒液殺菌效果最好。(5)大腸桿菌在伊紅—亞甲藍(lán)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落呈深紫色。1．（2022·遼寧卷）為避免航天器在執(zhí)行載人航天任務(wù)時(shí)出現(xiàn)微生物污染風(fēng)險(xiǎn)，需要對(duì)航天器及潔凈的組裝車(chē)間進(jìn)行環(huán)境微生物檢測(cè)。下列敘述錯(cuò)誤的是(D)A．航天器上存在適應(yīng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)匱乏等環(huán)境的極端微生物B．細(xì)菌形成菌膜黏附于航天器設(shè)備表面產(chǎn)生生物腐蝕C．在組裝車(chē)間地面和設(shè)備表面采集環(huán)境微生物樣品D．采用平板劃線(xiàn)法等分離培養(yǎng)微生物，觀察菌落特征解析：航天器處于外太空的極端環(huán)境中，其上可能存在適應(yīng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)匱乏等環(huán)境的極端微生物，A正確；細(xì)菌形成菌膜可黏附于航天器設(shè)備表面產(chǎn)生生物腐蝕，故需要潔凈的組裝車(chē)間，B正確；在組裝車(chē)間地面和設(shè)備表面可采集環(huán)境微生物樣品，C正確；由于航天器及潔凈的組裝車(chē)間微生物很少，不需要用平板劃線(xiàn)法分離微生物，D錯(cuò)誤。2．（2023·廣東卷）研究者擬從堆肥中取樣并篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌。根據(jù)堆肥溫度變化曲線(xiàn)（如圖）和選擇培養(yǎng)基篩選原理來(lái)判斷，下列最可能篩選到目標(biāo)菌的條件組合是(D)A．a(chǎn)點(diǎn)時(shí)取樣、尿素氮源培養(yǎng)基B．b點(diǎn)時(shí)取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基C．b點(diǎn)時(shí)取樣、蛋白胨氮源培養(yǎng)基D．c點(diǎn)時(shí)取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基解析：研究目的是篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌，因此目標(biāo)菌既要耐高溫，又要能夠高效降解角蛋白，所以應(yīng)在c點(diǎn)時(shí)取樣，并且用角蛋白氮源培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)，D符合題意。3．（2021·山東卷）含硫蛋白質(zhì)在某些微生物的作用下產(chǎn)生硫化氫導(dǎo)致生活污水發(fā)臭。硫化氫可以與硫酸亞鐵銨結(jié)合形成黑色沉淀。為探究發(fā)臭水體中甲、乙菌是否產(chǎn)生硫化氫及兩種菌的運(yùn)動(dòng)能力，用穿刺接種的方法分別將兩種菌接種在含有硫酸亞鐵銨的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，如圖所示。若兩種菌繁殖速度相等，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是(B)A．乙菌的運(yùn)動(dòng)能力比甲菌強(qiáng)B．為不影響菌的運(yùn)動(dòng)需選用液體培養(yǎng)基C．該實(shí)驗(yàn)不能比較出兩種菌產(chǎn)生硫化氫的量D．穿刺接種等接種技術(shù)的核心是防止雜菌的污染解析：從圖中可以看出甲菌在試管中分布范圍小于乙菌，說(shuō)明了乙菌的運(yùn)動(dòng)能力比甲菌強(qiáng)，A正確；為不影響菌的運(yùn)動(dòng)需選用半固體培養(yǎng)基，B錯(cuò)誤；該實(shí)驗(yàn)只能對(duì)甲、乙菌能否產(chǎn)生硫化氫進(jìn)行定性分析，并不能比較兩種菌產(chǎn)生硫化氫的量，C正確；微生物接種技術(shù)的核心是防止雜菌的污染，D正確。