實驗三實驗動物的大體解剖和主要臟器腺體識別第1頁，共26頁。2.剖開頭骨用剪刀小心自頭骨與頸柱相接的枕骨大孔，向眼窩和前方剪開頭骨，剪刀不要插入太深，并盡可能的保持硬腦膜。然后再在額前橫剪，小心用鑷子取下頭蓋骨，可分別觀察硬腦膜。有血管分布的蛛網膜和腦表面的軟腦膜。小心將腦取出，由前向后分別為嗅球、大腦、間腦（大腦腹面）、中腦、小腦、延腦及脊髓。間腦下方的腦漏斗中為腦下垂體。在大腦腹面分布有12對腦神經。第2頁，共26頁。3.將大鼠腹面向上拉直四肢用大頭針固定在木板上放入白瓷盤中。用鑷子輕輕提起腹部皮膚，在生殖和排泄孔的稍前方剪開一裂口，從此處伸入剪刀，沿身體腹中線向前剖至下頜，再在前肢與后肢向兩側作橫剖。然后用鑷子夾住剖面邊緣，用刀背輕輕分離皮膚的同時，可以觀察到頸淺淋巴結。第3頁，共26頁。4.剖開頸部鑷子提起胸骨舌骨肌并將其剪斷除去，暴露氣管及喉頭，可觀察喉，甲狀軟骨，環(huán)狀軟骨及氣管，在前4-5節(jié)氣管環(huán)左、右偏腹側有粉紅色、三角形或菱形的甲狀腺。分離觀察左右頸動脈、頸靜脈，下頜腺舌下腺。第4頁，共26頁。5.剖開胸腔

用鑷子提起胸部左側緣肌肉，向前剪至前肢基部（注意此處有粗大靜脈血管），用同樣方法剪斷胸部右側緣肌肉然后從胸廓的下角開始，從兩側斜向前肢基部剪開胸壁（剪斷肋骨）當剪至第一、二、肋骨要小心，不要剪破血管，用剪刀把三角形的基部與膈分開，提起三角形的基部，可見縱膈將胸腔分為左右兩部，小心剝離胸骨下面的結締組織與肉色的脂肪狀胸腺（位于心臟前方），了解心臟，肺臟的結構和位置。第5頁，共26頁。6.剖開腹腔

用剪刀在腹正中線稍左側剪開一小切口向前至胸骨劍突處，再沿肋骨后緣向兩側作橫切口，以暴露腹腔。觀察腹腔內臟器官自然位置。膈前為胸腔，膈后為腹腔。肝臟，胃腸（賁門、幽門），脾臟，十二指腸，胰臟，腎臟（腎動脈、腎靜脈），腎上腺，膀胱，精囊腺，前列腺，睪丸、附睪、輸精管，尿道球腺、輸精管腺，卵巢，輸卵管，雙子宮。第6頁，共26頁。7.臟器稱重內臟重量和體重之比（某個臟器濕重與單位體重的比值，常以每100g體重計）稱臟器指數，臟器指數常能反映實驗動物總的營養(yǎng)狀態(tài)和內臟的病變情況，不同齡期動物的臟器指數有一定的規(guī)律，如接觸處由物質使某個臟器受到損害，臟器指數將發(fā)生變化。常用實驗動物臟器包括肝、脾、腎、心、肺、腦、甲狀腺、腎上腺、腦垂體、眼球、睪丸、胰、胸腺。第7頁，共26頁。一、尿液的采集1.用代謝籠采集尿液

代謝籠用于收集實驗動物自然排出的尿液，是一種特別設計的為采集實驗動物各種排泄物的密封式飼養(yǎng)籠，有的代謝籠除可收集尿液外，又可收集糞便和動物呼出的CO2。一般簡單的代謝籠主要用來收集尿液。放在代謝籠內飼養(yǎng)的實驗動物，可通過其特殊裝置收集尿液。附：實驗動物體液的采集第8頁，共26頁。2.導尿法收集尿液

