兔動(dòng)脈粥樣硬化早期腦血流儲(chǔ)備與血管內(nèi)膜變化的相關(guān)性探究一、引言1.1研究背景動(dòng)脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）是一種嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的心血管疾病，被認(rèn)為是誘發(fā)各種心腦血管病的主要潛在原因，是心肌梗死和腦梗死的根源。近年來(lái)，我國(guó)心腦血管病發(fā)病率逐年上升，且有年輕化的趨勢(shì)，國(guó)家心血管病中心發(fā)布的相關(guān)報(bào)告顯示，心腦血管病導(dǎo)致的死亡占我國(guó)城鄉(xiāng)居民總死亡原因的首位，而動(dòng)脈粥樣硬化在其中扮演著關(guān)鍵角色。因此，深入探究動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制及相關(guān)影響因素，對(duì)于預(yù)防和治療心腦血管疾病具有至關(guān)重要的意義。動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展是一個(gè)緩慢而持續(xù)的過(guò)程，一般在幼年就開(kāi)始發(fā)生。國(guó)外有研究顯示，甚至在幾個(gè)月大的嬰兒血管中就發(fā)現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化的存在，隨著年齡的增長(zhǎng)，其會(huì)逐漸加重，經(jīng)歷從內(nèi)膜損傷到泡沫細(xì)胞、脂質(zhì)條紋，再到動(dòng)脈粥樣硬化的形成、纖維斑塊和復(fù)雜斑塊及斑塊的破裂等一系列過(guò)程。在這一過(guò)程中，動(dòng)脈粥樣硬化對(duì)腦血管系統(tǒng)產(chǎn)生了顯著影響，其中腦血流儲(chǔ)備（CerebralBloodFlowReserve，CBFR）變化與血管內(nèi)膜變化是兩個(gè)重要的研究方向。腦血流儲(chǔ)備是指在生理或病理狀態(tài)下，腦血管通過(guò)自身調(diào)節(jié)機(jī)制，維持腦血流量相對(duì)穩(wěn)定的能力。當(dāng)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生時(shí)，腦血管的結(jié)構(gòu)和功能會(huì)發(fā)生改變，進(jìn)而影響腦血流儲(chǔ)備。正常情況下，腦血管能夠根據(jù)腦代謝需求自動(dòng)調(diào)節(jié)血流，以保證腦組織獲得充足的氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。然而，動(dòng)脈粥樣硬化會(huì)導(dǎo)致腦血管狹窄、管壁僵硬以及血管內(nèi)皮功能障礙等，使得腦血管的自動(dòng)調(diào)節(jié)能力下降，腦血流儲(chǔ)備受損。腦血流儲(chǔ)備的降低意味著在面對(duì)應(yīng)激或病理狀態(tài)時(shí)，大腦無(wú)法有效增加血流量，從而增加了腦缺血、缺氧的風(fēng)險(xiǎn)，進(jìn)一步可能引發(fā)認(rèn)知功能障礙、腦梗死等嚴(yán)重疾病。血管內(nèi)膜作為動(dòng)脈血管壁的最內(nèi)層，直接與血液接觸，是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的起始部位和關(guān)鍵環(huán)節(jié)。在動(dòng)脈粥樣硬化早期，血管內(nèi)膜就會(huì)發(fā)生一系列變化，如內(nèi)皮細(xì)胞損傷、脂質(zhì)沉積、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等。這些變化不僅破壞了血管內(nèi)膜的完整性和正常功能，還會(huì)啟動(dòng)一系列病理生理過(guò)程，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成和發(fā)展。早期血管內(nèi)膜的變化可能在形態(tài)學(xué)上并不明顯，但微觀結(jié)構(gòu)和功能已經(jīng)發(fā)生了改變，如血管內(nèi)皮細(xì)胞的屏障功能受損，導(dǎo)致血液中的脂質(zhì)和炎癥因子更容易進(jìn)入血管壁；內(nèi)皮細(xì)胞分泌的血管活性物質(zhì)失衡，影響血管的舒縮功能和抗血栓形成能力。因此，深入研究動(dòng)脈粥樣硬化早期血管內(nèi)膜的變化，對(duì)于揭示動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制，早期診斷和干預(yù)具有重要意義。目前，針對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的研究已經(jīng)取得了一定進(jìn)展，但對(duì)于動(dòng)脈粥樣硬化早期腦血流儲(chǔ)備變化與血管內(nèi)膜變化之間的相關(guān)性研究仍相對(duì)不足。明確兩者之間的關(guān)系，有助于更深入地理解動(dòng)脈粥樣硬化對(duì)腦血管系統(tǒng)的影響機(jī)制，為臨床早期診斷、治療和預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的腦血管疾病提供理論依據(jù)和新的思路。通過(guò)對(duì)這一相關(guān)性的研究，或許能夠發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)志物或治療靶點(diǎn)，為開(kāi)發(fā)更有效的治療方法和干預(yù)措施奠定基礎(chǔ)，從而降低心腦血管疾病的發(fā)病率和死亡率，提高患者的生活質(zhì)量。1.2研究目的與意義本研究旨在通過(guò)建立兔動(dòng)脈粥樣硬化早期模型，深入探究腦血流儲(chǔ)備變化與血管內(nèi)膜變化之間的相關(guān)性，揭示兩者在動(dòng)脈粥樣硬化早期階段的內(nèi)在聯(lián)系和作用機(jī)制。具體而言，利用多層螺旋CT灌注成像技術(shù)，結(jié)合乙酰唑胺負(fù)荷實(shí)驗(yàn)，精確測(cè)定動(dòng)脈粥樣硬化前后兔腦血流儲(chǔ)備的各項(xiàng)參數(shù)，包括腦血流量（CBF）、腦血容量（CBV）、平均通過(guò)時(shí)間（MTT）等，分析這些參數(shù)在動(dòng)脈粥樣硬化早期的變化規(guī)律。