4．（2024·海南卷）某小組為檢測(cè)1株粗糙脈孢霉突變株的氨基酸缺陷類(lèi)型，在相同培養(yǎng)溫度和時(shí)間的條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(D)組別培養(yǎng)條件實(shí)驗(yàn)結(jié)果①基礎(chǔ)培養(yǎng)基無(wú)法生長(zhǎng)②基礎(chǔ)培養(yǎng)基＋甲、乙、丙3種氨基酸正常生長(zhǎng)③基礎(chǔ)培養(yǎng)基＋甲、乙2種氨基酸無(wú)法生長(zhǎng)④基礎(chǔ)培養(yǎng)基＋甲、丙2種氨基酸正常生長(zhǎng)⑤基礎(chǔ)培養(yǎng)基＋乙、丙2種氨基酸正常生長(zhǎng)A.組別①是②③④⑤的對(duì)照組B．培養(yǎng)溫度和時(shí)間屬于無(wú)關(guān)變量C．①②結(jié)果表明，甲、乙、丙3種氨基酸中有該突變株正常生長(zhǎng)所必需的氨基酸D．①～⑤結(jié)果表明，該突變株為氨基酸甲缺陷型解析：與①組相比，在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，若添加的氨基酸中含有丙種氨基酸，則粗糙脈孢霉突變株都能正常生長(zhǎng)，但在只添加甲、乙2種氨基酸的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中無(wú)法生長(zhǎng)，說(shuō)明該突變株為氨基酸丙缺陷型，D錯(cuò)誤。課時(shí)作業(yè)51（總分：50分）一、選擇題（每小題3分，共30分）1．（2025·遼寧沈陽(yáng)模擬）地衣芽孢桿菌具有調(diào)節(jié)動(dòng)物腸道微生態(tài)平衡，增加動(dòng)物機(jī)體抗病能力的功能。仔兔飼喂地衣芽孢桿菌20～40天后，其免疫器官生長(zhǎng)發(fā)育迅速，血漿中T淋巴細(xì)胞值較對(duì)照組高。下列敘述錯(cuò)誤的是(A)A．培養(yǎng)地衣芽孢桿菌時(shí)，需要將培養(yǎng)基調(diào)至酸性B．可用液體培養(yǎng)基對(duì)地衣芽孢桿菌擴(kuò)大培養(yǎng)C．使用后的培養(yǎng)基在丟棄前要經(jīng)過(guò)滅菌處理D．地衣芽孢桿菌改變了仔兔腸道菌群的結(jié)構(gòu)解析：地衣芽孢桿菌屬于細(xì)菌，其培養(yǎng)基一般呈中性或弱堿性，A錯(cuò)誤。2．（2025·江西贛州模擬）硝化細(xì)菌在觀賞魚(yú)類(lèi)養(yǎng)殖中發(fā)揮著重要的作用，魚(yú)類(lèi)的排泄物和未吃完的食物會(huì)轉(zhuǎn)變成氨和亞硝酸，而硝化細(xì)菌可以利用氧化氨和亞硝酸時(shí)釋放的能量合成有機(jī)物。若要對(duì)魚(yú)缸中的硝化細(xì)菌進(jìn)行分離和計(jì)數(shù)，下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(C)A．可以從觀賞魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)良好的魚(yú)缸中進(jìn)行取樣B．篩選硝化細(xì)菌的培養(yǎng)基中不需要添加有機(jī)碳源C．可用接種環(huán)連續(xù)劃線(xiàn)、逐步稀釋?zhuān)M(jìn)行純化和計(jì)數(shù)D．