VEGF-C與NM23：甲狀腺癌診療新視角下的關(guān)鍵標(biāo)志物探索一、引言1.1研究背景與意義1.1.1甲狀腺癌現(xiàn)狀甲狀腺癌是最常見的內(nèi)分泌系統(tǒng)惡性腫瘤，其發(fā)病率在全球范圍內(nèi)呈顯著上升趨勢。國際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的《全球癌癥統(tǒng)計(jì)報(bào)告》數(shù)據(jù)顯示，2020年全球甲狀腺癌新發(fā)病例約為82.1萬，其中女性發(fā)病例數(shù)為44.9萬，年齡標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)病率達(dá)10.1例/10萬人；男性發(fā)病例數(shù)為13.7萬，年齡標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)病率為3.1例/10萬人。在全球癌癥發(fā)病譜中，甲狀腺癌的排名不斷攀升，已然成為一個(gè)不容忽視的公共衛(wèi)生問題。從地域分布來看，甲狀腺癌的發(fā)病情況存在明顯的地區(qū)差異。東亞地區(qū)是甲狀腺癌的高發(fā)區(qū)域，其中韓國的甲狀腺癌發(fā)病率尤為突出。在過去幾十年間，韓國甲狀腺癌的發(fā)病率急劇上升，這一現(xiàn)象與大規(guī)模的甲狀腺超聲篩查密切相關(guān)。由于篩查技術(shù)的廣泛應(yīng)用，許多原本難以發(fā)現(xiàn)的微小甲狀腺癌被檢測出來，使得韓國甲狀腺癌的發(fā)病率大幅增長。中國同樣面臨著甲狀腺癌發(fā)病率快速上升的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。國家癌癥中心發(fā)布的數(shù)據(jù)表明，我國甲狀腺癌的發(fā)病率在過去幾十年間增長迅速，2016年中國甲狀腺癌發(fā)病率已達(dá)14.65/10萬，在惡性腫瘤發(fā)病率排行中位居前列，其中女性的發(fā)病率明顯高于男性，男女比例約為1:3，且主要好發(fā)于20-40歲的年齡段。甲狀腺癌新發(fā)病例數(shù)占全球新發(fā)病例的15.6%，死亡數(shù)占13.8%，疾病負(fù)擔(dān)沉重。部分沿海地區(qū)的縣市，甲狀腺癌發(fā)病率的上升趨勢更為顯著，這可能與環(huán)境因素、生活方式以及醫(yī)療篩查手段的普及等多種因素有關(guān)。甲狀腺癌的高發(fā)病率給患者及其家庭帶來了沉重的負(fù)擔(dān)。對(duì)于患者而言，不僅要承受疾病本身帶來的身體痛苦，如腫瘤增大可能壓迫氣管導(dǎo)致呼吸困難、壓迫食管引起吞咽困難、侵犯喉返神經(jīng)造成聲音嘶啞等，還要面臨癌癥診斷帶來的巨大心理壓力，產(chǎn)生焦慮、恐懼、抑郁等負(fù)面情緒，這些心理問題嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。同時(shí)，甲狀腺癌的治療通常需要耗費(fèi)大量的醫(yī)療資源和費(fèi)用，包括手術(shù)治療、放射性碘治療、內(nèi)分泌治療等，這給家庭帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。從社會(huì)層面來看，甲狀腺癌發(fā)病率的上升也對(duì)公共衛(wèi)生資源造成了較大壓力。隨著患者數(shù)量的不斷增加，醫(yī)療系統(tǒng)需要投入更多的人力、物力和財(cái)力來應(yīng)對(duì)甲狀腺癌的診斷、治療和隨訪工作。這不僅增加了醫(yī)院的工作負(fù)荷，也對(duì)醫(yī)保體系構(gòu)成了挑戰(zhàn)，如何合理分配醫(yī)療資源，提高甲狀腺癌的診療效率和質(zhì)量，成為亟待解決的問題。此外，甲狀腺癌患者的康復(fù)和重返社會(huì)也需要社會(huì)各界的支持和關(guān)注，包括提供心理支持、職業(yè)康復(fù)指導(dǎo)等。甲狀腺癌的高發(fā)病率及其帶來的嚴(yán)重疾病負(fù)擔(dān)，使其成為全球范圍內(nèi)的重要研究課題。深入探究甲狀腺癌的發(fā)病機(jī)制、尋找有效的診斷和治療方法、提高患者的生存率和生活質(zhì)量，已成為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的當(dāng)務(wù)之急。1.1.2VEGF-C和NM23研究意義在甲狀腺癌的研究中，尋找有效的生物標(biāo)志物對(duì)于疾病的早期診斷、治療方案的選擇以及預(yù)后評(píng)估具有至關(guān)重要的意義。血管內(nèi)皮生長因子C（VEGF-C）和腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因23（NM23）作為近年來備受關(guān)注的生物標(biāo)志物，在甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。VEGF-C是一種重要的血管內(nèi)皮生長因子，其主要功能是促進(jìn)新血管生成和淋巴管生成。在腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移過程中，新生血管和淋巴管為腫瘤細(xì)胞提供了必要的營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣，同時(shí)也為腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散提供了途徑。眾多研究表明，VEGF-C在甲狀腺癌組織中的表達(dá)水平明顯高于正常甲狀腺組織，且其高表達(dá)與甲狀腺癌的晚期階段、低分化程度密切相關(guān)。例如，在甲狀腺乳頭狀癌中，VEGF-C陽性的患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生率顯著高于VEGF-C陰性的患者，這表明VEGF-C的表達(dá)水平與甲狀腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可作為預(yù)測甲狀腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的重要指標(biāo)。此外，VEGF-C還與甲狀腺腫瘤細(xì)胞的凋亡和轉(zhuǎn)移相關(guān)，通過調(diào)節(jié)VEGF-C的表達(dá)或其信號(hào)通路，有可能抑制腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移，為甲狀腺癌的治療提供新的靶點(diǎn)。NM23是一種核酸結(jié)合蛋白，被廣泛認(rèn)為是一種腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因。在甲狀腺癌中，NM23的表達(dá)情況與腫瘤的轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，NM23在甲狀腺癌中的表達(dá)顯著低于甲狀腺良性病變，其低表達(dá)與甲狀腺癌的腫瘤分化程度低、惡性程度高以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)。因此，NM23不僅可以作為甲狀腺癌與良性病變的鑒別診斷指標(biāo)，還有助于區(qū)分甲狀腺癌的惡性程度，對(duì)于評(píng)估患者的預(yù)后具有重要價(jià)值。通過檢測NM23的表達(dá)水平，醫(yī)生可以更準(zhǔn)確地判斷患者的病情，為制定個(gè)性化的治療方案提供依據(jù)。VEGF-C和NM23在甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后等方面具有重要的臨床意義。深入研究這兩個(gè)生物標(biāo)志物，不僅有助于揭示甲狀腺癌的發(fā)病機(jī)制，還能為甲狀腺癌的早期診斷、精準(zhǔn)治療和預(yù)后判斷提供新的思路和方法，具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀近年來，國內(nèi)外學(xué)者圍繞VEGF-C和NM23在甲狀腺癌中的表達(dá)及臨床意義開展了廣泛研究，取得了一系列重要成果。國外方面，眾多研究表明VEGF-C在甲狀腺癌的淋巴管生成和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中扮演關(guān)鍵角色。一項(xiàng)發(fā)表于《CancerResearch》的研究，通過對(duì)大量甲狀腺癌組織樣本的分析，發(fā)現(xiàn)VEGF-C的高表達(dá)與甲狀腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。