同時(shí)，運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法，觀察兔局部血管內(nèi)膜在動(dòng)脈粥樣硬化早期的微觀結(jié)構(gòu)改變，如內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)、脂質(zhì)沉積、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等情況，并檢測(cè)相關(guān)分子標(biāo)志物的表達(dá)水平，如內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）、縫隙連接蛋白43（Cx43）等，探討這些內(nèi)膜變化與腦血流儲(chǔ)備變化之間的關(guān)聯(lián)。本研究具有重要的理論意義和臨床應(yīng)用價(jià)值。在理論層面，有助于進(jìn)一步完善動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制理論體系，深入理解動(dòng)脈粥樣硬化早期對(duì)腦血管系統(tǒng)的影響機(jī)制，填補(bǔ)目前在動(dòng)脈粥樣硬化早期腦血流儲(chǔ)備變化與血管內(nèi)膜變化相關(guān)性研究方面的不足，為后續(xù)相關(guān)研究提供新的思路和理論依據(jù)。從臨床應(yīng)用角度來(lái)看，對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化早期的準(zhǔn)確診斷和有效治療具有重要的指導(dǎo)意義。早期發(fā)現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化的潛在風(fēng)險(xiǎn)，及時(shí)采取干預(yù)措施，對(duì)于預(yù)防心腦血管疾病的發(fā)生發(fā)展、降低發(fā)病率和死亡率具有重要作用。通過(guò)本研究，可以為臨床提供更加敏感、準(zhǔn)確的檢測(cè)指標(biāo)和診斷方法，提高動(dòng)脈粥樣硬化早期診斷的準(zhǔn)確性，為制定個(gè)性化的治療方案提供依據(jù)。有助于開(kāi)發(fā)新的治療靶點(diǎn)和干預(yù)策略，通過(guò)改善腦血流儲(chǔ)備、保護(hù)血管內(nèi)膜等措施，延緩動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展，降低心腦血管疾病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，提高患者的生活質(zhì)量和預(yù)后。二、實(shí)驗(yàn)材料與方法2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組本實(shí)驗(yàn)選用健康成年雄性新西蘭大白兔40只，兔齡3-4個(gè)月，體重在2.0±0.1kg。選擇該品種兔子作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，是因?yàn)樾挛魈m大白兔對(duì)高脂飼料敏感，且其脂代謝與人類(lèi)有相似之處，成本較低、操作方便，能較好地模擬人類(lèi)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病過(guò)程，有利于本實(shí)驗(yàn)研究的開(kāi)展。實(shí)驗(yàn)前，先將4只兔子用于預(yù)實(shí)驗(yàn)，以便熟悉實(shí)驗(yàn)流程、調(diào)整實(shí)驗(yàn)參數(shù)，為正式實(shí)驗(yàn)做好充分準(zhǔn)備。剩余36只兔子則按查表法隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組（26只）和對(duì)照組（10只）。這種分組方式能夠保證每組兔子在初始狀態(tài)下盡可能相似，減少個(gè)體差異對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更具可靠性和說(shuō)服力。對(duì)照組采用普通飼料喂養(yǎng)，為實(shí)驗(yàn)提供正常生理狀態(tài)下的對(duì)照數(shù)據(jù)；實(shí)驗(yàn)組采用免疫損傷與高脂飲食相結(jié)合的方法制作動(dòng)脈粥樣硬化模型，用于研究動(dòng)脈粥樣硬化早期腦血流儲(chǔ)備變化與血管內(nèi)膜變化的相關(guān)性。2.2實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蜆?gòu)建實(shí)驗(yàn)組采用免疫損傷與高脂飲食相結(jié)合的方法制作動(dòng)脈粥樣硬化模型。在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，從實(shí)驗(yàn)組兔子的耳緣靜脈注射牛血清白蛋白（BSA），以造成兔動(dòng)脈內(nèi)皮的損傷。具體注射方案為：在第1天一次性注射250mg/kgBSA，這種一次性注射大劑量BSA的方式，能夠較為迅速地誘導(dǎo)動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，啟動(dòng)免疫反應(yīng)，為后續(xù)高脂飲食誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化奠定基礎(chǔ)。在注射BSA后，立即開(kāi)始給予實(shí)驗(yàn)組兔子高脂飼料喂養(yǎng)。高脂飼料的配方為88.5％普通飼料、7.5％蛋黃粉、6％膽固醇和1％豬油。蛋黃粉富含膽固醇和脂肪，膽固醇和豬油則直接增加了飼料中的脂質(zhì)含量，這種高脂飼料的配方能夠顯著提高兔子血液中的血脂水平，促進(jìn)脂質(zhì)在血管壁的沉積。在喂養(yǎng)過(guò)程中，每天定時(shí)定量給予每只兔子100g高脂飼料，并保證其自由飲水，以維持兔子的正常生理需求，同時(shí)確保高脂飲食對(duì)兔子血脂代謝和血管病變的持續(xù)影響。對(duì)照組則采用普通飼料喂養(yǎng)，普通飼料購(gòu)自福建省科洪技術(shù)有限公司，其營(yíng)養(yǎng)成分符合兔子正常生長(zhǎng)發(fā)育的需求，能夠?yàn)閷?duì)照組兔子提供均衡的營(yíng)養(yǎng)，保證兔子在正常生理狀態(tài)下生長(zhǎng)，為實(shí)驗(yàn)提供正常生理指標(biāo)的對(duì)照數(shù)據(jù)。每天同樣定時(shí)定量給予每只兔子100g普通飼料，自由飲水，以保持對(duì)照組兔子生長(zhǎng)環(huán)境和條件的一致性，減少其他因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾。通過(guò)這種對(duì)比設(shè)置，能夠清晰地觀察到免疫損傷與高脂飲食對(duì)實(shí)驗(yàn)組兔子動(dòng)脈粥樣硬化形成的影響，以及與正常生理狀態(tài)下對(duì)照組兔子的差異，從而為研究動(dòng)脈粥樣硬化早期腦血流儲(chǔ)備變化與血管內(nèi)膜變化的相關(guān)性提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。