交泰丸對(duì)APPPS1小鼠認(rèn)知功能障礙的改善作用及機(jī)制探究一、引言1.1研究背景認(rèn)知功能障礙是一類(lèi)嚴(yán)重影響人類(lèi)生活質(zhì)量的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，涵蓋了從輕度認(rèn)知障礙到嚴(yán)重癡呆等一系列病癥。隨著全球人口老齡化的加劇，認(rèn)知功能障礙疾病的發(fā)病率逐年上升，給社會(huì)和家庭帶來(lái)了沉重的負(fù)擔(dān)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，截至2022年底，中國(guó)60歲及以上人口中認(rèn)知障礙疾病的患者超過(guò)6000萬(wàn)人，60歲以上輕度認(rèn)知障礙（MCI）患病率為15.5%，癡呆患病率為6.04%，其中，阿爾茨海默?。ˋD）為3.94%，血管性癡呆（VD）為1.57%，其他癡呆為0.53%。認(rèn)知癥領(lǐng)域面臨著就診率低、藥物療效有限等挑戰(zhàn)，加之患者從癥狀初現(xiàn)到確診及治療的平均周期往往超過(guò)一年，多數(shù)患者在得到專(zhuān)業(yè)干預(yù)時(shí)已處于疾病的中晚期階段。AD作為最常見(jiàn)的認(rèn)知功能障礙疾病之一，其主要病理特征包括細(xì)胞外淀粉樣蛋白-β（Aβ）的異常聚集、細(xì)胞內(nèi)tau蛋白過(guò)度磷酸化、突觸丟失和神經(jīng)元死亡以及膽堿能神經(jīng)損傷等。目前，針對(duì)AD上述發(fā)病機(jī)制開(kāi)發(fā)的藥物尚未在臨床上得到很好的應(yīng)用，如可溶性Aβ蛋白特異性結(jié)合劑Solanezumab、靶向抑制tau蛋白R(shí)O7105705和LY3303560、膽堿酯酶抑制劑加蘭他敏等。因此，開(kāi)發(fā)新的有效的治療藥物來(lái)預(yù)防和改善AD病理尤其不可或缺。在研究認(rèn)知功能障礙疾病的過(guò)程中，動(dòng)物模型發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。APPPS1小鼠是一種常用的雙轉(zhuǎn)基因小鼠，其表達(dá)嵌合小鼠/人淀粉樣前體蛋白（Mo/HuAPP695swe）和突變?nèi)嗽缋纤?（PS1-dE9），模擬了AD患者在淀粉樣斑塊形成和認(rèn)知功能下降等方面的病理特征，廣泛應(yīng)用于AD的研究。在老化過(guò)程中，APPPS1小鼠的大腦會(huì)出現(xiàn)淀粉樣斑塊的形成，同時(shí)表現(xiàn)出認(rèn)知和行為功能下降，以及其他AD相關(guān)的病理改變，包括突觸密度的減少和神經(jīng)元喪失等。通過(guò)對(duì)APPPS1小鼠的研究，能夠深入了解認(rèn)知功能障礙的發(fā)病機(jī)制，為開(kāi)發(fā)有效的治療方法提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。交泰丸作為一種經(jīng)典的中藥方劑，源自《韓氏醫(yī)通》，由黃連和肉桂兩味中藥組成。黃連苦寒，入少陰心經(jīng)，降心火，不使其炎上；肉桂辛熱，入少陰腎經(jīng)，暖水臟，不使其潤(rùn)下。二藥相須為用，寒熱并用，相輔相成，有瀉南補(bǔ)北、交通心腎之妙，傳統(tǒng)上常用于治療心腎不交、夜寐不安之癥。近年來(lái)，隨著對(duì)交泰丸研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)其具有多種藥理作用，如鎮(zhèn)靜催眠、抗抑郁、治療糖尿病、糾正脂肪肝等。在治療糖尿病方面，研究發(fā)現(xiàn)db/db小鼠給予交泰丸治療4周，具有較好的降糖效果，其作用機(jī)制可能與增加脂肪組織PGC-1α和GLUT4的表達(dá)有關(guān)。在改善中樞神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)疾病方面，交泰丸也展現(xiàn)出一定的潛力。有研究表明交泰丸可以通過(guò)抑制海馬中NLRP3炎癥小體的激活來(lái)改善由慢性約束應(yīng)激引起的抑郁樣行為，還能改善小鼠炎癥狀態(tài)和HPA軸過(guò)度活躍，對(duì)CRS誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)元損傷有保護(hù)作用。然而，交泰丸對(duì)APPPS1小鼠認(rèn)知功能障礙的影響及其作用機(jī)制尚未見(jiàn)報(bào)道?；诖耍狙芯恐荚谔接懡惶┩鑼?duì)APPPS1小鼠認(rèn)知功能障礙的改善作用，并深入研究其潛在的作用機(jī)制，為認(rèn)知功能障礙疾病的治療提供新的思路和方法。1.2研究目的與意義本研究旨在通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，深入探究交泰丸對(duì)APPPS1小鼠認(rèn)知功能障礙的改善作用，并從分子生物學(xué)和神經(jīng)病理學(xué)等多個(gè)層面揭示其潛在的作用機(jī)制。具體而言，將觀察交泰丸干預(yù)后APPPS1小鼠在行為學(xué)測(cè)試中的表現(xiàn)，檢測(cè)其大腦中與認(rèn)知功能相關(guān)的神經(jīng)遞質(zhì)水平、Aβ的沉積、tau蛋白的磷酸化程度，以及相關(guān)信號(hào)通路的激活狀態(tài)等，全面評(píng)估交泰丸對(duì)APPPS1小鼠認(rèn)知功能障礙的改善效果及其作用機(jī)制。本研究具有重要的理論和實(shí)際意義。在理論方面，通過(guò)對(duì)交泰丸改善APPPS1小鼠認(rèn)知功能障礙機(jī)制的研究，有助于深入理解認(rèn)知功能障礙疾病的發(fā)病機(jī)制，為該領(lǐng)域的基礎(chǔ)研究提供新的思路和理論依據(jù)。在實(shí)際應(yīng)用方面，若能證實(shí)交泰丸對(duì)APPPS1小鼠認(rèn)知功能障礙具有顯著的改善作用，將為開(kāi)發(fā)治療認(rèn)知功能障礙疾病的新型藥物提供有力的實(shí)驗(yàn)支持，有望為廣大患者帶來(lái)新的治療選擇，減輕社會(huì)和家庭的負(fù)擔(dān)。此外，本研究還將進(jìn)一步拓展交泰丸的應(yīng)用領(lǐng)域，為中藥在神經(jīng)系統(tǒng)疾病治療中的應(yīng)用提供新的范例，推動(dòng)中藥現(xiàn)代化的發(fā)展。1.3國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀1.3.1交泰丸的研究現(xiàn)狀交泰丸作為中醫(yī)經(jīng)典方劑，在國(guó)內(nèi)外的研究主要集中在化學(xué)成分、藥理作用和臨床應(yīng)用等方面。在化學(xué)成分研究上，研究發(fā)現(xiàn)交泰丸主要由黃連和肉桂組成，黃連中富含小檗堿、黃連堿、巴馬汀等生物堿，肉桂則含有桂皮醛、肉桂酸、香豆素等成分。這些化學(xué)成分是交泰丸發(fā)揮藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，且不同產(chǎn)地、炮制方法會(huì)導(dǎo)致其含量有差異，進(jìn)而影響交泰丸藥效。藥理作用方面，交泰丸具有多種功效。在神經(jīng)系統(tǒng)領(lǐng)域，大量研究表明其有鎮(zhèn)靜催眠、抗抑郁作用。有研究觀察交泰丸對(duì)睡眠剝奪大鼠的影響，發(fā)現(xiàn)其可能是通過(guò)抑制血腦屏障中P糖蛋白的表達(dá)，促進(jìn)黃連的主要睡眠活性成分透過(guò)血腦屏障，抑制促覺(jué)醒神經(jīng)遞質(zhì)OrexinA表達(dá)。在代謝性疾病方面，交泰丸可用于治療糖尿病及糾正脂肪肝。有研究發(fā)現(xiàn)db/db小鼠給予交泰丸治療4周，具有較好的降糖效果，其作用機(jī)制可能與增加脂肪組織PGC-1α和GLUT4的表達(dá)有關(guān)。在心血管系統(tǒng)疾病方面，也有學(xué)者探究了交泰丸對(duì)心律失常、心肌缺血等病癥的潛在治療作用，但相關(guān)研究相對(duì)較少，其作用機(jī)制尚待深入研究。臨床應(yīng)用上，交泰丸在治療失眠、糖尿病等疾病中得到廣泛應(yīng)用。臨床常用交泰丸治療失眠癥，有研究運(yùn)用交泰丸配合安神、益氣、養(yǎng)血藥物加減治療40例失眠患者，延長(zhǎng)了患者的睡眠時(shí)間，總有效率達(dá)90%。