第50

課時微生物的培養(yǎng)技術(shù)與應(yīng)用含答案第50課時微生物

的培養(yǎng)技術(shù)與應(yīng)用

課標(biāo)1.通過配制培養(yǎng)基、滅菌、接種和培養(yǎng)等實驗操作獲得純化的酵母菌菌落。2.分離土

要求壤中分解尿素的細(xì)菌，并進(jìn)行計數(shù)。

1.微生物的基

2024?湖南-T62024?山東1152022?湖北-T42021?天津-T1

本培養(yǎng)技術(shù)

考情

2024?黑吉遼?T192024?江西?T172024?全國甲137

分析2.微生物的選

2023?山東-T152023?廣東1102023?遼寧-T92022?遼寧115

擇培養(yǎng)和計數(shù)

2022?海南-T122022?江蘇-T32022?河北-T232021?山東-T14

考點(diǎn)一微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)

■整合必備知識

1.培養(yǎng)基的配制

（1）培養(yǎng)基的概念、用途和類型

①概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求,配制出的供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。

②用途：用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或積累其代謝物。

③培養(yǎng)基的種類（按物理性質(zhì)分）

培養(yǎng)基種類培養(yǎng)基特點(diǎn)作用

固體培養(yǎng)基加凝固劑，如瓊脂微生物的分離與鑒定，活菌計數(shù)，保藏菌種

容器放倒不致流出，

半固體培養(yǎng)基觀察微生物的運(yùn)動、分類鑒定

劇烈震動則破散

液體培養(yǎng)基不加凝固劑常用于工業(yè)生產(chǎn)、微生物的擴(kuò)大培養(yǎng)

（2）培養(yǎng)基的配方

①主要營養(yǎng)物質(zhì)：水、碳遮、氮源、無機(jī)鹽。

②其他條件：pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣。如表:

微生物乳酸桿菌霉菌細(xì)菌厭氧微生物

特殊需求添加維生素一般pH調(diào)至酸性一般pH調(diào)至中性或弱堿性無氧

2.無菌技術(shù)

（1）目的：獲得純凈的微生物培養(yǎng)物。

（2）關(guān)鍵：防止雜菌污染。

（3）常用方法：滅菌和消毒。

------（無菌技術(shù)］-------

■:黑黑、化人強(qiáng)烈的理化方法

殺死物體表面或內(nèi)部____殺死物體內(nèi)外所有的

一部分微生物（不包括T3sH微生物（包括芽泡和

芽胞和狗子）1抱子）

［n相，r點(diǎn)）

消毒和滅菌的實質(zhì)都是使微生物的蛋白質(zhì)或核酸變性

（4）注意事項

①實驗操作時，應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品接觸。

②為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應(yīng)在超凈工作臺上并在酒精燈火焰附近進(jìn)行。

［提醒］選擇無菌技術(shù)的原則：一要考慮無菌技術(shù)的效果，滅菌的效果比消毒要好；二要考

慮操作對象的承受能力，活體生物材料、操作者的手等只能采用消毒，而不能用滅菌。

3.微生物的純培養(yǎng)概念辨析

接種于培養(yǎng)基內(nèi)，在合適條件下形成

［珀:物產(chǎn)的含特定種類微生物的群體

［純培養(yǎng)物卜由單一個體繁殖所獲得的微生物群體

分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表

（菌落卜面或內(nèi)部繁殖形成的肉眼可見的、有

一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體

（純培養(yǎng)卜獲得純培養(yǎng)物的過程

4.純培養(yǎng)的過程（以酵母菌為例）

配制培養(yǎng)基稱取一煮沸—過濾一加葡萄糖、

瓊脂一定容用拇指和食指將培養(yǎng)皿

滅菌濕熱滅菌法打開一條稍大于瓶口的

培養(yǎng)基冷卻至501c左右開始縫隙，不要完全打開，

倒平板，溫度過高會燙手，過

以免培養(yǎng)基被污染

低培養(yǎng)基會凝固f

倒平板

防止瓶口上的微平板倒置既可防止皿蓋

生物污染培養(yǎng)基上的水珠落入培養(yǎng)基，

又可以防止培養(yǎng)基中的

水分過快揮發(fā)

平板劃線法通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃

分離酵母菌線的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散

的原理到培養(yǎng)基的表面。經(jīng)數(shù)次劃線后培養(yǎng),

可以分離得到單菌落

對照組

培L未接種平板倒置培養(yǎng)

養(yǎng)廠實驗組接種平板倒置培養(yǎng)可判斷培養(yǎng)基是

否被污染

「未接種培養(yǎng)基表面是否有菌落生長

結(jié)

果

分接種的培養(yǎng)基表面是否出現(xiàn)單菌落，菌落顏色、

析~形狀和大小是否一致，是否符合微生物特征

一

若培養(yǎng)基表面出現(xiàn)了其他菌落，可能由哪些原

因引起

0判斷正誤

⑴不含氮源的平板不能用于微生物培養(yǎng)(2023?山東，15A)(X)

提示不含氮源的平板可用于固氮菌的培養(yǎng)。

⑵可用濕熱滅菌法對實驗中所使用的微量離心管、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等進(jìn)行滅菌(2022?湖北，

4D)(V)

(3)接種后未長出菌落的培養(yǎng)基可以直接丟棄(2023?山東，15C)(X)

提示使用后的培養(yǎng)基即使未長出菌落也要在丟棄前進(jìn)行滅菌處理，不能直接丟棄，以免污

染環(huán)境。

「提升關(guān)鍵能力

分析微生物平板劃線和培養(yǎng)的具體操作

微生物平板劃線和培養(yǎng)的具體操作如圖所示，據(jù)圖回答下列問題:

①灼燒接②冷卻接種環(huán),③試管口通

種環(huán)拔出試管棉塞過火焰

⑦接種環(huán)劃⑧平板正置培養(yǎng)

線方法

⑴圖示①?⑧中不正確的操作及其原因分別是什么？

提示②拔出棉塞后完全握住棉塞會造成雜菌污染，應(yīng)握住棉塞上部；⑥劃線時不能將培養(yǎng)

皿完全打開，應(yīng)在火焰附近將培養(yǎng)皿打開一條縫隙，用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面迅速劃三至五條

平行線，蓋上皿蓋；⑦劃線時第5次的劃線不能與第1次的劃線相連；⑧平板應(yīng)倒置培養(yǎng)。

(2)在第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？

提示劃線后，線條末端菌種的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能

使菌種的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個微生物繁殖而來的菌落。

(3)在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？

提示需要；劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免污染環(huán)境和感

染操作者。

B歸納總結(jié)

平板劃線法操作中幾次灼燒接種環(huán)的目的

—①———②—----③-----

「第一次劃、r每次劃線、最后一次劃線

線前灼燒前灼燒結(jié)束后灼燒

避免接種環(huán)殺死上次劃線結(jié)殺死接種環(huán)上

上可能存在束后接種環(huán)上殘殘留的菌種，

的微生物污留的菌種，使下避免微生物污

染培養(yǎng)物次劃線的菌種均染環(huán)境和感染

來自上次劃線的操作者

末端

■評價遷移應(yīng)用

考向一微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)

1.（經(jīng)典高考題）為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線接種纖維素降解細(xì)菌，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。

下列敘述正確的是（）

A.倒平板后需間歇晃動，以保證表面平整

B.圖中I、n區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從iii區(qū)挑取單菌落

c.該實驗結(jié)果因單菌落太多，不能達(dá)到菌種純化的目的

D.菌落周圍的纖維素被降解后，可被剛果紅染成紅色

答案B

解析溫度降低后，培養(yǎng)基易凝固，因此倒平板后要及時輕輕晃動，以保持均一性，A錯誤;

由題圖可知，隨著劃線次數(shù)增多，細(xì)菌密度逐漸減小，in區(qū)開始出現(xiàn)單菌落，應(yīng)從III區(qū)挑取

單菌落，B正確；菌落是由單個微生物細(xì)胞或多個同種細(xì)胞繁殖到一定程度后形成的，能得

到單菌落即可以達(dá)到菌種純化的目的，C錯誤；剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物，菌落周

圍的纖維素被降解后紅色消失，出現(xiàn)透明圈，D錯誤。

2.（2024?深圳聯(lián)考）某同學(xué)將5個手指尖在貼有“洗手前”標(biāo)簽的固體培養(yǎng)基上輕輕按一下，

然后用肥皂將該手洗干凈，再將這5個手指尖在貼有“洗手后”標(biāo)簽的同種培養(yǎng)基上輕輕按

一下。將這兩個培養(yǎng)皿放入37°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，發(fā)現(xiàn)貼有“洗手后”標(biāo)簽的培

養(yǎng)皿中菌落較少。下列相關(guān)敘述錯誤的是（）

A.這個實驗中需要進(jìn)行滅菌處理的材料用具有培養(yǎng)皿和培養(yǎng)基等

B.“將手指尖在培養(yǎng)基上輕輕按一下”相當(dāng)于微生物培養(yǎng)中的接種

C.從實驗結(jié)果來看，洗手后的操作不會污染培養(yǎng)基

D.培養(yǎng)基中的氮元素是微生物合成蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)所必需的

答案C

解析從實驗結(jié)果看，貼有“洗手后”標(biāo)簽的培養(yǎng)皿中菌落較少，并不能說明洗手后的操作

不會污染培養(yǎng)基，C錯誤。

考點(diǎn)二微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)

■整合必備知識

1.區(qū)分選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基

種類特點(diǎn)用途舉例

從眾多微生以尿素為唯一氮源

選擇培允許特定種類的微生物生長,同時

物中分離所的培養(yǎng)基分離得到

養(yǎng)基抑制或阻止其他種類微生物生長

需的微生物尿素分解菌

根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)在培養(yǎng)基

鑒別培鑒別不同種用伊紅一亞甲藍(lán)培

中加入某種指示劑或化學(xué)藥品，進(jìn)

養(yǎng)基類的微生物養(yǎng)基鑒別大腸桿菌

而產(chǎn)生特定的顏色或其他變化

［提醒］常見選擇培養(yǎng)基舉例：(1)缺少氮源的培養(yǎng)基可以篩選能利用大氣中N2的微生物。

(2)含青霉素的培養(yǎng)基可淘汰細(xì)菌，篩選出真菌。(3)無有機(jī)碳源的培養(yǎng)基可篩選出自養(yǎng)微生物。

2.微生物的選擇培養(yǎng)和數(shù)量測定

(1)稀釋涂布平板法步驟

①系列稀釋操作：該操作常用在將細(xì)胞接種到培養(yǎng)基之前，通過液體稀釋的方法分散細(xì)胞，

隨著稀釋程度的增大，單位體積中的微生物細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞得以分散。

操作步驟：

②涂布平板操作步驟

取菌液：取0.1mL菌液，滴加到培養(yǎng)基

表面1

涂布器

涂布器消毒:將涂布器浸在盛有酒精的

燒杯中

涂布器滅菌:將涂布器放在火焰上灼燒，

待酒精燃盡、涂布器逢卻后,

再進(jìn)行涂布

涂布平板：用涂布器將菌液均勻地涂布

在培養(yǎng)基表面。涂布時可轉(zhuǎn)動

培養(yǎng)皿，使涂布均勻

(2)微生物的數(shù)量測定方法

①顯微鏡直接計數(shù)法

利用特定細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板，

一在顯微鏡下觀察、計數(shù)然后再計算一

定體積的樣品中微生物的數(shù)量

—用細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)