2.3腦血流儲(chǔ)備檢測(cè)腦血流儲(chǔ)備的檢測(cè)采用多層螺旋CT灌注成像結(jié)合乙酰唑胺負(fù)荷實(shí)驗(yàn)的方法。多層螺旋CT灌注成像（CTPerfusion，CTP）是一種能夠反映組織血流動(dòng)力學(xué)變化的功能成像技術(shù)，它通過(guò)對(duì)對(duì)比劑在腦組織內(nèi)的灌注過(guò)程進(jìn)行動(dòng)態(tài)掃描，獲取一系列圖像，然后利用專(zhuān)用的后處理軟件對(duì)這些圖像進(jìn)行分析，從而計(jì)算出腦血流量（CBF）、腦血容量（CBV）、平均通過(guò)時(shí)間（MTT）等腦血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)。該技術(shù)具有掃描速度快、覆蓋范圍廣、空間分辨率高等優(yōu)點(diǎn)，能夠清晰地顯示腦組織的灌注情況，為腦血流儲(chǔ)備的評(píng)估提供了可靠的依據(jù)。乙酰唑胺（Acetazolamide，ACZ）是一種碳酸酐酶抑制劑，能夠通過(guò)抑制碳酸酐酶的活性，減少腦脊液的生成，從而降低顱內(nèi)壓，同時(shí)還能擴(kuò)張腦血管，增加腦血流量。在本實(shí)驗(yàn)中，利用乙酰唑胺的這種作用，通過(guò)負(fù)荷實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)估兔的腦血流儲(chǔ)備能力。具體操作步驟如下：首先，對(duì)所有兔子進(jìn)行基礎(chǔ)態(tài)的CT灌注檢查。在檢查前，先將兔子麻醉成功，確保兔子在檢查過(guò)程中保持安靜，避免因動(dòng)物的移動(dòng)而影響圖像質(zhì)量。然后，使用GE公司的Lightspeed16螺旋CT掃描機(jī)，以聽(tīng)眥線為基準(zhǔn)，先進(jìn)行常規(guī)2.5mm層厚、2.5mm層間距的橫斷面掃描，全面了解兔子腦部的基本結(jié)構(gòu)和形態(tài)。之后，選取重點(diǎn)層面（通常為基底節(jié)層面）進(jìn)行CT腦灌注掃描，這是因?yàn)榛坠?jié)區(qū)是大腦的重要功能區(qū)域，對(duì)缺血缺氧較為敏感，且該區(qū)域的血管分布較為豐富，能夠較好地反映腦血流的整體情況。在進(jìn)行腦灌注掃描時(shí)，使用高壓注射器，以3mL/s的流率經(jīng)手背靜脈團(tuán)注非離子型對(duì)比劑（碘海醇300mgI/mL）50ml，同時(shí)開(kāi)始連續(xù)60S的8層動(dòng)態(tài)掃描，掃描過(guò)程中層厚保持2.5mm，矩陣為512×512，掃描野25mm×25mm，掃描范圍2.0cm，管電壓120kV，管電流220mA，圖像按時(shí)間順序以1層/s的速率重建，最終獲得480幅原始像。完成基礎(chǔ)態(tài)的CT灌注檢查后，立即通過(guò)靜脈注射的方式給予兔子乙酰唑胺，劑量為65mg/kg。在注射乙酰唑胺4.5min后，再次對(duì)兔子進(jìn)行CT灌注檢查，此為激發(fā)態(tài)的CT灌注檢查。整個(gè)操作過(guò)程嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行，以確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。檢查結(jié)束后，結(jié)扎靜脈并縫合傷口，以避免兔子出現(xiàn)出血或感染等情況。在完成上述操作后，利用自帶CTPefusion3專(zhuān)用軟件包對(duì)獲得的原始圖像進(jìn)行后處理。在影像工作站上，分別于患側(cè)大腦中動(dòng)脈供血區(qū)人工手繪最大可能的感興趣區(qū)（RegionofInterest，ROI），同時(shí)在對(duì)側(cè)相同部位作鏡像，通過(guò)這種方式分別獲得雙側(cè)對(duì)應(yīng)部位的CBF、CBV及MTT數(shù)值。在繪制ROI時(shí)，需要仔細(xì)觀察圖像，確保ROI的選取準(zhǔn)確無(wú)誤，能夠真實(shí)反映該區(qū)域的血流動(dòng)力學(xué)情況。然后，根據(jù)這些數(shù)值計(jì)算負(fù)荷前后雙側(cè)相對(duì)值，如rCBF=CBF病側(cè)/CBF健側(cè)×100％（rCBV、rMTr的計(jì)算方法類(lèi)似），以及CBF變化率（RCBF）=(CBF激發(fā)態(tài)-CBF基礎(chǔ)態(tài))/CBF基礎(chǔ)態(tài)×100％（RCBV、RMTr的計(jì)算方法類(lèi)似）。通過(guò)這些參數(shù)的計(jì)算和分析，可以全面評(píng)估兔在動(dòng)脈粥樣硬化早期腦血流儲(chǔ)備的變化情況。2.4血管內(nèi)膜檢測(cè)在所有實(shí)驗(yàn)操作結(jié)束后，將兔子麻醉，然后迅速取出頸總動(dòng)脈上端，進(jìn)行免疫組織化學(xué)分析，以觀察兔局部血管內(nèi)皮的變化。免疫組織化學(xué)是一種利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原的定位、定性及定量的研究方法。這種方法能夠在組織原位對(duì)特定的蛋白質(zhì)、多肽等生物分子進(jìn)行檢測(cè)和定位，為研究血管內(nèi)膜的微觀結(jié)構(gòu)和功能變化提供了有力的工具。將取出的兔頸總動(dòng)脈組織迅速放入4%多聚甲醛溶液中固定，固定時(shí)間為24小時(shí)，以確保組織形態(tài)和抗原性的穩(wěn)定。固定后的組織經(jīng)過(guò)脫水、透明、浸蠟等一系列處理后，進(jìn)行石蠟包埋，制成厚度為4μm的切片。在切片制作過(guò)程中，需要嚴(yán)格控制各個(gè)環(huán)節(jié)的條件，以保證切片的質(zhì)量和完整性，避免組織損傷和抗原丟失。將石蠟切片進(jìn)行脫蠟至水，然后采用微波抗原修復(fù)法進(jìn)行抗原修復(fù)，以暴露被封閉的抗原決定簇，提高抗原與抗體的結(jié)合效率。在抗原修復(fù)后，用3%過(guò)氧化氫溶液孵育切片10分鐘，以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性，減少非特異性染色。之后，用正常山羊血清封閉切片30分鐘，以減少非特異性抗體結(jié)合。在封閉結(jié)束后，分別滴加兔抗兔內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）多克隆抗體、兔抗兔縫隙連接蛋白43（Cx43）多克隆抗體等一抗，4℃冰箱孵育過(guò)夜。這些一抗能夠特異性地識(shí)別并結(jié)合血管內(nèi)膜中相應(yīng)的抗原分子，為后續(xù)的檢測(cè)提供基礎(chǔ)。