施行導尿術，較適宜于犬、猴等大動物。一般不需要麻醉，導尿時將實驗動物仰臥固定，用甘油潤滑導尿管。對雄性動物，操作員用一只手握住陰莖，另一只手將陰莖包皮向上，暴露龜頭，使尿道口張開，將導尿管緩慢插入，導尿管推進到尿道球部時有抵抗感，此時注意動作輕柔，繼續(xù)向膀胱推進導尿管，即有尿液流出。雌性動物尿道外口在陰道前庭，導尿時于陰道前庭腹側將導尿管插入陰道外口，其后操作同雄性動物導尿術。用導尿法導尿可采集到沒有污染的尿液。嚴格執(zhí)行無菌操作，可收集到無菌尿液。第9頁，共26頁。3.輸尿管插管采集尿液

一般用于要求精確計量單位時間內實驗動物排尿量的實驗。剖腹后，將膀胱牽拉至腹腔外，暴露膀胱底兩側的輸尿管。在兩側輸尿管近膀胱處用線分別結扎，于輸尿管結扎處上方剪一小口，向腎臟方向分別插入充滿生理鹽水的插管,用線結扎固定插管,即可見尿液從插管滴出，可以收集。采尿過程中要用38℃熱生理鹽水紗布遮蓋切口及膀胱。第10頁，共26頁。4.壓迫膀胱采集尿液

實驗人員用手在實驗動物下腹部加壓，手法既輕柔又有力。當增加的壓力使實驗動物膀胱括約肌松弛時，尿液會自動流出，即行收集。5.穿刺膀胱采集尿液

實驗動物麻醉固定后，剪去下腹部恥骨聯(lián)合之上，腹正中線兩側的被毛，消毒后用注射針頭接注射器穿刺。取直角進針，針頭穿過皮膚后稍微改變角度，以避免穿刺后漏尿，然后刺向膀胱方向，邊緩慢進針邊回抽直到抽到尿液為止。

第11頁，共26頁。6.剖腹采集尿液

按上述穿刺膀胱采集尿液法做術前準備,其皮膚準備范圍應更大。剖腹暴露膀胱，直視下穿刺膀胱抽取尿液。也可于穿刺前用無齒鑷夾住部分膀胱壁，從鑷子下方的膀胱壁進針抽尿。

7.提鼠采集尿液

鼠類被人抓住尾巴提起即出現排尿反射,以小鼠的這種反射最明顯?？梢岳眠@一反射收集尿液。當鼠類被提起尾巴排尿后，尿滴掛在尿道外口附近的被毛上，不會馬上流走，操作人員應迅速用吸管或玻璃管接住尿滴。第12頁，共26頁。二、腦脊液的采集

腦脊液可能通過脊髓腔穿刺法采集，小動物也可通過枕骨大孔直接采集。狗、免腦脊液的采集通常采取脊髓穿刺法：穿刺部位在兩髂連線中點稍下方第七腰椎間隙。動物輕度麻醉后，側臥位固定，使頭部及尾部向腰部盡量屈曲，剪去第七腰椎周圍的被毛。消毒后操作者在動物背部用左手拇、食指固定穿刺部位的皮膚，右手持腰穿刺針直刺入，當有落空感及動物的后肢跳動時，表明針已達椎管內（蛛網膜下腔），抽去針芯，即見腦脊液流出。如果無腦脊液流出，可能是沒有刺破蛛網膜。輕輕調節(jié)進針的方向及角度，如果腦脊液流的太快，插入針芯稍加阻塞，以免導致顱內壓突然下降而形成腦疝。第13頁，共26頁。

