TFF3與TR3：胃癌發(fā)生發(fā)展中的關(guān)鍵分子及臨床意義探究一、引言1.1研究背景與目的胃癌作為全球范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅人類健康的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，其發(fā)病率和病死率一直居高不下。據(jù)世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球癌癥負(fù)擔(dān)數(shù)據(jù)顯示，胃癌新發(fā)病例數(shù)達(dá)108.9萬，死亡病例數(shù)為76.9萬，分別位居全球惡性腫瘤發(fā)病和死亡的第5位和第4位。在我國，胃癌同樣是高發(fā)的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重影響著人們的生命健康和生活質(zhì)量。由于胃癌起病隱匿，早期癥狀不明顯，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，此時(shí)腫瘤往往已發(fā)生浸潤和轉(zhuǎn)移，錯(cuò)過了最佳的手術(shù)治療時(shí)機(jī)。中晚期胃癌患者即便接受了手術(shù)、化療、放療等綜合治療，預(yù)后仍然較差，5年生存率較低。因此，深入研究胃癌的發(fā)病機(jī)制，尋找有效的早期診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，對(duì)于提高胃癌的診療水平、改善患者的預(yù)后具有至關(guān)重要的意義。近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，越來越多的研究表明，胃癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)涉及多基因、多步驟、多信號(hào)通路異常的復(fù)雜過程。其中，三葉因子3（TrefoilFactor3，TFF3）和睪丸受體3（TesticularReceptor3，TR3）作為被廣泛關(guān)注的關(guān)鍵基因，在胃癌的發(fā)生、發(fā)展過程中扮演著重要角色。TFF3是一種由三個(gè)分子組成的弱酸穩(wěn)定的蛋白質(zhì)，廣泛存在于多種內(nèi)分泌細(xì)胞和上皮組織中。已有研究發(fā)現(xiàn)，TFF3在多種腫瘤細(xì)胞中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，能夠促進(jìn)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移，同時(shí)還具有抑制細(xì)胞凋亡、增強(qiáng)細(xì)胞抗凋亡的作用。在胃癌中，TFF3的表達(dá)也較為普遍。相關(guān)研究表明，TFF3可通過激活干細(xì)胞信號(hào)通路P38MAPK來促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖和侵襲，同時(shí)降低細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)細(xì)胞的自我更新和再生能力；此外，TFF3還能通過激活Ras/Raf/MEK/ERK信號(hào)通路來進(jìn)一步促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。在臨床研究中發(fā)現(xiàn)，TFF3的表達(dá)水平與胃癌的分化度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，其高表達(dá)水平往往與胃癌的低分化和高分級(jí)相關(guān)，并且可作為評(píng)估胃癌預(yù)后的重要指標(biāo)。TR3是一種核受體類蛋白，廣泛分布于多個(gè)組織和器官中。研究顯示，TR3在多種腫瘤中的表達(dá)水平與癌癥的發(fā)生、發(fā)展有著密切的關(guān)聯(lián)。在胃癌中，TR3的表達(dá)也較為常見。研究表明，TR3可以通過激活Wnt信號(hào)通路來促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，同時(shí)還能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期進(jìn)程來深刻影響胃癌的發(fā)生和發(fā)展。此外，TR3的高表達(dá)水平同樣與胃癌的分化度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，也可作為判斷胃癌預(yù)后的重要指標(biāo)。盡管目前針對(duì)TFF3和TR3在胃癌中的表達(dá)及作用已有一定的研究，但仍存在許多尚未明確的問題。例如，TFF3和TR3在胃癌發(fā)生、發(fā)展過程中的具體分子調(diào)控機(jī)制尚未完全闡明；兩者之間是否存在相互作用以及這種相互作用對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響也有待進(jìn)一步研究；在臨床應(yīng)用方面，如何將TFF3和TR3作為有效的生物標(biāo)志物應(yīng)用于胃癌的早期診斷、預(yù)后評(píng)估以及靶向治療等，還需要更多的臨床研究和實(shí)踐來驗(yàn)證?；谝陨媳尘?，本研究旨在深入探討TFF3和TR3在胃癌組織中的表達(dá)情況，分析其與胃癌臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性，并進(jìn)一步研究兩者在胃癌細(xì)胞中的作用機(jī)制，以期為揭示胃癌的發(fā)病機(jī)制提供新的理論依據(jù)，為胃癌的早期診斷、預(yù)后評(píng)估及靶向治療提供新的思路和潛在靶點(diǎn)，最終提高胃癌患者的生存率和生活質(zhì)量。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，國內(nèi)外學(xué)者對(duì)TFF3和TR3在胃癌中的表達(dá)及意義進(jìn)行了大量研究，取得了一定的成果，但仍存在許多有待深入探索的領(lǐng)域。在TFF3方面，國內(nèi)外研究一致表明其在胃癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)。國內(nèi)有研究收集了100例胃癌患者組織標(biāo)本、50例胃癌前病變組織標(biāo)本和50例胃腺瘤組織標(biāo)本，采用免疫組化方法檢測(cè)TFF3的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)TFF3在胃癌組織中的表達(dá)明顯高于癌前病變及胃腺瘤組織，且其表達(dá)水平與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，TFF3高表達(dá)的胃癌患者腫瘤侵襲性更強(qiáng)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)更高。國外學(xué)者通過對(duì)胃癌細(xì)胞系的研究也發(fā)現(xiàn)，TFF3可通過激活干細(xì)胞信號(hào)通路P38MAPK，促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖和侵襲，同時(shí)降低細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)細(xì)胞的自我更新和再生能力。另有研究指出，TFF3還能通過激活Ras/Raf/MEK/ERK信號(hào)通路來進(jìn)一步促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。然而，目前對(duì)于TFF3在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中上游調(diào)控因子以及下游作用靶點(diǎn)的研究還不夠全面，其具體的分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)尚未完全明晰。對(duì)于TR3，國內(nèi)外研究同樣證實(shí)了其在胃癌組織和細(xì)胞中的廣泛表達(dá)。國內(nèi)一項(xiàng)對(duì)60例腸型胃癌患者的研究中，應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)TR3的表達(dá)，分析得出TR3的表達(dá)與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期顯著相關(guān)，TR3高表達(dá)的患者腫瘤浸潤更深，更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，TNM分期也更高。國外研究表明，TR3可以通過激活Wnt信號(hào)通路來促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，同時(shí)還能通過調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期進(jìn)程來深刻影響胃癌的發(fā)生和發(fā)展。但目前TR3在胃癌中的作用機(jī)制研究多集中在經(jīng)典信號(hào)通路，對(duì)于其是否通過其他非經(jīng)典途徑影響胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為，以及在不同胃癌亞型中的作用差異等方面，研究還相對(duì)較少。在TFF3和TR3聯(lián)合研究方面，已有研究發(fā)現(xiàn)二者在胃癌中的表達(dá)呈正相關(guān)，共同表達(dá)時(shí)可協(xié)同促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，降低胃癌細(xì)胞的凋亡。然而，關(guān)于兩者相互作用的分子機(jī)制，以及聯(lián)合檢測(cè)在胃癌早期診斷、精準(zhǔn)治療中的具體應(yīng)用價(jià)值，還需要更多的基礎(chǔ)研究和大規(guī)模臨床驗(yàn)證。綜上所述，目前國內(nèi)外對(duì)TFF3和TR3在胃癌中的表達(dá)及作用已有一定認(rèn)識(shí)，但在分子機(jī)制的深入解析、臨床應(yīng)用的拓展等方面仍存在不足。本研究擬在前人研究基礎(chǔ)上，進(jìn)一步深入探討TFF3和TR3在胃癌中的作用機(jī)制及臨床意義，為胃癌的防治提供更有力的理論依據(jù)和實(shí)踐指導(dǎo)。1.3研究方法與創(chuàng)新點(diǎn)本研究采用多種研究方法，從不同層面深入探討TFF3和TR3在胃癌中的表達(dá)及其意義，具體如下：臨床標(biāo)本收集與檢測(cè)：收集一定數(shù)量的胃癌患者手術(shù)切除的腫瘤組織標(biāo)本及相應(yīng)的癌旁正常組織標(biāo)本，同時(shí)詳細(xì)記錄患者的臨床病理資料，包括年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤大小、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、TNM分期等。運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)，檢測(cè)TFF3和TR3在胃癌組織及癌旁組織中的表達(dá)水平，通過顯微鏡觀察染色結(jié)果，分析其表達(dá)強(qiáng)度和陽性細(xì)胞分布情況。利用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）技術(shù)，檢測(cè)組織標(biāo)本中TFF3和TR3的mRNA表達(dá)水平，以β-actin等內(nèi)參基因?yàn)閷?duì)照，計(jì)算相對(duì)表達(dá)量，從而準(zhǔn)確評(píng)估基因轉(zhuǎn)錄水平的變化。采用蛋白質(zhì)免疫印跡（WesternBlot）技術(shù)，檢測(cè)組織標(biāo)本中TFF3和TR3的蛋白質(zhì)表達(dá)水平，通過分析條帶的灰度值，半定量地比較不同標(biāo)本中蛋白表達(dá)的差異。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：選用人胃癌細(xì)胞系，如BGC-823、SGC-7901等，在含10%胎牛血清的RPMI1640或DMEM培養(yǎng)基中，置于37℃、5%CO?的培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染或病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)等方法，構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)或沉默TFF3、TR3的胃癌細(xì)胞株。利用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒（CCK-8）法、EdU（5-乙炔基-2'-脫氧尿苷）摻入實(shí)驗(yàn)等檢測(cè)細(xì)胞增殖能力的變化；采用Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的遷移和侵襲能力；運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期分布，以探究TFF3和TR3對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。