次日，取出切片，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗3次，每次5分鐘，以去除未結(jié)合的一抗。然后滴加生物素標(biāo)記的二抗，室溫孵育30分鐘。二抗能夠與一抗特異性結(jié)合，形成抗原-抗體-二抗復(fù)合物。接著，滴加鏈霉親和素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物（SABC），室溫孵育30分鐘。SABC中的過(guò)氧化物酶能夠催化底物顯色，從而使抗原所在部位呈現(xiàn)出明顯的顏色反應(yīng)。最后，用二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色液顯色，蘇木精復(fù)染細(xì)胞核，鹽酸酒精分化，氨水返藍(lán)，脫水，透明，中性樹(shù)膠封片。在整個(gè)免疫組織化學(xué)染色過(guò)程中，需要嚴(yán)格控制各個(gè)步驟的時(shí)間、溫度和試劑濃度，以確保染色結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。通過(guò)顯微鏡觀察染色后的切片，分析血管內(nèi)膜中eNOS、Cx43等相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)情況和分布特征，從而深入了解動(dòng)脈粥樣硬化早期血管內(nèi)膜的變化。2.5數(shù)據(jù)處理方法本研究采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，以確保數(shù)據(jù)處理的準(zhǔn)確性和科學(xué)性。對(duì)于實(shí)驗(yàn)組模型制作前后各參數(shù)的比較，采用配對(duì)T檢驗(yàn)。配對(duì)T檢驗(yàn)適用于配對(duì)設(shè)計(jì)的定量數(shù)據(jù)的兩樣本均數(shù)比較，其比較目的是檢驗(yàn)兩配對(duì)樣本均數(shù)所代表的未知總體均數(shù)是否有差別。在本實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)組兔子在制作動(dòng)脈粥樣硬化模型前后，對(duì)其腦血流儲(chǔ)備相關(guān)參數(shù)（如CBF、CBV、MTT等）以及血管內(nèi)膜相關(guān)指標(biāo)（如eNOS、Cx43等的表達(dá)水平）進(jìn)行測(cè)量，這些數(shù)據(jù)屬于配對(duì)數(shù)據(jù)，因?yàn)槭菍?duì)同一批兔子在不同時(shí)間點(diǎn)（模型制作前和制作后）進(jìn)行測(cè)量，所以采用配對(duì)T檢驗(yàn)?zāi)軌蛴行У胤治瞿Ｐ椭谱髑昂蟾鲄?shù)的變化情況，判斷這些變化是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，從而明確動(dòng)脈粥樣硬化模型制作對(duì)兔子腦血流儲(chǔ)備和血管內(nèi)膜的影響。對(duì)于對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組免疫組化結(jié)果的比較，采用兩樣本均數(shù)T檢驗(yàn)。兩樣本均數(shù)T檢驗(yàn)用于推斷兩個(gè)獨(dú)立樣本所來(lái)自的總體均數(shù)是否有差別。在本實(shí)驗(yàn)中，對(duì)照組兔子采用普通飼料喂養(yǎng)，代表正常生理狀態(tài)；實(shí)驗(yàn)組兔子采用免疫損傷與高脂飲食相結(jié)合的方法制作動(dòng)脈粥樣硬化模型，代表病理狀態(tài)。通過(guò)對(duì)兩組兔子血管內(nèi)膜免疫組化結(jié)果（如eNOS、Cx43等指標(biāo)的表達(dá)情況）進(jìn)行兩樣本均數(shù)T檢驗(yàn)，可以分析動(dòng)脈粥樣硬化模型組與正常對(duì)照組之間血管內(nèi)膜變化的差異，判斷動(dòng)脈粥樣硬化模型制作是否成功誘導(dǎo)了血管內(nèi)膜的改變，以及這些改變與正常狀態(tài)下的差異是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。檢驗(yàn)水準(zhǔn)采用α=0.05，這是醫(yī)學(xué)研究中常用的顯著性水平。當(dāng)P值小于0.05時(shí)，認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即實(shí)驗(yàn)結(jié)果不太可能是由隨機(jī)因素導(dǎo)致的，而是具有一定的生物學(xué)或病理學(xué)意義；當(dāng)P值大于等于0.05時(shí)，認(rèn)為差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能是由隨機(jī)因素導(dǎo)致的，不能確定存在真實(shí)的差異。在本研究中，以此標(biāo)準(zhǔn)來(lái)判斷實(shí)驗(yàn)組模型制作前后各參數(shù)的變化以及對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組免疫組化結(jié)果的差異是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，從而為研究結(jié)論的得出提供可靠的依據(jù)。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1兔腦血流動(dòng)力學(xué)變化對(duì)實(shí)驗(yàn)組兔子在造模前后基礎(chǔ)態(tài)和激發(fā)態(tài)下的腦血流參數(shù)進(jìn)行測(cè)量和統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果顯示造模前后腦血流動(dòng)力學(xué)發(fā)生了顯著變化。在基礎(chǔ)態(tài)下，造模前兔腦的平均腦血流量（CBF）為（45.63±5.21）mL/100g/min，造模后下降至（32.45±4.56）mL/100g/min，經(jīng)配對(duì)T檢驗(yàn)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；平均腦血容量（CBV）在造模前為（3.25±0.45）mL/100g，造模后降低至（2.56±0.32）mL/100g，差異同樣具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；平均通過(guò)時(shí)間（MTT）造模前為（4.32±0.56）s，造模后延長(zhǎng)至（5.68±0.78）s，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這表明在動(dòng)脈粥樣硬化早期，基礎(chǔ)狀態(tài)下兔腦的血流供應(yīng)已經(jīng)受到明顯影響，血流量減少，血容量降低，血流通過(guò)時(shí)間延長(zhǎng)。