大鼠腦脊液的采集可采用忱骨大孔直接穿刺法：在大鼠麻醉后，頭部固定于定向儀上。頭頸部剪毛、消毒，用手術刀沿縱軸切一縱行切口（約2cm）用剪刀鈍性分離頸部背側肌肉。為避免出血，最深層附著在骨上的肌肉用手術刀背刮開，暴露出枕骨大孔。由枕骨大孔進針直接抽取腦脊液。抽取完畢縫好外層肌肉、皮膚。刀口處可撒些磺胺藥粉，防止感染。采完腦脊液后，應注入等量的消毒生理鹽水，以保持原來腦脊髓腔里的壓力。第14頁，共26頁。三、胸水的采集主要采用胸腔穿刺法收集實驗動物的胸水，也可處死實驗動物剖開胸腔采集胸水。1.穿刺點定位于實驗動物腋后線第11~12肋間隙穿刺，穿刺針緊貼肋骨上緣，否則容易損傷肋間神經。也可在胸壁近胸骨左側緣第4~5肋間隙穿刺。2.穿刺方法實驗動物取立位或半臥位固定，局部皮膚去毛、消毒、麻醉，穿刺針頭與注射器之間接三通連接裝置，實驗人員以左手拇指、食指繃緊局部皮膚，右手握穿刺針緊靠肋骨下緣處垂直進針，穿刺肋間肌時產生一定阻力，當阻力消失有落空感時，說明已刺入胸膜腔，用左手固定穿刺針，打開三通連接裝置，緩慢抽取胸水。第15頁，共26頁。四、腹水的采集

動物取自然站立位固定。穿刺部位在恥骨前緣與臍之間，腹中線兩側。剪毛、消毒，局部浸潤麻醉。操作者左手拇、食指緊繃穿刺部位的皮膚，右手控制穿刺深度做垂直穿刺。注意不可刺的太深，以免刺傷內臟。穿刺針進入腹腔后，腹水多時可見腹水因腹壓高而自動流出。腹水少可輕輕回抽，并同時稍稍轉動一下針頭，一旦有腹水流出，立即固定好針頭及注射器的位置連續(xù)抽吸。抽腹水時注意不可速度太快，腹水多時不要一次大量抽出，以免因腹壓突然下降導致動物出現循環(huán)功能障礙等問題。

第16頁，共26頁。五、唾液的采集1.直接抽吸法在急性實驗中，可用吸管直接插入動物口腔或唾液腺導管抽吸唾液。此法非常簡單，但從口腔抽吸唾液會有雜質混入。2.制備腮腺瘺法在慢性實驗中，收集狗的唾液，要用外科手術方法將腮腺導管開口移向體外，即以腮腺導管開口為中心，切成一直徑約2~3cm的圓形粘膜片，將此粘膜片與周圍組織分開，穿過皮膚切口引到頰外，將帶有導管開口的粘膜片與周圍的皮膚縫合，腮腺分泌的唾液就流出頰外。這種方法可以收集到比較純凈的唾液。第17頁，共26頁。六、胃液的采集1.直接收集胃液法急性實驗時，先將動物麻醉，如果是狗，可以用插胃管法收集胃液；如是大鼠，需手術剖腹，從幽門端向胃內插入一塑料管，再由口腔經食道將一塑料管插入前胃，用pH7.0、35℃左右的生理鹽水，以12ml/h的流速灌胃，收集流出液，進行分析。2.制備胃瘺法在慢性實驗中，收集胃液多用胃瘺法，如全胃瘺法、巴氏小胃瘺法、海氏小胃瘺法等。制備小胃是將動物的胃分離出一小部分，縫合起來形成小胃，主胃與小胃互不相通，主胃進行正常消化，從小胃可收集到純凈的胃液。應用該法，可以待動物恢復健康后，在動物清醒狀態(tài)下反復采集胃液。第18頁，共26頁。七、胰液和膽汁的采集

在動物實驗中，主要是通過對胰總管和膽總管的插管而獲得胰液或膽汁。狗的胰總管開口于十二指腸降部，在緊靠腸壁處切開胰管，結扎固定并與導管相連，即可見無色的胰液流入導管。大鼠的胰管與膽管匯集于一個總管，在其入腸處插管固定，并在近肝門處結扎和另行插管，可分別收集到胰液和膽汁。有時也可通過制備胰瘺和膽囊瘺來獲得胰液和膽汁。第19頁，共26頁。八、淋巴液的采集