數(shù)據(jù)分析：使用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件（如SPSS、GraphPadPrism等）對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析（ANOVA）；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或率表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)（χ2）；分析TFF3和TR3表達(dá)與胃癌臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性時(shí)，采用Pearson相關(guān)分析或Spearman秩相關(guān)分析；生存分析采用Kaplan-Meier法，并通過Log-rank檢驗(yàn)比較生存曲線的差異。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究的創(chuàng)新點(diǎn)主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：多維度聯(lián)合研究：不僅單獨(dú)研究TFF3和TR3在胃癌中的表達(dá)、功能及與臨床病理特征的關(guān)系，還深入探究兩者之間的相互作用及協(xié)同效應(yīng)，從多個(gè)維度全面解析它們?cè)谖赴┌l(fā)生發(fā)展過程中的分子機(jī)制，為胃癌的綜合防治提供更全面的理論依據(jù)。新的作用機(jī)制探索：在已有研究基礎(chǔ)上，進(jìn)一步挖掘TFF3和TR3參與胃癌發(fā)生發(fā)展的新的信號(hào)通路和分子靶點(diǎn)，有望揭示一些尚未被發(fā)現(xiàn)的調(diào)控機(jī)制，為開發(fā)新的胃癌治療策略提供潛在的靶點(diǎn)和方向。臨床應(yīng)用拓展：通過大樣本的臨床研究，驗(yàn)證TFF3和TR3聯(lián)合檢測(cè)作為胃癌早期診斷、預(yù)后評(píng)估及療效監(jiān)測(cè)生物標(biāo)志物的可行性和準(zhǔn)確性，為其在臨床實(shí)踐中的廣泛應(yīng)用提供有力的證據(jù)支持，有助于提高胃癌的診療水平和患者的生存率。二、TFF3和TR3的生物學(xué)特性2.1TFF3的結(jié)構(gòu)、分布與生理功能TFF3，又被稱作小腸三葉因子（IntestinalTrefoilFactor，ITF），是三葉因子家族（TrefoilFactorsFamily，TFFs）的重要成員。其結(jié)構(gòu)獨(dú)特，以80個(gè)氨基酸的前體蛋白形式存在，成熟蛋白則由59個(gè)氨基酸構(gòu)成，分子量約為6-7kD。TFF3分子中富含半胱氨酸，含有一個(gè)由三個(gè)二硫橋形成三個(gè)環(huán)的P結(jié)構(gòu)域，因形似三片葉子而得名三葉結(jié)構(gòu)域，這一結(jié)構(gòu)域是TFF3發(fā)揮生物學(xué)功能的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。且第57位的Cys可以與另一個(gè)分子形成同源二聚體，研究已證實(shí)，與TFF3的單體形式相比，該同源二聚體是實(shí)現(xiàn)生物活性的必需之物。在正常生理狀態(tài)下，TFF3具有明顯的組織特異性和細(xì)胞特異性分布特點(diǎn)。其主要表達(dá)于小腸和結(jié)腸的杯狀細(xì)胞中，在這些部位，TFF3可抵抗蛋白酶的消化，為上皮細(xì)胞提供理想的保護(hù)。此外，在正常乳腺上皮及子宮、呼吸道、下丘腦及垂體等組織中也有少量表達(dá)。這種分布特點(diǎn)與其維護(hù)上皮組織的生理功能密切相關(guān)。在腸道中，TFF3能夠保護(hù)胃腸道粘膜，促進(jìn)胃腸道粘膜損傷后的修復(fù)，對(duì)維持腸道黏膜的完整性起著關(guān)鍵作用。相關(guān)研究表明，在低氧誘導(dǎo)的新生鼠壞死性小腸結(jié)腸炎模型中，給予TFF3治療組的腸道組織損傷明顯減輕。在口服硫酸葡聚糖誘導(dǎo)腸道炎癥的實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)組胃飼分泌型乳酸菌分泌有生物活性的TFF3，只發(fā)生輕度的上皮損傷，而對(duì)照組則死于廣泛性結(jié)腸炎。此外，TFF3缺陷的小鼠對(duì)葡萄糖硫酸鈉造成的損傷敏感性增高，死亡率達(dá)75％，而野生型僅10％出現(xiàn)癥狀，5％死亡，進(jìn)一步證實(shí)了TFF3在維持黏膜屏障中的重要作用。除了腸道，TFF3在其他組織中也發(fā)揮著維護(hù)上皮組織正常功能的作用，在乳腺中，TFF3蛋白能夠保護(hù)和維持上皮組織表面的完整性。2.2TR3的結(jié)構(gòu)、分布與生理功能TR3，即睪丸受體3，又稱核受體4A1（NR4A1），屬于核受體超家族成員。其結(jié)構(gòu)包含多個(gè)功能結(jié)構(gòu)域，具有高度保守的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（DBD），由兩個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)組成，可識(shí)別并結(jié)合特定的DNA序列，從而調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄。此外，還有配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域（LBD），雖目前尚未發(fā)現(xiàn)其天然配體，但該結(jié)構(gòu)域在TR3的功能調(diào)控中起著關(guān)鍵作用，可與其他蛋白質(zhì)相互作用，影響TR3的轉(zhuǎn)錄活性。同時(shí)，TR3還含有一個(gè)N端的激活功能結(jié)構(gòu)域（AF-1）和一個(gè)C端的激活功能結(jié)構(gòu)域（AF-2），這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域協(xié)同作用，共同調(diào)節(jié)TR3對(duì)靶基因的轉(zhuǎn)錄激活能力。TR3在體內(nèi)分布廣泛，幾乎存在于所有組織和細(xì)胞中，在心臟、肝臟、腎臟、肌肉、脂肪等組織中均有表達(dá)。在心血管系統(tǒng)中，心臟組織中TR3表達(dá)豐富，參與心肌細(xì)胞的生長、分化和凋亡過程，對(duì)維持心臟正常功能具有重要作用；在血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞中也有表達(dá)，參與血管舒縮、血管生成和血管重塑等生理病理過程。在肝臟中，TR3參與脂質(zhì)代謝、糖代謝以及肝臟再生等生理過程，對(duì)維持肝臟正常代謝功能至關(guān)重要。在免疫系統(tǒng)中，TR3在T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞中均有表達(dá)，參與免疫細(xì)胞的活化、增殖和分化，對(duì)免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)起著關(guān)鍵作用。TR3在細(xì)胞生理過程中發(fā)揮著多種重要功能，參與細(xì)胞增殖、凋亡、分化以及代謝調(diào)節(jié)等多個(gè)方面。在細(xì)胞增殖調(diào)控方面，TR3的作用具有雙重性，在某些細(xì)胞類型中，TR3可促進(jìn)細(xì)胞增殖，在表皮生長因子刺激下，細(xì)胞內(nèi)TR3表達(dá)上調(diào)，通過激活細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖；而在另一些細(xì)胞中，TR3則抑制細(xì)胞增殖，在腫瘤細(xì)胞中，高表達(dá)的TR3可通過抑制細(xì)胞周期蛋白D1的表達(dá)，阻滯細(xì)胞周期于G1期，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。在細(xì)胞凋亡調(diào)控中，TR3是一種重要的促凋亡因子，當(dāng)細(xì)胞受到DNA損傷、氧化應(yīng)激等凋亡刺激時(shí)，TR3表達(dá)迅速上調(diào)，從細(xì)胞核轉(zhuǎn)移到線粒體，與線粒體膜上的電壓依賴性陰離子通道（VDAC）相互作用，導(dǎo)致線粒體膜電位下降，細(xì)胞色素C釋放，進(jìn)而激活caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。在細(xì)胞分化過程中，TR3也發(fā)揮著重要作用，在脂肪細(xì)胞分化過程中，TR3可通過調(diào)節(jié)脂肪生成相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)前脂肪細(xì)胞向成熟脂肪細(xì)胞分化。在代謝調(diào)節(jié)方面，TR3參與脂質(zhì)代謝、糖代謝等過程，在肝臟中，TR3可通過調(diào)節(jié)脂肪酸合成酶、乙酰輔酶A羧化酶等脂質(zhì)合成關(guān)鍵酶的表達(dá)，調(diào)控脂質(zhì)合成；在肌肉和脂肪組織中，TR3參與調(diào)節(jié)胰島素信號(hào)通路，影響葡萄糖攝取和利用，對(duì)維持血糖平衡具有重要意義。三、TFF3在胃癌中的表達(dá)及意義3.1TFF3在胃癌組織中的表達(dá)情況眾多研究表明，TFF3在胃癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)。國內(nèi)一項(xiàng)研究收集了100例胃癌患者的手術(shù)切除標(biāo)本，采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)TFF3的表達(dá)，結(jié)果顯示TFF3在胃癌組織中的陽性表達(dá)率高達(dá)75%，而在癌旁正常組織中陽性表達(dá)率僅為20%，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，TFF3的表達(dá)強(qiáng)度在不同病理類型的胃癌中也存在差異，在低分化腺癌中的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于高分化腺癌。另一項(xiàng)研究通過對(duì)150例胃癌組織及相應(yīng)癌旁組織進(jìn)行qRT-PCR檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)胃癌組織中TFF3的mRNA表達(dá)水平顯著高于癌旁組織，約為癌旁組織的3.5倍。國外相關(guān)研究也得到了類似的結(jié)果。有研究對(duì)200例胃癌患者的組織標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)TFF3在胃癌組織中的陽性表達(dá)率為78%，且TFF3的表達(dá)與腫瘤的大小、浸潤深度密切相關(guān)。在腫瘤直徑大于5cm的胃癌組織中，TFF3的陽性表達(dá)率明顯高于腫瘤直徑小于5cm的組織；在浸潤至肌層及漿膜層的胃癌組織中，TFF3的表達(dá)水平顯著高于局限于黏膜層和黏膜下層的組織。此外，通過對(duì)胃癌細(xì)胞系的研究發(fā)現(xiàn)，在BGC-823、SGC-7901等多種胃癌細(xì)胞系中，TFF3蛋白和mRNA均呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)。還有研究將182例胃癌患者的癌組織作為觀察組，30例正常胃黏膜組織作為對(duì)照組，運(yùn)用SP免疫組化方法檢測(cè)TFF3表達(dá)，結(jié)果顯示觀察組TFF3陽性表達(dá)率為79.12%，顯著高于對(duì)照組的13.33%，且TFF3表達(dá)與胃癌組織類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期有關(guān)。另有實(shí)驗(yàn)對(duì)20例正常胃黏膜、10例胃癌伴腸化生、20例胃印戒細(xì)胞癌和20例腺癌組織進(jìn)行免疫組化，檢測(cè)TFF3表達(dá)情況，結(jié)果表明，相對(duì)于正常胃黏膜，胃癌中TFF3表達(dá)明顯升高，陽性率為72.5%。綜上所述，大量研究從不同角度、采用多種檢測(cè)方法證實(shí)了TFF3在胃癌組織中高表達(dá)，且其表達(dá)水平與胃癌的多種臨床病理特征密切相關(guān)，提示TFF3可能在胃癌的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。3.2TFF3對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響3.2.1促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖TFF3在胃癌細(xì)胞增殖過程中發(fā)揮著重要的促進(jìn)作用，其主要通過激活相關(guān)信號(hào)通路來實(shí)現(xiàn)這一功能。研究表明，TFF3可以激活干細(xì)胞信號(hào)通路P38MAPK。在正常生理狀態(tài)下，P38MAPK信號(hào)通路處于相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)，細(xì)胞增殖受到嚴(yán)格調(diào)控。然而，當(dāng)TFF3高表達(dá)時(shí)，其能夠與細(xì)胞表面的相應(yīng)受體結(jié)合，激活受體的激酶活性，進(jìn)而引發(fā)一系列的磷酸化級(jí)聯(lián)反應(yīng)。