計(jì)數(shù)時(shí)每隔24h統(tǒng)計(jì)一次，待菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)記錄結(jié)果解析：魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)良好的魚(yú)缸中，氮循環(huán)穩(wěn)定，魚(yú)缸中含有較多的硝化細(xì)菌可以及時(shí)將魚(yú)的排泄物和未吃完的食物分解，因此可以從觀賞魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)良好的魚(yú)缸中取樣來(lái)分離硝化細(xì)菌，A正確；硝化細(xì)菌屬于自養(yǎng)生物，可以利用空氣中的CO2作碳源，B正確；要對(duì)魚(yú)缸中的硝化細(xì)菌進(jìn)行分離和計(jì)數(shù)，需要用稀釋涂布平板法，平板劃線(xiàn)法不能用于微生物的計(jì)數(shù)，C錯(cuò)誤；對(duì)菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，要以連續(xù)觀察直至數(shù)量不再增加時(shí)的菌落數(shù)作為計(jì)數(shù)結(jié)果，D正確。3．（2024·廣東中山一模）某同學(xué)欲檢測(cè)消毒餐具中大腸桿菌的數(shù)量是否超標(biāo)，進(jìn)行如下操作：用蒸餾水分3～5次沖洗待檢餐具內(nèi)表面，制成待測(cè)樣液備用；配制伊紅—亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基，將待測(cè)樣液接種于瓊脂培養(yǎng)基上。下列敘述錯(cuò)誤的是(C)A．為了確保檢測(cè)的準(zhǔn)確性，沖洗待檢餐具的蒸餾水應(yīng)該換成無(wú)菌水B．生長(zhǎng)在伊紅—亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上的大腸桿菌菌落具有金屬光澤C．設(shè)置牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作對(duì)照可檢驗(yàn)該鑒別培養(yǎng)基的效果D．為便于觀察菌落的顏色，應(yīng)將培養(yǎng)基的pH調(diào)至中性或弱堿性解析：蒸餾水中可能存在大腸桿菌，對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生干擾，為了確保檢測(cè)的準(zhǔn)確性，沖洗待檢餐具的蒸餾水應(yīng)該換成無(wú)菌水，A正確；生長(zhǎng)在伊紅—亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上的大腸桿菌菌落呈深紫色且具有金屬光澤，B正確；為檢驗(yàn)該鑒別培養(yǎng)基的效果，應(yīng)設(shè)置接種大腸桿菌的伊紅—亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基作對(duì)照，C錯(cuò)誤；大腸桿菌屬于細(xì)菌，在培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，需要將培養(yǎng)基的pH調(diào)至中性或弱堿性，D正確。4．（2025·河北邢臺(tái)摸底）物質(zhì)M是一種難以降解的含氮有機(jī)物，其在培養(yǎng)基中表現(xiàn)為不透明。某研究小組欲從土壤中分離出能降解M的微生物，取土樣并進(jìn)行一系列稀釋后，取稀釋液滴加到平板A上開(kāi)始涂布，然后置于恒溫箱中培養(yǎng)24h，發(fā)現(xiàn)平板上的部分菌落周?chē)霈F(xiàn)透明圈，部分菌落周?chē)闯霈F(xiàn)透明圈。下列有關(guān)分析錯(cuò)誤的是(C)A．平板A應(yīng)以物質(zhì)M為唯一有機(jī)氮源，屬于選擇培養(yǎng)基B．平板A上的菌落數(shù)過(guò)多可能是取樣前未將稀釋液搖勻所致C．平板A上出現(xiàn)了無(wú)透明圈的菌落是因?yàn)榕囵B(yǎng)基被污染了D．