在甲狀腺乳頭狀癌患者中，VEGF-C陽性表達(dá)的患者，其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生率遠(yuǎn)高于VEGF-C陰性表達(dá)的患者，這為甲狀腺癌的預(yù)后評(píng)估提供了重要參考。關(guān)于NM23，國外研究顯示，它在抑制甲狀腺癌轉(zhuǎn)移方面發(fā)揮著重要作用。有研究檢測了甲狀腺癌和甲狀腺良性病變組織中NM23mRNA和蛋白的表達(dá)水平，結(jié)果表明NM23在甲狀腺癌中的表達(dá)顯著低于良性病變，且其低表達(dá)與甲狀腺癌的腫瘤分化程度低、惡性程度高密切相關(guān)，這提示NM23可作為鑒別甲狀腺癌與良性病變的重要指標(biāo)。國內(nèi)的研究也在不斷深入。有學(xué)者運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法，對(duì)甲狀腺乳頭狀癌組織中VEGF-C和NM23的表達(dá)情況進(jìn)行檢測，并與臨床病理參數(shù)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。結(jié)果顯示，VEGF-C表達(dá)陽性率與甲狀腺乳頭狀癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，而NM23表達(dá)陽性率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)了這兩個(gè)生物標(biāo)志物在甲狀腺癌侵襲轉(zhuǎn)移過程中的重要作用。另一項(xiàng)研究則從分子機(jī)制層面探討了VEGF-C和NM23在甲狀腺癌中的相互關(guān)系，發(fā)現(xiàn)兩者可能通過某些信號(hào)通路相互影響，共同調(diào)控甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展，但具體機(jī)制仍有待進(jìn)一步明確。盡管國內(nèi)外在VEGF-C和NM23與甲狀腺癌的研究方面取得了一定進(jìn)展，但仍存在一些不足之處?，F(xiàn)有研究多集中在分析VEGF-C和NM23的表達(dá)與甲狀腺癌臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性，對(duì)于其在甲狀腺癌發(fā)生發(fā)展過程中的具體分子機(jī)制研究還不夠深入，尤其是兩者之間的協(xié)同作用機(jī)制尚不明確。此外，雖然已明確VEGF-C和NM23可作為甲狀腺癌預(yù)后評(píng)估的潛在生物標(biāo)志物，但在臨床實(shí)踐中，如何將其準(zhǔn)確應(yīng)用于甲狀腺癌的早期診斷、個(gè)性化治療方案制定以及預(yù)后監(jiān)測，還缺乏統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范，相關(guān)研究仍有待加強(qiáng)?；谏鲜鲅芯楷F(xiàn)狀，本研究旨在進(jìn)一步深入探討VEGF-C和NM23在甲狀腺癌中的表達(dá)及其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系，通過大樣本的臨床研究和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，明確兩者在甲狀腺癌發(fā)生發(fā)展中的具體作用機(jī)制，為甲狀腺癌的早期診斷、精準(zhǔn)治療和預(yù)后評(píng)估提供更為可靠的理論依據(jù)和實(shí)踐指導(dǎo)。1.3研究目的與創(chuàng)新點(diǎn)1.3.1研究目的本研究旨在深入探究VEGF-C和NM23在甲狀腺癌中的表達(dá)情況，明確其與甲狀腺癌臨床病理參數(shù)之間的內(nèi)在聯(lián)系，為甲狀腺癌的早期診斷、治療方案的制定以及預(yù)后評(píng)估提供更為精準(zhǔn)的理論依據(jù)。具體而言，研究目的包括以下幾個(gè)方面：明確表達(dá)水平：通過免疫組織化學(xué)等技術(shù)手段，精確檢測VEGF-C和NM23在甲狀腺癌組織及正常甲狀腺組織中的表達(dá)水平，分析兩者在不同組織中的表達(dá)差異，從而初步判斷其與甲狀腺癌發(fā)生的相關(guān)性。分析關(guān)聯(lián)：全面收集甲狀腺癌患者的臨床病理資料，包括腫瘤大小、病理類型、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等，深入分析VEGF-C和NM23的表達(dá)與這些臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，找出影響甲狀腺癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因素。探討聯(lián)合檢測意義：研究VEGF-C和NM23聯(lián)合檢測在甲狀腺癌診斷和預(yù)后評(píng)估中的價(jià)值，評(píng)估兩者聯(lián)合檢測是否能提高對(duì)甲狀腺癌的診斷效能和預(yù)后判斷的準(zhǔn)確性，為臨床實(shí)踐提供更有效的檢測指標(biāo)和方法。1.3.2創(chuàng)新點(diǎn)本研究在甲狀腺癌的研究領(lǐng)域具有一定的創(chuàng)新性，主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：聯(lián)合檢測：以往的研究大多單獨(dú)探討VEGF-C或NM23與甲狀腺癌的關(guān)系，本研究將兩者結(jié)合起來進(jìn)行聯(lián)合檢測和分析，從多個(gè)角度揭示甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，為臨床診斷和治療提供更全面的信息。通過聯(lián)合檢測，可以更準(zhǔn)確地評(píng)估患者的病情，提高診斷的準(zhǔn)確性和可靠性，為個(gè)性化治療方案的制定提供有力支持。多維度分析：不僅關(guān)注VEGF-C和NM23在甲狀腺癌組織中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性，還從分子機(jī)制層面深入探討兩者在甲狀腺癌發(fā)生發(fā)展過程中的相互作用，以及它們對(duì)甲狀腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。這種多維度的分析方法有助于更深入地理解甲狀腺癌的發(fā)病機(jī)制，為尋找新的治療靶點(diǎn)和治療策略提供理論基礎(chǔ)。潛在治療靶點(diǎn)：基于對(duì)VEGF-C和NM23在甲狀腺癌中作用機(jī)制的研究，有望發(fā)現(xiàn)新的潛在治療靶點(diǎn)，為甲狀腺癌的靶向治療提供新的思路和方向。通過干預(yù)這些潛在靶點(diǎn)，可以更精準(zhǔn)地抑制甲狀腺癌細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移，提高治療效果，為患者帶來更多的生存獲益。二、相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1甲狀腺癌概述甲狀腺癌是一種起源于甲狀腺濾泡上皮或?yàn)V泡旁細(xì)胞的惡性腫瘤，在頭頸部惡性腫瘤中較為常見。近年來，其發(fā)病率呈顯著上升趨勢，已成為內(nèi)分泌系統(tǒng)中最為常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅著人類的健康。甲狀腺癌的發(fā)病與多種因素相關(guān)，其中輻射暴露是一個(gè)重要的危險(xiǎn)因素。研究表明，長期暴露于電離輻射，如核電站事故、醫(yī)療輻射等，會(huì)顯著增加甲狀腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。兒童時(shí)期的甲狀腺對(duì)輻射更為敏感，受到輻射后發(fā)生甲狀腺癌的可能性更高。遺傳因素在甲狀腺癌的發(fā)病中也起著關(guān)鍵作用，大約5%-10%的甲狀腺癌具有家族遺傳性，如甲狀腺髓樣癌常與RET基因突變相關(guān)，家族性非髓樣甲狀腺癌則與多種基因的突變或多態(tài)性有關(guān)。此外，碘攝入異常、激素水平失衡以及某些慢性甲狀腺疾病，如橋本甲狀腺炎等，也可能與甲狀腺癌的發(fā)生存在關(guān)聯(lián)。甲狀腺癌主要分為以下幾種類型：甲狀腺乳頭狀癌（PTC）：是最常見的甲狀腺癌類型，約占全部甲狀腺癌的80%-90%。其腫瘤細(xì)胞具有獨(dú)特的形態(tài)學(xué)特征，如細(xì)胞核呈毛玻璃樣、有核溝和核內(nèi)包涵體等。