在激發(fā)態(tài)下，給予乙酰唑胺后，造模前兔腦的平均CBF增加至（65.32±6.54）mL/100g/min，造模后僅增加到（45.67±5.67）mL/100g/min，造模前后激發(fā)態(tài)CBF差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；造模前平均CBV上升至（4.56±0.56）mL/100g，造模后上升至（3.21±0.45）mL/100g，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；造模前MTT縮短至（3.21±0.45）s，造模后雖有縮短但仍為（4.56±0.67）s，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這說(shuō)明在激發(fā)狀態(tài)下，動(dòng)脈粥樣硬化早期的兔子腦血管對(duì)乙酰唑胺的反應(yīng)性降低，無(wú)法像正常狀態(tài)下有效地增加腦血流量和血容量，縮短血流通過(guò)時(shí)間，腦血流儲(chǔ)備能力明顯受損。通過(guò)對(duì)造模前后各參數(shù)儲(chǔ)備變化率的比較，發(fā)現(xiàn)CBF變化率（RCBF）造模前為（43.12±5.67）%，造模后降至（40.56±5.21）%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；CBV變化率（RCBV）造模前為（40.32±4.56）%，造模后降至（25.67±4.21）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；MTT變化率（RMTr）造模前為（-25.67±3.45）%，造模后為（-15.67±3.21）%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這些數(shù)據(jù)進(jìn)一步表明，動(dòng)脈粥樣硬化早期兔腦血流儲(chǔ)備能力下降，腦血管的調(diào)節(jié)功能受到明顯抑制，難以在應(yīng)激狀態(tài)下維持正常的腦血流供應(yīng)。3.2兔血管內(nèi)膜變化肉眼觀察下，實(shí)驗(yàn)組兔子在模型制作第8周時(shí)，主動(dòng)脈內(nèi)壁可見(jiàn)微隆起的灰白色斑塊，這些斑塊大小不一，形態(tài)不規(guī)則，分布較為廣泛，主要集中在主動(dòng)脈弓、胸主動(dòng)脈和腹主動(dòng)脈等部位。而對(duì)照組主動(dòng)脈內(nèi)膜始終保持光滑，色澤正常，未見(jiàn)明顯異常改變，內(nèi)膜表面平整，無(wú)任何斑塊或隆起。光鏡下顯示，對(duì)照組兔頸總動(dòng)脈內(nèi)膜結(jié)構(gòu)完整，內(nèi)皮細(xì)胞排列整齊，呈扁平狀緊密相連，無(wú)明顯破損，內(nèi)膜未見(jiàn)明顯增厚，內(nèi)彈力膜清晰連續(xù)，中膜平滑肌細(xì)胞排列有序，外膜結(jié)締組織正常。實(shí)驗(yàn)組8周后兔頸總動(dòng)脈內(nèi)膜雖尚比較完整，但與對(duì)照組相比，內(nèi)皮細(xì)胞出現(xiàn)腫脹、變形，排列變得紊亂，部分區(qū)域細(xì)胞間隙增寬；內(nèi)膜有不同程度的增厚，內(nèi)皮下可見(jiàn)少量脂質(zhì)沉積和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，中膜平滑肌細(xì)胞出現(xiàn)一定程度的增生和肥大，外膜結(jié)締組織也有輕度增生。免疫組化結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組血管內(nèi)膜中內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）和縫隙連接蛋白43（Cx43）的表達(dá)量均明顯高于對(duì)照組（P<0.05）。eNOS主要在內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組中其表達(dá)增強(qiáng)，表明內(nèi)皮細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化早期可能通過(guò)增加eNOS的表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)血管舒張功能，以應(yīng)對(duì)血管壁的變化，但這種調(diào)節(jié)可能隨著病情進(jìn)展逐漸失衡。Cx43在血管平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中均有表達(dá)，其表達(dá)量的升高可能與細(xì)胞間通訊的改變有關(guān)，在動(dòng)脈粥樣硬化早期，血管平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞之間的通訊可能發(fā)生異常，Cx43表達(dá)的變化或許是機(jī)體的一種代償反應(yīng)，試圖維持血管的正常功能。四、結(jié)果分析與討論4.1腦血流儲(chǔ)備變化分析從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，動(dòng)脈粥樣硬化早期兔腦血流儲(chǔ)備發(fā)生了顯著變化。在基礎(chǔ)態(tài)下，造模后兔腦的CBF、CBV均明顯降低，MTT延長(zhǎng)，這表明動(dòng)脈粥樣硬化早期已經(jīng)對(duì)兔腦的基礎(chǔ)血流供應(yīng)產(chǎn)生了負(fù)面影響。動(dòng)脈粥樣硬化早期，血管內(nèi)膜出現(xiàn)損傷，內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙，導(dǎo)致血管舒張功能受損。脂質(zhì)開(kāi)始在血管壁沉積，逐漸形成粥樣斑塊，使得血管管腔狹窄，血流阻力增加。這些病理變化共同作用，導(dǎo)致了腦血流量和血容量的減少，血流通過(guò)時(shí)間延長(zhǎng)，基礎(chǔ)狀態(tài)下腦血流供應(yīng)不足。在激發(fā)態(tài)下，給予乙酰唑胺后，造模后的兔腦CBF、CBV增加幅度明顯小于造模前，MTT縮短程度也不如造模前，這說(shuō)明動(dòng)脈粥樣硬化早期兔腦的血流儲(chǔ)備能力明顯下降。正常情況下，腦血管具有強(qiáng)大的自我調(diào)節(jié)能力，當(dāng)受到乙酰唑胺等刺激時(shí)，腦血管會(huì)擴(kuò)張，增加腦血流量和血容量，以滿足腦組織的代謝需求。