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人教版高中生物實(shí)驗(yàn)操作詳細(xì)步驟生物學(xué)是一門以實(shí)驗(yàn)為基礎(chǔ)的自然科學(xué),實(shí)驗(yàn)操作是高中生物學(xué)習(xí)的核心內(nèi)容之一。通過(guò)實(shí)驗(yàn),不僅能鞏固理論知識(shí),更能培養(yǎng)科學(xué)探究能力、邏輯思維和動(dòng)手操作技能。本文結(jié)合人教版高中生物教材(必修1、必修2)中的7個(gè)經(jīng)典實(shí)驗(yàn),詳細(xì)梳理實(shí)驗(yàn)原理、材料用具、操作步驟、注意事項(xiàng)及結(jié)果分析,旨在為學(xué)生提供專業(yè)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)指導(dǎo),助力實(shí)驗(yàn)成功。實(shí)驗(yàn)一觀察DNA和RNA在細(xì)胞中的分布實(shí)驗(yàn)類型:驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)(觀察核酸的分布)實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo):掌握DNA和RNA在細(xì)胞中的分布特點(diǎn);學(xué)會(huì)使用甲基綠吡羅紅混合染色劑。一、實(shí)驗(yàn)原理1.染色劑專一性:甲基綠對(duì)DNA親和力強(qiáng),可將DNA染成綠色;吡羅紅對(duì)RNA親和力強(qiáng),可將RNA染成紅色。混合染色可同時(shí)顯示兩者的分布。2.鹽酸的作用:①改變細(xì)胞膜通透性,加速染色劑進(jìn)入細(xì)胞;②使染色體中的DNA與蛋白質(zhì)分離,便于DNA與染色劑結(jié)合。二、實(shí)驗(yàn)材料生物材料:人的口腔上皮細(xì)胞(或洋蔥鱗片葉內(nèi)表皮細(xì)胞,無(wú)葉綠體,避免色素干擾);試劑:質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9%的NaCl溶液(生理鹽水)、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8%的鹽酸、甲基綠吡羅紅混合染色劑。三、實(shí)驗(yàn)用具載玻片、蓋玻片、消毒牙簽、酒精燈、燒杯(大/?。㈣囎?、吸水紙、顯微鏡。四、實(shí)驗(yàn)步驟1.制片(固定細(xì)胞)(1)取潔凈載玻片,滴1滴生理鹽水(保持細(xì)胞正常形態(tài),防止吸水漲破);(2)用消毒牙簽在漱凈的口腔內(nèi)側(cè)壁輕刮幾下(避免用力過(guò)猛損傷細(xì)胞),將碎屑均勻涂抹在生理鹽水中;(3)將載玻片在酒精燈火焰上來(lái)回移動(dòng)烘干(固定細(xì)胞,防止解離時(shí)脫落)。2.水解(處理細(xì)胞)將烘干的載玻片放入盛有8%鹽酸的小燒杯中,再將小燒杯置于30℃溫水的大燒杯中,保溫5分鐘(鹽酸發(fā)揮作用,時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞破裂)。3.沖洗(去除多余鹽酸)用緩水流(防止細(xì)胞被沖走)沖洗載玻片10秒,去除殘留的鹽酸(避免解離過(guò)度影響染色)。4.染色(顯示核酸分布)(1)用吸水紙吸去載玻片上的水分;(2)滴2滴甲基綠吡羅紅混合染色劑,染色5分鐘(混合染色可同時(shí)顯示DNA和RNA,分開滴加會(huì)導(dǎo)致染色不均勻);(3)吸去多余染色劑,蓋上蓋玻片(避免氣泡產(chǎn)生),制成臨時(shí)裝片。5.觀察(顯微鏡下觀察)(1)低倍鏡觀察:找到目標(biāo)細(xì)胞(口腔上皮細(xì)胞呈扁平狀,洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞呈長(zhǎng)方形),移至視野中央;(2)高倍鏡觀察:調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋(高倍鏡下不能調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋),使物像清晰,觀察細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的顏色分布。