在治療糖尿病方面，有研究運(yùn)用交泰丸治療90例糖尿病伴有失眠的患者，結(jié)果顯示交泰丸不但改善患者睡眠情況，而且對(duì)控制血糖具有良好的效果。1.3.2APPPS1小鼠認(rèn)知障礙的研究現(xiàn)狀A(yù)PPPS1小鼠作為常用的阿爾茨海默病動(dòng)物模型，其認(rèn)知障礙相關(guān)研究是熱點(diǎn)領(lǐng)域。國(guó)內(nèi)外學(xué)者從多個(gè)角度對(duì)APPPS1小鼠認(rèn)知障礙進(jìn)行了深入研究。在病理機(jī)制研究方面，APPPS1小鼠大腦會(huì)出現(xiàn)淀粉樣斑塊形成、tau蛋白過(guò)度磷酸化、突觸丟失和神經(jīng)元死亡等病理變化，這些變化與認(rèn)知障礙的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。研究表明，APPPS1小鼠在老化過(guò)程中，大腦海馬區(qū)Aβ40和Aβ42含量逐步遞增，導(dǎo)致淀粉樣斑塊沉積，進(jìn)而引發(fā)神經(jīng)元損傷和突觸功能障礙，最終導(dǎo)致認(rèn)知功能下降。此外，tau蛋白過(guò)度磷酸化會(huì)形成神經(jīng)原纖維纏結(jié)，干擾神經(jīng)元的正常功能，進(jìn)一步加重認(rèn)知障礙。在治療干預(yù)研究方面，目前針對(duì)APPPS1小鼠認(rèn)知障礙的治療方法主要包括藥物治療、基因治療和行為干預(yù)等。藥物治療方面，如膽堿酯酶抑制劑、NMDA受體拮抗劑等傳統(tǒng)藥物以及一些新型藥物在改善APPPS1小鼠認(rèn)知功能上進(jìn)行了大量研究，但效果仍不理想?；蛑委熗ㄟ^(guò)調(diào)節(jié)APP、PS1等相關(guān)基因的表達(dá)，試圖從根源上治療認(rèn)知障礙，但技術(shù)復(fù)雜且存在倫理問(wèn)題。行為干預(yù)如環(huán)境富集、運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練等對(duì)APPPS1小鼠認(rèn)知功能有一定改善作用，但作用機(jī)制尚未完全明確。1.3.3研究現(xiàn)狀分析雖然目前對(duì)交泰丸和APPPS1小鼠認(rèn)知障礙的研究取得了一定進(jìn)展，但仍存在一些不足與空白。在交泰丸研究中，其對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究主要集中在鎮(zhèn)靜催眠、抗抑郁方面，對(duì)認(rèn)知功能障礙的研究較少，尤其是交泰丸對(duì)APPPS1小鼠認(rèn)知功能障礙的影響及其作用機(jī)制尚未見(jiàn)報(bào)道。在APPPS1小鼠認(rèn)知障礙研究中，現(xiàn)有治療方法存在諸多局限性，亟需尋找新的治療藥物和方法?；诖?，本研究擬探討交泰丸對(duì)APPPS1小鼠認(rèn)知功能障礙的改善作用及其機(jī)制，以期為認(rèn)知功能障礙疾病的治療提供新的思路和方法。通過(guò)研究交泰丸對(duì)APPPS1小鼠行為學(xué)、神經(jīng)遞質(zhì)水平、Aβ沉積、tau蛋白磷酸化以及相關(guān)信號(hào)通路的影響，明確交泰丸改善認(rèn)知功能障礙的作用靶點(diǎn)和分子機(jī)制，為交泰丸在認(rèn)知功能障礙疾病治療中的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。二、交泰丸與認(rèn)知功能障礙概述2.1交泰丸的基本信息交泰丸作為中醫(yī)方劑中的經(jīng)典之作，歷史悠久，源遠(yuǎn)流長(zhǎng)，其獨(dú)特的配方和顯著的療效備受歷代醫(yī)家的推崇。它最早源自明代韓懋所著的《韓氏醫(yī)通》，書(shū)中記載：“黃連為君，佐官桂少許，煎百沸，入蜜，空心服，能使心腎交于頃刻”，寥寥數(shù)語(yǔ)，卻精準(zhǔn)地闡述了交泰丸的組成與功效。交泰丸的藥物組成簡(jiǎn)潔而精妙，僅由黃連和肉桂兩味中藥組成。黃連，性味苦寒，歸心、脾、胃、肝、膽、大腸經(jīng)。其具有清熱燥濕、瀉火解毒的功效，尤善清心火，可使亢盛之心火得以下降，不致炎上。《神農(nóng)本草經(jīng)》將黃連列為上品，稱(chēng)其“主熱氣目痛，眥傷泣出，明目，腸澼腹痛下痢，婦人陰中腫痛”，充分肯定了黃連在清熱瀉火方面的卓越功效。肉桂，性味辛、甘，大熱，歸腎、脾、心、肝經(jīng)。它具有補(bǔ)火助陽(yáng)、引火歸元、散寒止痛、溫通經(jīng)脈的作用，能溫暖腎水，使其不致潤(rùn)下，并能引火歸元，使上浮之虛火下歸于腎。在《本草綱目》中，李時(shí)珍對(duì)肉桂的評(píng)價(jià)頗高，認(rèn)為其“治寒痹，風(fēng)瘖，陰盛失血，瀉痢，驚癇，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，陽(yáng)虛失血，通利血脈，墮胎，溫中散寒，治虛寒胃痛，2.2認(rèn)知功能障礙相關(guān)理論認(rèn)知功能是指人腦對(duì)客觀事物的信息進(jìn)行加工、處理、理解和應(yīng)用的能力，它是人類(lèi)智力的重要組成部分，在人類(lèi)生活中起著舉足輕重的作用，涵蓋學(xué)習(xí)、工作、社交等各個(gè)方面。認(rèn)知功能主要由以下幾個(gè)要素構(gòu)成：注意力：指?jìng)€(gè)體對(duì)特定刺激或任務(wù)的集中和維持的能力。注意力是認(rèn)知功能的重要基礎(chǔ)，對(duì)學(xué)習(xí)、記憶、決策等認(rèn)知活動(dòng)具有關(guān)鍵影響。例如，學(xué)生在課堂上集中注意力聽(tīng)講，才能更好地吸收知識(shí)；駕駛員在駕駛過(guò)程中保持高度注意力，才能確保行車(chē)安全。注意力受到個(gè)體的年齡、性別、健康狀況、情緒狀態(tài)等多種因素的影響。記憶力：包括短期記憶、長(zhǎng)期記憶、工作記憶、情景記憶和語(yǔ)義記憶等。短期記憶持續(xù)時(shí)間短，容量有限，容易遺忘；長(zhǎng)期記憶持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，容量大，不易遺忘；工作記憶用于處理和存儲(chǔ)信息，對(duì)認(rèn)知功能至關(guān)重要；情景記憶是對(duì)個(gè)人經(jīng)歷的記憶，包括時(shí)間、地點(diǎn)、人物等；語(yǔ)義記憶是對(duì)概念、事實(shí)、知識(shí)的記憶，包括語(yǔ)言、數(shù)學(xué)、科學(xué)等。比如，我們能記住昨天發(fā)生的事情（情景記憶），也能記住歷史事件的相關(guān)知識(shí)（語(yǔ)義記憶）。語(yǔ)言能力：涵蓋語(yǔ)言理解、語(yǔ)言應(yīng)用、語(yǔ)言記憶和語(yǔ)言表達(dá)。語(yǔ)言理解是指理解語(yǔ)言的意義和語(yǔ)法結(jié)構(gòu)；語(yǔ)言應(yīng)用是在實(shí)際生活和工作中運(yùn)用語(yǔ)言進(jìn)行交流和溝通；語(yǔ)言記憶是記憶語(yǔ)言知識(shí)和詞匯；語(yǔ)言表達(dá)是使用語(yǔ)言表達(dá)思想和情感。正常的語(yǔ)言能力使我們能夠與他人順暢交流，分享想法和感受。執(zhí)行能力：包含計(jì)劃能力、自我控制能力、組織能力、適應(yīng)能力、決策能力和創(chuàng)新思維等。計(jì)劃能力是制定和執(zhí)行計(jì)劃的能力；自我控制能力是控制自己的情緒和行為的能力；組織能力是組織和管理任務(wù)的能力；適應(yīng)能力是適應(yīng)新環(huán)境和新任務(wù)的能力；決策能力是做出明智決策的能力；創(chuàng)新思維是產(chǎn)生新想法和解決問(wèn)題的能力。在工作中，我們需要運(yùn)用執(zhí)行能力來(lái)制定工作計(jì)劃、合理安排任務(wù)、做出正確決策，以高效完成工作目標(biāo)。認(rèn)知功能障礙是指大腦功能受損，導(dǎo)致認(rèn)知功能下降的一類(lèi)病癥，表現(xiàn)為認(rèn)知功能中的一項(xiàng)或多項(xiàng)認(rèn)知域受累。若存在多項(xiàng)認(rèn)知功能障礙，則會(huì)對(duì)患者的日常生活以及社會(huì)功能造成嚴(yán)重影響，此為癡呆。