具體來說，TFF3與受體結(jié)合后，使受體的酪氨酸殘基磷酸化，招募并激活下游的適配蛋白，這些適配蛋白進(jìn)一步激活P38MAPK激酶家族成員，如MKK3、MKK6等，它們通過磷酸化激活P38MAPK。激活后的P38MAPK進(jìn)入細(xì)胞核，作用于一系列轉(zhuǎn)錄因子，如ATF1、Elk-1等，調(diào)節(jié)它們的活性，從而促進(jìn)與細(xì)胞增殖相關(guān)基因的表達(dá)，如CyclinD1、PCNA等。CyclinD1是細(xì)胞周期G1期向S期轉(zhuǎn)換的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，其表達(dá)上調(diào)可加速細(xì)胞周期進(jìn)程，促進(jìn)細(xì)胞增殖；PCNA則是DNA合成的關(guān)鍵蛋白，其表達(dá)增加有助于DNA復(fù)制，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖。此外，TFF3還能激活Ras/Raf/MEK/ERK信號(hào)通路。在胃癌細(xì)胞中，TFF3與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合后，激活受體的鳥苷酸交換因子活性，使Ras蛋白從無活性的GDP結(jié)合形式轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚缘腉TP結(jié)合形式?；罨腞as蛋白進(jìn)一步激活Raf蛋白，Raf蛋白是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，它可以磷酸化并激活MEK蛋白。MEK蛋白是一種雙特異性激酶，能夠同時(shí)磷酸化ERK蛋白的蘇氨酸和酪氨酸殘基，使其激活。激活后的ERK蛋白進(jìn)入細(xì)胞核，磷酸化一系列轉(zhuǎn)錄因子，如c-Fos、c-Jun等，這些轉(zhuǎn)錄因子形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合物，結(jié)合到靶基因的啟動(dòng)子區(qū)域，促進(jìn)與細(xì)胞增殖相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，如c-Myc、CyclinE等。c-Myc是一種重要的原癌基因，它可以調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化和凋亡等過程，其表達(dá)上調(diào)可促進(jìn)細(xì)胞增殖；CyclinE在細(xì)胞周期G1期向S期轉(zhuǎn)換過程中發(fā)揮重要作用，其表達(dá)增加可加速細(xì)胞進(jìn)入S期，促進(jìn)細(xì)胞DNA合成和細(xì)胞增殖。眾多實(shí)驗(yàn)為TFF3促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖提供了有力證據(jù)。有研究通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，構(gòu)建了穩(wěn)定過表達(dá)TFF3的胃癌細(xì)胞株和正常表達(dá)TFF3的胃癌細(xì)胞株作為對(duì)照。采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，結(jié)果顯示，過表達(dá)TFF3的胃癌細(xì)胞在培養(yǎng)24h、48h、72h后的吸光度值均顯著高于對(duì)照組，表明細(xì)胞增殖能力明顯增強(qiáng)。EdU摻入實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，過表達(dá)TFF3的胃癌細(xì)胞中EdU陽性細(xì)胞比例顯著增加，進(jìn)一步證實(shí)了TFF3能夠促進(jìn)胃癌細(xì)胞的DNA合成，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖。相反，利用RNA干擾技術(shù)沉默TFF3基因的表達(dá)后，胃癌細(xì)胞的增殖能力受到顯著抑制，細(xì)胞生長速度明顯減慢。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，將過表達(dá)TFF3的胃癌細(xì)胞和對(duì)照細(xì)胞分別接種到裸鼠皮下，一段時(shí)間后觀察腫瘤生長情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，接種過表達(dá)TFF3胃癌細(xì)胞的裸鼠腫瘤體積和重量均顯著大于接種對(duì)照細(xì)胞的裸鼠，腫瘤生長速度更快。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果充分表明，TFF3能夠通過激活相關(guān)信號(hào)通路，促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖。3.2.2增強(qiáng)胃癌細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移能力TFF3在增強(qiáng)胃癌細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移能力方面具有關(guān)鍵作用，其主要通過調(diào)控相關(guān)因子和信號(hào)通路來實(shí)現(xiàn)這一功能。研究發(fā)現(xiàn)，TFF3可以誘導(dǎo)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過程，從而增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。在正常上皮細(xì)胞中，細(xì)胞之間通過緊密連接、黏著連接等結(jié)構(gòu)維持著上皮細(xì)胞的極性和完整性，細(xì)胞具有較強(qiáng)的細(xì)胞間黏附能力，侵襲和轉(zhuǎn)移能力較弱。然而，在TFF3的作用下，胃癌細(xì)胞發(fā)生EMT過程。TFF3與細(xì)胞表面的受體結(jié)合后，激活下游的PI3K/AKT信號(hào)通路。激活的AKT蛋白可以磷酸化并抑制糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）的活性，使β-連環(huán)蛋白（β-catenin）在細(xì)胞質(zhì)中積累并進(jìn)入細(xì)胞核。在細(xì)胞核內(nèi)，β-catenin與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，促進(jìn)EMT相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，如N-cadherin、Vimentin等。同時(shí)，E-cadherin的表達(dá)受到抑制。N-cadherin和Vimentin是間質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志物，它們的表達(dá)上調(diào)可使細(xì)胞的形態(tài)和功能發(fā)生改變，細(xì)胞間黏附能力下降，遷移和侵襲能力增強(qiáng)；而E-cadherin是上皮細(xì)胞的重要黏附分子，其表達(dá)降低會(huì)破壞上皮細(xì)胞的緊密連接，進(jìn)一步促進(jìn)細(xì)胞的遷移和侵襲。此外，TFF3還可以通過激活基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的表達(dá)來增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的侵襲能力。MMPs是一類能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)的蛋白酶家族，在腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要作用。TFF3與胃癌細(xì)胞表面受體結(jié)合后，激活MAPK信號(hào)通路，其中ERK1/2、JNK等信號(hào)分子被激活。激活的ERK1/2和JNK可以磷酸化并激活轉(zhuǎn)錄因子AP-1、NF-κB等，這些轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到MMPs基因的啟動(dòng)子區(qū)域，促進(jìn)MMP-2、MMP-9等的表達(dá)。MMP-2和MMP-9能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)中的膠原蛋白、層粘連蛋白等成分，為胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲開辟通道，從而增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的侵襲能力。大量研究實(shí)例為TFF3增強(qiáng)胃癌細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移能力提供了有力支持。有研究通過Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胃癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力。將過表達(dá)TFF3的胃癌細(xì)胞和正常表達(dá)TFF3的胃癌細(xì)胞分別接種到Transwell小室的上室，下室加入含有趨化因子的培養(yǎng)基。培養(yǎng)一段時(shí)間后，固定并染色穿過小室膜的細(xì)胞，在顯微鏡下計(jì)數(shù)。結(jié)果顯示，過表達(dá)TFF3的胃癌細(xì)胞穿過小室膜的細(xì)胞數(shù)量顯著多于對(duì)照組，表明其侵襲和遷移能力明顯增強(qiáng)。相反，利用siRNA技術(shù)沉默TFF3的表達(dá)后，胃癌細(xì)胞穿過小室膜的細(xì)胞數(shù)量顯著減少，侵襲和遷移能力受到明顯抑制。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，將過表達(dá)TFF3的胃癌細(xì)胞和對(duì)照細(xì)胞分別注射到裸鼠的尾靜脈，觀察肺轉(zhuǎn)移情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，注射過表達(dá)TFF3胃癌細(xì)胞的裸鼠肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)量顯著多于注射對(duì)照細(xì)胞的裸鼠，表明TFF3能夠促進(jìn)胃癌細(xì)胞的肺轉(zhuǎn)移。這些研究結(jié)果充分表明，TFF3通過調(diào)控相關(guān)因子和信號(hào)通路，顯著增強(qiáng)了胃癌細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移能力。3.2.3抑制胃癌細(xì)胞凋亡TFF3在抑制胃癌細(xì)胞凋亡方面發(fā)揮著重要作用，其主要通過多種途徑來實(shí)現(xiàn)這一功能。研究表明，TFF3可以激活PI3K/AKT信號(hào)通路，該通路在細(xì)胞凋亡調(diào)控中起著關(guān)鍵作用。當(dāng)TFF3與胃癌細(xì)胞表面的受體結(jié)合后，激活受體的磷酸化活性，進(jìn)而招募并激活PI3K。PI3K催化磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2）生成磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸（PIP3）。PIP3作為第二信使，招募并激活A(yù)KT蛋白。激活后的AKT蛋白可以磷酸化一系列下游靶蛋白，其中包括Bad蛋白。Bad蛋白是一種促凋亡蛋白，在非磷酸化狀態(tài)下，它可以與抗凋亡蛋白Bcl-2或Bcl-XL結(jié)合，形成異二聚體，從而抑制Bcl-2或Bcl-XL的抗凋亡作用。而當(dāng)Bad蛋白被AKT磷酸化后，它與Bcl-2或Bcl-XL的結(jié)合能力減弱，使Bcl-2或Bcl-XL能夠發(fā)揮其抗凋亡作用，抑制細(xì)胞凋亡。此外，AKT還可以磷酸化并抑制caspase-9的活性，caspase-9是細(xì)胞凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)中的關(guān)鍵蛋白酶，其活性受到抑制可阻斷細(xì)胞凋亡的啟動(dòng)，從而抑制胃癌細(xì)胞凋亡。TFF3還可以通過調(diào)節(jié)線粒體凋亡途徑來抑制胃癌細(xì)胞凋亡。線粒體在細(xì)胞凋亡過程中起著核心作用，當(dāng)細(xì)胞受到凋亡刺激時(shí)，線粒體膜電位下降，細(xì)胞色素C從線粒體釋放到細(xì)胞質(zhì)中。在細(xì)胞質(zhì)中，細(xì)胞色素C與凋亡蛋白酶激活因子-1（Apaf-1）、dATP結(jié)合，形成凋亡小體，招募并激活caspase-9，進(jìn)而激活caspase-3等下游效應(yīng)caspases，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。研究發(fā)現(xiàn)，TFF3可以抑制細(xì)胞色素C的釋放，從而阻斷線粒體凋亡途徑。其具體機(jī)制可能是TFF3通過激活相關(guān)信號(hào)通路，調(diào)節(jié)Bcl-2家族蛋白的表達(dá)和活性。Bcl-2家族蛋白包括抗凋亡蛋白（如Bcl-2、Bcl-XL等）和促凋亡蛋白（如Bax、Bak等），它們之間的平衡決定了細(xì)胞是否發(fā)生凋亡。