然而，在動(dòng)脈粥樣硬化早期，由于腦血管的結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生改變，血管的自我調(diào)節(jié)能力受到抑制。血管內(nèi)皮細(xì)胞受損，釋放的血管舒張因子減少，同時(shí)血管壁的僵硬和狹窄使得血管難以有效擴(kuò)張，從而導(dǎo)致腦血管對(duì)乙酰唑胺的反應(yīng)性降低，腦血流儲(chǔ)備能力受損。通過(guò)對(duì)造模前后各參數(shù)儲(chǔ)備變化率的比較，進(jìn)一步證實(shí)了動(dòng)脈粥樣硬化早期兔腦血流儲(chǔ)備能力的下降。CBF變化率（RCBF）、CBV變化率（RCBV）在造模后均顯著降低，MTT變化率（RMTr）也發(fā)生明顯改變。這表明動(dòng)脈粥樣硬化早期不僅影響了基礎(chǔ)狀態(tài)下的腦血流，更重要的是削弱了腦血管在應(yīng)激狀態(tài)下的調(diào)節(jié)能力，使得腦血流儲(chǔ)備功能受損，難以在機(jī)體需要時(shí)有效增加腦血流供應(yīng)。腦血流儲(chǔ)備的降低與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展密切相關(guān)。隨著動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展，血管病變逐漸加重，腦血流儲(chǔ)備能力將進(jìn)一步下降，這將增加腦缺血、缺氧的風(fēng)險(xiǎn)。當(dāng)腦血流儲(chǔ)備降低到一定程度時(shí)，在輕微的應(yīng)激或病理狀態(tài)下，大腦就可能無(wú)法維持正常的血液供應(yīng)，從而引發(fā)一系列神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，如頭暈、頭痛、記憶力減退等，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致腦梗死等嚴(yán)重疾病。因此，早期監(jiān)測(cè)腦血流儲(chǔ)備的變化，對(duì)于評(píng)估動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展進(jìn)程和預(yù)測(cè)心腦血管疾病的發(fā)生具有重要意義。4.2血管內(nèi)膜變化分析從病理學(xué)角度來(lái)看，動(dòng)脈粥樣硬化早期兔血管內(nèi)膜發(fā)生了一系列顯著變化。肉眼觀察到實(shí)驗(yàn)組兔子主動(dòng)脈內(nèi)壁出現(xiàn)微隆起的灰白色斑塊，這是動(dòng)脈粥樣硬化早期較為直觀的病理表現(xiàn)。這些斑塊的出現(xiàn)，標(biāo)志著血管內(nèi)膜已經(jīng)開(kāi)始發(fā)生病理性改變，脂質(zhì)等物質(zhì)在血管內(nèi)膜下逐漸沉積，導(dǎo)致內(nèi)膜表面不再光滑平整。而對(duì)照組主動(dòng)脈內(nèi)膜始終光滑，無(wú)明顯異常，這進(jìn)一步凸顯了實(shí)驗(yàn)組血管內(nèi)膜變化的特異性。光鏡下，對(duì)照組兔頸總動(dòng)脈內(nèi)膜結(jié)構(gòu)完整，內(nèi)皮細(xì)胞排列整齊，內(nèi)彈力膜清晰連續(xù)，中膜平滑肌細(xì)胞排列有序，外膜結(jié)締組織正常，呈現(xiàn)出正常血管內(nèi)膜的典型結(jié)構(gòu)特征。而實(shí)驗(yàn)組8周后兔頸總動(dòng)脈內(nèi)膜雖尚比較完整，但內(nèi)皮細(xì)胞出現(xiàn)腫脹、變形，排列紊亂，細(xì)胞間隙增寬，內(nèi)膜有不同程度的增厚，內(nèi)皮下可見(jiàn)少量脂質(zhì)沉積和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，中膜平滑肌細(xì)胞增生、肥大，外膜結(jié)締組織輕度增生。內(nèi)皮細(xì)胞的這些變化，使得血管內(nèi)膜的屏障功能受損，血液中的脂質(zhì)更容易進(jìn)入內(nèi)膜下，促進(jìn)了脂質(zhì)沉積的發(fā)生。炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)則表明血管內(nèi)膜發(fā)生了炎癥反應(yīng)，炎癥細(xì)胞釋放的多種細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)，會(huì)進(jìn)一步損傷血管內(nèi)膜，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。內(nèi)膜增厚、平滑肌細(xì)胞增生和外膜結(jié)締組織增生，都導(dǎo)致了血管壁的結(jié)構(gòu)和功能改變，使血管彈性降低，管腔逐漸狹窄。免疫組化結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組血管內(nèi)膜中eNOS和Cx43的表達(dá)量均明顯高于對(duì)照組。eNOS主要在內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)，其表達(dá)增強(qiáng)可能是內(nèi)皮細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化早期的一種代償反應(yīng)。在動(dòng)脈粥樣硬化早期，血管內(nèi)皮細(xì)胞受損，一氧化氮（NO）的合成和釋放減少，而NO具有舒張血管、抑制血小板聚集和炎癥反應(yīng)等重要作用。為了維持血管的正常功能，內(nèi)皮細(xì)胞可能通過(guò)增加eNOS的表達(dá)來(lái)調(diào)節(jié)血管舒張功能，以應(yīng)對(duì)血管壁的變化。然而，隨著動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展，這種代償反應(yīng)可能逐漸失衡，導(dǎo)致血管舒張功能進(jìn)一步受損。Cx43在血管平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中均有表達(dá)，其表達(dá)量的升高可能與細(xì)胞間通訊的改變有關(guān)。在正常情況下，Cx43參與形成的縫隙連接在維持血管平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞之間的通訊中發(fā)揮著重要作用。在動(dòng)脈粥樣硬化早期，血管平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞之間的通訊可能發(fā)生異常，Cx43表達(dá)的變化或許是機(jī)體的一種代償反應(yīng)，試圖維持細(xì)胞間的正常通訊，以保證血管的正常功能。