獸醫(yī)實驗室試題及答案一、單項選擇題（每題2分，共40分）1.下列哪種培養(yǎng)基屬于選擇性培養(yǎng)基？A.營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基B.麥康凱瓊脂培養(yǎng)基C.血瓊脂培養(yǎng)基D.巧克力瓊脂培養(yǎng)基2.革蘭氏染色過程中，關(guān)鍵步驟是？A.結(jié)晶紫初染B.碘液媒染C.95%乙醇脫色D.沙黃復(fù)染3.進(jìn)行病毒血凝試驗時，判定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)是？A.紅細(xì)胞完全沉淀呈紐扣狀B.紅細(xì)胞均勻鋪展成薄膜C.紅細(xì)胞部分凝集D.紅細(xì)胞溶解4.檢測豬瘟病毒最常用的RT-PCR引物設(shè)計靶基因是？A.E2基因B.NS3基因C.NP基因D.M基因5.病理組織切片制作中，脫水的目的是？A.去除組織內(nèi)水分，便于透明B.固定組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)C.使組織與包埋劑結(jié)合D.增強(qiáng)染色效果6.布魯氏菌病血清學(xué)檢測中，虎紅平板凝集試驗屬于？A.沉淀反應(yīng)B.凝集反應(yīng)C.中和反應(yīng)D.補體結(jié)合反應(yīng)7.進(jìn)行細(xì)菌藥敏試驗時，MH培養(yǎng)基的pH值應(yīng)控制在？A.6.0-6.5B.7.0-7.4C.7.8-8.2D.8.5-9.08.檢測雞新城疫病毒的HI試驗中，陽性對照血清的作用是？A.驗證試驗操作準(zhǔn)確性B.確定病毒血凝價C.排除非特異性凝集D.計算樣品抗體效價9.實驗室常用的高壓蒸汽滅菌條件是？A.100℃，30分鐘B.121℃，15-20分鐘C.160℃，2小時D.180℃，1小時10.寄生蟲蟲卵檢查中，飽和鹽水漂浮法主要適用于？A.吸蟲卵（如肝片吸蟲）B.絳蟲卵（如莫尼茨絳蟲）C.線蟲卵（如蛔蟲）D.原蟲包囊（如球蟲）11.檢測豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）的熒光定量PCR技術(shù)中，探針的作用是？A.提高擴(kuò)增特異性B.提供DNA合成起始點C.標(biāo)記擴(kuò)增產(chǎn)物以便檢測D.穩(wěn)定反應(yīng)體系12.進(jìn)行血清學(xué)試驗時，血清滅活的溫度和時間通常是？A.37℃，30分鐘B.56℃，30分鐘C.65℃，15分鐘D.100℃，5分鐘13.細(xì)菌分離純化時，分區(qū)劃線法的關(guān)鍵操作是？A.每次劃線前接種環(huán)無需灼燒B.最后一區(qū)與第一區(qū)相連C.每區(qū)劃線后接種環(huán)需灼燒滅菌D.培養(yǎng)基表面保持濕潤14.檢測牛結(jié)核分枝桿菌的PPD皮內(nèi)試驗，判定陽性的標(biāo)準(zhǔn)是？A.注射部位無紅腫B.紅腫直徑＜5mmC.紅腫直徑5-15mmD.紅腫直徑＞15mm15.實驗室生物安全等級中，處理高致病性禽流感病毒（H5N1）應(yīng)在？A.BSL-1實驗室B.BSL-2實驗室C.BSL-3實驗室D.BSL-4實驗室16.進(jìn)行病毒中和試驗時，中和效價是指？A.能中和50%病毒的血清最高稀釋度B.能中和100%病毒的血清最低稀釋度C.能引起50%細(xì)胞病變的病毒量D.能抑制病毒復(fù)制的最小藥物濃度17.病理組織固定時，10%中性福爾馬林溶液的配制方法是？A.10ml福爾馬林原液+90ml蒸餾水B.10ml福爾馬林原液+90ml生理鹽水C.40ml福爾馬林原液+60ml蒸餾水（pH7.2-7.4）D.40ml福爾馬林原液+60ml生理鹽水（pH7.2-7.4）18.