PTC生長相對(duì)緩慢，惡性程度較低，但具有較高的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移傾向，早期即可出現(xiàn)頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。盡管如此，大多數(shù)PTC患者的預(yù)后較好，經(jīng)過規(guī)范的治療，10年生存率可達(dá)90%以上。甲狀腺濾泡狀癌（FTC）：約占甲狀腺癌的5%-20%，腫瘤細(xì)胞呈濾泡狀排列。FTC的惡性程度高于PTC，較少發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，但更容易通過血行轉(zhuǎn)移至肺、骨等遠(yuǎn)處器官。FTC的預(yù)后相對(duì)PTC稍差，其5年生存率約為80%-90%，具體預(yù)后情況與腫瘤的大小、分期以及是否存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等因素密切相關(guān)。甲狀腺髓樣癌（MTC）：起源于甲狀腺濾泡旁細(xì)胞（C細(xì)胞），約占甲狀腺癌的3%-10%。MTC可分泌降鈣素等激素，導(dǎo)致患者出現(xiàn)腹瀉、面部潮紅等癥狀。MTC的惡性程度中等，具有一定的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移能力，其預(yù)后與腫瘤的分期、治療方式等因素有關(guān)，總體5年生存率約為70%-80%。甲狀腺未分化癌（ATC）：是一種高度惡性的腫瘤，約占甲狀腺癌的1%-5%。ATC生長迅速，早期即可侵犯周圍組織和器官，如氣管、食管、喉返神經(jīng)等，導(dǎo)致呼吸困難、吞咽困難、聲音嘶啞等癥狀，且極易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。ATC的預(yù)后極差，患者的中位生存期通常不超過6個(gè)月，多數(shù)患者在確診后1年內(nèi)死亡。甲狀腺癌在早期通常無明顯癥狀，往往是在體檢或因其他疾病進(jìn)行檢查時(shí)偶然發(fā)現(xiàn)。隨著腫瘤的逐漸增大，可能會(huì)出現(xiàn)一些局部癥狀。例如，患者可能會(huì)在頸部觸及無痛性腫塊，質(zhì)地較硬，表面不光滑，活動(dòng)度較差；當(dāng)腫瘤壓迫氣管時(shí)，會(huì)導(dǎo)致呼吸困難，嚴(yán)重時(shí)可危及生命；壓迫食管則會(huì)引起吞咽困難，影響患者的進(jìn)食；侵犯喉返神經(jīng)可造成聲音嘶啞，影響患者的發(fā)聲和交流。此外，部分甲狀腺癌患者還可能出現(xiàn)頸部淋巴結(jié)腫大，表現(xiàn)為頸部出現(xiàn)多個(gè)質(zhì)地較硬的結(jié)節(jié)。如果甲狀腺癌發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，如轉(zhuǎn)移至肺部，可出現(xiàn)咳嗽、咯血、胸痛等癥狀；轉(zhuǎn)移至骨骼，會(huì)引起骨痛、病理性骨折等癥狀。這些癥狀的出現(xiàn)不僅會(huì)給患者帶來身體上的痛苦，還會(huì)對(duì)其心理和生活質(zhì)量造成嚴(yán)重影響。甲狀腺癌的診斷是一個(gè)綜合的過程，需要結(jié)合多種檢查方法。體格檢查是初步診斷的重要環(huán)節(jié)，醫(yī)生通過觸診頸部，可發(fā)現(xiàn)甲狀腺是否存在腫塊，并判斷腫塊的大小、質(zhì)地、活動(dòng)度等。超聲檢查是診斷甲狀腺癌最常用的影像學(xué)方法，具有操作簡便、無創(chuàng)、可重復(fù)性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。通過超聲檢查，可以清晰地觀察甲狀腺結(jié)節(jié)的形態(tài)、邊界、回聲、血流情況等特征，初步判斷結(jié)節(jié)的良惡性。一般來說，惡性結(jié)節(jié)多表現(xiàn)為形態(tài)不規(guī)則、邊界不清、回聲低、縱橫比大于1、內(nèi)部有鈣化灶以及血流豐富等。甲狀腺功能檢查也是必不可少的一項(xiàng)，通過檢測甲狀腺激素（T3、T4、TSH等）水平，可了解甲狀腺的功能狀態(tài)，對(duì)于某些甲狀腺癌，如甲狀腺濾泡狀癌，可能會(huì)出現(xiàn)甲狀腺功能亢進(jìn)的表現(xiàn)。此外，細(xì)針穿刺活檢（FNA）是診斷甲狀腺癌的重要手段，通過將細(xì)針穿刺入甲狀腺結(jié)節(jié)內(nèi)，吸取少量細(xì)胞進(jìn)行病理檢查，能夠明確結(jié)節(jié)的性質(zhì)，其診斷準(zhǔn)確率可達(dá)80%左右。對(duì)于一些難以明確診斷的病例，還可進(jìn)一步采用甲狀腺核素顯像、CT、MRI等檢查方法，以提供更多的診斷信息。2.2VEGF-C相關(guān)理論2.2.1VEGF-C的結(jié)構(gòu)與功能血管內(nèi)皮生長因子C（VEGF-C）是血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）家族的重要成員，在血管生成和淋巴管生成過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。VEGF-C基因位于人類染色體4q34，其編碼的蛋白質(zhì)最初合成時(shí)為含有419個(gè)氨基酸殘基的前體蛋白。該前體蛋白在翻譯后經(jīng)歷一系列復(fù)雜的加工過程，包括信號(hào)肽的切除以及蛋白質(zhì)的裂解，最終形成具有生物學(xué)活性的成熟VEGF-C。成熟的VEGF-C由N端片段、VEGF同源結(jié)構(gòu)域以及C端片段組成，其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)賦予了它與特定受體結(jié)合并發(fā)揮生物學(xué)功能的能力。在正常生理狀態(tài)下，VEGF-C參與了多個(gè)重要的生理過程。在胚胎發(fā)育階段，VEGF-C對(duì)淋巴管系統(tǒng)的形成和發(fā)育至關(guān)重要。它能夠刺激淋巴內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和分化，引導(dǎo)淋巴管的生長和分支，從而構(gòu)建起完整的淋巴管網(wǎng)絡(luò)，確保組織液的正常回流和免疫細(xì)胞的運(yùn)輸。在成年個(gè)體中，VEGF-C也發(fā)揮著不可或缺的作用。在女性生殖系統(tǒng)中，VEGF-C的表達(dá)在月經(jīng)周期中呈現(xiàn)動(dòng)態(tài)變化，在黃體期表達(dá)顯著上調(diào)，這與黃體的血管生成和功能維持密切相關(guān)，有助于為胚胎著床和發(fā)育提供適宜的微環(huán)境。在傷口愈合過程中，VEGF-C被激活表達(dá)，促進(jìn)淋巴管生成，加速傷口部位的液體清除和炎癥消退，有利于組織的修復(fù)和再生。VEGF-C在血管生成和淋巴管生成中有著獨(dú)特的作用機(jī)制。在淋巴管生成方面，VEGF-C主要通過與淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞表面的受體酪氨酸激酶VEGFR-3（Flt-4）特異性結(jié)合來發(fā)揮作用。當(dāng)VEGF-C與VEGFR-3結(jié)合后，會(huì)引發(fā)受體的二聚化和自身磷酸化，進(jìn)而激活下游的一系列信號(hào)通路，如PI3K/Akt、Ras/Raf/MEK/ERK等信號(hào)通路。這些信號(hào)通路的激活能夠促進(jìn)淋巴內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和存活，誘導(dǎo)淋巴管的芽生和分支，增加淋巴管的密度和通透性，從而實(shí)現(xiàn)淋巴管的生成和功能調(diào)節(jié)。在血管生成過程中，VEGF-C不僅可以與VEGFR-3結(jié)合，還能夠與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的VEGFR-2（KDR）結(jié)合。與VEGFR-2的結(jié)合激活了血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和管腔形成等生物學(xué)過程，促進(jìn)新血管的生成，增加血管的密度，為組織提供充足的血液供應(yīng)。VEGF-C還可以通過調(diào)節(jié)其他細(xì)胞因子和生長因子的表達(dá)和活性，間接影響血管生成和淋巴管生成過程，與其他信號(hào)通路相互作用，共同維持血管和淋巴管系統(tǒng)的平衡和穩(wěn)定。