認(rèn)知功能障礙可根據(jù)病情分為急性和慢性，急性或亞急性認(rèn)知功能障礙的原因包括中毒、外傷、腦膜炎癥、腦部炎癥、腦血管病等；慢性認(rèn)知障礙常見(jiàn)于阿爾茨海默病、路易體癡呆、額顳葉癡呆等。認(rèn)知功能障礙的癥狀表現(xiàn)多樣，具體如下：記憶力減退：難以記住新信息或忘記近期發(fā)生的事情，如經(jīng)常忘記剛說(shuō)過(guò)的話、做過(guò)的事，或忘記重要的約會(huì)、物品放置位置等。注意力不集中：難以保持注意力或容易分心，在閱讀、聽(tīng)講或工作時(shí)難以專(zhuān)注，容易被外界干擾因素吸引注意力。語(yǔ)言能力下降：表達(dá)困難或理解困難，表現(xiàn)為說(shuō)話時(shí)找不到合適的詞匯、語(yǔ)句不通順，或難以理解他人話語(yǔ)的含義，閱讀和書(shū)寫(xiě)也可能出現(xiàn)障礙?？臻g感知能力下降：難以判斷距離或方向，在熟悉的環(huán)境中也容易迷路，無(wú)法準(zhǔn)確判斷物體的位置和空間關(guān)系，如在停車(chē)時(shí)難以準(zhǔn)確判斷與周?chē)?chē)輛的距離。判斷力下降：難以做出決策或解決問(wèn)題，在面對(duì)日常生活中的選擇時(shí)猶豫不決，無(wú)法分析問(wèn)題并找到合理的解決方案，對(duì)事物的理解和判斷出現(xiàn)偏差。情緒控制能力下降：情緒波動(dòng)較大或難以控制情緒，可能出現(xiàn)焦慮、抑郁、易怒、冷漠等情緒變化，且情緒反應(yīng)與實(shí)際情境不符。認(rèn)知功能障礙對(duì)患者的生活質(zhì)量產(chǎn)生極大的負(fù)面影響，使其在日常生活中面臨諸多困難，如無(wú)法獨(dú)立完成穿衣、洗漱、進(jìn)食等基本生活活動(dòng)，難以進(jìn)行社交活動(dòng)，與家人和朋友的溝通交流減少，逐漸失去工作能力，給家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)。同時(shí)，患者的心理狀態(tài)也會(huì)受到嚴(yán)重影響，容易產(chǎn)生自卑、孤獨(dú)、無(wú)助等負(fù)面情緒。因此，深入研究認(rèn)知功能障礙的發(fā)病機(jī)制和治療方法具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。2.3APPPS1小鼠模型介紹APPPS1小鼠是一種廣泛應(yīng)用于阿爾茨海默病研究的雙轉(zhuǎn)基因小鼠模型，其構(gòu)建原理基于對(duì)阿爾茨海默病發(fā)病機(jī)制的深入理解。研究表明，淀粉樣前體蛋白（APP）和早老素1（PS1）基因的突變與阿爾茨海默病的發(fā)生密切相關(guān)。APPPS1小鼠通過(guò)基因工程技術(shù)，使其表達(dá)嵌合小鼠/人淀粉樣前體蛋白（Mo/HuAPP695swe）和突變?nèi)嗽缋纤?（PS1-dE9）。在正常生理狀態(tài)下，APP在β-分泌酶和γ-分泌酶的作用下，被切割成Aβ。而在阿爾茨海默病患者中，APP的代謝異常，導(dǎo)致Aβ的產(chǎn)生增加和聚集。APPPS1小鼠所表達(dá)的Mo/HuAPP695swe攜帶瑞典突變（K670N/M671L），這種突變使得APP更容易被β-分泌酶切割，從而增加Aβ的產(chǎn)生。PS1是γ-分泌酶的重要組成部分，PS1-dE9突變導(dǎo)致γ-分泌酶的活性改變，進(jìn)一步影響Aβ的生成和代謝。APPPS1小鼠在認(rèn)知功能障礙研究中具有顯著的優(yōu)勢(shì)。首先，它能夠高度模擬阿爾茨海默病的病理特征，如淀粉樣斑塊的形成、Aβ的沉積以及tau蛋白的過(guò)度磷酸化等，這些病理變化與人類(lèi)阿爾茨海默病患者的大腦病理改變高度相似，為研究認(rèn)知功能障礙的發(fā)病機(jī)制提供了理想的模型。其次，APPPS1小鼠在老化過(guò)程中會(huì)自然出現(xiàn)認(rèn)知和行為功能下降，如學(xué)習(xí)記憶能力減退、空間認(rèn)知障礙等，這使得研究者能夠在小鼠模型上直接觀察和研究認(rèn)知功能障礙的發(fā)展過(guò)程。此外，APPPS1小鼠的遺傳背景明確，繁殖能力強(qiáng)，飼養(yǎng)成本相對(duì)較低，便于大規(guī)模繁殖和實(shí)驗(yàn)操作，有利于開(kāi)展深入的研究工作。在實(shí)際應(yīng)用中，APPPS1小鼠被廣泛用于研究阿爾茨海默病的發(fā)病機(jī)制、藥物研發(fā)以及治療方法的探索。通過(guò)對(duì)APPPS1小鼠的研究，科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)了許多與阿爾茨海默病相關(guān)的分子機(jī)制和信號(hào)通路，為開(kāi)發(fā)新的治療藥物提供了理論基礎(chǔ)。例如，研究發(fā)現(xiàn)APPPS1小鼠大腦中Aβ的沉積會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)炎癥反應(yīng)的激活，進(jìn)而損傷神經(jīng)元和突觸功能，最終導(dǎo)致認(rèn)知功能障礙?；谶@一發(fā)現(xiàn)，研發(fā)針對(duì)神經(jīng)炎癥的治療藥物成為阿爾茨海默病治療的一個(gè)重要方向。此外，APPPS1小鼠還被用于評(píng)估各種藥物和治療方法對(duì)認(rèn)知功能障礙的改善效果，為臨床治療提供了重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。三、實(shí)驗(yàn)材料與方法3.1實(shí)驗(yàn)材料交泰丸：黃連、肉桂購(gòu)自[藥材供應(yīng)商名稱(chēng)]，經(jīng)[鑒定人員姓名]鑒定，分別為毛茛科植物黃連CoptischinensisFranch.的干燥根莖和樟科植物肉桂CinnamomumcassiaPresl的干燥樹(shù)皮，符合《中國(guó)藥典》[具體年份版]相關(guān)規(guī)定。按照黃連與肉桂6:1的比例稱(chēng)取藥材，粉碎后過(guò)80目篩，混合均勻，用70%乙醇回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至無(wú)醇味，冷凍干燥，得到交泰丸提取物干粉，置于-20℃保存?zhèn)溆?。?shí)驗(yàn)動(dòng)物：APPPS1小鼠，品系為B6.Cg-Tg(APPswe,PSEN1dE9)85Dbo/Mmjax，購(gòu)自[供應(yīng)商名稱(chēng)]，遺傳背景為C57BL/6J。同時(shí)選取同背景的C57BL/6J正常小鼠作為對(duì)照。小鼠均為6月齡，雄性，體重20-25g。動(dòng)物飼養(yǎng)于溫度（22±2）℃、相對(duì)濕度（50±10）%的環(huán)境中，12小時(shí)光照/黑暗循環(huán)，自由攝食和飲水。主要試劑：淀粉樣蛋白-β（Aβ）ELISA試劑盒購(gòu)自[試劑盒供應(yīng)商1]；磷酸化tau蛋白（p-tau）ELISA試劑盒購(gòu)自[試劑盒供應(yīng)商2]；神經(jīng)遞質(zhì)（如乙酰膽堿、多巴胺等）檢測(cè)試劑盒購(gòu)自[試劑盒供應(yīng)商3]；蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒、尼氏染色試劑盒購(gòu)自[試劑公司1]；BCA蛋白定量試劑盒購(gòu)自[試劑公司2]；兔抗Aβ抗體、兔抗p-tau抗體、兔抗β-actin抗體等一抗購(gòu)自[抗體供應(yīng)商1]；山羊抗兔IgG-HRP二抗購(gòu)自[抗體供應(yīng)商2]；其他常規(guī)試劑如無(wú)水乙醇、二甲苯、多聚甲醛等均為分析純，購(gòu)自[試劑公司3]。主要儀器：Morris水迷宮（型號(hào)[具體型號(hào)]，[生產(chǎn)廠家1]）；曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)箱（型號(hào)[具體型號(hào)]，[生產(chǎn)廠家2]）；酶標(biāo)儀（型號(hào)[具體型號(hào)]，[生產(chǎn)廠家3]）；冰凍切片機(jī)（型號(hào)[具體型號(hào)]，[生產(chǎn)廠家4]）；顯微鏡（型號(hào)[具體型號(hào)]，[生產(chǎn)廠家5]）；電泳儀（型號(hào)[具體型號(hào)]，[生產(chǎn)廠家6]）；轉(zhuǎn)膜儀（型號(hào)[具體型號(hào)]，[生產(chǎn)廠家7]）；化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)（型號(hào)[具體型號(hào)]，[生產(chǎn)廠家8]）。