檢測犬細(xì)小病毒的膠體金試紙條，其檢測線（T線）包被的成分是？A.犬細(xì)小病毒單克隆抗體B.羊抗鼠IgG抗體C.膠體金標(biāo)記的病毒抗原D.兔抗犬IgG抗體19.細(xì)菌生化試驗中，吲哚試驗檢測的代謝產(chǎn)物是？A.丙酮酸B.硫化氫C.靛基質(zhì)D.尿素分解產(chǎn)物20.實驗室質(zhì)量控制中，室內(nèi)質(zhì)控的核心目的是？A.確保不同實驗室結(jié)果可比性B.監(jiān)控檢測過程的穩(wěn)定性C.驗證檢測方法的準(zhǔn)確性D.評估人員操作水平二、判斷題（每題1分，共10分。正確打“√”，錯誤打“×”）1.革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁含大量肽聚糖，經(jīng)乙醇脫色后仍保留結(jié)晶紫-碘復(fù)合物，呈紫色。（）2.病毒分離培養(yǎng)時，細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）僅表現(xiàn)為細(xì)胞腫脹，不會出現(xiàn)脫落或融合。（）3.進(jìn)行PCR檢測時，陽性對照出現(xiàn)擴(kuò)增曲線而陰性對照無，說明試驗無污染。（）4.寄生蟲蟲卵檢查中，直接涂片法適用于蟲卵密度高的樣品（如蛔蟲感染）。（）5.血清學(xué)試驗中，補體結(jié)合試驗需嚴(yán)格控制反應(yīng)溫度和時間，因補體活性易受溫度影響。（）6.病理組織切片染色時，蘇木精-伊紅（HE）染色中，蘇木精染細(xì)胞質(zhì)呈紅色，伊紅染細(xì)胞核呈藍(lán)色。（）7.細(xì)菌藥敏試驗中，抑菌圈直徑越大，說明細(xì)菌對該藥物越敏感。（）8.檢測口蹄疫病毒時，O型、A型、Asia1型多價診斷血清可用于區(qū)分病毒型別。（）9.實驗室高壓蒸汽滅菌時，需排盡鍋內(nèi)冷空氣，否則會導(dǎo)致溫度達(dá)不到設(shè)定值。（）10.熒光抗體技術(shù)中，直接法是用熒光素標(biāo)記一抗，間接法是用熒光素標(biāo)記二抗。（）三、簡答題（每題8分，共40分）1.簡述ELISA雙抗體夾心法的基本原理及操作步驟。2.列舉5種常用的病毒檢測方法，并說明其適用場景。3.病理組織石蠟切片制作包括哪些關(guān)鍵步驟？各步驟的主要目的是什么？4.如何對疑似豬瘟病料進(jìn)行實驗室檢測？請簡述樣品采集、處理及檢測方法的選擇依據(jù)。5.實驗室生物安全防護(hù)的核心措施有哪些？針對高致病性病原微生物操作需特別注意哪些事項？四、案例分析題（每題15分，共30分）案例1：某豬場爆發(fā)疫情，病豬表現(xiàn)為高熱（41-42℃）、皮膚出血、腹瀉，部分出現(xiàn)神經(jīng)癥狀。剖檢可見脾臟邊緣梗死、淋巴結(jié)大理石樣出血、腎臟表面有針尖狀出血點。（1）請列出3種可能的疑似病原。（2）若需實驗室確診，應(yīng)如何采集樣品？說明不同樣品的檢測目標(biāo)。（3）選擇2種檢測方法并簡述其操作流程及結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)。案例2：某實驗室進(jìn)行雞新城疫抗體檢測時，出現(xiàn)以下情況：陽性對照孔無顯色，陰性對照孔顯色，所有樣品孔均無顯色。（1）分析可能的原因（至少3條）。（2）提出對應(yīng)的解決措施。