152024-02-23發(fā)布本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會（SAM/TC1I瘤胃微生物體外培養(yǎng)操作規(guī)程GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和4.2試劑配制1準(zhǔn)確稱量氯化鈣13.20g，氯化錳10.00g，氯化鈷1.00g，氯化鐵8.00g，溶解后定容到100mL。準(zhǔn)確稱取碳酸氫銨4.00g，碳酸氫鈉35.00g，溶解后定容至準(zhǔn)確稱取磷酸二氫鈉5.70g，磷酸二氫鉀6.20g，硫酸鎂0.60g，溶解后定容到15.3干燥箱：RT+10℃~250℃,控溫精度±5℃。5.4ANKOMRFS體外產(chǎn)氣測量系統(tǒng)：模塊數(shù)量18個以上，250mL培養(yǎng)瓶。）：5.6pH計：測量范圍0～14，精度±0.1。6.2瘤胃緩沖液配制474mL水中，通入CO2至飽和，并保存在39℃水浴恒溫培養(yǎng)箱中，最后再加入49.5mL還原劑溶液，加6.3瘤胃液的制備選擇健康、體重接近的3只（頭）裝有永久性瘤胃瘺管的供試動物，單欄飼養(yǎng)。在晨飼前經(jīng)瘤胃瘺保溫容器中。用攪拌器攪拌2min，混合均勻后經(jīng)4層紗布過濾，同時通入CO26.4培養(yǎng)裝置的準(zhǔn)備2每個培養(yǎng)瓶中加入培養(yǎng)底物約0.5g（準(zhǔn)確至0.0001g），每種培養(yǎng)底物設(shè)3個重復(fù)，每6.5培養(yǎng)每個培養(yǎng)瓶中迅速加入20mL瘤胃液。瘤胃培養(yǎng)液通入CO23min，立即擰上瓶蓋，放入39.5℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)箱的震蕩頻率為15次/分，持續(xù)培養(yǎng)3A.1瘤胃微生物體外培養(yǎng)的操作瘤胃微生物體外培養(yǎng)的操作包括6個步驟見圖A.1，在瘤胃微生物體外培養(yǎng)過程中進(jìn)行產(chǎn)氣量的記錄，培養(yǎng)完成后，可以進(jìn)行pH值測定、氨氮和揮發(fā)性脂肪酸的測定和營養(yǎng)物質(zhì)消失率的測A.2體外培養(yǎng)參數(shù)利用產(chǎn)氣測量系統(tǒng)每隔60s記錄產(chǎn)氣模塊內(nèi)的氣體壓力變化，最后由樣品模塊內(nèi)壓力減去空白模塊內(nèi)壓力得到，計算出0.5h、1h、2h、3h、4h、5h、6h、8h、10h、12h、16h、18h、24h、28h、32h、36h、40h、4發(fā)酵至48h時，打開培養(yǎng)瓶采集培養(yǎng)液樣品10mL，立即用pH計測定培養(yǎng)液pH值。pH值的適宜范圍取剩余培養(yǎng)殘渣烘干后，測定相關(guān)營養(yǎng)物質(zhì)的含量，計算營養(yǎng)物質(zhì)Y——代表試樣中某一營養(yǎng)物質(zhì)