TFF3可以上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL的表達(dá)，同時(shí)下調(diào)促凋亡蛋白Bax、Bak的表達(dá)，使Bcl-2家族蛋白的平衡向抗凋亡方向傾斜，從而抑制細(xì)胞色素C的釋放，抑制胃癌細(xì)胞凋亡。大量實(shí)驗(yàn)研究為TFF3抑制胃癌細(xì)胞凋亡提供了有力證據(jù)。有研究通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)胃癌細(xì)胞的凋亡率。將過表達(dá)TFF3的胃癌細(xì)胞和正常表達(dá)TFF3的胃癌細(xì)胞分別用凋亡誘導(dǎo)劑處理，然后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果顯示，過表達(dá)TFF3的胃癌細(xì)胞在凋亡誘導(dǎo)劑處理后的凋亡率顯著低于對(duì)照組，表明TFF3能夠抑制胃癌細(xì)胞凋亡。相反，利用RNA干擾技術(shù)沉默TFF3的表達(dá)后，胃癌細(xì)胞在凋亡誘導(dǎo)劑處理后的凋亡率顯著增加。此外，通過檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)也證實(shí)了TFF3的抗凋亡作用。在過表達(dá)TFF3的胃癌細(xì)胞中，抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL的表達(dá)水平明顯升高，而促凋亡蛋白Bax、Bad的表達(dá)水平明顯降低，同時(shí)caspase-3、caspase-9的活性也顯著降低。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果充分表明，TFF3通過激活PI3K/AKT信號(hào)通路和調(diào)節(jié)線粒體凋亡途徑等多種方式，有效地抑制了胃癌細(xì)胞凋亡。3.3TFF3表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系3.3.1與胃癌分化程度的關(guān)聯(lián)TFF3的表達(dá)水平與胃癌的分化程度密切相關(guān)，眾多研究表明，TFF3高表達(dá)與胃癌的低分化顯著相關(guān)。有研究對(duì)120例胃癌患者的組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，結(jié)果顯示，在高分化胃癌組織中，TFF3的陽性表達(dá)率為30%；而在低分化胃癌組織中，TFF3的陽性表達(dá)率高達(dá)80%，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。進(jìn)一步的分析發(fā)現(xiàn)，TFF3的表達(dá)強(qiáng)度也隨著胃癌分化程度的降低而增強(qiáng)。在高分化胃癌組織中，TFF3主要呈弱陽性表達(dá)，染色強(qiáng)度較淺；而在低分化胃癌組織中，TFF3多呈強(qiáng)陽性表達(dá)，染色強(qiáng)度深，陽性細(xì)胞分布廣泛。從分子機(jī)制角度來看，TFF3可能通過激活相關(guān)信號(hào)通路來影響胃癌細(xì)胞的分化。如前文所述，TFF3可以激活Ras/Raf/MEK/ERK信號(hào)通路，該通路的激活可促進(jìn)與細(xì)胞增殖相關(guān)基因的表達(dá)，抑制細(xì)胞分化相關(guān)基因的表達(dá)。在胃癌細(xì)胞中，當(dāng)TFF3高表達(dá)時(shí)，持續(xù)激活的Ras/Raf/MEK/ERK信號(hào)通路使細(xì)胞過度增殖，而抑制了細(xì)胞向正常分化方向發(fā)展，從而導(dǎo)致胃癌細(xì)胞呈現(xiàn)低分化狀態(tài)。此外，TFF3還可能通過與其他轉(zhuǎn)錄因子或信號(hào)分子相互作用，調(diào)控胃癌細(xì)胞的分化相關(guān)基因表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，TFF3可以與Snail、Slug等轉(zhuǎn)錄因子相互作用，這些轉(zhuǎn)錄因子是上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過程的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，同時(shí)也參與細(xì)胞分化的調(diào)控。TFF3與它們相互作用后，可促進(jìn)EMT過程，使胃癌細(xì)胞獲得間質(zhì)細(xì)胞的特性，失去上皮細(xì)胞的分化特征，進(jìn)而導(dǎo)致胃癌細(xì)胞分化程度降低。TFF3表達(dá)與胃癌分化程度的相關(guān)性具有重要的臨床意義。低分化胃癌通常具有更高的侵襲性和轉(zhuǎn)移性，預(yù)后較差。TFF3高表達(dá)與胃癌低分化的相關(guān)性提示，TFF3可能作為評(píng)估胃癌惡性程度的一個(gè)重要指標(biāo)。通過檢測(cè)TFF3的表達(dá)水平，醫(yī)生可以更準(zhǔn)確地判斷胃癌的分化程度，從而為制定個(gè)性化的治療方案提供重要依據(jù)。對(duì)于TFF3高表達(dá)的低分化胃癌患者，可能需要更積極的治療策略，如強(qiáng)化化療、靶向治療或免疫治療等，以提高治療效果，改善患者預(yù)后。3.3.2與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系TFF3表達(dá)水平與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間存在密切聯(lián)系，大量研究證實(shí)，TFF3高表達(dá)的胃癌患者更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。有研究對(duì)150例胃癌患者進(jìn)行回顧性分析，采用免疫組化方法檢測(cè)TFF3的表達(dá)，并對(duì)患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果顯示，在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌患者中，TFF3的陽性表達(dá)率為40%；而在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，TFF3的陽性表達(dá)率高達(dá)85%，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，TFF3的表達(dá)強(qiáng)度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的數(shù)目和范圍也相關(guān)。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目較多、轉(zhuǎn)移范圍較廣的患者中，TFF3的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目較少、轉(zhuǎn)移范圍局限的患者。TFF3促進(jìn)胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的機(jī)制主要與其增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力有關(guān)。前文已提及，TFF3可以誘導(dǎo)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過程，使胃癌細(xì)胞獲得間質(zhì)細(xì)胞的特性，如細(xì)胞間黏附能力下降、遷移和侵襲能力增強(qiáng)。在EMT過程中，TFF3通過激活PI3K/AKT信號(hào)通路，抑制GSK-3β的活性，使β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中積累并進(jìn)入細(xì)胞核，與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，促進(jìn)EMT相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致E-cadherin表達(dá)降低，N-cadherin和Vimentin表達(dá)上調(diào)。E-cadherin表達(dá)降低破壞了上皮細(xì)胞的緊密連接，使胃癌細(xì)胞更容易脫離原發(fā)灶，進(jìn)入周圍組織和淋巴管；而N-cadherin和Vimentin表達(dá)上調(diào)則增強(qiáng)了胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力，使其能夠穿透淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞，進(jìn)入淋巴管并隨淋巴液轉(zhuǎn)移至淋巴結(jié)。此外，TFF3還可以激活基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的表達(dá)，MMPs能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)，為胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲開辟通道，進(jìn)一步促進(jìn)胃癌細(xì)胞向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。TFF3表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系對(duì)胃癌預(yù)后評(píng)估具有重要價(jià)值。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響胃癌預(yù)后的重要因素之一，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌患者預(yù)后往往較差。TFF3高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性表明，TFF3可作為評(píng)估胃癌患者預(yù)后的一個(gè)重要生物標(biāo)志物。通過檢測(cè)TFF3的表達(dá)水平，醫(yī)生可以初步判斷胃癌患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)，從而對(duì)患者的預(yù)后進(jìn)行更準(zhǔn)確的評(píng)估。對(duì)于TFF3高表達(dá)且伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌患者，應(yīng)加強(qiáng)隨訪和監(jiān)測(cè)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)并處理可能出現(xiàn)的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，同時(shí)在治療上應(yīng)采取更綜合、更積極的措施，以提高患者的生存率和生活質(zhì)量。3.4TFF3作為胃癌診斷和預(yù)后標(biāo)志物的潛力鑒于TFF3在胃癌組織中的高表達(dá)及其與胃癌臨床病理特征的密切關(guān)系，其在胃癌的診斷和預(yù)后評(píng)估方面展現(xiàn)出巨大的潛力。在胃癌早期診斷中，TFF3具有較高的敏感性和特異性。研究表明，檢測(cè)血清或胃液中的TFF3水平，能夠?yàn)槲赴┑脑缙诤Y查提供重要依據(jù)。有研究對(duì)100例胃癌患者和100例健康對(duì)照者的血清進(jìn)行檢測(cè)，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法測(cè)定TFF3的含量。結(jié)果顯示，胃癌患者血清中TFF3水平顯著高于健康對(duì)照組，以特定的TFF3水平作為臨界值時(shí)，診斷胃癌的敏感性可達(dá)70%，特異性為80%。另有研究對(duì)50例早期胃癌患者和50例良性胃部疾病患者的胃液進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)早期胃癌患者胃液中TFF3的表達(dá)水平明顯升高，以胃液TFF3水平診斷早期胃癌的敏感性為75%，特異性為85%。這些研究結(jié)果表明，TFF3作為胃癌早期診斷標(biāo)志物具有一定的可行性，能夠幫助醫(yī)生在疾病早期發(fā)現(xiàn)病變，提高胃癌的早期診斷率。TFF3對(duì)胃癌預(yù)后判斷同樣具有重要作用。大量臨床研究證實(shí)，TFF3高表達(dá)的胃癌患者預(yù)后較差，其5年生存率明顯低于TFF3低表達(dá)的患者。有研究對(duì)200例接受手術(shù)治療的胃癌患者進(jìn)行長期隨訪，分析TFF3表達(dá)與患者生存情況的關(guān)系。結(jié)果顯示，TFF3高表達(dá)組患者的5年生存率為30%，而TFF3低表達(dá)組患者的5年生存率為60%，兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。進(jìn)一步的多因素分析表明，TFF3表達(dá)水平是影響胃癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。此外，TFF3的表達(dá)還與胃癌患者的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，TFF3高表達(dá)的患者術(shù)后復(fù)發(fā)率明顯高于TFF3低表達(dá)的患者。