透明圈最大的菌落，其分解M的能力未必最強(qiáng)解析：由題意可知，欲從土壤中分離出能降解M的微生物，可見(jiàn)平板A應(yīng)以物質(zhì)M為唯一有機(jī)氮源，屬于選擇培養(yǎng)基，A正確；由題干信息可知，實(shí)驗(yàn)采用稀釋涂布平板法進(jìn)行接種，平板A上的菌落數(shù)過(guò)多可能是取樣前未將稀釋液搖勻所致，B正確；平板A上出現(xiàn)了無(wú)透明圈的菌落不是因?yàn)榕囵B(yǎng)基被污染了，而是細(xì)菌分解M的能力弱，C錯(cuò)誤；透明圈直徑與菌落直徑的比值大小能反映該細(xì)菌對(duì)物質(zhì)M的分解能力，透明圈最大的菌落，其分解M的能力未必最強(qiáng)，D正確。5．（2025·重慶渝北區(qū)摸底）采用巴氏消毒法進(jìn)行殺菌處理的牛奶通常被稱(chēng)為“巴氏殺菌乳”，某款牛奶的產(chǎn)品介紹如圖所示。根據(jù)圖中信息判斷，下列說(shuō)法正確的是(D)A．巴氏消毒的優(yōu)點(diǎn)是既能殺死所有微生物，又不破壞牛奶的成分B．如果盒裝牛奶出現(xiàn)鼓包，很可能是乳酸菌污染導(dǎo)致C．鮮牛奶應(yīng)保存在2～6℃條件下，因?yàn)樵谶@個(gè)區(qū)間的溫度能夠殺死微生物D．巴氏消毒可以破壞微生物的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，使其失去活性解析：巴氏消毒法的優(yōu)點(diǎn)是能夠殺死牛奶中的大部分病原微生物，并且基本不會(huì)對(duì)牛奶的營(yíng)養(yǎng)成分造成破壞，A錯(cuò)誤；乳酸菌無(wú)氧呼吸不產(chǎn)生氣體，如果被乳酸菌污染，不會(huì)使盒裝牛奶出現(xiàn)鼓包，B錯(cuò)誤；鮮牛奶應(yīng)保存在2～6℃條件下，因?yàn)檫@個(gè)溫度區(qū)間可以抑制微生物的生長(zhǎng)和繁殖，而不是直接殺死微生物，C錯(cuò)誤；巴氏消毒通過(guò)將牛奶加熱到一定溫度，可以破壞微生物的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，使其失去活性，從而達(dá)到殺菌的效果，D正確。6．（2025·湖南長(zhǎng)沙聯(lián)考）聚乙烯醇（PVA，一種難以降解的大分子有機(jī)物）能與碘作用產(chǎn)生藍(lán)綠色復(fù)合物，復(fù)合物被降解后呈白色，PVA分解菌能夠產(chǎn)生PVA酶降解PVA。某實(shí)驗(yàn)小組從土壤樣品中分離具有降解PVA功能的菌株，大致過(guò)程是①稱(chēng)量土樣→②依次等比稀釋→③涂布平板→④滴加碘液，挑取需要的單菌落轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)液中培養(yǎng)→⑤檢測(cè)菌株降解PVA的能力→⑥選取優(yōu)良菌株擴(kuò)大培養(yǎng)。下列敘述正確的是(C)A．制備以PVA為唯一碳源的培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)先滅菌再調(diào)pHB．步驟③中涂布時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)涂布器，使菌液在培養(yǎng)基上涂布均勻C．步驟④中應(yīng)挑取透明圈直徑與菌落直徑之比大的菌落進(jìn)行培養(yǎng)D．步驟⑥中若要準(zhǔn)確計(jì)數(shù)某一時(shí)刻菌液中的活菌，應(yīng)采用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法解析：制備培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)先調(diào)節(jié)pH后滅菌，A錯(cuò)誤；涂布時(shí)，應(yīng)轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使涂布均勻，B錯(cuò)誤；步驟④中，培養(yǎng)基中的PVA被可降解PVA的分解菌降解后，不能與碘作用產(chǎn)生藍(lán)綠色復(fù)合物，會(huì)出現(xiàn)透明圈，故透明圈直徑與菌落直徑之比越大，說(shuō)明菌株降解PVA的能力越強(qiáng)，C正確；顯微鏡直接計(jì)數(shù)不能區(qū)分菌體的死活，無(wú)法得到準(zhǔn)確的活菌數(shù)目，D錯(cuò)誤。