—不能區(qū)分死菌與活菌而使計數(shù)結(jié)果偏大

［提醒］顯微鏡直接計數(shù)法本身不能區(qū)分細(xì)菌的死活，但是通過一定的輔助處理，可以實現(xiàn)

活菌計數(shù)，如在計數(shù)前用臺盼藍(lán)染液進(jìn)行染色，可以通過統(tǒng)計無色細(xì)胞的個數(shù)來對活菌進(jìn)行

計數(shù)。

②活菌計數(shù)法

當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表

面生長的一個單菌落，來源于樣品稀

釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上

的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有

「

稀多少活匿

釋一般選擇菌落數(shù)為30~300的平板進(jìn)行

涂

布減小計數(shù)

平

誤差在同一稀釋度下，應(yīng)至少對3個平板'

進(jìn)行重復(fù)計數(shù)，然后求出平均值

統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目'

統(tǒng)計

少，因為當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起

結(jié)果

時，平板上觀察到的只是一個菌落

3.土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)的實驗操作

(1)實驗原理

①土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因

為它們能合成版酶；

分離

◎②配制以尿案為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠

原理

在該培養(yǎng)基中生長的細(xì)菌就是能分解尿素

的細(xì)菌

(2)實驗流程

①土壤取樣:從酸堿度接近中性的潮濕土壤中，鏟去表

層土，取距地表3~8cm的土壤層

②樣品的稀釋:通常選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行

培養(yǎng)，以保證獲得菌落數(shù)為型迎的

平板進(jìn)行計數(shù)

ra.接種：用稀釋涂布平板法接種;

③微生b.培養(yǎng)條件：30~37七培養(yǎng)1~2天;

物的培＜；c.觀察：根據(jù)菌落的特征區(qū)分微生物；

養(yǎng)與觀&計數(shù):每隔24小時統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，選取

察,菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果

④計算：計算單位體積中的菌體數(shù)

(3)實驗結(jié)果分析與評價

.對照的培養(yǎng)皿中九田、一刈

有無雜無菌落生長一未被水菌污染

菌污染一

對照的培養(yǎng)皿中

的判斷1有菌落生長一被雜菌污染

培養(yǎng)基

選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)選擇培養(yǎng)

是否具

目遠(yuǎn)少土牛肉膏蛋白陳一基具篩選

篩選作〔培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目作用

樣品稀一《得到3個或3個以上菌落_操作

釋評價〔數(shù)目在30~300的平板一成功

重復(fù)組一「比較各一若選取同一種土樣，統(tǒng)

〔重復(fù)組一計結(jié)果應(yīng)接近

的結(jié)果

［教材隱性知識］選擇性必修3P19“探究?實踐”：本活動初步篩選了能分解尿素的細(xì)菌，請

進(jìn)一步借助于生物化學(xué)的方法來鑒定所分離的菌種：分解尿素的細(xì)菌合成的腺酶可以將尿素

分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌，若指示劑變紅,

可確定該細(xì)菌能夠分解尿素。

Z判斷正誤

(1)平板涂布時涂布器使用前必須進(jìn)行消毒(2023?山東，15B)(X)

提示平板涂布時涂布器使用前必須先浸在酒精中，然后在火焰上灼燒，這種操作屬于滅菌。

(2)利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成腺酶的微生物(2023?山東，15D)(V)

(3)稀釋涂布平板法和平板劃線法均能得到單菌落，都可用于細(xì)菌計數(shù)(2021?浙江6月選考,

17C)(X)

提示平板劃線法只能用于細(xì)菌分離，不能用于細(xì)菌計數(shù)。

(4)血細(xì)胞計數(shù)板既可用于酵母菌的數(shù)量測定，也可用于細(xì)菌的數(shù)量測定(2023?江蘇，

7D)(X)

提示血細(xì)胞計數(shù)板不適用于微小的細(xì)菌計數(shù)。

■提升關(guān)鍵能力

理解微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)的原理

某興趣小組從富含纖維素的土壤中取樣，加入選擇培養(yǎng)基中進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，之后接種于鑒別

培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，篩選出能夠高效分解纖維素的微生物。請回答下列相關(guān)問題：

1.從富含纖維素的土壤中取樣的原因是什么？

提示纖維素分解菌大多分布在富含纖維素的環(huán)境中。

2.分離出分解纖維素的微生物，應(yīng)該配制以纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基,目的是促進(jìn)纖維素

分解菌生長，抑制其他微生物的生長。

3.已知剛果紅與纖維素能形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，復(fù)合物無法形成，平板上會

出現(xiàn)以菌落為中心的透明圈(如圖)，幾號真菌降解纖維素的能力最強(qiáng)，理由是什么？

提示④；④形成的透明圈與菌落直徑的比值最大。

4.三位同學(xué)用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中細(xì)菌數(shù)量，在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為1。6的稀釋

液中各取0.1mL涂平板，得到以下統(tǒng)計結(jié)果：

甲同學(xué)涂布了兩個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是236和260,取平均值248；

乙同學(xué)涂布了三個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是209、240和250,取平均值233；

丙同學(xué)涂布了三個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)是21、212和256,取平均值163；

