2012-07-24發(fā)布2012-12-10實(shí)施I Ⅱ 12規(guī)范性引用文件 13方法提要 14試劑與材料 15儀器與設(shè)備 26試樣制備 27分析測(cè)定 28方法的線性范圍、靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度 4附錄A(資料性附錄)七種化合物的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜圖(MRM色譜圖) 6Ⅱ本標(biāo)準(zhǔn)按GB/T1.1-2009的規(guī)則編制。本標(biāo)準(zhǔn)由長(zhǎng)沙市畜禽水產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)中心提出。本標(biāo)準(zhǔn)由湖南省畜牧水產(chǎn)局歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：長(zhǎng)沙市畜禽水產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)中心。本標(biāo)準(zhǔn)起草人：盧艷芬、王輝、徐麗君、顏克旭、唐巍、漆亮、楊輝、尹雯婕、薛爽。1飼料中福莫特羅、苯乙醇胺A、克侖特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、特布它林、西馬特羅的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飼料中福莫特羅(Formoterol)、苯乙醇胺A(PhenylethanolamineA)、克侖特羅(Clenbuterol)、萊克多巴胺(Ractopamine)、沙丁胺醇(Salbutamol)、西馬特羅(Cimaterol)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的測(cè)定方法。沙丁胺醇、特布它林、西馬特羅的測(cè)定。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T14699.1飼料采樣GB/T20195動(dòng)物飼料試樣的制備本法所用試劑除另有說明外，均為分析純；實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。4.6提取液：0.1mol/L鹽酸+甲醇=8+2(V+V)。4.70.1mol/L鹽酸：取鹽酸9mL,用水稀釋至1000mL。4.80.1%甲酸溶液：取甲酸1mL,加水稀釋至1000mL。4.910mol/L氫氧化鈉：稱取40g氫氧化鈉，用適量水溶解冷卻后，用水稀釋至100mL。4.105%氨化甲醇溶液：取5mL氨水用甲醇稀釋到100mL。4.11溶解液：0.1%甲酸溶液(4.8)+甲醇=5+95(V+V)。4.12標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：福莫特羅、苯乙醇胺A、克侖特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、特布它林、西馬特羅，2純度均應(yīng)大于98.0%。沙丁胺醇、特布它林、西馬特羅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用甲醇分別配制成濃度為100μg/mL箱中避光保存。保存期不超過6個(gè)月。4.14混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(1μg/mL):分別準(zhǔn)確吸取1.0mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋定容至100mL,置4℃冰箱中避光保存。保存期不超過6個(gè)月。5儀器與設(shè)備5.1分析天平：感量0.01mg、0.01g。5.3水浴超聲器。5.4高速離心機(jī)：5000r/min。5.5氮吹儀。5.6渦旋振蕩器。5.9混合型陽(yáng)離子固相萃取小柱：60mg/3mL,使用前活化。6試樣制備按GB/T14699.1采樣。選取有代表性飼料樣品至少500g,按GB/T20195制備試樣。7.1樣品制備稱取試樣2g(精確到0.01g)于50mL離心管中，準(zhǔn)確加入10mL提取液(4.6);充分振蕩后超聲10min,5000r/min高速離心5min。上清液全部轉(zhuǎn)移到另一離心管中。殘?jiān)蒙鲜龇椒ㄖ貜?fù)提取一次。合并上清液，用10mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至4,待用。依次用3mL甲醇，3mL水活化固相萃取小柱，準(zhǔn)確移取5mL上清液上柱。再依次用3mL0.1mol/L鹽酸溶液、3mL甲醇淋洗，抽干，用3mL5%氦化甲醇洗脫，收集洗脫液于5mL離心管中，45℃下用氮?dú)獯蹈伞Ｓ?.0mL溶解液溶解；渦旋混勻后過有機(jī)微孔濾膜，上機(jī)測(cè)定。若試樣溶液中含有的被測(cè)物質(zhì)濃度超出儀器線性范圍，可用一定體積溶解液稀釋后進(jìn)樣。3DB43/T687—20127.2.1液相色譜參考條件色譜柱：C18(50×2.1mm,粒徑1.流動(dòng)相：A相：0.1%甲酸水溶液；B相：甲醇。流動(dòng)相梯度洗脫條件參見表1流動(dòng)相梯度洗脫條件。時(shí)間(min)0555流速：0.3mL/min。柱溫：35℃。7.2.2質(zhì)譜參考條件離子源：電噴霧離子源。掃描方式：正離子掃描。檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)。電離電壓：3.0KV。離子源溫度：120℃。霧化溫度：350℃。錐孔氣流速：50L/h。霧化氣流速：580L/h。各化合物保留時(shí)間、定性定量離子對(duì)及錐孔電壓、碰撞能量參見表2七種化合物的保留時(shí)間、定性定量離子對(duì)及錐孔電壓、碰撞能量。保留時(shí)間定性離子對(duì)定量離子對(duì)西馬特羅克倫特羅福莫特羅(Form)47.2.3液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定檢測(cè)的線性范圍內(nèi)。7.2.3.1定性測(cè)定件下，試樣中被測(cè)化合物色譜峰的保留時(shí)間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的保留時(shí)間一致，變化范圍應(yīng)在±2.5%.度相比，其允許偏差不超過表3定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差規(guī)定的范圍。允許的相對(duì)偏差7.2.3.2定量測(cè)定的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜圖(MRM色譜圖)參見附錄A。7.2.4空白試驗(yàn)除不加樣品外，采用完全相同的分析測(cè)定步7.3結(jié)果計(jì)算試樣中各被測(cè)化合物的含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)(mg/kg)表示，其結(jié)果可由計(jì)算機(jī)外標(biāo)法自動(dòng)計(jì)算獲得，Cs——標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中各化合物的濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);m—試樣的質(zhì)量，單位為克(g);平行測(cè)定用算術(shù)平均值表示，計(jì)算結(jié)果應(yīng)扣除空白值，結(jié)果保留3位有效數(shù)字。8方法的線性范圍、靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度5本方法中各化合物的定量限均為0.05mg/kg。8.3準(zhǔn)確度本方法中，各化合物在添加濃度為0.05mg/kg、0.1mg/kg、0.2mg/kg時(shí)，回收率范圍為65%~8.4精密度批內(nèi)變異系數(shù)≤15%,批間變異系數(shù)≤15%。6附錄A(資料性附錄)003345.5>327.2Phen