7．（2024·四川成都一模）工業(yè)生產(chǎn)中常用谷氨酸棒狀桿菌的高絲氨酸缺陷型菌作為賴(lài)氨酸的發(fā)酵菌株?？蒲腥藛T將紫外線(xiàn)照射處理過(guò)的野生谷氨酸棒狀桿菌菌液（原菌液），經(jīng)過(guò)程①（稀釋10倍）接種在培養(yǎng)基甲上培養(yǎng)，菌落數(shù)目不再增加時(shí)如圖中培養(yǎng)基甲。過(guò)程②表示向培養(yǎng)基甲中添加某種物質(zhì)，繼續(xù)培養(yǎng)。下列敘述正確的是(C)A．菌落A是誘變產(chǎn)生的高絲氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌種B．培養(yǎng)基甲是一種選擇培養(yǎng)基，過(guò)程②向甲中添加賴(lài)氨酸C．經(jīng)過(guò)程①取0.2mL菌液涂布得到甲平板所示結(jié)果，則原菌液未突變菌株濃度約為450個(gè)/mLD．發(fā)酵結(jié)束后，將過(guò)濾得到的固體物質(zhì)進(jìn)行干燥即可獲得賴(lài)氨酸產(chǎn)品解析：野生菌種經(jīng)紫外線(xiàn)照射處理后接種于培養(yǎng)基甲上，與培養(yǎng)基甲相比，培養(yǎng)基乙上菌落多，說(shuō)明過(guò)程②往培養(yǎng)基中添加的某種物質(zhì)是高絲氨酸，新出現(xiàn)的菌落為高絲氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌種，即菌落A是野生型菌種，菌落B為高絲氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌種，A錯(cuò)誤；結(jié)合題圖分析可知，培養(yǎng)基甲上只有菌落A，過(guò)程②向培養(yǎng)基甲中添加高絲氨酸后出現(xiàn)菌落B，這說(shuō)明培養(yǎng)基甲中缺少高絲氨酸，是一種選擇培養(yǎng)基，B錯(cuò)誤；過(guò)程①取0.2mL菌液進(jìn)行涂布后得到的培養(yǎng)基甲上有9個(gè)菌落，所以菌液稀釋10倍后每毫升中有未突變的菌株9÷0.2＝45（個(gè)），紫外線(xiàn)照射處理后的菌液中未突變的菌株濃度約為450個(gè)/mL，C正確；發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵產(chǎn)品采取適當(dāng)?shù)奶崛?、分離和純化措施來(lái)獲得賴(lài)氨酸產(chǎn)品，D錯(cuò)誤。8．（2025·江蘇南通模擬）研究人員為分離出產(chǎn)酒精能力強(qiáng)的酵母菌菌株，進(jìn)行了如下圖所示實(shí)驗(yàn)，甲、乙、丙、丁錐形瓶?jī)?nèi)分別加入100mL完全培養(yǎng)基。相關(guān)敘述正確的是(C)A．過(guò)程②涂布器蘸取酒精后立即置于酒精燈火焰上灼燒，以防酒精揮發(fā)B．根據(jù)涂布后菌落的數(shù)目計(jì)算出葡萄酒過(guò)濾液的酵母菌密度約為6.8×109個(gè)·L-1C．后續(xù)還需對(duì)甲、乙、丙、丁瓶中的酒精濃度和活菌數(shù)量進(jìn)行檢測(cè)D．分離出的優(yōu)質(zhì)酵母菌菌株可用于白酒釀造，能耐受酒精度40%vol以上的發(fā)酵液解析：過(guò)程②涂布器蘸取酒精后立即置于酒精燈火焰上灼燒，防止殘留酒精影響微生物生長(zhǎng)，冷卻后用于涂布，A錯(cuò)誤；若對(duì)微生物計(jì)數(shù)，需選取菌落數(shù)處于30～300的培養(yǎng)皿計(jì)數(shù)，葡萄酒過(guò)濾液中活菌的密度約為(62＋68＋74)÷3÷0.1×104×103＝6.8×109（個(gè)·L-1），但菌液中不只有酵母菌這一種微生物，故該數(shù)值不能代表酵母菌的種群密度，B錯(cuò)誤；后續(xù)還需對(duì)甲、乙、丙、丁瓶中的酒精濃度和活菌數(shù)量進(jìn)行檢測(cè)，以確定分離效果，C正確；分離出的優(yōu)質(zhì)酵母菌菌株可用于白酒釀造，能耐受酒精度為多少還需要進(jìn)一步通過(guò)實(shí)驗(yàn)才能確定，D錯(cuò)誤。