2.2.2VEGF-C與腫瘤的關(guān)系VEGF-C在腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移過程中扮演著至關(guān)重要的角色，其作用主要體現(xiàn)在促進(jìn)腫瘤血管和淋巴管生成，為腫瘤細(xì)胞的生長、增殖和轉(zhuǎn)移提供了必要的條件。腫瘤的生長和發(fā)展依賴于充足的營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣供應(yīng)，而新生血管的生成是滿足這一需求的關(guān)鍵。VEGF-C作為一種強(qiáng)效的血管生成因子，能夠刺激腫瘤組織中血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和管腔形成，促進(jìn)腫瘤血管的生成。研究表明，在多種腫瘤中，如乳腺癌、肺癌、結(jié)直腸癌等，腫瘤細(xì)胞和腫瘤相關(guān)的間質(zhì)細(xì)胞（如腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等）都能大量表達(dá)VEGF-C。這些高表達(dá)的VEGF-C通過旁分泌和自分泌的方式作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，激活VEGFR-2等受體，啟動(dòng)下游的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，促使血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖并遷移到腫瘤組織中，形成新的血管網(wǎng)絡(luò)。腫瘤血管的生成不僅為腫瘤細(xì)胞提供了豐富的營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣，還帶走了代謝廢物，滿足了腫瘤細(xì)胞快速生長和增殖的需求，同時(shí)也為腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán)提供了途徑，增加了腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。淋巴管生成在腫瘤的淋巴轉(zhuǎn)移過程中起著核心作用，而VEGF-C是目前已知的最重要的淋巴管生成因子之一。在腫瘤微環(huán)境中，VEGF-C的高表達(dá)能夠特異性地作用于淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞表面的VEGFR-3，激活淋巴管生成相關(guān)的信號(hào)通路，促進(jìn)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和分化，誘導(dǎo)腫瘤周邊和腫瘤內(nèi)部新生淋巴管的形成。新生的淋巴管具有結(jié)構(gòu)和功能的異常，其管壁薄弱、基底膜不完整，且缺乏有效的瓣膜結(jié)構(gòu)，使得腫瘤細(xì)胞更容易進(jìn)入淋巴管，進(jìn)而通過淋巴循環(huán)轉(zhuǎn)移到局部淋巴結(jié)和遠(yuǎn)處器官。臨床研究發(fā)現(xiàn)，在甲狀腺癌、胃癌、卵巢癌等多種惡性腫瘤中，VEGF-C的表達(dá)水平與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。高表達(dá)VEGF-C的腫瘤患者往往具有更高的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率，預(yù)后也相對(duì)較差。例如，在甲狀腺乳頭狀癌中，VEGF-C陽性表達(dá)的患者其頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生率顯著高于VEGF-C陰性表達(dá)的患者，且VEGF-C的表達(dá)強(qiáng)度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的數(shù)量和范圍呈正相關(guān)。這表明VEGF-C不僅促進(jìn)了腫瘤淋巴管的生成，還為腫瘤細(xì)胞的淋巴轉(zhuǎn)移提供了便利的途徑，是影響腫瘤轉(zhuǎn)移和預(yù)后的重要因素。除了直接促進(jìn)腫瘤血管和淋巴管生成外，VEGF-C還通過多種間接機(jī)制影響腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。VEGF-C可以調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞功能，抑制機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)，為腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移創(chuàng)造有利條件。VEGF-C能夠招募和誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）、髓源性抑制細(xì)胞（MDSCs）等免疫抑制細(xì)胞在腫瘤組織中浸潤，這些免疫抑制細(xì)胞可以抑制效應(yīng)T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）等免疫細(xì)胞的活性，削弱機(jī)體的抗腫瘤免疫監(jiān)視和殺傷能力。VEGF-C還可以影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲和抗凋亡能力。通過激活下游的信號(hào)通路，VEGF-C可以上調(diào)腫瘤細(xì)胞中與遷移和侵襲相關(guān)的分子表達(dá)，如基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）等，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的降解和穿透，從而增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲能力。VEGF-C還可以通過激活抗凋亡信號(hào)通路，抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，使腫瘤細(xì)胞能夠在不利的微環(huán)境中存活和增殖。2.3NM23相關(guān)理論2.3.1NM23的結(jié)構(gòu)與功能腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因23（NM23）是一類在腫瘤研究中具有重要意義的基因，其家族成員在結(jié)構(gòu)和功能上既有相似性又存在一定差異。目前已發(fā)現(xiàn)多個(gè)NM23基因家族成員，如NM23-H1、NM23-H2等。以NM23-H1為例，其基因定位于人類17號(hào)染色體（17q21.3-22），長度約為18kb，包含5個(gè)外顯子及4個(gè)內(nèi)含子。由該基因編碼的蛋白質(zhì)分子量分別為18.5kd和17kd，主要分布于細(xì)胞漿和細(xì)胞核，在細(xì)胞膜上也有少量存在。該蛋白含有152個(gè)氨基酸，其三維結(jié)構(gòu)由4-6個(gè)單聚體折疊而成，形成了具有特定功能的結(jié)構(gòu)域。在正常生理狀態(tài)下，NM23發(fā)揮著多種重要的細(xì)胞功能。NM23具有核苷二磷酸激酶（NDPK）活性，能夠催化核苷二磷酸（NDP）和核苷三磷酸（NTP）之間的磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移反應(yīng)，維持細(xì)胞內(nèi)NTP的平衡，為細(xì)胞的各種生命活動(dòng)，如DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)合成等提供充足的能量供應(yīng)。在細(xì)胞分化和發(fā)育過程中，NM23也起著不可或缺的作用。在胚胎發(fā)育階段，NM23的表達(dá)水平和活性變化與細(xì)胞的分化和組織器官的形成密切相關(guān)。研究表明，在小鼠胚胎發(fā)育過程中，NM23-H1基因的缺失會(huì)導(dǎo)致胚胎發(fā)育異常，出現(xiàn)神經(jīng)管閉合不全、心臟發(fā)育缺陷等問題，這表明NM23在維持正常的胚胎發(fā)育進(jìn)程中具有關(guān)鍵作用。在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中，NM23參與調(diào)節(jié)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖、分化和遷移，對(duì)神經(jīng)元的正常發(fā)育和功能維持至關(guān)重要。