五、注意事項(xiàng)鹽酸濃度與時(shí)間:8%鹽酸是最佳濃度,處理時(shí)間5分鐘,過(guò)長(zhǎng)會(huì)破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu);染色劑使用:甲基綠吡羅紅需現(xiàn)配現(xiàn)用(久置會(huì)失效),且必須混合使用;烘干操作:載玻片要來(lái)回移動(dòng),避免局部過(guò)熱導(dǎo)致細(xì)胞破裂;緩水流沖洗:防止細(xì)胞被沖走,影響觀察。六、結(jié)果分析細(xì)胞核呈綠色(DNA主要分布在細(xì)胞核中);細(xì)胞質(zhì)呈紅色(RNA主要分布在細(xì)胞質(zhì)中,如核糖體、線粒體)。實(shí)驗(yàn)二檢測(cè)生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)類型:鑒定性實(shí)驗(yàn)(檢測(cè)生物組織中的有機(jī)物)實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo):掌握還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定方法;學(xué)會(huì)選擇實(shí)驗(yàn)材料。一、實(shí)驗(yàn)原理有機(jī)物鑒定試劑反應(yīng)條件實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象還原糖(如葡萄糖、果糖)斐林試劑(甲液+乙液)水浴加熱(50-65℃)磚紅色沉淀脂肪蘇丹Ⅲ染液(或蘇丹Ⅳ染液)無(wú)(需鏡檢)橘黃色(或紅色)蛋白質(zhì)雙縮脲試劑(A液+B液)無(wú)紫色二、實(shí)驗(yàn)材料還原糖:蘋果或梨勻漿(含糖量高、顏色淺,避免色素干擾);脂肪:花生種子(浸泡2-3小時(shí),便于切片);蛋白質(zhì):豆?jié){或蛋清稀釋液(蛋清需稀釋10倍,避免黏附試管壁)。三、實(shí)驗(yàn)用具試管、量筒、滴管、酒精燈、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、吸水紙。四、實(shí)驗(yàn)步驟1.還原糖的檢測(cè)(1)取2mL蘋果勻漿注入試管;(2)加入1mL斐林試劑(甲液:0.1g/mLNaOH溶液;乙液:0.05g/mLCuSO?溶液),現(xiàn)配現(xiàn)用、混合均勻(斐林試劑不穩(wěn)定,久置會(huì)生成Cu(OH)?沉淀);(3)將試管放入50-65℃溫水浴中加熱2分鐘;(4)觀察現(xiàn)象:試管中出現(xiàn)磚紅色沉淀。2.脂肪的檢測(cè)(切片法)(1)取材:取浸泡過(guò)的花生種子,去掉種皮,用刀片在子葉橫切面上切薄切片(盡量薄,便于透光),放入清水培養(yǎng)皿中;(2)制片:用毛筆選取最薄的切片,放在載玻片上,滴2滴蘇丹Ⅲ染液,染色3分鐘;用吸水紙吸去多余染液,再滴1-2滴50%酒精(洗去浮色,蘇丹Ⅲ溶于酒精,不溶于水);吸去酒精,滴1滴清水,蓋上蓋玻片;(3)觀察:低倍鏡下找到花生子葉切片,移至視野中央;高倍鏡下觀察,可見橘黃色脂肪顆粒。3.蛋白質(zhì)的檢測(cè)(1)取2mL豆?jié){注入試管;(2)加入1mL雙縮脲試劑A液(0.1g/mLNaOH溶液),搖勻(創(chuàng)造堿性環(huán)境);(3)加入4滴雙縮脲試劑B液(0.01g/mLCuSO?溶液),搖勻(B液不能過(guò)多,否則會(huì)掩蓋紫色);(4)觀察現(xiàn)象:試管中出現(xiàn)紫色。五、注意事項(xiàng)還原糖檢測(cè):不能用甘蔗(含蔗糖,非還原糖)、西瓜(色素干擾);斐林試劑需水浴加熱,不能直接酒精燈加熱;脂肪檢測(cè):花生種子需浸泡,便于切片;切片要薄,否則無(wú)法觀察到脂肪顆粒;50%酒精是洗去浮色的關(guān)鍵;蛋白質(zhì)檢測(cè):雙縮脲試劑需先加A液后加B液(A液創(chuàng)造堿性環(huán)境,B液提供Cu2?,與蛋白質(zhì)中的肽鍵反應(yīng)生成紫色絡(luò)合物);蛋清需稀釋,避免黏附試管壁。