在三位同學(xué)的統(tǒng)計中，乙同學(xué)的統(tǒng)計是正確的，據(jù)此計算，每克土壤樣品中含細(xì)菌2.33X109個。

B歸納總結(jié)

計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=(C+V)xM

C代表某一稀釋V代表涂布平板

“代表稀

度下平板上生長時所用的稀釋液

釋倍數(shù)

的平均菌落數(shù)的體積(mL)

■評價遷移應(yīng)用

考向二目標(biāo)微生物的篩選與鑒定

3.（2023.廣東，10）研究者擬從堆肥中取樣并篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的

嗜熱菌。根據(jù)堆肥溫度變化曲線（如圖）和選擇培養(yǎng)基篩選原理來判斷，下列最可能篩選到目

標(biāo)菌的條件組合是（）

1

()8(

P

6

鶴4

盥

鷲2

7^

123456

堆肥時間/天

A.a點(diǎn)時取樣、尿素氮源培養(yǎng)基

B.b點(diǎn)時取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基

C.b點(diǎn)時取樣、蛋白陳氮源培養(yǎng)基

D.c點(diǎn)時取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基

答案D

解析研究目的是篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌，因此目標(biāo)菌既要

耐高溫，又要能夠高效降解角蛋白，所以應(yīng)在c點(diǎn)時取樣，并且用角蛋白氮源培養(yǎng)基進(jìn)行選

擇培養(yǎng)，D符合題意。

4.（2022?江蘇，3）下列是某同學(xué)分離高產(chǎn)版酶菌的實驗設(shè)計，不合理的是（）

A.選擇農(nóng)田或公園土壤作為樣品分離目的菌株

B.在選擇培養(yǎng)基中需添加尿素作為唯一氮源

C.適當(dāng)稀釋樣品是為了在平板上形成單菌落

D.可分解酚紅指示劑使其褪色的菌株是產(chǎn)）R酶菌

答案D

解析農(nóng)田或公園土壤中含有較多的產(chǎn)腺酶的微生物，A正確；為了篩選可分解尿素的細(xì)菌,

配制的培養(yǎng)基應(yīng)選擇尿素作為唯一氮源，能合成腺酶的微生物在該培養(yǎng)基上能生長，B正確;

當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，

C正確；在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的腺酶將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的

pH升高，酚紅指示劑將變紅，因此在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，能對分

離的菌種做進(jìn)一步鑒定，D錯誤。

考向三微生物的分離與計數(shù)

5.（2024?武漢調(diào)研）研究者從溫泉中篩選出能高效產(chǎn)生耐高溫淀粉酶的嗜熱細(xì)菌的過程如圖1

所示。將得到的嗜熱細(xì)菌懸液轉(zhuǎn)接到特定固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到若干菌落后用碘液作顯色

處理，結(jié)果如圖2所示。下列說法錯誤的是（）

周圍顯藍(lán)

@挑出菌落色的菌落

周

If率7n號藍(lán)

乙培養(yǎng)基培養(yǎng)基落

圖2

A.過程①②一般都取1mL菌液轉(zhuǎn)移

B.試管甲、乙都通過無菌水稀釋

C.圖2中周圍不顯藍(lán)色的菌落含有所需菌種

D.過程①②屬于稀釋涂布平板法，能對分離得到的微生物進(jìn)行計數(shù)

答案A

解析過程①為稀釋過程，一般取1mL菌液轉(zhuǎn)移，過程②為涂布平板過程，一般取0.1mL

菌液進(jìn)行涂布，A錯誤；圖2中周圍不顯藍(lán)色的菌落產(chǎn)生的淀粉酶可以在高溫下分解淀粉，

所以周圍不顯藍(lán)色的菌落含有所需菌種，C正確。

兩種純化方法的比較

項目平板劃線法稀釋涂布平板法

分離結(jié)果O

①一系列的梯度稀釋；

關(guān)鍵操作接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線

②涂布平板操作

接種用具接種環(huán)涂布器

優(yōu)點(diǎn)可以觀察菌落特征，對混合菌進(jìn)行分離可以計數(shù)，可以觀察菌落特征

缺點(diǎn)不能計數(shù)操作復(fù)雜，需要涂布多個平板

都要用到固體培養(yǎng)基；都需進(jìn)行無菌操作；都會在培養(yǎng)基表面形成單個的菌

共同點(diǎn)

落，都可用于觀察菌落特征

6.（經(jīng)典高考題）產(chǎn)脂肪酶酵母可用于含油廢水處理。為篩選產(chǎn)脂肪酶酵母菌株，科研人員開展

了相關(guān)研究。請回答下列問題：

（1）常規(guī)微生物實驗中，下列物品及其滅菌方法錯誤的是（填編號）。

編號①②③④

物品培養(yǎng)基接種環(huán)培養(yǎng)皿涂布器

滅菌方法高壓蒸汽火焰灼燒干熱臭氧

（2）稱取1.0g某土壤樣品，轉(zhuǎn)入99mL無菌水中，制備成菌懸液，經(jīng)__________后，獲得細(xì)

胞密度不同的菌懸液。分別取01mL菌懸液涂布在固體培養(yǎng)基上，其中10倍稀釋的菌懸液

培養(yǎng)后平均長出了46個酵母菌落，則該樣本中每克土壤約含酵母菌________個。

（3）為了進(jìn)一步提高酵母菌產(chǎn)酶能力，對分離所得的菌株，采用射線輻照進(jìn)行育種。

將輻照處理后的酵母菌涂布在以為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時間后，

按照菌落直徑大小進(jìn)行初篩，選擇直徑的菌落，純化后獲得A、B兩突變菌株。

（4）在處理含油廢水的同時，可獲得單細(xì)胞蛋白，實現(xiàn)污染物資源化。為評價A、B兩菌株的

相關(guān)性能，進(jìn)行了培養(yǎng)研究，結(jié)果如圖。據(jù)圖分析，應(yīng)選擇菌株進(jìn)行后續(xù)相關(guān)研究,