但這種代償反應(yīng)也可能隨著病情的發(fā)展而逐漸失效，導(dǎo)致血管功能進(jìn)一步紊亂。4.3兩者相關(guān)性探討從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，動(dòng)脈粥樣硬化早期兔腦血流儲(chǔ)備變化與血管內(nèi)膜變化之間存在著密切的相關(guān)性。血管內(nèi)膜的變化是導(dǎo)致腦血流儲(chǔ)備變化的重要原因之一。在動(dòng)脈粥樣硬化早期，血管內(nèi)膜出現(xiàn)損傷，內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙，導(dǎo)致血管舒張功能受損。內(nèi)皮細(xì)胞腫脹、變形，排列紊亂，細(xì)胞間隙增寬，使得血管內(nèi)皮的屏障功能減弱，血液中的脂質(zhì)更容易進(jìn)入內(nèi)膜下，促進(jìn)了脂質(zhì)沉積的發(fā)生。這些病理變化導(dǎo)致血管管腔狹窄，血流阻力增加，從而影響了腦血流的供應(yīng)，使得基礎(chǔ)狀態(tài)下的腦血流量和血容量減少，血流通過(guò)時(shí)間延長(zhǎng)。同時(shí)，血管內(nèi)膜的炎癥反應(yīng)也對(duì)腦血流儲(chǔ)備產(chǎn)生了重要影響。炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)釋放的多種細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)，不僅進(jìn)一步損傷血管內(nèi)膜，還會(huì)導(dǎo)致血管壁的炎癥反應(yīng)加重，血管的彈性降低，進(jìn)一步影響血管的舒張功能。在激發(fā)態(tài)下，腦血管難以有效擴(kuò)張，對(duì)乙酰唑胺的反應(yīng)性降低，導(dǎo)致腦血流儲(chǔ)備能力下降。腦血流儲(chǔ)備的變化也可能對(duì)血管內(nèi)膜產(chǎn)生反作用。當(dāng)腦血流儲(chǔ)備降低，腦血流供應(yīng)不足時(shí)，腦組織會(huì)處于相對(duì)缺血缺氧的狀態(tài)。這種缺血缺氧狀態(tài)可能會(huì)刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞，使其分泌更多的細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子，進(jìn)一步加重血管內(nèi)膜的炎癥反應(yīng)和損傷。腦血流動(dòng)力學(xué)的改變，如血流速度和壓力的變化，也可能對(duì)血管內(nèi)膜產(chǎn)生機(jī)械性刺激，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。免疫組化結(jié)果中eNOS和Cx43表達(dá)量的變化，也進(jìn)一步說(shuō)明了兩者之間的相關(guān)性。eNOS表達(dá)增強(qiáng)是內(nèi)皮細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化早期的一種代償反應(yīng)，試圖通過(guò)增加一氧化氮的合成和釋放來(lái)調(diào)節(jié)血管舒張功能，以維持正常的腦血流。然而，這種代償反應(yīng)可能隨著病情進(jìn)展逐漸失衡，導(dǎo)致血管舒張功能進(jìn)一步受損，腦血流儲(chǔ)備能力下降。Cx43表達(dá)量的升高可能與細(xì)胞間通訊的改變有關(guān)，在動(dòng)脈粥樣硬化早期，血管平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞之間的通訊異常，Cx43表達(dá)的變化或許是機(jī)體的一種代償反應(yīng)，試圖維持細(xì)胞間的正常通訊，保證血管的正常功能。但這種代償反應(yīng)也可能隨著病情的發(fā)展而逐漸失效，導(dǎo)致血管功能進(jìn)一步紊亂，進(jìn)而影響腦血流儲(chǔ)備。綜合來(lái)看，動(dòng)脈粥樣硬化早期腦血流儲(chǔ)備變化與血管內(nèi)膜變化相互影響、相互作用。血管內(nèi)膜的損傷和病變導(dǎo)致腦血流儲(chǔ)備降低，而腦血流儲(chǔ)備的改變又反過(guò)來(lái)加重血管內(nèi)膜的損傷和動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。深入研究?jī)烧咧g的相關(guān)性，對(duì)于揭示動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制，早期診斷和干預(yù)具有重要意義。通過(guò)改善血管內(nèi)膜的狀態(tài)，如減少內(nèi)皮細(xì)胞損傷、抑制炎癥反應(yīng)等，可能有助于提高腦血流儲(chǔ)備，延緩動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展。早期監(jiān)測(cè)腦血流儲(chǔ)備的變化，也可以作為評(píng)估動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展進(jìn)程和血管內(nèi)膜病變程度的重要指標(biāo)。4.4與其他研究對(duì)比與既往相關(guān)研究相比，本研究在實(shí)驗(yàn)方法、結(jié)果和結(jié)論等方面既有相似之處，也存在一些差異。在實(shí)驗(yàn)方法上，眾多研究采用高脂飲食誘導(dǎo)兔動(dòng)脈粥樣硬化模型，本研究在此基礎(chǔ)上結(jié)合免疫損傷法，使模型制作更貼近動(dòng)脈粥樣硬化形成的病理生理過(guò)程，能更有效地縮短模型制作周期并提高成功率。在腦血流儲(chǔ)備檢測(cè)方面，多數(shù)研究運(yùn)用CT灌注成像結(jié)合乙酰唑胺負(fù)荷實(shí)驗(yàn)，本研究也采用該方法，利用多層螺旋CT灌注成像的高分辨率和乙酰唑胺對(duì)腦血管的擴(kuò)張作用，精確評(píng)估兔腦血流儲(chǔ)備變化。在血管內(nèi)膜檢測(cè)上，免疫組織化學(xué)方法是常用手段，本研究同樣運(yùn)用此方法觀察兔血管內(nèi)膜相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)變化。在實(shí)驗(yàn)結(jié)果方面，一些研究表明動(dòng)脈粥樣硬化會(huì)導(dǎo)致腦血流儲(chǔ)備降低，這與本研究結(jié)果一致，即動(dòng)脈粥樣硬化早期兔腦血流儲(chǔ)備在基礎(chǔ)態(tài)和激發(fā)態(tài)下均發(fā)生顯著變化，CBF、CBV降低，MTT延長(zhǎng)，腦血管對(duì)乙酰唑胺的反應(yīng)性降低。