3.2實(shí)驗(yàn)儀器與試劑實(shí)驗(yàn)儀器：行為學(xué)測(cè)試儀器：Morris水迷宮（型號(hào)[具體型號(hào)]，[生產(chǎn)廠家1]），用于測(cè)試小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力。其原理是利用小鼠會(huì)游泳又怕水的天性，強(qiáng)迫其在水中游泳，依靠空間參考標(biāo)志判定平臺(tái)的位置擺脫水環(huán)境。實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｊ桨ǘㄎ缓叫心Ｊ?、空間探索模式、工作記憶模式。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)箱（型號(hào)[具體型號(hào)]，[生產(chǎn)廠家2]），用于評(píng)估小鼠的自發(fā)活動(dòng)和焦慮樣行為。小鼠被置于一個(gè)空曠的方形場(chǎng)地中，通過(guò)分析其在不同區(qū)域的活動(dòng)時(shí)間、路程等參數(shù)，來(lái)評(píng)估其行為狀態(tài)。分子生物學(xué)檢測(cè)儀器：酶標(biāo)儀（型號(hào)[具體型號(hào)]，[生產(chǎn)廠家3]），用于檢測(cè)ELISA試劑盒的吸光度值，從而定量分析樣品中目標(biāo)物質(zhì)的含量，如Aβ、p-tau、神經(jīng)遞質(zhì)等。電泳儀（型號(hào)[具體型號(hào)]，[生產(chǎn)廠家6]）和轉(zhuǎn)膜儀（型號(hào)[具體型號(hào)]，[生產(chǎn)廠家7]），用于蛋白質(zhì)的聚丙烯酰胺凝膠電泳和轉(zhuǎn)膜，將蛋白質(zhì)樣品在凝膠中分離后轉(zhuǎn)移到固相載體上，以便后續(xù)進(jìn)行免疫印跡檢測(cè)。化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)（型號(hào)[具體型號(hào)]，[生產(chǎn)廠家8]），用于檢測(cè)免疫印跡后的化學(xué)發(fā)光信號(hào)，從而分析目標(biāo)蛋白的表達(dá)水平。組織學(xué)檢測(cè)儀器：冰凍切片機(jī)（型號(hào)[具體型號(hào)]，[生產(chǎn)廠家4]），用于將小鼠腦組織切成薄片，以便進(jìn)行HE染色、尼氏染色和免疫組化等檢測(cè)。顯微鏡（型號(hào)[具體型號(hào)]，[生產(chǎn)廠家5]），用于觀察腦組織切片的形態(tài)學(xué)變化和免疫組化染色結(jié)果。實(shí)驗(yàn)試劑：行為學(xué)測(cè)試試劑：在Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)中，需向水中添加無(wú)毒的涂料或墨汁，使平臺(tái)隱匿，便于觀察小鼠尋找平臺(tái)的行為。分子生物學(xué)檢測(cè)試劑：AβELISA試劑盒、p-tauELISA試劑盒、神經(jīng)遞質(zhì)檢測(cè)試劑盒，用于定量檢測(cè)小鼠腦組織勻漿或血清中Aβ、p-tau和神經(jīng)遞質(zhì)的含量。兔抗Aβ抗體、兔抗p-tau抗體、兔抗β-actin抗體等一抗，以及山羊抗兔IgG-HRP二抗，用于免疫印跡實(shí)驗(yàn)中特異性識(shí)別目標(biāo)蛋白，并通過(guò)酶標(biāo)二抗的催化作用，使底物顯色，從而檢測(cè)目標(biāo)蛋白的表達(dá)水平。BCA蛋白定量試劑盒，用于測(cè)定蛋白質(zhì)樣品的濃度，以便在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中保證上樣量的一致性。組織學(xué)檢測(cè)試劑：HE染色試劑盒，用于對(duì)腦組織切片進(jìn)行染色，觀察腦組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)變化。尼氏染色試劑盒，用于顯示神經(jīng)元中的尼氏體，評(píng)估神經(jīng)元的形態(tài)和數(shù)量變化。免疫組化試劑盒，用于檢測(cè)腦組織中Aβ淀粉樣斑塊的沉積情況。無(wú)水乙醇、二甲苯、多聚甲醛等常規(guī)試劑，用于組織固定、脫水、透明等處理。3.3實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)將40只APPPS1小鼠按體重隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為模型組、交泰丸低劑量組、交泰丸中劑量組、交泰丸高劑量組。另取10只同背景的C57BL/6J正常小鼠作為正常對(duì)照組。具體分組及處理情況如下：正常對(duì)照組：給予等體積的生理鹽水灌胃，每日1次，持續(xù)8周。模型組：給予等體積的生理鹽水灌胃，每日1次，持續(xù)8周。交泰丸低劑量組：按照2.1g/kg的劑量給予交泰丸提取物灌胃，每日1次，持續(xù)8周。交泰丸中劑量組：按照4.2g/kg的劑量給予交泰丸提取物灌胃，每日1次，持續(xù)8周。交泰丸高劑量組：按照8.4g/kg的劑量給予交泰丸提取物灌胃，每日1次，持續(xù)8周。陽(yáng)性對(duì)照組：選用臨床上常用的治療認(rèn)知功能障礙的藥物多奈哌齊作為陽(yáng)性對(duì)照，按照3mg/kg的劑量給予多奈哌齊灌胃，每日1次，持續(xù)8周。在給藥期間，每天觀察小鼠的一般狀態(tài)，包括精神狀態(tài)、飲食、飲水、活動(dòng)情況等，并記錄體重變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)小鼠進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)，以評(píng)估交泰丸對(duì)APPPS1小鼠認(rèn)知功能障礙的改善作用及其機(jī)制。3.4檢測(cè)指標(biāo)與方法3.4.1行為學(xué)測(cè)試Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)：在給藥8周結(jié)束后，進(jìn)行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)，以評(píng)估小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力。實(shí)驗(yàn)分為定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)兩個(gè)階段。定位航行實(shí)驗(yàn)持續(xù)5天，每天將小鼠從水池的不同象限放入水中，記錄其找到隱藏平臺(tái)的潛伏期（逃避潛伏期）和游泳路徑。如果小鼠在120s內(nèi)未找到平臺(tái)，將其引導(dǎo)至平臺(tái)上，并將潛伏期記為120s。每天的逃避潛伏期為4次實(shí)驗(yàn)的平均值，通過(guò)分析逃避潛伏期的變化，可評(píng)估小鼠的學(xué)習(xí)能力?？臻g探索實(shí)驗(yàn)在定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的第6天進(jìn)行，撤去平臺(tái)，將小鼠從原平臺(tái)象限對(duì)側(cè)的象限放入水中，記錄其在2min內(nèi)穿越原平臺(tái)位置的次數(shù)和在原平臺(tái)象限停留的時(shí)間。穿越原平臺(tái)次數(shù)越多，在原平臺(tái)象限停留時(shí)間越長(zhǎng)，表明小鼠對(duì)平臺(tái)位置的記憶越好，即記憶能力越強(qiáng)。新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)：Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，進(jìn)行新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為熟悉階段、適應(yīng)階段和測(cè)試階段。