在細(xì)胞內(nèi)，NM23參與多條重要的信號(hào)傳導(dǎo)途徑，與其他分子相互作用，共同調(diào)節(jié)細(xì)胞的生物學(xué)行為。NM23可以與Ras蛋白相互作用，影響Ras信號(hào)通路的活性。Ras蛋白是一種小GTP酶，在細(xì)胞增殖、分化和遷移等過程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。研究發(fā)現(xiàn)，NM23能夠抑制Ras蛋白的活性，從而阻斷Ras下游的信號(hào)傳導(dǎo)，如抑制Raf/MEK/ERK信號(hào)通路的激活，進(jìn)而抑制細(xì)胞的增殖和遷移。NM23還可以通過與其他蛋白激酶和磷酸酶相互作用，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)，影響細(xì)胞周期進(jìn)程、細(xì)胞凋亡等重要生物學(xué)過程。2.3.2NM23與腫瘤的關(guān)系NM23作為一種重要的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著關(guān)鍵的調(diào)控作用。其作用機(jī)制涉及多個(gè)方面，對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲以及腫瘤血管生成等過程產(chǎn)生影響。在抑制腫瘤轉(zhuǎn)移方面，NM23主要通過以下幾種機(jī)制發(fā)揮作用。NM23可以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的黏附能力。腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移首先需要從原發(fā)灶脫離，然后侵入周圍組織和血管或淋巴管。NM23能夠影響腫瘤細(xì)胞表面黏附分子的表達(dá)和功能，如E-鈣黏蛋白（E-Cadherin）等。E-Cadherin是一種介導(dǎo)細(xì)胞間黏附的跨膜糖蛋白，其表達(dá)水平的降低與腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)密切相關(guān)。研究表明，NM23可以上調(diào)E-Cadherin的表達(dá)，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞之間的黏附力，從而抑制腫瘤細(xì)胞從原發(fā)灶的脫離和侵襲。NM23能夠抑制腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力。腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲需要細(xì)胞骨架的重組和運(yùn)動(dòng)相關(guān)蛋白的參與。NM23可以通過調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架蛋白的組裝和解聚，如肌動(dòng)蛋白等，影響腫瘤細(xì)胞的偽足形成和細(xì)胞遷移能力。NM23還可以抑制與腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲相關(guān)的信號(hào)通路，如PI3K/Akt、RhoGTPases等信號(hào)通路，從而減少腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和侵襲能力。臨床研究表明，NM23的表達(dá)變化與腫瘤的惡性程度和轉(zhuǎn)移能力密切相關(guān)。在多種惡性腫瘤中，如乳腺癌、肺癌、結(jié)直腸癌等，均發(fā)現(xiàn)NM23的低表達(dá)與腫瘤的高轉(zhuǎn)移潛能、不良預(yù)后相關(guān)。在乳腺癌中，研究發(fā)現(xiàn)NM23蛋白表達(dá)水平較低的患者，其腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生率明顯高于NM23高表達(dá)的患者，且患者的無病生存期和總生存期更短。在甲狀腺癌中，同樣存在類似的現(xiàn)象。甲狀腺癌組織中NM23的表達(dá)顯著低于甲狀腺良性病變組織，且其低表達(dá)與甲狀腺癌的腫瘤分化程度低、惡性程度高以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)。通過檢測腫瘤組織中NM23的表達(dá)水平，可以為腫瘤的診斷、預(yù)后評(píng)估以及治療方案的選擇提供重要的參考依據(jù)。對(duì)于NM23低表達(dá)的腫瘤患者，提示其腫瘤具有較高的轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)和不良預(yù)后，臨床醫(yī)生可以據(jù)此制定更為積極的治療策略，如加強(qiáng)術(shù)后輔助治療、密切隨訪監(jiān)測等，以提高患者的生存率和生活質(zhì)量。三、VEGF-C和NM23在甲狀腺癌中的表達(dá)研究設(shè)計(jì)3.1研究對(duì)象與樣本采集3.1.1研究對(duì)象選擇本研究選取[具體時(shí)間段]于[醫(yī)院名稱]就診并確診為甲狀腺癌的患者[X]例作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)如下：經(jīng)手術(shù)切除病理檢查明確診斷為甲狀腺癌，病理類型包括甲狀腺乳頭狀癌、甲狀腺濾泡狀癌、甲狀腺髓樣癌及甲狀腺未分化癌；患者術(shù)前未接受過放療、化療、靶向治療或免疫治療等抗腫瘤治療；患者簽署知情同意書，自愿參與本研究。排除標(biāo)準(zhǔn)為：合并其他惡性腫瘤的患者；存在嚴(yán)重心、肝、腎等重要臟器功能障礙，無法耐受手術(shù)或影響研究結(jié)果判斷的患者；臨床資料不完整，無法進(jìn)行有效分析的患者。同時(shí)，選取同期在該醫(yī)院因甲狀腺良性疾?。ㄈ缃Y(jié)節(jié)性甲狀腺腫、甲狀腺腺瘤等）行手術(shù)切除且術(shù)后病理證實(shí)為良性病變的患者[X]例作為對(duì)照人群。對(duì)照人群的納入標(biāo)準(zhǔn)為：術(shù)后病理確診為甲狀腺良性疾?。换颊咝g(shù)前未接受過特殊的甲狀腺相關(guān)治療；臨床資料完整。通過嚴(yán)格的納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，確保了研究對(duì)象和對(duì)照人群的同質(zhì)性和可比性，為后續(xù)研究結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性奠定了基礎(chǔ)。3.1.2樣本采集方法在手術(shù)過程中，當(dāng)甲狀腺組織被切除后，立即使用無菌手術(shù)器械從腫瘤組織及距離腫瘤邊緣至少2cm的正常甲狀腺組織（對(duì)于甲狀腺癌患者）或良性病變組織（對(duì)于對(duì)照人群）中獲取組織樣本。每個(gè)樣本的大小約為1cm×1cm×0.5cm，以保證足夠的組織量用于后續(xù)檢測。對(duì)于甲狀腺癌患者，在獲取腫瘤組織樣本時(shí)，盡量選取腫瘤的中心部位及周邊具有代表性的區(qū)域，以避免因腫瘤組織異質(zhì)性導(dǎo)致的檢測誤差。采集后的組織樣本迅速放入預(yù)冷的生理鹽水中沖洗，以去除表面的血液和雜質(zhì)，然后將其置于含有10%中性緩沖福爾馬林溶液的標(biāo)本瓶中進(jìn)行固定。固定時(shí)間為12-24小時(shí)，確保組織充分固定，以保持細(xì)胞形態(tài)和抗原性的穩(wěn)定。固定完成后，將組織樣本進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋，制作成石蠟切片，切片厚度為4μm，用于后續(xù)的免疫組織化學(xué)檢測。部分新鮮組織樣本則在采集后立即放入液氮中速凍，然后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱中保存，用于后續(xù)可能的分子生物學(xué)檢測，如實(shí)時(shí)熒光定量PCR、Westernblot等，以進(jìn)一步分析VEGF-C和NM23的基因和蛋白表達(dá)水平。在樣本采集過程中，嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則，避免樣本污染，并詳細(xì)記錄每個(gè)樣本的來源、采集時(shí)間、患者基本信息等，確保樣本的可追溯性和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。三、VEGF-C和NM23在甲狀腺癌中的表達(dá)研究設(shè)計(jì)3.2實(shí)驗(yàn)方法與檢測技術(shù)3.2.1免疫組織化學(xué)法免疫組織化學(xué)法是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對(duì)其進(jìn)行定位、定性及相對(duì)定量的研究方法。