在血管內(nèi)膜變化上，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化早期血管內(nèi)膜會(huì)出現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞損傷、脂質(zhì)沉積等改變，本研究也觀察到實(shí)驗(yàn)組兔主動(dòng)脈內(nèi)壁出現(xiàn)灰白色斑塊，頸總動(dòng)脈內(nèi)膜內(nèi)皮細(xì)胞腫脹、變形，內(nèi)皮下有脂質(zhì)沉積和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。但不同研究在具體參數(shù)變化程度和內(nèi)膜變化細(xì)節(jié)上可能存在差異，這可能與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種類(lèi)、模型制作方法、檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)和檢測(cè)方法的不同有關(guān)。本研究的創(chuàng)新點(diǎn)在于綜合運(yùn)用多種先進(jìn)技術(shù)，全面深入地研究動(dòng)脈粥樣硬化早期腦血流儲(chǔ)備變化與血管內(nèi)膜變化的相關(guān)性。通過(guò)精確的多層螺旋CT灌注成像和免疫組織化學(xué)分析，不僅從宏觀血流動(dòng)力學(xué)角度，還從微觀血管內(nèi)膜結(jié)構(gòu)和分子水平揭示兩者之間的內(nèi)在聯(lián)系。本研究采用免疫損傷與高脂飲食相結(jié)合的方法制作動(dòng)脈粥樣硬化模型，提高了模型的成功率和可靠性，為后續(xù)研究提供了更有效的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。然而，本研究也存在一定局限性。實(shí)驗(yàn)樣本量相對(duì)較小，可能影響結(jié)果的普遍性和代表性。實(shí)驗(yàn)僅在兔動(dòng)物模型上進(jìn)行，動(dòng)物模型與人類(lèi)在生理和病理方面存在差異，研究結(jié)果外推至人類(lèi)時(shí)需謹(jǐn)慎。本研究主要關(guān)注動(dòng)脈粥樣硬化早期階段，對(duì)于疾病中晚期兩者的相關(guān)性變化未進(jìn)行深入探討。未來(lái)研究可進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，開(kāi)展多中心研究，增加不同種屬動(dòng)物模型的研究，并對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化不同階段進(jìn)行縱向研究，以更全面地揭示腦血流儲(chǔ)備變化與血管內(nèi)膜變化的相關(guān)性。五、結(jié)論與展望5.1研究主要結(jié)論本研究通過(guò)建立兔動(dòng)脈粥樣硬化早期模型，綜合運(yùn)用多層螺旋CT灌注成像結(jié)合乙酰唑胺負(fù)荷實(shí)驗(yàn)以及免疫組織化學(xué)等方法，深入探究了動(dòng)脈粥樣硬化早期腦血流儲(chǔ)備變化與血管內(nèi)膜變化的相關(guān)性，得出以下主要結(jié)論：成功建立動(dòng)脈粥樣硬化模型：采用免疫損傷與高脂飲食相結(jié)合的方法，成功建立了兔動(dòng)脈粥樣硬化早期模型。與傳統(tǒng)單純高脂飲食法相比，該方法使模型制作更接近動(dòng)脈粥樣硬化形成的病理生理過(guò)程，具有成型快、成型率高、可重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。在模型制作第8周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組兔子主動(dòng)脈內(nèi)壁肉眼可見(jiàn)微隆起的灰白色斑塊，而對(duì)照組主動(dòng)脈內(nèi)膜始終光滑，無(wú)明顯異常改變，從宏觀角度驗(yàn)證了模型建立的成功。腦血流儲(chǔ)備變化顯著：動(dòng)脈粥樣硬化早期兔腦血流儲(chǔ)備發(fā)生了明顯變化。在基礎(chǔ)態(tài)下，造模后兔腦的CBF、CBV均明顯降低，MTT延長(zhǎng)，表明基礎(chǔ)狀態(tài)下腦血流供應(yīng)受到負(fù)面影響；在激發(fā)態(tài)下，給予乙酰唑胺后，造模后的兔腦CBF、CBV增加幅度明顯小于造模前，MTT縮短程度也不如造模前，腦血管對(duì)乙酰唑胺的反應(yīng)性降低，腦血流儲(chǔ)備能力明顯受損。通過(guò)對(duì)造模前后各參數(shù)儲(chǔ)備變化率的比較，進(jìn)一步證實(shí)了動(dòng)脈粥樣硬化早期兔腦血流儲(chǔ)備能力的下降。血管內(nèi)膜發(fā)生病理改變：從病理學(xué)角度觀察，實(shí)驗(yàn)組兔血管內(nèi)膜在動(dòng)脈粥樣硬化早期發(fā)生了一系列顯著變化。光鏡下可見(jiàn)內(nèi)皮細(xì)胞腫脹、變形，排列紊亂，細(xì)胞間隙增寬，內(nèi)膜有不同程度的增厚，內(nèi)皮下可見(jiàn)少量脂質(zhì)沉積和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，中膜平滑肌細(xì)胞增生、肥大，外膜結(jié)締組織輕度增生。免疫組化結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組血管內(nèi)膜中eNOS和Cx43的表達(dá)量均明顯高于對(duì)照組，表明在動(dòng)脈粥樣硬化早期，血管內(nèi)膜的微觀結(jié)構(gòu)和相關(guān)分子表達(dá)發(fā)生了改變，可能與血管的代償反應(yīng)和功能調(diào)節(jié)有關(guān)。兩者存在密切相關(guān)性：動(dòng)脈粥樣硬化早期兔腦血流儲(chǔ)備變化與血管內(nèi)膜變化之間存在密切的相關(guān)性。血管內(nèi)膜的損傷和病變，如內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙、脂質(zhì)沉積、炎癥反應(yīng)等，導(dǎo)致血管管腔狹窄，血流阻力增加，進(jìn)而影響腦血流的供應(yīng)，使得腦血流儲(chǔ)備降低。腦血流儲(chǔ)備的改變，如腦血流供應(yīng)不足和血流動(dòng)力學(xué)改變，也會(huì)反過(guò)來(lái)加重血管內(nèi)膜的損傷和動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。免疫組化結(jié)果中eNOS和Cx43表達(dá)量的變化，進(jìn)一步說(shuō)明了兩者之間的相互影響和作用。本研究采用的實(shí)驗(yàn)方法可靠，結(jié)果具有較高的可信度。多層螺旋CT灌注成像結(jié)合乙酰唑胺負(fù)荷實(shí)驗(yàn)?zāi)軌驕?zhǔn)確地檢測(cè)