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T/NAIA0263-Technicalregulationsfordiagnosis,preventionandtreatmentofbovineendometritis2023-12-18發(fā) 2023-12-31實寧夏化學分析測試協(xié) 發(fā)T/NAIA0263-T/NAIA0263-GB/T1.1-20201部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)GB/T6682GB/T14926.42GB/T14926.43GB/T39759NY/T3234PCRBovineendometritis性或淋巴源性感染)道，至少停留30s以上，對側(cè)面、腹面和背面陰道壁至宮頸口進行觸診，退出時對陰道內(nèi)的性狀和B1～2mL，立即注入備好的無菌瓶內(nèi)，封蓋，標記，冷藏保存。如果24h內(nèi)不能送達實驗室，-20℃PCR 附錄（資料性mL蒸餾水中，121℃高壓滅菌15min，傾入無菌平皿，4℃保存。蛋白胨20.0g，牛膽鹽5.0g，氯化鈉5.0g，瓊脂14.0g，乳糖10.0g，中性紅0.03g，加入溶液，搖勻，115℃滅菌20min，待冷至50～55℃時傾注平皿。凝固后置4C冰箱保存，一周內(nèi)使用。KF蛋白胨10.0g，酵母粉10.0g，甘油磷酸鈉10.0g，氯化鈉5.0g，麥芽糖20.0g，乳糖1.0g，疊氮鈉0.4g，瓊脂13.0g，溴甲酚紫0.015g，加熱溶解于1000mL蒸餾水中，121℃高壓15min，冷卻至50～60℃時，加入無菌1%TTC溶液10mL，混勻，傾入無菌平皿，備用。MHA牛肉粉6.0g，可溶性淀粉1.5g，酸水解蛋白17.5g，瓊脂17.0g，稱取本品加熱溶解于1000mL蒸餾水中，121℃高壓滅菌15min，待冷至50℃，傾入無菌平皿，備用。附錄（資料性PCR取4.7.2培養(yǎng)物2mL，12000r/min10min，用細菌基因組DNA提取試劑盒對沉淀物進行基16SF5，-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-316SR5，-ACGGCTACCTTGTTACGACTT-350μL反應條件如下：PCR反應體系為50μL體系：模板2μL，27F、1492R各1μL（20μmol/L），2×TaqPCRMix25μL，ddH2O21μL；16SrRNAPCR反應條件為：95℃預變性5min，94℃變性50s，57℃退火1min，72℃延伸90s，30個循環(huán)，72℃終延伸10min，4℃結(jié)束反應