有研究對(duì)150例胃癌術(shù)后患者進(jìn)行隨訪，發(fā)現(xiàn)TFF3高表達(dá)組患者的術(shù)后復(fù)發(fā)率為50%，而TFF3低表達(dá)組患者的術(shù)后復(fù)發(fā)率僅為20%。這些研究結(jié)果表明，TFF3可以作為評(píng)估胃癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)，醫(yī)生可以根據(jù)TFF3的表達(dá)水平，對(duì)患者的預(yù)后進(jìn)行準(zhǔn)確判斷，為制定個(gè)性化的治療和隨訪方案提供依據(jù)。綜上所述，TFF3在胃癌的早期診斷和預(yù)后評(píng)估方面具有重要的應(yīng)用價(jià)值，有望成為胃癌診斷和預(yù)后判斷的重要生物標(biāo)志物。然而，目前TFF3在臨床應(yīng)用中仍存在一些問題，如檢測(cè)方法的標(biāo)準(zhǔn)化、臨界值的確定等，需要進(jìn)一步的研究和完善。未來，隨著研究的深入和技術(shù)的發(fā)展，TFF3有望在胃癌的臨床診療中發(fā)揮更大的作用。四、TR3在胃癌中的表達(dá)及意義4.1TR3在胃癌組織中的表達(dá)情況大量研究表明，TR3在胃癌組織中呈現(xiàn)出較高的表達(dá)水平。有研究采用免疫組織化學(xué)染色方法，對(duì)80例胃癌患者的手術(shù)切除標(biāo)本及相應(yīng)的癌旁正常組織標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示TR3在胃癌組織中的陽性表達(dá)率為70%，而在癌旁正常組織中的陽性表達(dá)率僅為25%，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，TR3的表達(dá)強(qiáng)度在不同病理類型的胃癌中存在明顯差異，在低分化腺癌中的表達(dá)強(qiáng)度顯著高于高分化腺癌。在低分化腺癌組織中，TR3多呈強(qiáng)陽性表達(dá)，染色深且陽性細(xì)胞分布廣泛；而在高分化腺癌組織中，TR3主要呈弱陽性表達(dá)，染色較淺，陽性細(xì)胞數(shù)量較少。通過實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）技術(shù)對(duì)胃癌組織和癌旁組織中TR3的mRNA表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，也得到了類似的結(jié)果。有研究對(duì)60例胃癌患者的組織標(biāo)本進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)胃癌組織中TR3的mRNA表達(dá)水平顯著高于癌旁組織，約為癌旁組織的4倍。在另一項(xiàng)研究中，對(duì)100例胃癌患者的組織標(biāo)本進(jìn)行qRT-PCR檢測(cè)，同樣證實(shí)了胃癌組織中TR3的mRNA表達(dá)水平明顯高于癌旁正常組織。此外，蛋白質(zhì)免疫印跡（WesternBlot）實(shí)驗(yàn)也表明，胃癌組織中TR3的蛋白質(zhì)表達(dá)水平顯著高于癌旁組織。有研究通過WesternBlot檢測(cè)了50例胃癌患者組織標(biāo)本中TR3的蛋白表達(dá)，結(jié)果顯示胃癌組織中TR3蛋白條帶的灰度值明顯高于癌旁組織，表明TR3在胃癌組織中的蛋白表達(dá)量更高。對(duì)胃癌細(xì)胞系的研究同樣證實(shí)了TR3的高表達(dá)。在BGC-823、SGC-7901等多種常見的胃癌細(xì)胞系中，TR3蛋白和mRNA均呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)。有研究通過免疫熒光實(shí)驗(yàn)觀察到，在BGC-823細(xì)胞中，TR3主要定位于細(xì)胞核，呈現(xiàn)出較強(qiáng)的熒光信號(hào)，表明其高表達(dá)。通過qRT-PCR和WesternBlot實(shí)驗(yàn)對(duì)SGC-7901細(xì)胞中TR3的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示該細(xì)胞系中TR3的mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著高于正常胃上皮細(xì)胞系。綜上所述，眾多研究從不同層面、運(yùn)用多種檢測(cè)技術(shù)，一致證實(shí)了TR3在胃癌組織中高表達(dá)，這提示TR3可能在胃癌的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。4.2TR3對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響4.2.1促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖TR3在促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，其主要通過激活Wnt信號(hào)通路來實(shí)現(xiàn)這一功能。在正常生理狀態(tài)下，Wnt信號(hào)通路處于相對(duì)穩(wěn)定的調(diào)控狀態(tài)，細(xì)胞增殖有序進(jìn)行。然而，當(dāng)TR3高表達(dá)時(shí)，它能夠與Wnt信號(hào)通路中的關(guān)鍵分子相互作用，從而激活該信號(hào)通路。具體而言，TR3可以直接與β-連環(huán)蛋白（β-catenin）結(jié)合，抑制β-catenin的磷酸化和降解。在經(jīng)典的Wnt信號(hào)通路中，當(dāng)Wnt信號(hào)未激活時(shí)，β-catenin與結(jié)腸腺瘤性息肉蛋白（APC）、軸蛋白（Axin）和糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）形成復(fù)合物，在GSK-3β的作用下，β-catenin發(fā)生磷酸化，隨后被泛素化并降解，從而維持細(xì)胞內(nèi)β-catenin的低水平。而TR3高表達(dá)時(shí)，它與β-catenin結(jié)合，破壞了β-catenin與APC、Axin和GSK-3β形成的復(fù)合物，使β-catenin無法被磷酸化和降解，導(dǎo)致β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中積累并進(jìn)入細(xì)胞核。在細(xì)胞核內(nèi)，β-catenin與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，形成轉(zhuǎn)錄激活復(fù)合物，啟動(dòng)一系列與細(xì)胞增殖相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，如c-Myc、CyclinD1等。c-Myc是一種重要的原癌基因，它可以調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化和凋亡等過程，其表達(dá)上調(diào)可促進(jìn)細(xì)胞增殖；CyclinD1是細(xì)胞周期G1期向S期轉(zhuǎn)換的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，其表達(dá)上調(diào)可加速細(xì)胞周期進(jìn)程，促進(jìn)細(xì)胞增殖。眾多實(shí)驗(yàn)為TR3促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖提供了有力證據(jù)。有研究通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，構(gòu)建了穩(wěn)定過表達(dá)TR3的胃癌細(xì)胞株和正常表達(dá)TR3的胃癌細(xì)胞株作為對(duì)照。采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，結(jié)果顯示，過表達(dá)TR3的胃癌細(xì)胞在培養(yǎng)24h、48h、72h后的吸光度值均顯著高于對(duì)照組，表明細(xì)胞增殖能力明顯增強(qiáng)。EdU摻入實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，過表達(dá)TR3的胃癌細(xì)胞中EdU陽性細(xì)胞比例顯著增加，進(jìn)一步證實(shí)了TR3能夠促進(jìn)胃癌細(xì)胞的DNA合成，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖。相反，利用RNA干擾技術(shù)沉默TR3基因的表達(dá)后，胃癌細(xì)胞的增殖能力受到顯著抑制，細(xì)胞生長速度明顯減慢。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，將過表達(dá)TR3的胃癌細(xì)胞和對(duì)照細(xì)胞分別接種到裸鼠皮下，一段時(shí)間后觀察腫瘤生長情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，接種過表達(dá)TR3胃癌細(xì)胞的裸鼠腫瘤體積和重量均顯著大于接種對(duì)照細(xì)胞的裸鼠，腫瘤生長速度更快。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果充分表明，TR3能夠通過激活Wnt信號(hào)通路，促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖。4.2.2促進(jìn)胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移TR3在促進(jìn)胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移方面具有重要作用，其主要通過調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）等過程來實(shí)現(xiàn)。細(xì)胞骨架的動(dòng)態(tài)變化在細(xì)胞遷移和侵襲過程中起著關(guān)鍵作用。研究發(fā)現(xiàn)，TR3可以通過調(diào)節(jié)微絲、微管等細(xì)胞骨架成分的組裝和解聚，影響胃癌細(xì)胞的形態(tài)和運(yùn)動(dòng)能力。具體來說，TR3可以上調(diào)一些細(xì)胞骨架調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)，如RhoA、ROCK等。RhoA是一種小GTP酶，它可以激活下游的ROCK蛋白激酶。ROCK通過磷酸化作用，調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白的活性，促進(jìn)肌動(dòng)蛋白絲的聚合和交聯(lián)，從而增強(qiáng)細(xì)胞的收縮力和遷移能力。在胃癌細(xì)胞中，當(dāng)TR3高表達(dá)時(shí)，RhoA/ROCK信號(hào)通路被激活，導(dǎo)致細(xì)胞骨架重組，使胃癌細(xì)胞獲得更強(qiáng)的遷移和侵襲能力。此外，TR3還可以誘導(dǎo)EMT過程，從而促進(jìn)胃癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。在正常上皮細(xì)胞中，細(xì)胞之間通過緊密連接、黏著連接等結(jié)構(gòu)維持著上皮細(xì)胞的極性和完整性，細(xì)胞具有較強(qiáng)的細(xì)胞間黏附能力，遷移和侵襲能力較弱。然而，在TR3的作用下，胃癌細(xì)胞發(fā)生EMT過程。TR3可以通過激活Wnt信號(hào)通路，抑制GSK-3β的活性，使β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中積累并進(jìn)入細(xì)胞核。在細(xì)胞核內(nèi)，β-catenin與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，促進(jìn)EMT相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，如N-cadherin、Vimentin等。同時(shí)，E-cadherin的表達(dá)受到抑制。N-cadherin和Vimentin是間質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志物，它們的表達(dá)上調(diào)可使細(xì)胞的形態(tài)和功能發(fā)生改變，細(xì)胞間黏附能力下降，遷移和侵襲能力增強(qiáng)；而E-cadherin是上皮細(xì)胞的重要黏附分子，其表達(dá)降低會(huì)破壞上皮細(xì)胞的緊密連接，進(jìn)一步促進(jìn)細(xì)胞的遷移和侵襲。大量研究實(shí)例為TR3促進(jìn)胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移提供了有力支持。有研究通過Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。將過表達(dá)TR3的胃癌細(xì)胞和正常表達(dá)TR3的胃癌細(xì)胞分別接種到Transwell小室的上室，下室加入含有趨化因子的培養(yǎng)基。培養(yǎng)一段時(shí)間后，固定并染色穿過小室膜的細(xì)胞，在顯微鏡下計(jì)數(shù)。結(jié)果顯示，過表達(dá)TR3的胃癌細(xì)胞穿過小室膜的細(xì)胞數(shù)量顯著多于對(duì)照組，表明其遷移和侵襲能力明顯增強(qiáng)。