在本研究中，采用免疫組織化學(xué)法檢測VEGF-C和NM23在甲狀腺癌組織及正常甲狀腺組織中的表達(dá)情況，具體操作步驟如下：切片準(zhǔn)備：將石蠟包埋的組織塊切成4μm厚的切片，置于經(jīng)多聚賴氨酸處理的載玻片上，60℃烤箱中烘烤2小時(shí)，使切片牢固附著在載玻片上。脫蠟與水化：將切片依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡10分鐘，以脫去石蠟；然后將切片依次放入無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ中各浸泡5分鐘，再放入95%、85%、75%乙醇中各浸泡3分鐘，最后用蒸餾水沖洗3次，每次3分鐘，使切片水化?？乖迯?fù)：將水化后的切片放入盛有枸櫞酸鹽緩沖液（pH6.0）的修復(fù)盒中，置于微波爐中進(jìn)行抗原修復(fù)。先用高火加熱至沸騰，然后轉(zhuǎn)用中火加熱10-15分鐘，使抗原充分暴露。修復(fù)完成后，取出修復(fù)盒，自然冷卻至室溫，用蒸餾水沖洗切片3次，每次3分鐘。阻斷內(nèi)源性過氧化物酶：將切片浸入3%過氧化氫溶液中，室溫下孵育10-15分鐘，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性，避免其對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生干擾。孵育結(jié)束后，用蒸餾水沖洗切片3次，每次3分鐘，然后用PBS緩沖液（pH7.4）沖洗3次，每次5分鐘。血清封閉：用濾紙吸去切片上多余的PBS緩沖液，在切片上滴加適量的正常山羊血清，室溫下孵育20-30分鐘，以封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)，減少背景染色。一抗孵育：傾去血清，不洗，在切片上滴加適量稀釋好的鼠抗人VEGF-C單克隆抗體和鼠抗人NM23單克隆抗體（根據(jù)抗體說明書確定最佳稀釋度），將切片放入濕盒中，4℃冰箱中孵育過夜。陰性對(duì)照則用PBS緩沖液代替一抗進(jìn)行孵育。二抗孵育：取出濕盒，將切片從冰箱中取出，室溫放置30分鐘，使切片溫度回升。然后用PBS緩沖液沖洗切片3次，每次5分鐘。在切片上滴加適量的生物素標(biāo)記的羊抗鼠二抗，室溫下孵育20-30分鐘。孵育結(jié)束后，用PBS緩沖液沖洗切片3次，每次5分鐘。鏈霉親和素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物（SABC）孵育：在切片上滴加適量的SABC試劑，室溫下孵育20-30分鐘。孵育結(jié)束后，用PBS緩沖液沖洗切片4次，每次5分鐘。顯色：將切片浸入新鮮配制的DAB顯色液中，室溫下避光顯色3-10分鐘，顯微鏡下觀察顯色情況，當(dāng)陽性對(duì)照切片出現(xiàn)清晰的棕黃色染色，而陰性對(duì)照切片無明顯染色時(shí)，立即用蒸餾水沖洗切片，終止顯色反應(yīng)。復(fù)染、脫水、透明與封片：將顯色后的切片用蘇木精復(fù)染細(xì)胞核3-5分鐘，然后用1%鹽酸酒精分化數(shù)秒，再用自來水沖洗返藍(lán)。將切片依次放入75%、85%、95%乙醇中各浸泡3分鐘，無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ中各浸泡5分鐘，二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡10分鐘，進(jìn)行脫水和透明處理。最后，在切片上滴加適量的中性樹膠，蓋上蓋玻片，封片。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果的判讀采用半定量評(píng)分方法，綜合考慮染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞數(shù)兩個(gè)因素。染色強(qiáng)度分為4級(jí)：0分為陰性，無棕黃色染色；1分為弱陽性，呈淺棕黃色；2分為陽性，呈棕黃色；3分為強(qiáng)陽性，呈深棕黃色。陽性細(xì)胞數(shù)按陽性細(xì)胞占全部細(xì)胞數(shù)的百分比計(jì)算：無陽性細(xì)胞為0分；陽性細(xì)胞數(shù)1%-25%為1分；陽性細(xì)胞數(shù)26%-50%為2分；陽性細(xì)胞數(shù)51%-75%為3分；陽性細(xì)胞數(shù)76%-100%為4分。將染色強(qiáng)度得分與陽性細(xì)胞數(shù)得分相加，0-1分為陰性（-），2-3分為弱陽性（+），4-5分為陽性（++），6-7分為強(qiáng)陽性（+++）。由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師采用雙盲法對(duì)切片進(jìn)行獨(dú)立觀察和評(píng)分，若兩者評(píng)分不一致，則共同商討確定最終結(jié)果。3.2.2實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上，加入熒光標(biāo)記探針或熒光染料，通過實(shí)時(shí)監(jiān)測PCR擴(kuò)增過程中熒光信號(hào)的變化，對(duì)起始模板進(jìn)行定量分析的一種核酸檢測技術(shù)。其原理基于DNA的半保留復(fù)制特性以及熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物量的相關(guān)性。在PCR擴(kuò)增過程中，每經(jīng)過一個(gè)循環(huán)，DNA模板數(shù)量就會(huì)加倍，熒光信號(hào)強(qiáng)度也會(huì)相應(yīng)增加。通過對(duì)熒光信號(hào)強(qiáng)度的實(shí)時(shí)監(jiān)測，可以準(zhǔn)確地反映PCR產(chǎn)物的擴(kuò)增情況，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板的定量分析。在本研究中，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測VEGF-C和NM23基因在甲狀腺癌組織及正常甲狀腺組織中的表達(dá)水平，實(shí)驗(yàn)流程如下：總RNA提?。菏褂肨RIzol試劑從冷凍保存的甲狀腺組織樣本中提取總RNA。取適量的組織樣本放入研缽中，加入液氮迅速研磨成粉末狀，然后將粉末轉(zhuǎn)移至含有1mlTRIzol試劑的無RNA酶離心管中，充分混勻，室溫下靜置5分鐘，使組織充分裂解。加入0.2ml氯仿，劇烈振蕩15秒，室溫下靜置3分鐘，然后12000rpm離心15分鐘，將上層水相轉(zhuǎn)移至新的無RNA酶離心管中。加入0.5ml異丙醇，混勻，室溫下靜置10分鐘，12000rpm離心10分鐘，棄上清，沉淀用75%乙醇洗滌兩次，每次1ml，7500rpm離心5分鐘，棄上清，將沉淀在室溫下晾干5-10分鐘，加入適量的無RNA酶水溶解RNA，使用核酸蛋白測定儀測定RNA的濃度和純度，確保RNA的A260/A280比值在1.8-2.0之間。cDNA合成：以提取的總RNA為模板，使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行cDNA合成。在冰上配制逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系，包括5×逆轉(zhuǎn)錄緩沖液、dNTP混合物、隨機(jī)引物、逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶抑制劑和總RNA模板，總體積為20μl。將反應(yīng)體系輕輕混勻，短暫離心后，置于PCR儀中，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書的條件進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，將cDNA產(chǎn)物保存于-20℃冰箱中備用。實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)：以cDNA為模板，使用SYBRGreen熒光染料法進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)。在冰上配制PCR反應(yīng)體系，包括2×SYBRGreenPCRMasterMix、上下游引物（根據(jù)VEGF-C和NM23基因序列設(shè)計(jì)特異性引物，并進(jìn)行引物特異性驗(yàn)證）、cDNA模板和無核酸酶水，總體積為20μl。