理由是

菌株A-脂菌株B-細(xì)

g25肪剩余胞密度

aTJOO

o

)20

-80

掘

?L5菌株A-細(xì)

-60

三L0胞密度

思-40

S5

///-20

0『r4-/菌株B-脂肪剩余

???????????0

培養(yǎng)時間

答案（1）@（2）等比稀釋4.6X105（或460000）（3）誘變脂肪較大（4）B該菌株增殖

速度快，單細(xì)胞蛋白產(chǎn)量高；降解脂肪能力強(qiáng)，凈化效果好

解析（2）利用稀釋涂布平板法統(tǒng)計活菌數(shù)目時，需要將制備的菌懸液進(jìn)行等比稀釋，以獲得

細(xì)胞密度不同的菌懸液，一般來說，菌落數(shù)為30?300的平板最適于計數(shù)。0.1mL菌懸液中

含有46個酵母菌落，則1mL菌懸液中含有460個酵母菌落；1.0g土壤樣品首先稀釋100

倍，然后稀釋10倍，共稀釋了1000倍，因此樣本中每克土壤約含酵母菌460X1000=

4.6X105（個）。（3）采用射線輻照引起酵母菌基因突變，此種方法屬于誘變育種。檢查誘變酵母

菌產(chǎn)脂肪酶的能力，需要把酵母菌接種到以脂肪為唯一碳源的培養(yǎng)基上，按照產(chǎn)生菌落直徑

大小進(jìn)行初步篩選，直徑大的說明產(chǎn)酶能力強(qiáng)，利用的脂肪（碳源）多，直徑小的說明產(chǎn)酶能

力弱，利用的脂肪（碳源）少。（4）通過分析題圖可知，相同時間內(nèi)，菌株B細(xì)胞密度大，說明

該菌株增殖速度快，單細(xì)胞蛋白產(chǎn)量高；相同時間內(nèi)，菌株B利用的脂肪多，脂肪剩余量少,

說明該菌株降解脂肪的能力強(qiáng)，凈化效果好。

查落實固基礎(chǔ)

一、過教材

1.下列有關(guān)微生物培養(yǎng)基的成分與配制過程的相關(guān)說法，正確的是（）

A.培養(yǎng)基中添加的牛肉膏可為微生物提供碳源、氮源和維生素等

B.與液體培養(yǎng)基相比，固體培養(yǎng)基含有瓊脂成分

C.培養(yǎng)硝化細(xì)菌時，培養(yǎng)基中需要加氮源，不需要加入碳源

D.為防止雜菌污染，滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)立即倒入培養(yǎng)皿中并蓋上皿蓋，待冷卻后倒置

E.在培養(yǎng)細(xì)菌時，需要將培養(yǎng)基調(diào)至中性或弱酸性

F.配制培養(yǎng)基過程中應(yīng)先調(diào)pH再進(jìn)行高壓蒸汽滅菌

答案ABCF

解析硝化細(xì)菌是自養(yǎng)生物，可以利用環(huán)境中的CO2,C正確；剛滅菌的培養(yǎng)基需冷卻到50℃

左右才能倒平板，D錯誤；在培養(yǎng)細(xì)菌時，需要將培養(yǎng)基調(diào)至中性或弱堿性，E錯誤。

2.獲得純凈微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵。下列關(guān)于無菌操作的敘述，錯誤的

是（）

A.牛奶可使用巴氏消毒法，其優(yōu)點(diǎn)是能夠殺死全部微生物，保留牛奶風(fēng)味

B.在接種箱或超凈工作臺的使用過程中，可用紫外線照射30min來進(jìn)行消毒

C.灼燒滅菌的對象可以是金屬用具和玻璃器皿，在酒精燈火焰充分燃燒層進(jìn)行

D.高壓蒸汽滅菌時的滅菌條件通常是100kPa121℃,15?30min

E.若培養(yǎng)皿蓋和培養(yǎng)皿底之間濺有培養(yǎng)基，則不宜用此培養(yǎng)皿培養(yǎng)大腸桿菌

F.倒平板時應(yīng)該把培養(yǎng)皿蓋完全打開，以免培養(yǎng)基濺到培養(yǎng)皿蓋上

G.倒平板后，對空白培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，可檢測培養(yǎng)基是否被污染

H.接種前后接種環(huán)都必須灼燒滅菌

I.倒平板和接種操作都需要在酒精燈的火焰附近進(jìn)行

答案ABF

解析牛奶可使用巴氏消毒法，其優(yōu)點(diǎn)是能夠殺死牛奶中的絕大多數(shù)微生物，并且不破壞牛

奶的營養(yǎng)成分，A錯誤；在接種箱或超凈工作臺使用之前，可用紫外線照射30min來進(jìn)行消

毒，B錯誤；為防止空氣中的雜菌落入培養(yǎng)皿中，倒平板時不能把培養(yǎng)皿蓋完全打開，正確

的操作是將培養(yǎng)皿打開一條稍大于錐形瓶瓶口的縫隙，F(xiàn)錯誤。

3.下列有關(guān)微生物分離、純化、計數(shù)及培養(yǎng)的敘述，錯誤的是（）

A.平板劃線法接種時不能劃破培養(yǎng)基，第3次劃線應(yīng)從第2次劃線的末端開始

B.平板劃線法接種時，若在平板上劃線4個區(qū)，則需灼燒接種環(huán)5次

C.用涂布器蘸取少量菌液滴加在培養(yǎng)基表面，涂布時可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使菌液分布均勻