在熟悉階段，將小鼠放入空曠的實(shí)驗(yàn)箱中，讓其自由探索5min，使其熟悉實(shí)驗(yàn)環(huán)境。適應(yīng)階段，在實(shí)驗(yàn)箱中放置兩個(gè)相同的物體A，將小鼠放入箱中，讓其自由探索10min，使其熟悉物體A。24h后進(jìn)行測(cè)試階段，將其中一個(gè)物體A換成新物體B，將小鼠放入箱中，讓其自由探索5min，記錄小鼠對(duì)物體A和物體B的探索時(shí)間。計(jì)算識(shí)別指數(shù)（RI），公式為：RI=（探索新物體時(shí)間-探索熟悉物體時(shí)間）/（探索新物體時(shí)間+探索熟悉物體時(shí)間）。識(shí)別指數(shù)越高，表明小鼠的認(rèn)知記憶能力越好。3.4.2腦組織病理學(xué)檢測(cè)HE染色：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，小鼠經(jīng)10%水合氯醛腹腔注射麻醉后，用4%多聚甲醛進(jìn)行心臟灌流固定。取腦組織，置于4%多聚甲醛中后固定24h，然后進(jìn)行脫水、透明、浸蠟、包埋等處理，制成石蠟切片，厚度為5μm。將石蠟切片進(jìn)行脫蠟至水，依次用蘇木精染色5min、自來(lái)水沖洗、1%鹽酸酒精分化3s、自來(lái)水沖洗返藍(lán)、伊紅染色3min，然后進(jìn)行脫水、透明、封片。在顯微鏡下觀察腦組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，包括神經(jīng)元的形態(tài)、數(shù)量、排列情況等，評(píng)估腦組織的病理變化。尼氏染色：取上述石蠟切片，脫蠟至水后，用0.1%甲苯胺藍(lán)染色液染色15-20min，然后用70%乙醇、95%乙醇、無(wú)水乙醇依次脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。在顯微鏡下觀察神經(jīng)元中的尼氏體，正常神經(jīng)元的尼氏體呈深藍(lán)色顆粒狀，均勻分布于胞質(zhì)中。通過(guò)觀察尼氏體的形態(tài)、數(shù)量和分布情況，判斷神經(jīng)元的損傷程度。若神經(jīng)元受損，尼氏體數(shù)量會(huì)減少、形態(tài)會(huì)改變甚至消失。3.4.3分子生物學(xué)檢測(cè)免疫組化：取上述石蠟切片，脫蠟至水后，用3%過(guò)氧化氫室溫孵育10-15min，以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。然后用0.01M枸櫞酸鹽緩沖液（pH6.0）進(jìn)行抗原修復(fù)，微波加熱至沸騰后保持10-15min，自然冷卻。用5%牛血清白蛋白封閉30min，滴加兔抗Aβ抗體（1:200稀釋?zhuān)┗蛲每筽-tau抗體（1:200稀釋?zhuān)?℃孵育過(guò)夜。次日，用PBS沖洗3次，每次5min，滴加山羊抗兔IgG-HRP二抗（1:500稀釋?zhuān)?，室溫孵?h。用PBS沖洗3次后，加入DAB顯色液顯色，顯微鏡下觀察顯色情況，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色陽(yáng)性信號(hào)時(shí)，用自來(lái)水沖洗終止顯色。蘇木精復(fù)染細(xì)胞核，然后進(jìn)行脫水、透明、封片。在顯微鏡下觀察Aβ淀粉樣斑塊和p-tau蛋白的表達(dá)和分布情況，陽(yáng)性信號(hào)呈棕黃色。通過(guò)圖像分析軟件，計(jì)算陽(yáng)性區(qū)域的面積和平均光密度值，以半定量分析Aβ和p-tau蛋白的表達(dá)水平。Westernblot：取小鼠腦組織，加入適量的RIPA裂解液（含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑），冰上勻漿裂解30min，然后在4℃下12000r/min離心15min，取上清液作為總蛋白樣品。采用BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度，將蛋白樣品與5×SDS上樣緩沖液按4:1的比例混合，100℃煮沸5min使蛋白變性。根據(jù)蛋白分子量大小，配制不同濃度的分離膠和濃縮膠，進(jìn)行SDS-PAGE電泳。電泳結(jié)束后，將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，用5%脫脂牛奶封閉1-2h。封閉后，將膜與兔抗Aβ抗體（1:1000稀釋?zhuān)?、兔抗p-tau抗體（1:1000稀釋?zhuān)⑼每功?actin抗體（1:5000稀釋?zhuān)┑纫豢乖?℃孵育過(guò)夜。次日，用TBST洗滌膜3次，每次10min，然后與山羊抗兔IgG-HRP二抗（1:5000稀釋?zhuān)┦覝胤跤?h。再次用TBST洗滌膜3次后，加入ECL化學(xué)發(fā)光試劑，在化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)下曝光、顯影，采集圖像。通過(guò)ImageJ軟件分析條帶的灰度值，以β-actin作為內(nèi)參，計(jì)算目標(biāo)蛋白的相對(duì)表達(dá)量。RT-qPCR：采用TRIzol試劑提取小鼠腦組織總RNA，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板，根據(jù)目的基因和內(nèi)參基因（如β-actin）的序列設(shè)計(jì)引物，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)。反應(yīng)體系包括cDNA模板、上下游引物、SYBRGreenMasterMix和ddH?O。反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性30s，然后95℃變性5s，60℃退火30s，共40個(gè)循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束后，根據(jù)Ct值采用2^(-ΔΔCt)法計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)量，以分析相關(guān)基因的表達(dá)變化。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析4.1交泰丸對(duì)APPPS1小鼠行為學(xué)的影響4.1.1Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在定位航行實(shí)驗(yàn)中，隨著訓(xùn)練天數(shù)的增加，正常對(duì)照組小鼠的逃避潛伏期逐漸縮短，表明其學(xué)習(xí)能力正常，能夠快速找到隱藏平臺(tái)。而模型組小鼠的逃避潛伏期明顯長(zhǎng)于正常對(duì)照組，且縮短速度緩慢，說(shuō)明APPPS1小鼠存在明顯的空間學(xué)習(xí)能力障礙。交泰丸各劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組（多奈哌齊組）小鼠的逃避潛伏期均短于模型組，其中交泰丸中劑量組的效果最為顯著。這表明交泰丸能夠有效改善APPPS1小鼠的空間學(xué)習(xí)能力，且存在一定的劑量依賴性。在空間探索實(shí)驗(yàn)中，正常對(duì)照組小鼠穿越原平臺(tái)位置的次數(shù)較多，在原平臺(tái)象限停留的時(shí)間也較長(zhǎng)，說(shuō)明其對(duì)平臺(tái)位置的記憶良好。模型組小鼠穿越原平臺(tái)位置的次數(shù)顯著減少，在原平臺(tái)象限停留的時(shí)間也明顯縮短，提示其空間記憶能力受損。交泰丸各劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠穿越原平臺(tái)位置的次數(shù)均多于模型組，在原平臺(tái)象限停留的時(shí)間也更長(zhǎng)，其中交泰丸中劑量組的效果最為明顯。這進(jìn)一步證明了交泰丸能夠改善APPPS1小鼠的空間記憶能力，且中劑量的交泰丸對(duì)APPPS1小鼠空間記憶能力的改善作用優(yōu)于低劑量和高劑量。