六、結(jié)果分析還原糖:磚紅色沉淀→含有還原糖;脂肪:橘黃色顆?!兄荆坏鞍踪|(zhì):紫色→含有蛋白質(zhì)。實(shí)驗(yàn)三觀察葉綠體和線粒體實(shí)驗(yàn)類型:觀察類實(shí)驗(yàn)(觀察細(xì)胞器形態(tài))實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo):掌握葉綠體和線粒體的形態(tài)與分布;學(xué)會(huì)使用健那綠染液。一、實(shí)驗(yàn)原理1.葉綠體:本身含有葉綠素,呈綠色橢球形,無(wú)需染色,可直接觀察;2.線粒體:需用健那綠染液(專一性活細(xì)胞染料)染色,染成藍(lán)綠色(健那綠可將線粒體中的細(xì)胞色素氧化酶還原為藍(lán)綠色)。二、實(shí)驗(yàn)材料葉綠體:新鮮蘚類葉片(薄,只有一層細(xì)胞,葉綠體大且少)或菠菜葉下表皮(帶少量葉肉細(xì)胞,葉綠體多);線粒體:人的口腔上皮細(xì)胞(無(wú)葉綠體,避免干擾)。三、實(shí)驗(yàn)用具顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、滴管、消毒牙簽、健那綠染液、清水。四、實(shí)驗(yàn)步驟1.葉綠體的觀察(1)取材:用鑷子取一片新鮮蘚類葉片(或撕取菠菜葉下表皮,帶少量葉肉細(xì)胞);(2)制片:將葉片放入載玻片的清水中,展平,蓋上蓋玻片(避免氣泡);(3)觀察:低倍鏡下找到葉片細(xì)胞,移至視野中央;高倍鏡下觀察葉綠體的形態(tài)(橢球形)和分布(沿細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)方向排列)。2.線粒體的觀察(1)取材:用消毒牙簽在漱凈的口腔內(nèi)側(cè)壁輕刮幾下,將碎屑涂抹在載玻片的清水中;(2)染色:滴1滴健那綠染液,染色10分鐘(健那綠是活細(xì)胞染料,時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡);(3)制片:蓋上蓋玻片,制成臨時(shí)裝片;(4)觀察:低倍鏡下找到口腔上皮細(xì)胞,移至視野中央;高倍鏡下觀察線粒體的形態(tài)(棒狀或粒狀)和分布(細(xì)胞質(zhì)中)。五、注意事項(xiàng)葉綠體觀察:蘚類葉片要保持濕潤(rùn)(避免失水萎縮);菠菜葉要撕取下表皮(帶葉肉細(xì)胞,葉綠體多);線粒體觀察:健那綠染液需現(xiàn)配現(xiàn)用(久置會(huì)失效);染色時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)(10分鐘為宜),否則細(xì)胞死亡;顯微鏡使用:高倍鏡下要調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋,使物像清晰。六、結(jié)果分析葉綠體:綠色橢球形,分布在細(xì)胞質(zhì)中,隨細(xì)胞質(zhì)流動(dòng);線粒體:藍(lán)綠色棒狀或粒狀,分布在細(xì)胞質(zhì)中(如口腔上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)邊緣)。實(shí)驗(yàn)四植物細(xì)胞的質(zhì)壁分離與復(fù)原實(shí)驗(yàn)類型:探究性實(shí)驗(yàn)(驗(yàn)證滲透作用)實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo):掌握質(zhì)壁分離與復(fù)原的原理;學(xué)會(huì)觀察植物細(xì)胞的滲透現(xiàn)象。一、實(shí)驗(yàn)原理1.滲透作用:水分子從低濃度溶液向高濃度溶液擴(kuò)散;2.原生質(zhì)層:細(xì)胞膜、液泡膜及兩層膜之間的細(xì)胞質(zhì)(相當(dāng)于半透膜);3.