D.在篩選產(chǎn)纖維素酶的微生物時，含纖維素和剛果紅的固體培養(yǎng)基既是選擇培養(yǎng)基也是鑒

別培養(yǎng)基

E.接種后需立即倒置培養(yǎng)以避免皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染

F.對培養(yǎng)皿進(jìn)行編號或?qū)N進(jìn)行標(biāo)注時，應(yīng)使用記號筆在皿底標(biāo)記

G.菌落的大小、顏色、隆起程度等特征都可作為菌種鑒定的依據(jù)

H.同一稀釋度下應(yīng)至少對3個平板進(jìn)行重復(fù)計數(shù)，然后求平均值

I.利用顯微鏡直接計數(shù)，統(tǒng)計的結(jié)果一般是活菌數(shù)和死菌數(shù)的總和

J.用平板劃線法和稀釋涂布平板法進(jìn)行微生物計數(shù)時，所得數(shù)據(jù)往往比實際數(shù)據(jù)偏小

答案CEJ

解析涂布時，用移液器取0.1mL菌液滴加到培養(yǎng)基表面，而后用涂布器進(jìn)行涂布，涂布時

涂布器可以不動，可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使涂布均勻，C錯誤；接種后需等到菌液被培養(yǎng)基吸收后

倒置平板，目的是防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水滴落，造成污染，同時也能避免培養(yǎng)基中的水分

蒸發(fā)過快，E錯誤；因為當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，故

用稀釋涂布平板法進(jìn)行微生物計數(shù)時，所得數(shù)據(jù)往往比實際數(shù)據(jù)偏小，但用平板劃線法不能

對微生物計數(shù)，J錯誤。

二、過高考

1.（2021?廣東，21節(jié)選）基于菌株H嗜鹽、酸堿耐受能力強(qiáng)等特性，研究人員設(shè)計了一種不

需要滅菌的發(fā)酵系統(tǒng)，其培養(yǎng)基鹽濃度設(shè)為60g/L,pH為10,菌株H可正常持續(xù)發(fā)酵60d

以上。該系統(tǒng)不需要滅菌的原因是鹽濃度為60g/L的條件下，其他雜菌因失水過多而死亡；

pH為10的條件下，其他雜菌的酶變性失活，生長繁殖受抑制（答出兩點(diǎn)即可）。

2.（2023?全國乙，37節(jié)選）在粉碎的秸稈中接種菌T,培養(yǎng)一段時間后發(fā)現(xiàn)菌T能夠?qū)⒔斩?/p>

中的纖維素大量分解，其原因是菌T能夠分泌纖維素酶。

3.（2022?河北，23節(jié)選）枯草芽抱桿菌為好氧微生物，液體培養(yǎng)時應(yīng)采用搖床震蕩（填“靜置”

或“搖床震蕩”）培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中抽樣檢測活菌數(shù)量時，應(yīng)采用稀釋涂布平板法（填“稀釋

涂布平板法”或“顯微鏡直接計數(shù)法”），其原因是用稀釋涂布平板法在培養(yǎng)基上看到的每一

個菌落都來自一個活細(xì)胞，而顯微鏡直接計數(shù)法會將死亡的枯草芽抱桿菌也計算在內(nèi)。

4.（2022?全國乙，37節(jié)選）用菌株C可產(chǎn)生S,若以制糖廢液作為碳源，為進(jìn)一步確定生產(chǎn)S

的最適碳源濃度，某同學(xué)進(jìn)行了相關(guān)實驗。請簡要寫出實驗思路：設(shè)計一系列不同濃度的制

糖廢液分別培養(yǎng)菌株C測定不同濃度制糖廢液中S產(chǎn)量，尋找S產(chǎn)量最大的碳源濃度，確

定最適碳源濃度。

課時精練

選擇題1?5題，每小題6分，6?9題，每小題7分，共58分。

一、選擇題

1.（2024.隨州一模）從海水樣本中分離粘質(zhì)沙雷氏菌時，所用的海生菌肉湯培養(yǎng)基的成分如表

所示。下列敘述錯誤的是（）

-1-1-1

蛋白膝5.00g-LMgCl25.90g-LNaHCO30.16g-L

酵母提取物L(fēng)OOgL-Na2so43.24g-L-1KBr0.08g-L-1

1

檸檬酸鐵0.10gl/iCaCl21.80g-L'SrCl234.00g-L^

NaCl19.45g-L-1KC10.55gLTiH3BO322.00g-L-1

A.蛋白豚只為粘質(zhì)沙雷氏菌提供碳源，該菌生長需要多種微量元素

B.若從牛肉膏、硫酸鏤、硝酸鉀中篩選優(yōu)質(zhì)氮源，每次應(yīng)只添加其中一種

C.該培養(yǎng)基應(yīng)在滅菌前調(diào)節(jié)pH,其不能用于分離粘質(zhì)沙雷氏菌獲得單菌落

D.該培養(yǎng)基添加了NaCL具有抑制某些微生物生長的作用，屬于選擇培養(yǎng)基

答案A

解析培養(yǎng)基中的蛋白陳可為粘質(zhì)沙雷氏菌提供碳源、氮源和維生素等，A錯誤；篩選最佳

氮源時，培養(yǎng)基中每次應(yīng)只添加牛肉膏、硫酸錠、硝酸鉀中的一種，B正確；該培養(yǎng)基應(yīng)在

滅菌前調(diào)節(jié)pH,該培養(yǎng)基沒有添加瓊脂，是液體培養(yǎng)基，不能分離出粘質(zhì)沙雷氏菌的單菌落,

C正確；選擇培養(yǎng)基是允許特定種類的微生物生長、同時抑制或阻止其他微生物生長的培養(yǎng)