9．（2025·河南濮陽(yáng)模擬）谷氨酰胺酶（PG酶）是一種催化L-β-谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨的酶，能增大蛋白質(zhì)的溶解性，提高食品工業(yè)中蛋白質(zhì)的利用率。研究人員利用谷氨酰胺—甘氨酸（谷氨酰胺—甘氨酸遇熱易分解）為唯一氮源從土壤中篩選產(chǎn)PG酶的金黃桿菌，實(shí)驗(yàn)過(guò)程如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是(A)A．該實(shí)驗(yàn)不僅篩選出了產(chǎn)PG酶的金黃桿菌，并且還對(duì)其進(jìn)行了計(jì)數(shù)B．金黃桿菌在培養(yǎng)基Ⅰ和Ⅲ中的生長(zhǎng)速度高于在培養(yǎng)基Ⅱ的生長(zhǎng)速度C．培養(yǎng)基Ⅰ～Ⅲ中的氮源相同，三種培養(yǎng)基都是選擇培養(yǎng)基D．PG酶的活性可以用單位時(shí)間內(nèi)催化L-β-谷氨酰胺水解生成氨的數(shù)量來(lái)表示解析：該實(shí)驗(yàn)篩選出了產(chǎn)PG酶的金黃桿菌，但從圖中的操作看只用了一個(gè)平板，所以并沒(méi)有對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，A錯(cuò)誤；培養(yǎng)基Ⅰ和Ⅲ屬于液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基Ⅱ?qū)儆诠腆w培養(yǎng)基，微生物在液體培養(yǎng)基中由于和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)接觸充分，所以代謝和繁殖效率高，故金黃桿菌在培養(yǎng)基Ⅰ和Ⅲ中的生長(zhǎng)速度高于在培養(yǎng)基Ⅱ的生長(zhǎng)速度，B正確；培養(yǎng)基Ⅰ～Ⅲ中的氮源相同，三種培養(yǎng)基都可以篩選產(chǎn)PG酶的金黃桿菌，所以都是選擇培養(yǎng)基，C正確；由于PG酶可以催化L-β-谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨，所以PG酶的活性可以用單位時(shí)間內(nèi)催化L-β-谷氨酰胺水解生成氨的數(shù)量來(lái)表示，D正確。10．（2025·福建泉州摸底）某興趣小組利用碳青霉烯類(lèi)抗生素進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)。步驟1：將大腸桿菌接種于培養(yǎng)基平板上，并將平板劃分為四個(gè)大小一致的區(qū)域，分別標(biāo)記為①～④。①區(qū)域放入1張不含碳青霉烯類(lèi)抗生素的圓形濾紙片，②～④區(qū)域各放入1張含碳青霉烯類(lèi)抗生素的相同圓形濾紙片，將培養(yǎng)皿倒置于適宜條件下培養(yǎng)12～16h。步驟2：挑取該平板上位于抑菌圈邊緣菌落的細(xì)菌配制菌液，重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)操作，培養(yǎng)至第3代，觀察、測(cè)量并記錄每一代的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，結(jié)果如下表。下列相關(guān)敘述正確的是(B)區(qū)域抑菌圈直徑/cm第1代第2代第3代②2.261.891.62③2.411.911.67④2.421.871.69A.