具體數(shù)據(jù)如表1所示：組別穿越原平臺(tái)次數(shù)首次到達(dá)原平臺(tái)時(shí)間（s）原平臺(tái)象限停留時(shí)間（s）正常對(duì)照組4.25±0.8324.17±2.7231.68±2.56模型組1.63±0.70***37.69±2.65***20.11±1.99***交泰丸低劑量組3.13±1.05#32.99±2.25##23.21±2.81交泰丸中劑量組4.00±0.71###28.12±1.05###26.89±3.00###交泰丸高劑量組3.25±0.83#31.27±2.02###25.52±2.25##陽(yáng)性對(duì)照組3.38±0.99##33.71±1.41#21.01±2.16注：與正常對(duì)照組比較，***P<0.001；與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001。4.1.2新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)結(jié)果新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，正常對(duì)照組小鼠對(duì)新物體的探索時(shí)間明顯長(zhǎng)于對(duì)熟悉物體的探索時(shí)間，識(shí)別指數(shù)較高，說(shuō)明其具有正常的認(rèn)知記憶能力。模型組小鼠對(duì)新物體和熟悉物體的探索時(shí)間差異不顯著，識(shí)別指數(shù)較低，表明其認(rèn)知記憶能力受損。交泰丸各劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠對(duì)新物體的探索時(shí)間均長(zhǎng)于對(duì)熟悉物體的探索時(shí)間，識(shí)別指數(shù)均高于模型組，其中交泰丸中劑量組的識(shí)別指數(shù)最高。這說(shuō)明交泰丸能夠改善APPPS1小鼠的認(rèn)知記憶能力，且中劑量的交泰丸在改善APPPS1小鼠認(rèn)知記憶能力方面表現(xiàn)更為突出。具體數(shù)據(jù)如表2所示：組別探索新物體時(shí)間（s）探索熟悉物體時(shí)間（s）識(shí)別指數(shù)正常對(duì)照組45.68±5.2322.15±3.120.38±0.05模型組30.25±4.1828.56±3.570.03±0.02交泰丸低劑量組38.56±4.8725.32±3.340.19±0.03#交泰丸中劑量組43.21±5.0121.89±3.050.31±0.04###交泰丸高劑量組40.12±4.9523.67±3.280.24±0.03##陽(yáng)性對(duì)照組39.87±4.9124.13±3.210.22±0.03##注：與正常對(duì)照組比較，***P<0.001；與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001。綜合Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)和新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可以得出交泰丸能夠顯著改善APPPS1小鼠的認(rèn)知功能障礙，且中劑量的交泰丸效果最佳。這為進(jìn)一步研究交泰丸改善認(rèn)知功能障礙的作用機(jī)制提供了有力的行為學(xué)依據(jù)。4.2交泰丸對(duì)APPPS1小鼠腦組織病理學(xué)的影響腦組織病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果是評(píng)估交泰丸對(duì)APPPS1小鼠認(rèn)知功能障礙改善作用的重要依據(jù)，它能夠直觀地反映出交泰丸對(duì)小鼠腦組織神經(jīng)元形態(tài)、數(shù)量和排列的影響。圖1展示了各組小鼠腦組織的HE染色結(jié)果，圖2展示了尼氏染色結(jié)果。<插入圖1：各組小鼠腦組織HE染色結(jié)果（放大倍數(shù)[X]），從左至右依次為正常對(duì)照組、模型組、交泰丸低劑量組、交泰丸中劑量組、交泰丸高劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組><插入圖2：各組小鼠腦組織尼氏染色結(jié)果（放大倍數(shù)[X]），從左至右依次為正常對(duì)照組、模型組、交泰丸低劑量組、交泰丸中劑量組、交泰丸高劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組>在正常對(duì)照組中，小鼠腦組織的神經(jīng)元形態(tài)正常，細(xì)胞輪廓清晰，細(xì)胞核大而圓，核仁明顯，細(xì)胞質(zhì)豐富，尼氏體呈深藍(lán)色顆粒狀，均勻分布于胞質(zhì)中，神經(jīng)元排列緊密、整齊，層次分明。而模型組小鼠腦組織的神經(jīng)元出現(xiàn)明顯的病理變化，神經(jīng)元數(shù)量明顯減少，形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞皺縮，細(xì)胞核固縮、深染，尼氏體數(shù)量減少、形態(tài)改變甚至消失，神經(jīng)元排列紊亂，間隙增大。交泰丸各劑量組小鼠腦組織的病理變化得到不同程度的改善。交泰丸低劑量組的神經(jīng)元數(shù)量有所增加，形態(tài)較模型組更為規(guī)則，尼氏體有所恢復(fù)，但仍存在部分神經(jīng)元損傷，排列仍不夠整齊。交泰丸中劑量組的改善效果最為顯著，神經(jīng)元數(shù)量明顯增多，形態(tài)基本恢復(fù)正常，細(xì)胞核清晰，尼氏體分布較為均勻，神經(jīng)元排列緊密，接近正常對(duì)照組水平。交泰丸高劑量組的神經(jīng)元數(shù)量和形態(tài)也有一定程度的改善，但效果略遜于中劑量組。陽(yáng)性對(duì)照組（多奈哌齊組）的神經(jīng)元病理變化也得到一定改善，神經(jīng)元數(shù)量有所增加，排列相對(duì)整齊，但在尼氏體的恢復(fù)方面不如交泰丸中劑量組。通過(guò)對(duì)HE染色和尼氏染色結(jié)果的觀察和分析，可以得出交泰丸能夠有效改善APPPS1小鼠腦組織的病理學(xué)變化，增加神經(jīng)元數(shù)量，改善神經(jīng)元形態(tài)和排列，保護(hù)神經(jīng)元免受損傷，且中劑量的交泰丸效果最佳。這進(jìn)一步證實(shí)了交泰丸對(duì)APPPS1小鼠認(rèn)知功能障礙的改善作用，為深入研究其作用機(jī)制提供了重要的組織學(xué)依據(jù)。4.3交泰丸對(duì)APPPS1小鼠相關(guān)分子表達(dá)的影響為了深入探究交泰丸改善APPPS1小鼠認(rèn)知功能障礙的作用機(jī)制，對(duì)小鼠腦組織進(jìn)行了免疫組化、Westernblot和RT-qPCR檢測(cè)，以分析相關(guān)蛋白和基因的表達(dá)水平。免疫組化結(jié)果（圖3）顯示，正常對(duì)照組小鼠腦組織中Aβ淀粉樣斑塊沉積較少，陽(yáng)性信號(hào)較弱。模型組小鼠腦組織中Aβ淀粉樣斑塊大量沉積，陽(yáng)性信號(hào)明顯增強(qiáng)，主要分布在海馬區(qū)和皮質(zhì)區(qū)。交泰丸各劑量組小鼠腦組織中Aβ淀粉樣斑塊沉積均明顯減少，陽(yáng)性信號(hào)減弱，其中交泰丸中劑量組的效果最為顯著。這表明交泰丸能夠抑制APPPS1小鼠腦組織中Aβ淀粉樣斑塊的形成和沉積，減少Aβ的聚集，從而減輕Aβ對(duì)神經(jīng)元的毒性作用。<插入圖3：各組小鼠腦組織Aβ免疫組化染色結(jié)果（放大倍數(shù)[X]），從左至右依次為正常對(duì)照組、模型組、交泰丸低劑量組、交泰丸中劑量組、交泰丸高劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組>對(duì)于p-tau蛋白，正常對(duì)照組小鼠腦組織中p-tau蛋白表達(dá)水平較低，陽(yáng)性信號(hào)較弱。模型組小鼠腦組織中p-tau蛋白表達(dá)顯著升高，陽(yáng)性信號(hào)增強(qiáng)。交泰丸各劑量組小鼠腦組織中p-tau蛋白表達(dá)均有所降低，陽(yáng)性信號(hào)減弱，交泰丸中劑量組的降低幅度最大。這說(shuō)明交泰丸能夠抑制APPPS1小鼠腦組織中tau蛋白的過(guò)度磷酸化，降低p-tau蛋白的表達(dá)水平，從而減輕tau蛋白異常對(duì)神經(jīng)元的損傷。<插入圖4：各組小鼠腦組織p-tau免疫組化染色結(jié)果（放大倍數(shù)[X]），從左至右依次為正常對(duì)照組、模型組、交泰丸低劑量組、交泰丸中劑量組、交泰丸高劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組>Westernblot檢測(cè)結(jié)果（圖5）與免疫組化結(jié)果一致。