基，該培養(yǎng)基中添加了NaCl,能抑制某些不耐鹽的微生物的生長，屬于選擇培養(yǎng)基，D正確。

2.（2024?重慶聯(lián)考）熔噴布的主要成分是聚丙烯，會對環(huán)境造成污染。某科研小組從土壤中分

離到一種能分解聚丙烯的細(xì)菌。下列說法正確的是（）

A.配制固體培養(yǎng)基時，需要在無菌的環(huán)境中進(jìn)行

B.制備培養(yǎng)基時需要先將培養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)至中性或弱堿性

C.從土壤中分離能分解聚丙烯的細(xì)菌，可采用平板劃線法進(jìn)行分離與計數(shù)

D.純化培養(yǎng)時，在培養(yǎng)皿皿蓋做標(biāo)記后倒置在恒溫培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)

答案B

解析配制固體培養(yǎng)基時，不需要在無菌的環(huán)境中進(jìn)行，因為培養(yǎng)基配制好之后會進(jìn)行滅菌，

A錯誤；平板劃線法只能對微生物進(jìn)行分離，不能計數(shù)，C錯誤；純化培養(yǎng)時，在培養(yǎng)皿皿

底做標(biāo)記后倒置在恒溫培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)，這樣方便觀察，D錯誤。

3.纖維素、半纖維素、木質(zhì)素參與構(gòu)成植物細(xì)胞壁?？蓮陌紫伒哪c道中分離木質(zhì)素分解菌來

降解利用木質(zhì)素，已知木質(zhì)素降解過程使苯胺藍(lán)培養(yǎng)基脫色。以下說法錯誤的是（）

A.以木質(zhì)素為唯一碳源，用稀釋涂布平板法分離木質(zhì)素分解菌

B.脫色圈直徑與菌落直徑比值越小，木質(zhì)素分解菌分解效果越好

C.在選擇培養(yǎng)基上挑選出菌落后，再通過平板劃線法進(jìn)一步純化

D.除了白蟻腸道，還可從腐爛的樹皮表面分離出木質(zhì)素分解菌

答案B

解析木質(zhì)素降解過程使苯胺藍(lán)培養(yǎng)基脫色，脫色圈直徑與菌落直徑比值越大，說明菌落周

圍的木質(zhì)素被分解得越多，分解效果越好，B錯誤。

4.（2024?黃岡一模）某實驗小組通過控制苯濃度，對從污泥處理廠的活性污泥中篩選獲得的苯

降解菌進(jìn)行馴化培養(yǎng)，挑選出合適的培養(yǎng)條件，同時馴化培養(yǎng)出較好的苯降解菌，培養(yǎng)的實

驗結(jié)果如表所示。下列有關(guān)敘述錯誤的是（）

組別加入苯濃度/（g?L-1）菌落數(shù)/個菌落密度/（個1）

①200幾乎無幾乎無

②20601200

③2541120

④0.224450

A.該實驗中馴化苯降解菌的培養(yǎng)基中應(yīng)該加入適量的瓊脂

B.第①組幾乎沒有菌落的原因可能是苯濃度過高對細(xì)菌產(chǎn)生了毒性

C.第④組菌落數(shù)目少的原因可能是培養(yǎng)基中的碳源的含量不足

D.由該實驗可知，20g.L-i的苯濃度是培養(yǎng)苯降解菌的最適濃度

答案D

解析若要培養(yǎng)菌落，通常在培養(yǎng)基中加入適量瓊脂制成固體培養(yǎng)基，A正確；第①組苯濃

度過高，可能超出了細(xì)菌所能承受的范圍，對細(xì)菌產(chǎn)生毒性，抑制其生長和繁殖，導(dǎo)致幾乎

沒有菌落，B正確；第④組苯濃度過低，提供的碳源不足，可能無法滿足細(xì)菌生長所需，導(dǎo)

致菌落數(shù)目少，C正確；僅根據(jù)這幾組實驗數(shù)據(jù)，不能確定20g的苯濃度就是培養(yǎng)苯降

解菌的最適濃度，還需要更多更小濃度梯度的實驗來進(jìn)一步確定，D錯誤。

5.（2025?馬鞍山模擬）為檢驗?zāi)称放票ち柚写竽c桿菌含量是否超標(biāo)，研究小組利用配制的伊

紅一亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行檢測。下列有關(guān)敘述正確的是（）

A.檢測中用到的接種方法為平板劃線法

B.配制培養(yǎng)基，高壓蒸汽滅菌后，調(diào)節(jié)pH

C.檢測中應(yīng)設(shè)一個不接種的平板作為陰性對照和一個接種大腸桿菌的平板作為陽性對照

D.檢測的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，大腸桿菌在該培養(yǎng)基上會形成紅色且有金屬光澤的菌落

答案C

解析平板劃線法不能用來計數(shù)，檢測中用到的接種方法為稀釋涂布平板法，A錯誤；配制

培養(yǎng)基時，應(yīng)先調(diào)節(jié)pH,再進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，B錯誤；檢測中應(yīng)設(shè)一個不接種的平板作為