質(zhì)壁分離:當(dāng)外界溶液濃度高于細(xì)胞液濃度時(shí),水分子從細(xì)胞液流向外界溶液,原生質(zhì)層收縮,與細(xì)胞壁分離;4.質(zhì)壁復(fù)原:當(dāng)外界溶液濃度低于細(xì)胞液濃度時(shí),水分子從外界溶液流向細(xì)胞液,原生質(zhì)層恢復(fù)原狀。二、實(shí)驗(yàn)材料紫色洋蔥鱗片葉外表皮(有大液泡,顏色深,便于觀察液泡大小變化)。三、實(shí)驗(yàn)用具顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、滴管、蔗糖溶液(0.3g/mL,適宜濃度,不會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡)、清水。四、實(shí)驗(yàn)步驟1.制片(觀察初始狀態(tài))(1)用鑷子撕取紫色洋蔥鱗片葉外表皮(約0.5cm×0.5cm,薄而透明);(2)將表皮放入載玻片的清水中,展平,蓋上蓋玻片(避免氣泡);(3)低倍鏡觀察:找到洋蔥表皮細(xì)胞,觀察細(xì)胞形態(tài)(細(xì)胞壁與原生質(zhì)層緊貼,液泡大且呈紫色)。2.質(zhì)壁分離(處理細(xì)胞)(1)從蓋玻片一側(cè)滴加0.3g/mL蔗糖溶液,另一側(cè)用吸水紙吸引(使溶液滲透到細(xì)胞周圍);(2)低倍鏡觀察:持續(xù)觀察細(xì)胞變化,可見液泡逐漸縮?。?xì)胞液失水),紫色逐漸加深(細(xì)胞液濃度升高),原生質(zhì)層與細(xì)胞壁分離(質(zhì)壁分離)。3.質(zhì)壁復(fù)原(恢復(fù)細(xì)胞)(1)從蓋玻片一側(cè)滴加清水,另一側(cè)用吸水紙吸引(替換蔗糖溶液);(2)低倍鏡觀察:持續(xù)觀察細(xì)胞變化,可見液泡逐漸變大(細(xì)胞液吸水),紫色逐漸變淺(細(xì)胞液濃度降低),原生質(zhì)層與細(xì)胞壁重新緊貼(質(zhì)壁復(fù)原)。五、注意事項(xiàng)材料選擇:必須用成熟植物細(xì)胞(有大液泡),如紫色洋蔥外表皮(顏色深,便于觀察);蔗糖溶液濃度:0.3g/mL是適宜濃度,濃度過(guò)高(如0.5g/mL)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡(無(wú)法復(fù)原),濃度過(guò)低(如0.1g/mL)不會(huì)發(fā)生質(zhì)壁分離;操作技巧:滴加溶液時(shí)要從蓋玻片一側(cè)加,另一側(cè)吸,使溶液均勻滲透;觀察時(shí)要持續(xù)跟蹤同一個(gè)細(xì)胞(避免誤差)。六、結(jié)果分析質(zhì)壁分離:液泡縮小、紫色加深、原生質(zhì)層與細(xì)胞壁分離→外界溶液濃度>細(xì)胞液濃度;質(zhì)壁復(fù)原:液泡變大、紫色變淺、原生質(zhì)層與細(xì)胞壁緊貼→外界溶液濃度<細(xì)胞液濃度。實(shí)驗(yàn)五探究酶的高效性和專一性實(shí)驗(yàn)類型:探究性實(shí)驗(yàn)(驗(yàn)證酶的特性)實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo):掌握酶的高效性(與無(wú)機(jī)催化劑對(duì)比)和專一性(催化特定底物);學(xué)會(huì)控制變量。一、實(shí)驗(yàn)原理1.高效性:酶的催化效率遠(yuǎn)高于無(wú)機(jī)催化劑(如過(guò)氧化氫酶催化H?O?分解的速率比FeCl?高10?-1013倍);2.專一性:酶只能催化特定底物(如淀粉酶只能催化淀粉水解,不能催化蔗糖水解)。二、實(shí)驗(yàn)材料高效性:新鮮肝臟研磨液(含過(guò)氧化氫酶)、FeCl?溶液(無(wú)機(jī)催化劑)、3%H?O?溶液;專一性:淀粉酶溶液、淀粉溶液、蔗糖溶液、斐林試劑。三、實(shí)驗(yàn)用具試管、量筒、滴管、酒精燈、燒杯、溫度計(jì)。四、實(shí)驗(yàn)步驟1.探究酶的高效性(1)取2支潔凈試管,編號(hào)為1號(hào)、2號(hào);(2)向1號(hào)試管加入2mL3%H?O?溶液+1mL新鮮肝臟研磨液;(3)向2號(hào)試管加入2mL3%H?O?溶液+1mLFeCl?