---參考答案一、單項選擇題1.B（麥康凱含膽鹽抑制革蘭氏陽性菌，屬于選擇性培養(yǎng)基）2.C（脫色時間過長會導(dǎo)致陽性菌被誤判為陰性，是關(guān)鍵步驟）3.B（紅細(xì)胞均勻鋪展為完全凝集，呈薄膜狀為陽性）4.A（E2基因是豬瘟病毒主要抗原基因，引物設(shè)計常用靶標(biāo)）5.A（脫水去除水分，使組織能被透明劑（如二甲苯）滲透）6.B（虎紅平板凝集試驗通過抗原抗體凝集反應(yīng)檢測布魯氏菌抗體）7.B（MH培養(yǎng)基pH7.0-7.4為細(xì)菌藥敏試驗標(biāo)準(zhǔn)條件）8.A（陽性對照驗證試驗體系有效性，確保結(jié)果可靠）9.B（121℃、15-20分鐘可殺滅所有微生物及芽孢）10.C（飽和鹽水密度大，線蟲卵（如蛔蟲）密度小于鹽水，可漂浮）11.C（探針標(biāo)記熒光基團(tuán)，擴(kuò)增時被水解釋放熒光信號）12.B（56℃30分鐘滅活補體，不破壞抗體活性）13.C（每區(qū)劃線后灼燒接種環(huán)，確保菌量遞減，獲得單菌落）14.D（PPD試驗紅腫直徑＞15mm判定為陽性）15.C（H5N1屬高致病性病原，需BSL-3實驗室操作）16.A（中和效價為能中和50%病毒的血清最高稀釋度）17.B（10%中性福爾馬林為10ml福爾馬林原液+90ml生理鹽水，pH中性）18.A（檢測線包被病毒特異性單克隆抗體，捕獲樣品中的病毒抗原）19.C（吲哚試驗檢測細(xì)菌分解色氨酸產(chǎn)生的靛基質(zhì)）20.B（室內(nèi)質(zhì)控監(jiān)控檢測過程穩(wěn)定性，確保結(jié)果準(zhǔn)確）二、判斷題1.√（革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁厚，乙醇脫色后保留紫色）2.×（CPE可表現(xiàn)為細(xì)胞腫脹、脫落、融合（如合胞體）等）3.×（陰性對照無擴(kuò)增僅說明無外源污染，需結(jié)合內(nèi)參基因判斷）4.√（直接涂片法簡便，適用于蟲卵密度高的樣品）5.√（補體在37℃活性最高，56℃30分鐘失活，需嚴(yán)格控溫）6.×（蘇木精染細(xì)胞核呈藍(lán)色，伊紅染細(xì)胞質(zhì)呈紅色）7.√（抑菌圈直徑與藥物敏感性正相關(guān)）8.×（多價血清用于初篩，定型需單價血清）9.√（冷空氣存在會導(dǎo)致壓力與溫度不匹配，影響滅菌效果）10.√（直接法標(biāo)記一抗，間接法標(biāo)記二抗，提高靈敏度）三、簡答題1.ELISA雙抗體夾心法原理：用已知特異性抗體（捕獲抗體）包被固相載體，加入待檢樣品，若樣品含目標(biāo)抗原，抗原會與包被抗體結(jié)合；洗去未結(jié)合成分后，加入酶標(biāo)記的特異性抗體（檢測抗體），形成“包被抗體-抗原-酶標(biāo)抗體”復(fù)合物；最后加入底物，酶催化底物顯色，顏色深淺與抗原量正相關(guān)。操作步驟：①包被：將捕獲抗體稀釋后加入酶標(biāo)板，4℃過夜；②封閉：加入牛血清白蛋白（BSA）封閉未結(jié)合位點；③加樣：加入待檢樣品，37℃孵育1小時；④加酶標(biāo)抗體：加入酶標(biāo)記的檢測抗體，37℃孵育1小時；⑤洗板：用PBS-T緩沖液洗板3-5次；⑥顯色：加入底物（如TMB），避光反應(yīng)15-30分鐘；⑦終止：加入終止液（如2MH2SO4）；⑧讀數(shù)：用酶標(biāo)儀測定OD值，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定量。2.常用病毒檢測方法及適用場景：①病毒分離培養(yǎng)（雞胚/細(xì)胞培養(yǎng)）：適用于病毒鑒定、毒力測定（如新城疫病毒分離）；②血凝（HA）與血凝抑制（HI）試驗：適用于有血凝特性的病毒（如禽流感病毒、新城疫病毒）抗體或抗原檢測；③免疫熒光（IFA）：快速檢測組織或細(xì)胞中的病毒抗原（如豬瘟病毒感染細(xì)胞檢測）；④RT-PCR/熒光定量PCR：檢測病毒核酸（如非洲豬瘟病毒、口蹄疫病毒），靈敏度高；⑤膠體金試紙條：現(xiàn)場快速檢測（如犬細(xì)小病毒、豬藍(lán)耳病病毒），操作簡便。