步驟1為使用平板劃線(xiàn)法進(jìn)行大腸桿菌接種B.抑菌圈邊緣的菌落更易培養(yǎng)出具有抗藥性的細(xì)菌C．步驟2應(yīng)取每一代直徑最大的抑菌圈邊緣菌落的細(xì)菌配制菌液D．抑菌圈直徑逐代減小說(shuō)明大腸桿菌在抗生素的作用下產(chǎn)生了變異解析：將大腸桿菌接種于培養(yǎng)基平板上的方法為稀釋涂布平板法，A錯(cuò)誤；本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖翘骄靠股貙?duì)細(xì)菌的選擇作用，抗生素能抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)，在抑菌圈邊緣可能有突變后產(chǎn)生抗藥性的菌株，B正確；由表可知，隨著實(shí)驗(yàn)代數(shù)的增加，抑菌圈直徑逐漸減小，說(shuō)明細(xì)菌的抗藥性逐漸增強(qiáng)，步驟2應(yīng)取每一代直徑最小的抑菌圈邊緣菌落的細(xì)菌配制菌液，C錯(cuò)誤；細(xì)菌中抗藥性基因是通過(guò)基因突變產(chǎn)生的，抗生素對(duì)細(xì)菌抗藥性的產(chǎn)生起選擇作用，D錯(cuò)誤。二、非選擇題（共20分）11．（9分）（2024·廣東中山一模）柑橘酸腐病是由白地霉引起的柑橘貯藏期常見(jiàn)的病害之一?？咕氖且环N抑菌活性強(qiáng)、無(wú)環(huán)境污染的生物多肽，目前已用于多種農(nóng)業(yè)病菌的防治。研究人員研究了抗菌肽對(duì)白地霉的抑菌效果，并且對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行了探究。回答下列問(wèn)題：利用基因工程合成抗菌肽時(shí)，基本流程為克隆目的基因→導(dǎo)入枯草桿菌→篩選菌種→誘導(dǎo)抗菌肽表達(dá)→分離純化→功能研究。(1)白地霉從柑橘中獲得其生長(zhǎng)繁殖所需的水、無(wú)機(jī)鹽、碳源和氮源等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。(2)為研究抗菌肽對(duì)白地霉的抑菌效果，現(xiàn)用無(wú)菌打孔器在果實(shí)相同部位打孔，每個(gè)打孔處接種相同體積的處理液，比較15天后的病斑直徑。各組處理及結(jié)果見(jiàn)表。組別12345接種處理方式接種一定體積的病原菌孢子懸浮液抗菌肽溶液與病原菌孢子懸浮液混合后直接接種先加入抗菌肽溶液，2h后接種病原菌孢子懸浮液X抗菌肽溶液與病原菌孢子懸浮液混合，培養(yǎng)2h后接種15天后病斑直徑/mm41.313.929.328.711.2表中數(shù)據(jù)表明抗菌肽對(duì)白地霉有一定的抑菌效果，且抑菌效果與抗菌肽、病原菌孢子懸浮液接種順序有關(guān)，表中X為先接種病原菌孢子懸浮液，2h后再加入抗菌肽溶液。與第2組相比，第5組抑菌效果更好的原因可能是相比第2組，第5組混合后先培養(yǎng)2h，使抗菌肽與病原菌孢子充分接觸，更有效地發(fā)揮作用。(3)一般情況下，電導(dǎo)率和離子濃度呈正相關(guān)，通過(guò)測(cè)量溶液電導(dǎo)率可以反映出溶液中離子濃度的大小。研究人員將白地霉孢子與抗菌肽在無(wú)菌水中混合，測(cè)定電導(dǎo)率，培養(yǎng)一段時(shí)間后，再次測(cè)定電導(dǎo)率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)電導(dǎo)率明顯升高，據(jù)此推測(cè)抗菌肽抑制白地霉孢子的作用機(jī)制可能是抗菌肽破壞白地霉孢子的細(xì)胞膜，使細(xì)胞內(nèi)容物釋放出來(lái)。解析：(1)微生物生長(zhǎng)一般都需要水、無(wú)機(jī)鹽、氮源、碳源等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。(2)根據(jù)表中接種處理方式可知，第1組只接種病原菌