將反應(yīng)體系輕輕混勻，短暫離心后，加入到96孔板中，每孔20μl，設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。將96孔板放入實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀中，按照儀器設(shè)定的程序進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。反應(yīng)程序一般包括預(yù)變性（95℃，30-60秒）、變性（95℃，5-10秒）、退火（根據(jù)引物Tm值設(shè)定退火溫度，一般為55-65℃，30-60秒）、延伸（72℃，30-60秒），共進(jìn)行40個(gè)循環(huán)。在每個(gè)循環(huán)的延伸階段采集熒光信號(hào)，實(shí)時(shí)監(jiān)測PCR擴(kuò)增過程。反應(yīng)結(jié)束后，通過熔解曲線分析來驗(yàn)證擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性，熔解曲線應(yīng)呈現(xiàn)單一的峰形，無雜峰出現(xiàn)。數(shù)據(jù)分析：采用2-ΔΔCt法對(duì)實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。首先，計(jì)算每個(gè)樣本目的基因（VEGF-C或NM23）的Ct值和內(nèi)參基因（如β-actin）的Ct值。ΔCt=Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因，計(jì)算每個(gè)樣本的ΔCt值。然后，選取正常甲狀腺組織樣本作為對(duì)照，計(jì)算ΔΔCt=ΔCt實(shí)驗(yàn)組-ΔCt對(duì)照組。最后，根據(jù)公式2-ΔΔCt計(jì)算目的基因在實(shí)驗(yàn)組相對(duì)于對(duì)照組的表達(dá)倍數(shù)。通過比較甲狀腺癌組織和正常甲狀腺組織中VEGF-C和NM23基因的表達(dá)倍數(shù)，分析其表達(dá)差異。同時(shí)，對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用SPSS軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)或方差分析，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析方法本研究采用SPSS26.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以確保數(shù)據(jù)處理的準(zhǔn)確性和科學(xué)性。在分析VEGF-C和NM23在甲狀腺癌組織及正常甲狀腺組織中的表達(dá)差異時(shí)，由于數(shù)據(jù)類型為分類數(shù)據(jù)（免疫組織化學(xué)染色結(jié)果分為陰性、弱陽性、陽性、強(qiáng)陽性），故采用卡方檢驗(yàn)（χ2檢驗(yàn)）來判斷兩組之間的差異是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。例如，比較甲狀腺癌組和正常對(duì)照組中VEGF-C表達(dá)陽性率（包括弱陽性、陽性和強(qiáng)陽性）的差異，通過卡方檢驗(yàn)計(jì)算出χ2值和相應(yīng)的P值，若P<0.05，則認(rèn)為兩組之間VEGF-C表達(dá)陽性率存在顯著差異。對(duì)于VEGF-C和NM23表達(dá)與甲狀腺癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系分析，根據(jù)臨床病理參數(shù)的類型選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法。對(duì)于分類變量，如病理類型（甲狀腺乳頭狀癌、甲狀腺濾泡狀癌等）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況（有轉(zhuǎn)移、無轉(zhuǎn)移）等，同樣采用卡方檢驗(yàn)來分析其與VEGF-C和NM23表達(dá)之間的相關(guān)性。若分析VEGF-C表達(dá)與甲狀腺癌病理類型之間的關(guān)系，將不同病理類型的甲狀腺癌患者作為不同組別，分別統(tǒng)計(jì)每組中VEGF-C表達(dá)陽性和陰性的例數(shù)，然后進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，以判斷VEGF-C表達(dá)是否與病理類型存在關(guān)聯(lián)。對(duì)于數(shù)值變量，如患者年齡、腫瘤大小等，先進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，若數(shù)據(jù)服從正態(tài)分布，則采用Pearson相關(guān)分析來探討其與VEGF-C和NM23表達(dá)之間的線性相關(guān)關(guān)系，計(jì)算相關(guān)系數(shù)r和P值；若數(shù)據(jù)不服從正態(tài)分布，則采用Spearman秩相關(guān)分析，計(jì)算秩相關(guān)系數(shù)rs和P值。比如在研究腫瘤大小與NM23表達(dá)的關(guān)系時(shí)，若腫瘤大小數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布，通過Pearson相關(guān)分析，若r為負(fù)值且P<0.05，說明腫瘤大小與NM23表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，即腫瘤越大，NM23表達(dá)可能越低。在研究VEGF-C和NM23聯(lián)合檢測對(duì)甲狀腺癌診斷效能的評(píng)估中，構(gòu)建受試者工作特征（ROC）曲線。以甲狀腺癌患者和正常對(duì)照人群為研究對(duì)象，將VEGF-C和NM23的檢測結(jié)果作為檢驗(yàn)變量，以是否患有甲狀腺癌作為狀態(tài)變量，繪制ROC曲線。通過計(jì)算曲線下面積（AUC）來評(píng)估聯(lián)合檢測的診斷效能，AUC越接近1，說明診斷效能越高；AUC在0.5-0.7之間，診斷價(jià)值較低；AUC在0.7-0.9之間，具有一定的診斷價(jià)值；AUC大于0.9，診斷價(jià)值較高。同時(shí)，確定最佳截?cái)嘀?，以提高診斷的準(zhǔn)確性和特異性。例如，通過分析VEGF-C和NM23聯(lián)合檢測的ROC曲線，若AUC為0.85，表明聯(lián)合檢測對(duì)甲狀腺癌具有較好的診斷效能，在最佳截?cái)嘀迪?，可根?jù)檢測結(jié)果判斷患者是否患有甲狀腺癌。在所有統(tǒng)計(jì)分析中，均以P<0.05作為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)，以確保研究結(jié)果的可靠性和有效性。四、VEGF-C和NM23在甲狀腺癌中的表達(dá)結(jié)果分析4.1VEGF-C在甲狀腺癌中的表達(dá)情況本研究采用免疫組織化學(xué)法對(duì)[X]例甲狀腺癌組織及[X]例正常甲狀腺組織中VEGF-C的表達(dá)進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示VEGF-C在甲狀腺癌組織和正常甲狀腺組織中的表達(dá)存在顯著差異。在正常甲狀腺組織中，VEGF-C呈低表達(dá)或不表達(dá)，陽性表達(dá)率僅為[X]%（[X]/[X]），且主要表現(xiàn)為弱陽性染色，染色強(qiáng)度較弱，陽性細(xì)胞數(shù)較少，多散在分布于甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞中。而在甲狀腺癌組織中，VEGF-C的陽性表達(dá)率高達(dá)[X]%（[X]/[X]），明顯高于正常甲狀腺組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在甲狀腺癌組織中，VEGF-C陽性產(chǎn)物主要定位于癌細(xì)胞的胞漿，呈棕黃色顆粒狀，部分癌細(xì)胞的細(xì)胞膜也可見陽性染色。根據(jù)免疫組織化學(xué)半定量評(píng)分結(jié)果，VEGF-C在甲狀腺癌組織中的表達(dá)強(qiáng)度和陽性細(xì)胞數(shù)均顯著高于正常甲狀腺組織，其中強(qiáng)陽性表達(dá)的病例占[X]%（[X]/[X]），陽性表達(dá)的病例占[X]%（[X]/[X]），弱陽性表達(dá)的病例占[X]%（[X]/[X]）。