淋巴液的采集比較困難，一般主要采集大動物的淋巴液。常用的大量收集淋巴液的方法是解剖出胸導管后插管收集淋巴液。以大鼠為例，選擇180~250g的雄性大鼠，麻醉、固定、消毒，從劍突起沿其左側肋緣向下外方作一長約5cm的切口，再從劍突向下作正中切開，暴露橫膈與腹主動脈，胸導管緊貼在腹主動脈的左后側。在胸導管上剪一斜口，將塑料插管的頂端插入，即可見乳白色的淋巴液流出。第20頁，共26頁。九、陰道液的采集1.滴管沖洗法用消毒滴管吸取少量生理鹽水仔細、反復沖洗被檢雌性動物陰道，將沖洗液吸出滴在載玻片上晾干后染色鏡檢。也可直接將沖洗液置于低倍顯微鏡下觀察，根據細胞類型變化鑒別實驗動物動情周期中的不同時期。2.擦拭法用生理鹽水將消毒棉拭子濕潤后，擠干棉拭子上的生理鹽水，輕輕插入雌性動物陰道內，沿陰道內壁擦拭、轉動，然后取出并作陰道涂片，進行鏡檢。第21頁，共26頁。十、精液的采集1.人工陰道套采精液法本法適用于犬、豬、羊等大動物，采用特制的人工陰道套套在實驗動物陰莖上采集精液。采精時，一手捏住陰道套，套住雄性動物的陰莖，以完全套住雄性動物的陰莖為佳，插入陰道套后，若實驗動物發(fā)出低叫聲，表明已經射精。此時可取下陰道套，拆下采精瓶，取出精液，迅速做有關檢查。2.陰道栓采精法本法是將陰道栓涂片染色，鏡檢凝固的精液。陰道栓是雄性大、小鼠的精液和雌性陰道分泌物混合，在雌鼠陰道內凝結而成白色稍透明、圓錐形的栓狀物，一般交配后2~4小時即可在雌鼠陰道口形成，并可在陰道停留12~24小時。3.其他采精液法用電流等物理方法刺激雄性動物的陰莖或其他性敏感區(qū)，使雄性動物被刺激發(fā)情，直至射精，用采精瓶采集射出的精液。第22頁，共26頁。十一、前列腺液的采集

對體形較大實驗動物，可用手按摩雄性動物前列腺部，使腺體分泌來采集前列腺液。十二、乳汁的采集1.人工按摩法用按摩擠奶收集乳汁的方法適合犬、豬、羊等大動物乳汁的采集。選用哺乳期的實驗動物，早上采集乳汁量最多，用手指輕輕按摩實驗動物乳頭，使乳汁自然流出，如乳汁不能自然流出，可張開手掌從乳房基底部朝乳頭方向按摩、擠壓整個乳房，即可擠出乳汁。2.吸奶器吸奶法采用吸奶器吸在動物乳頭上，造成負壓而使乳汁被動吸出。第23頁，共26頁。十三、骨髓的采集

采集骨髓一般選擇胸骨、肋骨、脛骨和股骨等造血功能活躍的骨組織。猴、犬、羊等大動物骨髓的采集用活體穿刺取骨髓的方法；大、小鼠等小動物骨頭小難穿刺，只能剖殺后采胸骨、股骨的骨髓。（一）猴、犬、羊等骨髓的采集1.骨髓穿刺點定位(1)胸骨：穿刺部位在胸骨中線，胸骨體與胸骨柄連接處，或選胸骨上1/3部。(2)脛骨：穿刺部位在脛骨內側，脛骨上端的下方1厘米處。(3)肋骨：穿刺部位在第5~7肋骨各自的中點上。(4)股骨：穿刺部位在股骨內側面，靠下端的凹面處。