相反，利用siRNA技術(shù)沉默TR3的表達(dá)后，胃癌細(xì)胞穿過小室膜的細(xì)胞數(shù)量顯著減少，遷移和侵襲能力受到明顯抑制。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，將過表達(dá)TR3的胃癌細(xì)胞和對(duì)照細(xì)胞分別注射到裸鼠的尾靜脈，觀察肺轉(zhuǎn)移情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，注射過表達(dá)TR3胃癌細(xì)胞的裸鼠肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)量顯著多于注射對(duì)照細(xì)胞的裸鼠，表明TR3能夠促進(jìn)胃癌細(xì)胞的肺轉(zhuǎn)移。這些研究結(jié)果充分表明，TR3通過調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架和誘導(dǎo)EMT等過程，顯著促進(jìn)了胃癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。4.2.3對(duì)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)TR3在胃癌細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期進(jìn)程的調(diào)控中發(fā)揮著重要作用，其主要通過調(diào)控相關(guān)蛋白和基因的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)這一功能。在細(xì)胞凋亡方面，TR3可以作為一種促凋亡因子發(fā)揮作用。當(dāng)細(xì)胞受到外界刺激，如化療藥物、放療等，TR3的表達(dá)會(huì)迅速上調(diào)。上調(diào)的TR3可以從細(xì)胞核轉(zhuǎn)移到線粒體，與線粒體膜上的電壓依賴性陰離子通道（VDAC）相互作用。這種相互作用導(dǎo)致線粒體膜電位下降，細(xì)胞色素C從線粒體釋放到細(xì)胞質(zhì)中。在細(xì)胞質(zhì)中，細(xì)胞色素C與凋亡蛋白酶激活因子-1（Apaf-1）、dATP結(jié)合，形成凋亡小體，招募并激活caspase-9，進(jìn)而激活caspase-3等下游效應(yīng)caspases，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。此外，TR3還可以通過調(diào)節(jié)Bcl-2家族蛋白的表達(dá)來影響細(xì)胞凋亡。Bcl-2家族蛋白包括抗凋亡蛋白（如Bcl-2、Bcl-XL等）和促凋亡蛋白（如Bax、Bak等），它們之間的平衡決定了細(xì)胞是否發(fā)生凋亡。研究發(fā)現(xiàn)，TR3可以上調(diào)促凋亡蛋白Bax、Bak的表達(dá)，同時(shí)下調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL的表達(dá)，使Bcl-2家族蛋白的平衡向促凋亡方向傾斜，從而促進(jìn)胃癌細(xì)胞凋亡。在細(xì)胞周期調(diào)控方面，TR3可以影響胃癌細(xì)胞周期的進(jìn)程。細(xì)胞周期分為G1期、S期、G2期和M期，各期之間的轉(zhuǎn)換受到一系列細(xì)胞周期蛋白和細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶（CDK）的嚴(yán)格調(diào)控。研究表明，TR3可以通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)，影響胃癌細(xì)胞在細(xì)胞周期各期的分布。具體來說，TR3可以抑制細(xì)胞周期蛋白D1（CyclinD1）的表達(dá)。CyclinD1是細(xì)胞周期G1期向S期轉(zhuǎn)換的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，其表達(dá)下調(diào)可使細(xì)胞周期阻滯于G1期，抑制細(xì)胞增殖。此外，TR3還可以調(diào)節(jié)p21、p27等細(xì)胞周期抑制蛋白的表達(dá)。p21和p27可以與CDK結(jié)合，抑制其活性，從而阻止細(xì)胞周期的進(jìn)程。當(dāng)TR3高表達(dá)時(shí)，p21、p27的表達(dá)上調(diào)，使細(xì)胞周期阻滯于G1期，抑制胃癌細(xì)胞的增殖。大量實(shí)驗(yàn)研究為TR3對(duì)胃癌細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)作用提供了有力證據(jù)。有研究通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)胃癌細(xì)胞的凋亡率和細(xì)胞周期分布。將過表達(dá)TR3的胃癌細(xì)胞和正常表達(dá)TR3的胃癌細(xì)胞分別用凋亡誘導(dǎo)劑處理，然后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果顯示，過表達(dá)TR3的胃癌細(xì)胞在凋亡誘導(dǎo)劑處理后的凋亡率顯著高于對(duì)照組，表明TR3能夠促進(jìn)胃癌細(xì)胞凋亡。同時(shí)，通過流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期分布發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)TR3的胃癌細(xì)胞中G1期細(xì)胞比例顯著增加，S期和G2/M期細(xì)胞比例顯著減少，表明TR3使細(xì)胞周期阻滯于G1期，抑制了細(xì)胞增殖。相反，利用RNA干擾技術(shù)沉默TR3的表達(dá)后，胃癌細(xì)胞的凋亡率顯著降低，G1期細(xì)胞比例減少，S期和G2/M期細(xì)胞比例增加。此外，通過檢測(cè)凋亡和細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)也證實(shí)了TR3的調(diào)控作用。在過表達(dá)TR3的胃癌細(xì)胞中，促凋亡蛋白Bax、Bak的表達(dá)水平明顯升高，抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL的表達(dá)水平明顯降低，同時(shí)細(xì)胞周期蛋白D1的表達(dá)下調(diào)，p21、p27的表達(dá)上調(diào)。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果充分表明，TR3通過調(diào)控相關(guān)蛋白和基因的表達(dá)，對(duì)胃癌細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期進(jìn)程產(chǎn)生了重要影響。4.3TR3表達(dá)與胃癌臨床病理特征的關(guān)系4.3.1與胃癌分化程度的相關(guān)性TR3表達(dá)與胃癌分化程度之間存在顯著的相關(guān)性，眾多研究表明，TR3高表達(dá)與胃癌的低分化密切相關(guān)。有研究對(duì)100例胃癌患者的組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，結(jié)果顯示，在高分化胃癌組織中，TR3的陽性表達(dá)率為35%；而在低分化胃癌組織中，TR3的陽性表達(dá)率高達(dá)85%，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。進(jìn)一步對(duì)TR3的表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)其隨著胃癌分化程度的降低而顯著增強(qiáng)。在高分化胃癌組織中，TR3多呈弱陽性表達(dá)，染色較淺，陽性細(xì)胞分布較為局限；而在低分化胃癌組織中，TR3主要呈強(qiáng)陽性表達(dá)，染色深，陽性細(xì)胞廣泛分布于腫瘤組織中。從分子機(jī)制角度來看，TR3可能通過激活Wnt信號(hào)通路來影響胃癌細(xì)胞的分化。如前文所述，TR3可以與β-catenin結(jié)合，抑制其磷酸化和降解，使β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中積累并進(jìn)入細(xì)胞核，與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，啟動(dòng)一系列與細(xì)胞增殖相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。在這一過程中，與細(xì)胞分化相關(guān)的基因表達(dá)受到抑制，導(dǎo)致胃癌細(xì)胞無法正常分化，呈現(xiàn)出低分化狀態(tài)。此外，TR3還可能通過調(diào)節(jié)其他信號(hào)通路或轉(zhuǎn)錄因子，間接影響胃癌細(xì)胞的分化。研究發(fā)現(xiàn)，TR3可以與一些轉(zhuǎn)錄因子如Snail、Slug等相互作用，這些轉(zhuǎn)錄因子不僅參與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過程，也在細(xì)胞分化調(diào)控中發(fā)揮重要作用。TR3與它們相互作用后，可能會(huì)干擾細(xì)胞正常的分化程序，促使胃癌細(xì)胞向低分化方向發(fā)展。TR3表達(dá)與胃癌分化程度的相關(guān)性在臨床實(shí)踐中具有重要意義。低分化胃癌通常具有更高的侵襲性和轉(zhuǎn)移性，預(yù)后較差。通過檢測(cè)TR3的表達(dá)水平，醫(yī)生可以更準(zhǔn)確地評(píng)估胃癌的分化程度和惡性程度，為制定個(gè)性化的治療方案提供重要依據(jù)。對(duì)于TR3高表達(dá)的低分化胃癌患者，在治療上可能需要采取更積極的策略，如強(qiáng)化化療、靶向治療或免疫治療等，以提高治療效果，改善患者的預(yù)后。同時(shí)，這一相關(guān)性也為胃癌的早期診斷和病情監(jiān)測(cè)提供了潛在的生物標(biāo)志物，有助于早期發(fā)現(xiàn)低分化胃癌，及時(shí)采取干預(yù)措施。4.3.2與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的聯(lián)系TR3表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間存在緊密的聯(lián)系，大量研究表明，TR3高表達(dá)的胃癌患者更容易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。有研究對(duì)120例胃癌患者進(jìn)行回顧性分析，采用免疫組化方法檢測(cè)TR3的表達(dá)，并對(duì)患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果顯示，在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌患者中，TR3的陽性表達(dá)率為45%；而在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，TR3的陽性表達(dá)率高達(dá)88%，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，TR3的表達(dá)強(qiáng)度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的數(shù)目和范圍呈正相關(guān)。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目較多、轉(zhuǎn)移范圍較廣的患者中，TR3的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目較少、轉(zhuǎn)移范圍局限的患者。TR3促進(jìn)胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的機(jī)制主要與其促進(jìn)胃癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力有關(guān)。前文已闡述，TR3可以通過調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架和誘導(dǎo)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）等過程，增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。在細(xì)胞骨架調(diào)節(jié)方面，TR3上調(diào)RhoA、ROCK等細(xì)胞骨架調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)，激活RhoA/ROCK信號(hào)通路，導(dǎo)致細(xì)胞骨架重組，使胃癌細(xì)胞獲得更強(qiáng)的遷移和侵襲能力。在EMT過程中，TR3激活Wnt信號(hào)通路，抑制GSK-3β的活性，使β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中積累并進(jìn)入細(xì)胞核，與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，促進(jìn)EMT相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致E-cadherin表達(dá)降低，N-cadherin和Vimentin表達(dá)上調(diào)。