溶液(對(duì)照);(4)觀察現(xiàn)象:1號(hào)試管氣泡產(chǎn)生速率遠(yuǎn)快于2號(hào)試管(酶的高效性)。2.探究酶的專一性(1)取2支潔凈試管,編號(hào)為A號(hào)、B號(hào);(2)向A號(hào)試管加入2mL淀粉溶液+1mL淀粉酶溶液;(3)向B號(hào)試管加入2mL蔗糖溶液+1mL淀粉酶溶液(對(duì)照);(4)將兩支試管置于37℃溫水中保溫10分鐘(淀粉酶的最適溫度是37℃);(5)向兩支試管各加入1mL斐林試劑,水浴加熱2分鐘;(6)觀察現(xiàn)象:A號(hào)試管出現(xiàn)磚紅色沉淀(淀粉水解為還原糖),B號(hào)試管無(wú)明顯現(xiàn)象(蔗糖未水解)(酶的專一性)。五、注意事項(xiàng)高效性實(shí)驗(yàn):肝臟要新鮮(過(guò)氧化氫酶活性高,久置會(huì)被分解);H?O?溶液要新鮮(避免自行分解);專一性實(shí)驗(yàn):控制變量(淀粉和蔗糖溶液濃度相同、淀粉酶溶液量相同、保溫時(shí)間相同);斐林試劑需水浴加熱;安全注意:H?O?溶液有腐蝕性,避免接觸皮膚;肝臟研磨液要現(xiàn)制現(xiàn)用(防止酶失活)。六、結(jié)果分析高效性:1號(hào)試管氣泡多、速率快→酶的催化效率高于無(wú)機(jī)催化劑;專一性:A號(hào)試管磚紅色沉淀→淀粉酶催化淀粉水解;B號(hào)試管無(wú)沉淀→淀粉酶不能催化蔗糖水解→酶具有專一性。實(shí)驗(yàn)六綠葉中色素的提取和分離實(shí)驗(yàn)類型:分離類實(shí)驗(yàn)(提取并分離葉綠體色素)實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo):掌握色素的提取和分離方法;了解色素的種類和含量。一、實(shí)驗(yàn)原理1.提?。喝~綠體中的色素溶于有機(jī)溶劑(如無(wú)水乙醇),不溶于水,可用無(wú)水乙醇提取色素;2.分離:紙層析法(色素在層析液中的溶解度不同,溶解度高的擴(kuò)散速度快,反之則慢,從而分離)。二、實(shí)驗(yàn)材料新鮮菠菜葉(或青菜葉,色素含量高)。三、實(shí)驗(yàn)用具研缽、漏斗、濾紙、試管、棉塞、量筒、滴管、層析液(石油醚+丙酮+苯,現(xiàn)配現(xiàn)用)、二氧化硅(SiO?,研磨充分)、碳酸鈣(CaCO?,保護(hù)葉綠素,防止被破壞)。四、實(shí)驗(yàn)步驟1.提取色素(1)取5g新鮮菠菜葉,剪碎,放入研缽中;(2)加入少許SiO?(研磨充分)、CaCO?(保護(hù)葉綠素)和10mL無(wú)水乙醇(提取色素);(3)快速研磨(避免無(wú)水乙醇揮發(fā)),直至研成勻漿;(4)用單層尼龍布過(guò)濾(去除殘?jiān)?,收集濾液(色素提取液),置于試管中,用棉塞塞緊(防止無(wú)水乙醇揮發(fā))。2.制備濾紙條(1)取一張干燥的定性濾紙,剪成長(zhǎng)10cm、寬1cm的濾紙條;(2)在濾紙條一端剪去兩角(防止層析時(shí)色素?cái)U(kuò)散不均勻);(3)在濾紙條距剪角端1cm處用鉛筆劃一條細(xì)橫線(濾液線位置)。3.畫濾液線用毛細(xì)吸管吸取少量色素提取液,沿鉛筆線細(xì)而直地畫一條濾液線(避免色素?cái)U(kuò)散);待濾液線干燥后,重復(fù)畫2-3次(增加色素含量,使分離效果更明顯)。4.分離色素(1)將層析液倒入試管中,液面高度不能超過(guò)濾液線(防止色素溶解在層析液中);(2)將濾紙條輕輕插入層析液中,濾液線一端朝下,用棉塞塞緊試管口(防止層析液揮發(fā));(3)靜置5-10分鐘,待色素分離后,取出濾紙條,晾干。5.觀察色素帶濾紙條上會(huì)出現(xiàn)四條色素帶,從上到下依次是:胡蘿卜素(橙黃色,溶解度最高,擴(kuò)散最快);葉黃素(黃色,溶解度次之);葉綠素a(藍(lán)綠色,含量最多,擴(kuò)散較慢);葉綠素b(黃綠色,溶解度最低,擴(kuò)散最慢)。五、注意事項(xiàng)提取色素:SiO?和CaCO?