陰性對照和一個接種大腸桿菌的平板作為陽性對照，以此來對比反映冰激凌中大腸桿菌及其

數(shù)量，C正確；檢測的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，大腸桿菌在該培養(yǎng)基上會形成深紫色且有金屬

光澤的菌落，D錯誤。

6.（2024?三明一模）圓褐固氮菌可獨(dú)立固定空氣中的氮?dú)?，且能夠分泌生長素。巨大芽抱桿菌

可將有機(jī)磷降解為可溶性磷。二者組合可將有機(jī)廚余垃圾迅速分解為水和二氧化碳。為制備

分解有機(jī)廚余垃圾的微生物菌劑，某科研小組對兩種菌種進(jìn)行了最佳接種比例的探究實驗，

得出如圖實驗結(jié)果。下列說法錯誤的是（）

100

80

60

40

20

0

褐固氮菌大芽胞桿菌兩種菌種接種比例

A.圓褐固氮菌和巨大芽抱桿菌在生長過程中都需要氮源

B.統(tǒng)計活菌數(shù)量可采用稀釋涂布平板法

C.處理有機(jī)廚余垃圾，兩種菌種的最佳接種比例為1：2

D.兩種菌種的組合菌劑還可制成微生物肥料施用到土壤中，提高農(nóng)作物的產(chǎn)量

答案C

解析雖然培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽，圓褐固氮菌的

氮源來自空氣中的氮?dú)?，巨大芽匏桿菌的氮源來自培養(yǎng)基，A正確；實驗的因變量是有機(jī)垃

圾的分解量（以二者的有效菌落數(shù)為指標(biāo)），接種量比例為1：2的有效菌落數(shù)小于接種量為

1：1的有效菌落數(shù)，故接種量比例1：1時分解有機(jī)廚余垃圾的能力強(qiáng)，C錯誤；植物在生

長的過程中要吸收一定量的含N、P的無機(jī)鹽和二氧化碳等營養(yǎng)物質(zhì)，圓褐固氮菌可獨(dú)立固

定空氣中的氮?dú)?，且能夠分泌生長素，巨大芽抱桿菌可將有機(jī)磷降解為可溶性磷，二者能為

植物提供含N、P的無機(jī)鹽和二氧化碳等營養(yǎng)物質(zhì)，故兩菌種的組合菌劑可制成微生物肥料

施用到土壤中，提高農(nóng)作物的產(chǎn)量，D正確。

7.（2025?四川部分學(xué)校聯(lián)考）工業(yè)生產(chǎn)中常用谷氨酸棒狀桿菌的高絲氨酸營養(yǎng)缺陷型菌作為賴

氨酸的發(fā)酵菌株?？蒲腥藛T將紫外線照射處理過的野生谷氨酸棒狀桿菌菌液（原菌液），經(jīng)過

程①（稀釋10倍）接種在培養(yǎng)基甲上培養(yǎng)，菌落數(shù)目不再增加時如圖中甲平板。過程②表示向

培養(yǎng)基甲中添加某種物質(zhì)，繼續(xù)培養(yǎng)。下列敘述正確的是（）

紫外線八人

衛(wèi)Y孑2

野生型菌液甲乙

A.菌落A是誘變產(chǎn)生的高絲氨酸營養(yǎng)缺陷型菌種

B.培養(yǎng)基甲是一種選擇培養(yǎng)基，過程②向甲中添加賴氨酸

C.經(jīng)過程①取0.2mL菌液涂布得到甲平板所示結(jié)果，則原菌液未突變菌株數(shù)量約為450個

/mL

D.發(fā)酵結(jié)束后，將過濾得到的固體物質(zhì)進(jìn)行干燥即可獲得賴氨酸產(chǎn)品

答案c

解析野生菌種經(jīng)紫外線照射，與甲平板相比，乙平板上菌落多，說明過程②往培養(yǎng)基中添

加的物質(zhì)是絲氨酸，新出現(xiàn)的菌落為高絲氨酸營養(yǎng)缺陷型菌種，即菌落A是野生型菌種，菌

落B為高絲氨酸營養(yǎng)缺陷型菌種，A錯誤；結(jié)合圖分析可知，甲平板上只有菌落A,過程②

向培養(yǎng)基甲中添加高絲氨酸后出現(xiàn)B菌落，這說明培養(yǎng)基甲中缺少高絲氨酸，是一種選擇培

養(yǎng)基，B錯誤；過程①取0.2mL菌液進(jìn)行涂布后得到的甲平板上有9個菌落，所以菌液稀釋

10倍后每毫升中有未突變的菌株9:0.2=45（個），紫外線照射處理后的菌液中未突變的菌株數(shù)

量約為450個/mL,C正確；發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵產(chǎn)品采取適當(dāng)?shù)奶崛?、分離和純化措施來

獲得賴氨酸產(chǎn)品，D錯誤。

8.（2024?重慶，13）養(yǎng)殖場糞便是農(nóng)家肥的重要來源，其中某些微生物可使氨氮化合物轉(zhuǎn)化為

尿素進(jìn)而產(chǎn)生NH3,影響畜禽健康。為篩選糞便中能利用氨氮化合物且減少NH3產(chǎn)生的微生

物。興趣小組按圖示進(jìn)行實驗獲得目的菌株，下列敘述正確的是（）

菌株保存

畜禽培養(yǎng)利用氨氮只肉膏蛋白

糞

便鯉-化合物的f白、豚培養(yǎng)基

樣

本①多個菌落

尿素唯一

氮源培養(yǎng)基

②篩

選

甲：不產(chǎn)服酶

的菌株培養(yǎng)、離心取［不能利用

上清液檢測尿素的多

③個單菌落

乙：分泌胭酶