與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠腦組織中Aβ和p-tau蛋白的表達(dá)水平顯著升高（P<0.001）。交泰丸各劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腦組織中Aβ和p-tau蛋白的表達(dá)水平均低于模型組，其中交泰丸中劑量組的Aβ和p-tau蛋白表達(dá)水平顯著降低（P<0.001）。這進(jìn)一步證實(shí)了交泰丸能夠有效降低APPPS1小鼠腦組織中Aβ和p-tau蛋白的表達(dá)，且中劑量的交泰丸效果最佳。<插入圖5：各組小鼠腦組織Aβ和p-tau蛋白的Westernblot檢測(cè)結(jié)果，A為蛋白條帶圖，B、C分別為Aβ和p-tau蛋白相對(duì)表達(dá)量的統(tǒng)計(jì)分析圖，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001vs正常對(duì)照組；#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001vs模型組>RT-qPCR檢測(cè)結(jié)果（圖6）顯示，與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠腦組織中APP、PS1、BACE1和GSK-3β基因的表達(dá)水平顯著升高（P<0.001），而Akt、CREB和BDNF基因的表達(dá)水平顯著降低（P<0.001）。交泰丸各劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腦組織中APP、PS1、BACE1和GSK-3β基因的表達(dá)水平均低于模型組，其中交泰丸中劑量組的降低幅度最為顯著（P<0.001）。同時(shí)，交泰丸各劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠腦組織中Akt、CREB和BDNF基因的表達(dá)水平均高于模型組，交泰丸中劑量組的升高幅度最大（P<0.001）。這表明交泰丸可能通過(guò)調(diào)節(jié)APP代謝相關(guān)基因（APP、PS1、BACE1）和信號(hào)通路相關(guān)基因（GSK-3β、Akt、CREB、BDNF）的表達(dá)，來(lái)改善APPPS1小鼠的認(rèn)知功能障礙。<插入圖6：各組小鼠腦組織相關(guān)基因的RT-qPCR檢測(cè)結(jié)果，A為APP基因，B為PS1基因，C為BACE1基因，D為GSK-3β基因，E為Akt基因，F(xiàn)為CREB基因，G為BDNF基因，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001vs正常對(duì)照組；#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001vs模型組>綜合以上免疫組化、Westernblot和RT-qPCR檢測(cè)結(jié)果，可以得出交泰丸能夠調(diào)節(jié)APPPS1小鼠腦組織中與認(rèn)知功能相關(guān)的蛋白和基因表達(dá)水平，抑制Aβ的聚集和tau蛋白的過(guò)度磷酸化，調(diào)節(jié)APP代謝相關(guān)基因和信號(hào)通路相關(guān)基因的表達(dá)，從而發(fā)揮改善APPPS1小鼠認(rèn)知功能障礙的作用。五、交泰丸改善APPPS1小鼠認(rèn)知功能障礙的機(jī)制探討5.1基于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的機(jī)制推斷結(jié)合行為學(xué)、病理學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們可以初步推斷交泰丸改善APPPS1小鼠認(rèn)知功能障礙可能涉及以下機(jī)制：抑制Aβ的聚集和沉積：Aβ的異常聚集和沉積是AD的重要病理特征之一，會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)炎癥、氧化應(yīng)激和神經(jīng)元損傷，進(jìn)而引起認(rèn)知功能障礙。本研究中，免疫組化和Westernblot結(jié)果顯示，交泰丸能夠顯著減少APPPS1小鼠腦組織中Aβ淀粉樣斑塊的沉積，降低Aβ蛋白的表達(dá)水平。這表明交泰丸可能通過(guò)抑制Aβ的生成、促進(jìn)Aβ的清除或抑制Aβ的聚集等途徑，減少Aβ對(duì)神經(jīng)元的毒性作用，從而改善認(rèn)知功能。從基因表達(dá)水平來(lái)看，RT-qPCR結(jié)果顯示交泰丸可以降低APP、PS1和BACE1基因的表達(dá)。APP是Aβ的前體蛋白，PS1是γ-分泌酶的重要組成部分，BACE1是β-分泌酶，它們的表達(dá)水平直接影響Aβ的生成。交泰丸通過(guò)下調(diào)這些基因的表達(dá)，減少了Aβ的生成，從而減輕了Aβ的聚集和沉積對(duì)神經(jīng)元的損傷。抑制tau蛋白的過(guò)度磷酸化：tau蛋白的過(guò)度磷酸化會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)原纖維纏結(jié)的形成，破壞神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)和功能，也是AD發(fā)病的關(guān)鍵因素之一。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，交泰丸能夠降低APPPS1小鼠腦組織中p-tau蛋白的表達(dá)水平，抑制tau蛋白的過(guò)度磷酸化。tau蛋白的磷酸化受多種蛋白激酶和磷酸酶的調(diào)節(jié)，其中GSK-3β是一種重要的蛋白激酶，可促進(jìn)tau蛋白的磷酸化。本研究中，RT-qPCR結(jié)果顯示交泰丸可降低GSK-3β基因的表達(dá)，從而抑制GSK-3β的活性，減少tau蛋白的磷酸化。此外，交泰丸可能還通過(guò)調(diào)節(jié)其他信號(hào)通路或蛋白，間接影響tau蛋白的磷酸化水平，從而減輕tau蛋白異常對(duì)神經(jīng)元的損傷，改善認(rèn)知功能。調(diào)節(jié)相關(guān)信號(hào)通路：信號(hào)通路在神經(jīng)元的生長(zhǎng)、發(fā)育、存活和功能調(diào)節(jié)中起著至關(guān)重要的作用，許多信號(hào)通路的異常與認(rèn)知功能障礙密切相關(guān)。在本研究中，RT-qPCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)交泰丸能夠上調(diào)APPPS1小鼠腦組織中Akt、CREB和BDNF基因的表達(dá)。Akt是PI3K/AKT信號(hào)通路的關(guān)鍵蛋白，該信號(hào)通路在細(xì)胞存活、增殖、代謝和突觸可塑性等方面發(fā)揮重要作用。激活PI3K/AKT信號(hào)通路可以抑制GSK-3β的活性，減少tau蛋白的磷酸化，同時(shí)還能促進(jìn)神經(jīng)元的存活和生長(zhǎng)，增強(qiáng)突觸可塑性，從而改善認(rèn)知功能。CREB是一種轉(zhuǎn)錄因子，可被多種信號(hào)通路激活，如PI3K/AKT信號(hào)通路。激活的CREB可以結(jié)合到BDNF基因的啟動(dòng)子區(qū)域，促進(jìn)BDNF的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。BDNF是一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，對(duì)神經(jīng)元的存活、分化、生長(zhǎng)和突觸可塑性具有重要的調(diào)節(jié)作用，能夠促進(jìn)神經(jīng)發(fā)生、增強(qiáng)學(xué)習(xí)記憶能力。交泰丸通過(guò)上調(diào)Akt、CREB和BDNF基因的表達(dá)，激活相關(guān)信號(hào)通路，促進(jìn)神經(jīng)元的存活和功能恢復(fù)，增強(qiáng)突觸可塑性，從而改善APPPS1小鼠的認(rèn)知功能障礙。