的用量要少(過(guò)多會(huì)影響濾液濃度);無(wú)水乙醇要足量(避免色素提取不充分);研磨要快速(防止無(wú)水乙醇揮發(fā));制備濾紙條:剪角要整齊(防止色素?cái)U(kuò)散不均勻);濾液線要細(xì)而直(避免色素重疊);分離色素:層析液不能沒過(guò)濾液線(否則色素溶解在層析液中,無(wú)法分離);試管要密封(防止層析液揮發(fā),有害健康);色素帶分析:葉綠素a含量最多(藍(lán)綠色帶最寬),胡蘿卜素含量最少(橙黃色帶最窄)。六、結(jié)果分析四條色素帶:說(shuō)明葉綠體中含有四種色素(胡蘿卜素、葉黃素、葉綠素a、葉綠素b);色素帶寬度:反映色素含量(葉綠素a>葉綠素b>葉黃素>胡蘿卜素);色素帶位置:反映溶解度(胡蘿卜素>葉黃素>葉綠素a>葉綠素b)。實(shí)驗(yàn)七觀察根尖分生區(qū)細(xì)胞的有絲分裂實(shí)驗(yàn)類型:觀察類實(shí)驗(yàn)(觀察細(xì)胞分裂過(guò)程)實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo):掌握有絲分裂的裝片制作方法;識(shí)別有絲分裂的不同時(shí)期。一、實(shí)驗(yàn)原理1.解離:用鹽酸和酒精混合液(1:1)解離根尖,使細(xì)胞相互分離;2.染色:用龍膽紫或醋酸洋紅染液染色,使染色體呈深色(便于觀察);3.壓片:用拇指按壓載玻片,使細(xì)胞分散成單層(避免重疊);4.觀察:分生區(qū)細(xì)胞(呈正方形、排列緊密、有的細(xì)胞處于分裂期)的有絲分裂過(guò)程。二、實(shí)驗(yàn)材料洋蔥根尖(分生區(qū)細(xì)胞分裂旺盛,位于根尖頂端2-3mm處)。三、實(shí)驗(yàn)用具顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、滴管、解離液(鹽酸+酒精=1:1)、染色液(龍膽紫染液或醋酸洋紅染液)、清水、培養(yǎng)皿。四、實(shí)驗(yàn)步驟1.解離(分散細(xì)胞)(1)取洋蔥根尖2-3mm(分生區(qū)),放入盛有解離液的培養(yǎng)皿中,解離3-5分鐘(時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞破碎,過(guò)短則細(xì)胞不分散);(2)用鑷子取出根尖,放入盛有清水的培養(yǎng)皿中,漂洗10分鐘(去除解離液,防止解離過(guò)度,影響染色)。2.染色(顯示染色體)將根尖放入盛有龍膽紫染液的培養(yǎng)皿中,染色3-5分鐘(染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致顏色太深,影響觀察;過(guò)短則染色體不明顯)。3.制片(分散細(xì)胞)(1)用鑷子取出根尖,放在載玻片上,滴1滴清水;(2)用鑷子將根尖弄碎(分散細(xì)胞),蓋上蓋玻片;(3)用拇指輕壓蓋玻片(避免壓碎蓋玻片),使細(xì)胞分散成單層(便于觀察)。4.觀察(顯微鏡下觀察)(1)低倍鏡觀察:找到根尖分生區(qū)細(xì)胞(呈正方形、排列緊密、有的細(xì)胞處于分裂期),移至視野中央;(2)高倍鏡觀察:調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋,使物像清晰,識(shí)別有絲分裂的不同時(shí)期(間期:細(xì)胞核大,染色質(zhì)疏松;前期:染色體出現(xiàn),核膜解體;中期:染色體排列在赤道板上;后期:染色體著絲點(diǎn)分裂,姐妹染色單體分開;末期:染色體解螺旋,核膜重建)。五、注意事項(xiàng)取材時(shí)間:洋蔥根尖分生區(qū)細(xì)胞分裂旺盛的時(shí)間是上午10點(diǎn)至下午2點(diǎn)(此時(shí)分裂期細(xì)胞多,便于觀察);解離時(shí)間:3-5分鐘,過(guò)長(zhǎng)會(huì)破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu),過(guò)短則細(xì)胞不分散;漂洗時(shí)間:10分鐘,充分去除解離液,避免影響染色;染色時(shí)間:3-5分鐘,過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)
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