3.病理組織石蠟切片制作關(guān)鍵步驟及目的：①固定：用10%中性福爾馬林等固定液處理組織，防止自溶、腐敗，保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)；②脫水：用梯度乙醇（70%→80%→95%→100%）去除組織內(nèi)水分，便于透明；③透明：用二甲苯置換乙醇，使組織透明，利于石蠟滲透；④包埋：將組織浸入融化石蠟，形成蠟塊，支撐組織便于切片；⑤切片：用切片機(jī)切3-5μm薄片，展平后貼于載玻片；⑥染色：HE染色（蘇木精染核、伊紅染質(zhì)），顯示組織細(xì)胞形態(tài)；⑦封片：用中性樹膠封片，保護(hù)切片長期保存。4.疑似豬瘟病料檢測流程：樣品采集：①病豬組織（脾、淋巴結(jié)、腎臟）：用于病毒核酸或抗原檢測；②血清：用于抗體檢測；③全血（EDTA抗凝）：用于病毒分離。樣品處理：組織樣品研磨后加PBS制成10%懸液，離心取上清；血清直接使用；全血分離血漿。檢測方法選擇：①抗原檢測：熒光抗體試驗（IFA），直接檢測組織觸片中的豬瘟病毒抗原；②核酸檢測：RT-PCR檢測E2基因，特異性強(qiáng)，可區(qū)分疫苗株與野毒株；③抗體檢測：ELISA檢測豬瘟病毒抗體（如NSP7抗體），用于感染狀態(tài)評估；④病毒分離：接種PK-15細(xì)胞，觀察CPE（細(xì)胞病變），結(jié)合中和試驗確認(rèn)。5.實驗室生物安全核心措施：①硬件防護(hù)：根據(jù)病原危害等級選擇BSL-1至BSL-4實驗室，配備生物安全柜、高壓滅菌器等；②操作規(guī)范：嚴(yán)格執(zhí)行個人防護(hù)（穿防護(hù)服、戴手套口罩）、銳器管理、污染物處理（高壓滅菌或化學(xué)消毒）；③管理體系：制定生物安全手冊，定期培訓(xùn)人員，進(jìn)行風(fēng)險評估；④應(yīng)急處理：制定暴露后處置方案（如皮膚污染時用碘伏消毒，誤吸時及時就醫(yī)）。高致病性病原操作注意事項：①必須在BSL-3及以上實驗室的生物安全柜內(nèi)操作；②避免氣溶膠產(chǎn)生（如緩慢開啟離心管、使用無針頭注射器）；③所有實驗用品（器材、廢棄物）需經(jīng)高壓滅菌后處理；④操作全程記錄，雙人監(jiān)督，配備急救藥品（如抗病毒藥物）。四、案例分析題案例1：（1）可能病原：豬瘟病毒（CSFV）、非洲豬瘟病毒（ASFV）、豬丹毒桿菌（E.rhusiopathiae）。（2）樣品采集及檢測目標(biāo)：①脾臟、淋巴結(jié)：用于病毒核酸檢測（CSFV、ASFV）或細(xì)菌分離（豬丹毒桿菌）；②腎臟：病理組織學(xué)檢查（如CSFV的腎臟出血點）；③全血（EDTA抗凝）：檢測ASFV核酸（因ASFV主要存在于白細(xì)胞）；④血清：檢測CSFV抗體（區(qū)分野毒感染與疫苗免疫）。（3）檢測方法及流程：方法一：RT-PCR檢測CSFV：操作流程：提取病料總RNA→反轉(zhuǎn)錄為cDNA→加入CSFVE2基因特異性引物和探針→熒光定量PCR擴(kuò)增→分析Ct值（Ct≤35為陽性）。結(jié)果判定：陽性對照Ct值≤35，陰性對照無擴(kuò)增，樣品Ct≤35判定為CSFV陽性。方法二：實時熒光定量PCR檢測ASFV：操作流程：提取病料DNA→加入ASFVp72基因特異性引物和探針→熒光定量PCR擴(kuò)增→監(jiān)測熒光信號。結(jié)果判定：陽性對照Ct值≤35，陰性對照無擴(kuò)增，樣品Ct≤35判定為ASFV陽性。案例2：（1）可能原因：①陽性對照血清失效（如保存