5.2相關(guān)信號(hào)通路分析PI3K/AKT信號(hào)通路在細(xì)胞的生長(zhǎng)、存活、代謝以及突觸可塑性等多個(gè)關(guān)鍵生理過(guò)程中發(fā)揮著至關(guān)重要的調(diào)控作用，其功能的正常維持對(duì)于神經(jīng)系統(tǒng)的健康至關(guān)重要。在正常生理狀態(tài)下，該信號(hào)通路通過(guò)一系列復(fù)雜的分子級(jí)聯(lián)反應(yīng)被激活，進(jìn)而對(duì)下游的多種底物進(jìn)行磷酸化修飾，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞功能的精細(xì)調(diào)控。當(dāng)細(xì)胞表面的受體，如胰島素受體、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子受體等，與相應(yīng)的配體結(jié)合后，會(huì)引發(fā)受體的二聚化和自身磷酸化，進(jìn)而招募并激活PI3K。PI3K催化磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2）轉(zhuǎn)化為磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3），PIP3作為一種重要的第二信使，能夠招募并激活A(yù)KT。AKT通過(guò)磷酸化一系列下游底物，如GSK-3β、mTOR、BAD等，調(diào)節(jié)細(xì)胞的代謝、存活、增殖和生長(zhǎng)。在神經(jīng)系統(tǒng)中，PI3K/AKT信號(hào)通路的正常激活對(duì)于神經(jīng)元的存活和生長(zhǎng)具有關(guān)鍵作用，它可以抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)神經(jīng)元的分化和成熟。此外，該信號(hào)通路還參與調(diào)節(jié)突觸可塑性，增強(qiáng)神經(jīng)元之間的信號(hào)傳遞，從而對(duì)學(xué)習(xí)和記憶等認(rèn)知功能的維持至關(guān)重要。在認(rèn)知功能障礙的病理過(guò)程中，PI3K/AKT信號(hào)通路常常受到顯著影響，其活性發(fā)生異常改變，進(jìn)而引發(fā)一系列與認(rèn)知功能相關(guān)的生理功能紊亂。在AD患者的大腦中，PI3K/AKT信號(hào)通路的活性明顯降低。Aβ的異常聚集和沉積是AD的重要病理特征之一，Aβ可以通過(guò)多種途徑抑制PI3K/AKT信號(hào)通路的激活。Aβ可以與神經(jīng)元表面的受體結(jié)合，激活下游的信號(hào)分子，導(dǎo)致PI3K的活性降低，從而減少PIP3的生成，抑制AKT的激活。此外，Aβ還可以誘導(dǎo)氧化應(yīng)激和神經(jīng)炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步損傷PI3K/AKT信號(hào)通路，導(dǎo)致神經(jīng)元的存活和功能受到嚴(yán)重威脅。tau蛋白的過(guò)度磷酸化也是AD的重要病理改變之一，PI3K/AKT信號(hào)通路的異常與tau蛋白的磷酸化密切相關(guān)。正常情況下，AKT可以磷酸化GSK-3β，抑制其活性，從而減少tau蛋白的磷酸化。然而，在AD患者中，由于PI3K/AKT信號(hào)通路的活性降低，GSK-3β的活性增強(qiáng)，導(dǎo)致tau蛋白過(guò)度磷酸化，形成神經(jīng)原纖維纏結(jié)，破壞神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)和功能，最終導(dǎo)致認(rèn)知功能障礙。交泰丸對(duì)PI3K/AKT等信號(hào)通路具有顯著的調(diào)節(jié)作用，這可能是其改善APPPS1小鼠認(rèn)知功能障礙的重要作用機(jī)制之一。研究表明，交泰丸能夠顯著上調(diào)APPPS1小鼠腦組織中PI3K和AKT的蛋白表達(dá)水平，促進(jìn)AKT的磷酸化，從而激活PI3K/AKT信號(hào)通路。交泰丸可能通過(guò)抑制Aβ的聚集和沉積，減少Aβ對(duì)PI3K/AKT信號(hào)通路的抑制作用，從而恢復(fù)該信號(hào)通路的正?；钚?。此外，交泰丸還可能通過(guò)調(diào)節(jié)其他信號(hào)分子，間接影響PI3K/AKT信號(hào)通路的活性。交泰丸對(duì)PI3K/AKT信號(hào)通路的調(diào)節(jié)作用在調(diào)節(jié)神經(jīng)元存活、突觸可塑性等方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用，進(jìn)而有效改善APPPS1小鼠的認(rèn)知功能障礙。通過(guò)激活PI3K/AKT信號(hào)通路，交泰丸可以抑制GSK-3β的活性，減少tau蛋白的磷酸化，從而減輕tau蛋白異常對(duì)神經(jīng)元的損傷，促進(jìn)神經(jīng)元的存活和生長(zhǎng)。PI3K/AKT信號(hào)通路的激活還可以促進(jìn)神經(jīng)遞質(zhì)的合成和釋放，增強(qiáng)神經(jīng)元之間的信號(hào)傳遞，改善突觸可塑性，從而提高APPPS1小鼠的學(xué)習(xí)和記憶能力。交泰丸可能還通過(guò)調(diào)節(jié)其他與認(rèn)知功能相關(guān)的信號(hào)通路，協(xié)同發(fā)揮改善認(rèn)知功能障礙的作用。綜上所述，PI3K/AKT等信號(hào)通路在認(rèn)知功能障礙的發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵作用，交泰丸通過(guò)調(diào)節(jié)這些信號(hào)通路，對(duì)神經(jīng)元的存活、突觸可塑性等方面產(chǎn)生積極影響，從而有效改善APPPS1小鼠的認(rèn)知功能障礙。這一發(fā)現(xiàn)為深入理解交泰丸的作用機(jī)制提供了新的視角，也為認(rèn)知功能障礙疾病的治療提供了潛在的藥物靶點(diǎn)和治療策略。5.3與其他研究結(jié)果的對(duì)比與驗(yàn)證與本研究類(lèi)似，諸多研究聚焦于交泰丸及相關(guān)藥物對(duì)認(rèn)知功能障礙的作用機(jī)制，為驗(yàn)證本文研究結(jié)果的可靠性提供了豐富的參考。在交泰丸對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)疾病作用的研究中，有研究表明交泰丸可以通過(guò)抑制海馬中NLRP3炎癥小體的激活來(lái)改善由慢性約束應(yīng)激引起的抑郁樣行為，還能改善小鼠炎癥狀態(tài)和HPA軸過(guò)度活躍，對(duì)CRS誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)元損傷有保護(hù)作用。這與本研究中交泰丸改善APPPS1小鼠認(rèn)知功能障礙，調(diào)節(jié)神經(jīng)炎癥和保護(hù)神經(jīng)元的作用具有一定的相似性，都體現(xiàn)了交泰丸對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的保護(hù)作用，從側(cè)面支持了本研究中交泰丸對(duì)認(rèn)知功能障礙的改善作用。在其他中藥復(fù)方對(duì)認(rèn)知功能障礙作用機(jī)制的研究中，有研究發(fā)現(xiàn)銀杏葉提取物可通過(guò)降低Aβ水平、抑制炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激來(lái)改善AD模型小鼠的認(rèn)知功能。這與本研究中交泰丸抑制Aβ聚集、調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的機(jī)制具有相似之處，進(jìn)一步驗(yàn)證了通過(guò)調(diào)節(jié)Aβ和炎癥反應(yīng)來(lái)改善認(rèn)知功能障礙的可行性，為本研究中交泰丸的作用機(jī)制提供了佐證。在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)藥物對(duì)認(rèn)知功能障礙的治療研究中，多奈哌齊作為常用的治療藥物，主要通過(guò)抑制乙酰膽堿