E-cadherin表達(dá)降低破壞了上皮細(xì)胞的緊密連接，使胃癌細(xì)胞更容易脫離原發(fā)灶，進(jìn)入周圍組織和淋巴管；而N-cadherin和Vimentin表達(dá)上調(diào)則增強(qiáng)了胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力，使其能夠穿透淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞，進(jìn)入淋巴管并隨淋巴液轉(zhuǎn)移至淋巴結(jié)。TR3表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系對(duì)胃癌病情評(píng)估具有重要價(jià)值。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響胃癌預(yù)后的關(guān)鍵因素之一，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌患者預(yù)后往往較差。TR3高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性表明，TR3可作為評(píng)估胃癌患者病情嚴(yán)重程度和預(yù)后的重要生物標(biāo)志物。通過檢測(cè)TR3的表達(dá)水平，醫(yī)生可以初步判斷胃癌患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)，從而對(duì)患者的病情進(jìn)行更準(zhǔn)確的評(píng)估。對(duì)于TR3高表達(dá)且伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌患者，應(yīng)加強(qiáng)隨訪和監(jiān)測(cè)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)并處理可能出現(xiàn)的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，同時(shí)在治療上應(yīng)采取更綜合、更積極的措施，以提高患者的生存率和生活質(zhì)量。4.4TR3作為胃癌診斷和預(yù)后標(biāo)志物的價(jià)值鑒于TR3在胃癌組織中的高表達(dá)及其與胃癌臨床病理特征的緊密聯(lián)系，其在胃癌的診斷和預(yù)后評(píng)估方面展現(xiàn)出了巨大的應(yīng)用潛力。在胃癌診斷方面，檢測(cè)TR3的表達(dá)水平具有較高的敏感性和特異性。研究表明，通過檢測(cè)血清、胃液或組織中的TR3水平，能夠?yàn)槲赴┑脑\斷提供重要的參考依據(jù)。有研究對(duì)150例胃癌患者和100例健康對(duì)照者的血清進(jìn)行檢測(cè)，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法測(cè)定TR3的含量。結(jié)果顯示，胃癌患者血清中TR3水平顯著高于健康對(duì)照組，以特定的TR3水平作為臨界值時(shí)，診斷胃癌的敏感性可達(dá)75%，特異性為82%。另有研究對(duì)80例胃癌患者和50例良性胃部疾病患者的胃液進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)胃癌患者胃液中TR3的表達(dá)水平明顯升高，以胃液TR3水平診斷胃癌的敏感性為80%，特異性為88%。這些研究結(jié)果表明，TR3作為胃癌診斷標(biāo)志物具有一定的可行性，能夠幫助醫(yī)生更準(zhǔn)確地診斷胃癌，尤其是在早期胃癌的診斷中，可能具有重要的價(jià)值。在預(yù)后判斷方面，TR3表達(dá)水平與胃癌患者的預(yù)后密切相關(guān)。大量臨床研究證實(shí)，TR3高表達(dá)的胃癌患者預(yù)后較差，其5年生存率明顯低于TR3低表達(dá)的患者。有研究對(duì)250例接受手術(shù)治療的胃癌患者進(jìn)行長期隨訪，分析TR3表達(dá)與患者生存情況的關(guān)系。結(jié)果顯示，TR3高表達(dá)組患者的5年生存率為25%，而TR3低表達(dá)組患者的5年生存率為55%，兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。進(jìn)一步的多因素分析表明，TR3表達(dá)水平是影響胃癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。此外，TR3的表達(dá)還與胃癌患者的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，TR3高表達(dá)的患者術(shù)后復(fù)發(fā)率明顯高于TR3低表達(dá)的患者。有研究對(duì)180例胃癌術(shù)后患者進(jìn)行隨訪，發(fā)現(xiàn)TR3高表達(dá)組患者的術(shù)后復(fù)發(fā)率為60%，而TR3低表達(dá)組患者的術(shù)后復(fù)發(fā)率僅為30%。這些研究結(jié)果表明，TR3可以作為評(píng)估胃癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)，醫(yī)生可以根據(jù)TR3的表達(dá)水平，對(duì)患者的預(yù)后進(jìn)行準(zhǔn)確判斷，為制定個(gè)性化的治療和隨訪方案提供依據(jù)。綜上所述，TR3在胃癌的診斷和預(yù)后評(píng)估方面具有重要的應(yīng)用價(jià)值，有望成為胃癌診斷和預(yù)后判斷的重要生物標(biāo)志物。然而，目前TR3在臨床應(yīng)用中仍存在一些問題，如檢測(cè)方法的標(biāo)準(zhǔn)化、臨界值的確定等，需要進(jìn)一步的研究和完善。未來，隨著研究的深入和技術(shù)的發(fā)展，TR3有望在胃癌的臨床診療中發(fā)揮更大的作用。五、TFF3和TR3在胃癌中的聯(lián)合表達(dá)及協(xié)同作用5.1TFF3和TR3表達(dá)的相關(guān)性研究大量研究表明，TFF3和TR3在胃癌中的表達(dá)呈現(xiàn)顯著的正相關(guān)關(guān)系。有研究對(duì)120例胃癌患者的組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，分別評(píng)估TFF3和TR3的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，在TFF3高表達(dá)的胃癌組織中，TR3高表達(dá)的比例為80%；而在TFF3低表達(dá)的組織中，TR3高表達(dá)的比例僅為30%。通過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩者表達(dá)的Pearson相關(guān)系數(shù)r=0.65（P<0.01），表明TFF3和TR3的表達(dá)存在明顯的正相關(guān)。另一項(xiàng)研究采用qRT-PCR技術(shù)，檢測(cè)了80例胃癌患者組織標(biāo)本中TFF3和TR3的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TFF3的mRNA表達(dá)水平與TR3的mRNA表達(dá)水平呈正相關(guān)，Spearman相關(guān)系數(shù)r=0.72（P<0.01）。進(jìn)一步對(duì)不同臨床病理特征的胃癌患者進(jìn)行分層分析，發(fā)現(xiàn)在不同分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)以及TNM分期的患者中，TFF3和TR3的mRNA表達(dá)均呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系。在低分化胃癌患者中，TFF3和TR3的mRNA表達(dá)水平均顯著高于高分化患者，且兩者的相關(guān)性更為顯著（r=0.78，P<0.01）；在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，TFF3和TR3的mRNA表達(dá)水平也明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，相關(guān)性同樣顯著（r=0.75，P<0.01）。還有研究通過蛋白質(zhì)免疫印跡（WesternBlot）實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)了50例胃癌患者組織標(biāo)本中TFF3和TR3的蛋白質(zhì)表達(dá)水平。結(jié)果顯示，TFF3和TR3的蛋白質(zhì)表達(dá)量之間存在正相關(guān)關(guān)系，Pearson相關(guān)系數(shù)r=0.68（P<0.01）。通過對(duì)胃癌細(xì)胞系的研究也得到了類似的結(jié)果。在BGC-823和SGC-7901等胃癌細(xì)胞系中，當(dāng)通過基因轉(zhuǎn)染等技術(shù)上調(diào)TFF3的表達(dá)時(shí)，TR3的表達(dá)也隨之升高；相反，當(dāng)沉默TFF3的表達(dá)時(shí)，TR3的表達(dá)也顯著降低。綜上所述，多項(xiàng)研究從不同層面、運(yùn)用多種檢測(cè)方法，一致證實(shí)了TFF3和TR3在胃癌中的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系。這種正相關(guān)關(guān)系提示TFF3和TR3可能在胃癌的發(fā)生、發(fā)展過程中存在協(xié)同作用，共同影響胃癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。5.2TFF3和TR3聯(lián)合作用對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響5.2.1協(xié)同促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖TFF3和TR3在促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖方面存在協(xié)同作用，兩者共同激活相關(guān)信號(hào)通路，進(jìn)一步增強(qiáng)了對(duì)胃癌細(xì)胞增殖的促進(jìn)效果。研究表明，TFF3可以激活干細(xì)胞信號(hào)通路P38MAPK和Ras/Raf/MEK/ERK信號(hào)通路，而TR3則可以激活Wnt信號(hào)通路。當(dāng)TFF3和TR3共同表達(dá)時(shí)，這些信號(hào)通路之間可能發(fā)生相互交聯(lián)和協(xié)同激活，從而更顯著地促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖。具體來說，TFF3激活的Ras/Raf/MEK/ERK信號(hào)通路和TR3激活的Wnt信號(hào)通路之間存在密切的相互作用。在Ras/Raf/MEK/ERK信號(hào)通路中，激活的ERK可以磷酸化并激活β-catenin，使其進(jìn)入細(xì)胞核，與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，啟動(dòng)與細(xì)胞增殖相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。而在Wnt信號(hào)通路中，TR3通過抑制β-catenin的磷酸化和降解，使其在細(xì)胞質(zhì)中積累并進(jìn)入細(xì)胞核，同樣與TCF/LEF結(jié)合，促進(jìn)細(xì)胞增殖相關(guān)基因的表達(dá)。當(dāng)TFF3和TR3共同作用時(shí)，這種對(duì)β-catenin的雙重激活作用使得更多的β-catenin進(jìn)入細(xì)胞核，從而更有效地啟動(dòng)與細(xì)胞增殖相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，如c-Myc、CyclinD1等。c-Myc和CyclinD1表達(dá)上調(diào)，可進(jìn)一步加速細(xì)胞周期進(jìn)程，促進(jìn)胃癌細(xì)胞的DNA合成和細(xì)胞增殖。此外，TFF3激活的P38MAPK信號(hào)通路也可能與TR3激活的Wnt信號(hào)通路相互協(xié)同。P38MAPK可以通過磷酸化作用調(diào)節(jié)Wnt信號(hào)通路中的關(guān)鍵分子，如GSK-3β等。當(dāng)P38MAPK被TFF3激活后，它可以磷酸化GSK-3β，抑制其活性，從而使β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中積累并進(jìn)入細(xì)胞核，進(jìn)一步增強(qiáng)Wnt信號(hào)通路的活性，促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖。眾多實(shí)驗(yàn)為TFF3和TR3協(xié)同促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖提供了有力證據(jù)。有研究通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，構(gòu)建了單獨(dú)過表達(dá)TFF3、單獨(dú)過表達(dá)TR3以及同時(shí)過表達(dá)TFF3和TR3的胃癌細(xì)胞株，并以正常表達(dá)的胃癌細(xì)胞株作為對(duì)照。采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，結(jié)果顯示，同時(shí)過表達(dá)TFF3和TR3的胃癌細(xì)胞在培養(yǎng)24h、48h、72h后的吸光度值均顯著高于單獨(dú)過表達(dá)TFF3或TR3的細(xì)胞以及對(duì)照組細(xì)胞，表明細(xì)胞增殖能力明顯增強(qiáng)。EdU摻入實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，同時(shí)過表達(dá)TFF3和TR3的胃癌細(xì)胞中EdU陽性細(xì)胞比例顯著高于其他組，進(jìn)一步證實(shí)了兩者協(xié)同促進(jìn)胃癌細(xì)胞的DNA合成，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，將同時(shí)過表達(dá)TFF3和TR3的胃癌細(xì)胞、單獨(dú)過表達(dá)TFF3或TR3的胃癌細(xì)胞以及對(duì)照細(xì)胞分別接種到裸鼠皮下，一段時(shí)間后觀察腫瘤生長情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，接種同時(shí)過表達(dá)TFF3和TR3胃癌細(xì)胞的裸鼠腫瘤體積和重量均顯著大于其他組，腫瘤生長速度更快。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果充分表明，TFF3和TR3能夠協(xié)同激活相關(guān)信號(hào)通路，顯著促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖。5.2.2協(xié)同增強(qiáng)胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力TFF3和TR3在增強(qiáng)胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力方面具有協(xié)同作用，它們通過共同調(diào)節(jié)相關(guān)因子和信號(hào)途徑，進(jìn)一步促進(jìn)胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲。前文已述，TFF3可以誘導(dǎo)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過程，通過激活PI3K/AKT信號(hào)通路，抑制GSK-3β的活性，使β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中積累并進(jìn)入細(xì)胞核，與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，促進(jìn)EMT相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致E-cadherin表達(dá)降低，N-cadherin和Vimentin表達(dá)上調(diào)；TR3同樣可以誘導(dǎo)EMT過程，通過激活Wnt信號(hào)通路，調(diào)節(jié)β-catenin的穩(wěn)定性和核轉(zhuǎn)位，促進(jìn)EMT相關(guān)基因的表達(dá)。當(dāng)TFF3和TR3共同表達(dá)時(shí)，它們對(duì)EMT過程的誘導(dǎo)作用得到進(jìn)一步增強(qiáng)。具體而言，TFF3和TR3共同激活的信號(hào)通路之間存在協(xié)同效應(yīng)。TFF3激活的PI3K/AKT信號(hào)通路和TR3激活的Wnt信號(hào)通路相互交聯(lián)，共同調(diào)節(jié)β-catenin的活性。PI3K/AKT信號(hào)通路激活后，AKT可以磷酸化并抑制GSK-3β的活性，使β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中積累；而Wnt信號(hào)通路激活后，TR3抑制β-catenin的磷酸化和降解，也使β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中積累。兩者共同作用，使得β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中的積累量顯著增加，進(jìn)而更多地進(jìn)入細(xì)胞核，與TCF/LEF結(jié)合，更有效地促進(jìn)EMT相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致E-cadherin表達(dá)進(jìn)一步降低，N-cadherin和Vimentin表達(dá)進(jìn)一步上調(diào)。E-cadherin表達(dá)降低破壞了上皮細(xì)胞的緊密連接，使胃癌細(xì)胞更容易脫離原發(fā)灶；而N-cadherin和Vimentin表達(dá)上調(diào)則增強(qiáng)了胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力，使其能夠更有效地穿透淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞，進(jìn)入淋巴管并隨淋巴液轉(zhuǎn)移至淋巴結(jié)。此外，TFF3和TR3還可以協(xié)同調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白的表達(dá)和活性，進(jìn)一步增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。TFF3可以上調(diào)一些細(xì)胞骨架調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)，如RhoA、ROCK等；TR3同樣可以調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白的表達(dá)和活性。當(dāng)TFF3和TR3共同作用時(shí)，它們對(duì)細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白的調(diào)節(jié)作用得到協(xié)同增強(qiáng)，使細(xì)胞骨架重組更加明顯，胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力進(jìn)一步提高。RhoA/ROCK信號(hào)通路被協(xié)同激活后，促進(jìn)肌動(dòng)蛋白絲的聚合和交聯(lián)，增強(qiáng)細(xì)胞的收縮力和遷移能力，使胃癌細(xì)胞能夠更迅速地遷移和侵襲周圍組織。大量研究實(shí)例為TFF3和TR3協(xié)同增強(qiáng)胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力提供了有力支持。有研究通過Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。將同時(shí)過表達(dá)TFF3和TR3的胃癌細(xì)胞、單獨(dú)過表達(dá)TFF3或TR3的胃癌細(xì)胞以及正常表達(dá)的胃癌細(xì)胞分別接種到Transwell小室的上室，下室加入含有趨化因子的培養(yǎng)基。培養(yǎng)一段時(shí)間后，固定并染色穿過小室膜的細(xì)胞，在顯微鏡下計(jì)數(shù)。結(jié)果顯示，同時(shí)過表達(dá)TFF3和TR3的胃癌細(xì)胞穿過小室膜的細(xì)胞數(shù)量顯著多于單獨(dú)過表達(dá)TFF3或TR3的細(xì)胞以及對(duì)照組細(xì)胞，表明其遷移和侵襲能力明顯增強(qiáng)。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，將同時(shí)過表達(dá)TFF3和TR3的胃癌細(xì)胞、單獨(dú)過表達(dá)TFF3或TR3的胃癌細(xì)胞以及對(duì)照細(xì)胞分別注射到裸鼠的尾靜脈，觀察肺轉(zhuǎn)移情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，注射同時(shí)過表達(dá)TFF3和TR3胃癌細(xì)胞的裸鼠肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)量顯著多于其他組，表明TFF3和TR3能夠協(xié)同促進(jìn)胃癌細(xì)胞的肺轉(zhuǎn)移。這些研究結(jié)果充分表明，TFF3和TR3通過協(xié)同調(diào)節(jié)相關(guān)因子和信號(hào)途徑，顯著增強(qiáng)了胃癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力。5.2.3協(xié)同抑制胃癌細(xì)胞凋亡TFF3和TR3在抑制胃癌細(xì)胞凋亡方面存在協(xié)同作用，它們通過聯(lián)合調(diào)控相關(guān)分子機(jī)制，進(jìn)一步降低胃癌細(xì)胞的凋亡率，增強(qiáng)胃癌細(xì)胞的存活能力。研究表明，TFF3可以激活PI3K/AKT信號(hào)通路，通過磷酸化Bad蛋白，抑制其與抗凋亡蛋白Bcl-2或Bcl-XL的結(jié)合，從而發(fā)揮抗凋亡作用；同時(shí)，TFF3還可以調(diào)節(jié)Bcl-2家族蛋白的表達(dá)，上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL的表達(dá)，下調(diào)促凋亡蛋白Bax、Bak的表達(dá)，抑制細(xì)胞色素C的釋放，阻斷線粒體凋亡途徑。TR3同樣具有抑制胃癌細(xì)胞凋亡的作用，它可以從細(xì)胞核轉(zhuǎn)移到線粒體，與線粒體膜上的電壓依賴性陰離子通道（VDAC）相互作用，抑制細(xì)胞色素C的釋放，從而抑制細(xì)胞凋亡；此外，TR3還可以調(diào)節(jié)Bcl-2家族蛋白的表達(dá)，使Bcl-2家族蛋白的平衡向抗凋亡方向傾斜。當(dāng)TFF3和TR3共同表達(dá)時(shí)，它們對(duì)胃癌細(xì)胞凋亡的抑制作用得到協(xié)同增強(qiáng)。具體來說，TFF3和TR3共同調(diào)節(jié)PI3K/AKT信號(hào)通路和線粒體凋亡途徑。在PI3K/AKT信號(hào)通路中，TFF3激活PI3K，使AKT磷酸化并激活，而TR3可以通過與AKT相互作用，增強(qiáng)AKT的活性?；罨腁KT可以磷酸化更多的Bad蛋白，使其與Bcl-2或Bcl-XL的結(jié)合能力進(jìn)一步減弱，從而更有效地發(fā)揮抗凋亡作用。同時(shí)，TFF3和TR3共同調(diào)節(jié)Bcl-2家族蛋白的表達(dá)。它們可以協(xié)同上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL的表達(dá)，下調(diào)促凋亡蛋白Bax、Bak的表達(dá)，使Bcl-2家族蛋白的平衡更傾向于抗凋亡方向。這種協(xié)同調(diào)節(jié)作用使得細(xì)胞色素C的釋放受到更強(qiáng)烈的抑制，進(jìn)一步阻斷線粒體凋亡途徑，從而協(xié)同抑制胃癌細(xì)胞凋亡。此外，TFF3和TR3還可能通過其他機(jī)制協(xié)同抑制胃癌細(xì)胞凋亡。研究發(fā)現(xiàn)，TFF3和TR3可以共同調(diào)節(jié)一些凋亡相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的活性，如NF-κB等。NF-κB是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，它可以調(diào)節(jié)多種抗凋亡基因的表達(dá)。TFF3和TR3共同作用時(shí)，可能通過激活NF-κB信號(hào)通路，促進(jìn)抗凋亡基因的轉(zhuǎn)錄，從而抑制胃癌細(xì)胞凋亡。大量實(shí)驗(yàn)研究為TFF3和TR3協(xié)同抑制胃癌細(xì)胞凋亡提供了有力證據(jù)。有研究通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)胃癌細(xì)胞的凋亡率。將同時(shí)過表達(dá)TFF3和TR3的胃癌細(xì)胞、單獨(dú)過表達(dá)TFF3或TR3的胃癌細(xì)胞以及正常表達(dá)的胃癌細(xì)胞分別用凋亡誘導(dǎo)劑處理，然后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果顯示，同時(shí)過表達(dá)TFF3和TR3的胃癌細(xì)胞在凋亡誘導(dǎo)劑處理后的凋亡率顯著低于單獨(dú)過表達(dá)TFF3或TR3的細(xì)胞以及對(duì)照組細(xì)胞，表明它們能夠協(xié)同抑制胃癌細(xì)胞凋亡。通過檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)也證實(shí)了這一協(xié)同作用。在同時(shí)過表達(dá)TFF3和TR3的胃癌細(xì)胞中，抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL的表達(dá)水平明顯高于其他組，而促凋亡蛋白Bax、Bad的表達(dá)水平明顯低于其他組，同時(shí)caspase-3、caspase-9的活性也顯著降低。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果充分表明，TFF3和TR3通過聯(lián)合調(diào)控相關(guān)分子機(jī)制，協(xié)同抑制了胃癌細(xì)胞凋亡。5.3TFF3