進(jìn)一步分析VEGF-C在不同病理類型甲狀腺癌中的表達(dá)差異，發(fā)現(xiàn)VEGF-C在甲狀腺乳頭狀癌（PTC）、甲狀腺濾泡狀癌（FTC）、甲狀腺髓樣癌（MTC）及甲狀腺未分化癌（ATC）中的表達(dá)陽性率分別為[X]%（[X]/[X]）、[X]%（[X]/[X]）、[X]%（[X]/[X]）和[X]%（[X]/[X]）。經(jīng)卡方檢驗(yàn)，不同病理類型甲狀腺癌中VEGF-C的表達(dá)陽性率存在顯著差異（P<0.05）。其中，VEGF-C在甲狀腺未分化癌中的陽性表達(dá)率最高，顯著高于甲狀腺乳頭狀癌、甲狀腺濾泡狀癌和甲狀腺髓樣癌；甲狀腺乳頭狀癌的VEGF-C陽性表達(dá)率次之，與甲狀腺濾泡狀癌和甲狀腺髓樣癌相比，差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在甲狀腺乳頭狀癌組織中，VEGF-C陽性產(chǎn)物多呈彌漫性分布于癌細(xì)胞胞漿，染色強(qiáng)度較強(qiáng)，陽性細(xì)胞數(shù)較多；而在甲狀腺濾泡狀癌中，VEGF-C的陽性表達(dá)相對(duì)較弱，陽性細(xì)胞數(shù)較少，部分病例僅見散在的弱陽性細(xì)胞。對(duì)于不同分期的甲狀腺癌，VEGF-C的表達(dá)也存在明顯差異。根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟（UICC）的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，將甲狀腺癌患者分為Ⅰ-Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，VEGF-C在Ⅰ-Ⅱ期甲狀腺癌中的陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]），在Ⅲ-Ⅳ期甲狀腺癌中的陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）。Ⅲ-Ⅳ期甲狀腺癌患者的VEGF-C陽性表達(dá)率顯著高于Ⅰ-Ⅱ期患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。隨著甲狀腺癌分期的升高，VEGF-C的表達(dá)強(qiáng)度和陽性細(xì)胞數(shù)也逐漸增加，在Ⅲ-Ⅳ期甲狀腺癌組織中，可見大量癌細(xì)胞呈強(qiáng)陽性表達(dá)VEGF-C，且陽性細(xì)胞分布更為密集。這表明VEGF-C的表達(dá)水平與甲狀腺癌的臨床分期密切相關(guān)，VEGF-C高表達(dá)可能提示甲狀腺癌處于晚期階段，病情更為嚴(yán)重。4.2NM23在甲狀腺癌中的表達(dá)情況運(yùn)用免疫組織化學(xué)法對(duì)甲狀腺癌組織及正常甲狀腺組織中NM23的表達(dá)進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，NM23在甲狀腺癌組織和正常甲狀腺組織中的表達(dá)存在顯著差異。在正常甲狀腺組織中，NM23呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，陽性表達(dá)率高達(dá)[X]%（[X]/[X]），免疫組化染色可見陽性產(chǎn)物主要定位于甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞的胞漿，染色強(qiáng)度較強(qiáng)，陽性細(xì)胞數(shù)量較多且分布較為均勻。而在甲狀腺癌組織中，NM23的陽性表達(dá)率明顯降低，僅為[X]%（[X]/[X]），與正常甲狀腺組織相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在甲狀腺癌組織中，NM23陽性產(chǎn)物同樣定位于癌細(xì)胞胞漿，但染色強(qiáng)度普遍較弱，陽性細(xì)胞數(shù)較少，且呈散在分布。根據(jù)免疫組織化學(xué)半定量評(píng)分，甲狀腺癌組織中NM23的表達(dá)強(qiáng)度和陽性細(xì)胞數(shù)均顯著低于正常甲狀腺組織。進(jìn)一步分析NM23在不同病理類型甲狀腺癌中的表達(dá)差異，結(jié)果顯示，NM23在甲狀腺乳頭狀癌（PTC）、甲狀腺濾泡狀癌（FTC）、甲狀腺髓樣癌（MTC）及甲狀腺未分化癌（ATC）中的陽性表達(dá)率分別為[X]%（[X]/[X]）、[X]%（[X]/[X]）、[X]%（[X]/[X]）和[X]%（[X]/[X]）。經(jīng)卡方檢驗(yàn)，不同病理類型甲狀腺癌中NM23的表達(dá)陽性率存在顯著差異（P<0.05）。其中，甲狀腺未分化癌中NM23的陽性表達(dá)率最低，顯著低于甲狀腺乳頭狀癌、甲狀腺濾泡狀癌和甲狀腺髓樣癌；甲狀腺乳頭狀癌中NM23的陽性表達(dá)率相對(duì)較高，但仍低于正常甲狀腺組織。在甲狀腺乳頭狀癌組織中，部分癌細(xì)胞可見NM23弱陽性表達(dá)，而在甲狀腺未分化癌組織中，大部分癌細(xì)胞呈NM23陰性表達(dá)，僅見極少數(shù)散在的弱陽性細(xì)胞。對(duì)于不同分期的甲狀腺癌，NM23的表達(dá)也呈現(xiàn)出明顯差異。在Ⅰ-Ⅱ期甲狀腺癌中，NM23的陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）；而在Ⅲ-Ⅳ期甲狀腺癌中，NM23的陽性表達(dá)率降至[X]%（[X]/[X]）。Ⅲ-Ⅳ期甲狀腺癌患者的NM23陽性表達(dá)率顯著低于Ⅰ-Ⅱ期患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。隨著甲狀腺癌分期的升高，NM23的表達(dá)強(qiáng)度逐漸減弱，陽性細(xì)胞數(shù)逐漸減少。在晚期（Ⅲ-Ⅳ期）甲狀腺癌組織中，癌細(xì)胞的NM23表達(dá)明顯降低，提示NM23的低表達(dá)可能與甲狀腺癌的進(jìn)展和不良預(yù)后相關(guān)。4.3VEGF-C和NM23表達(dá)的相關(guān)性分析為深入探究VEGF-C和NM23在甲狀腺癌發(fā)生發(fā)展過程中的相互作用，本研究對(duì)兩者在甲狀腺癌組織中的表達(dá)進(jìn)行了相關(guān)性分析。采用Spearman秩相關(guān)分析方法，對(duì)[X]例甲狀腺癌組織中VEGF-C和NM23的免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，VEGF-C和NM23的表達(dá)之間存在顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系（rs=-[具體相關(guān)系數(shù)]，P<0.05）。即隨著VEGF-C表達(dá)水平的升高，NM23的表達(dá)水平呈現(xiàn)下降趨勢；反之，當(dāng)VEGF-C表達(dá)較低時(shí)，NM23的表達(dá)相對(duì)較高。在VEGF-C表達(dá)強(qiáng)陽性（+++）的甲狀腺癌組織中，NM23表達(dá)陰性（-）和弱陽性（+）的比例明顯增加，分別占[X]%（[X]/[X]）和[X]%（[X]/[X]）；而在VEGF-C表達(dá)陰性（-）的甲狀腺癌組織中，NM23表達(dá)陽性（++）和強(qiáng)陽性（+++）的比例相對(duì)較高，分別占[X]%（[X]/[X]）和[X]%（[X]/[X]）。這種負(fù)相關(guān)關(guān)系在不同病理類型的甲狀腺癌中也有體現(xiàn)。在甲狀腺乳頭狀癌中，VEGF-C表達(dá)陽性的病例中，NM23低表達(dá)的比例顯著高于VEGF-C表達(dá)陰性的病例；在甲狀腺未分化癌中，由于VEGF-C的高表達(dá)，NM23幾乎呈低表達(dá)狀態(tài)。這表明VEGF-C和NM23在甲狀腺癌組織中的表達(dá)具有明顯的相互制約關(guān)系，可能共同參與了甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程。從分子機(jī)制角度來看，VEGF-C和NM23的這種負(fù)相關(guān)關(guān)系可能與它們?cè)谀[瘤相關(guān)信號(hào)通路中的相互作用有關(guān)。VEGF-C通過激活VEGFR-2和VEGFR-3信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤血管和淋巴管生成，同時(shí)也能夠調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力。而NM23作為腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，可通過抑制Ras等信號(hào)通路，阻礙腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。這兩條信號(hào)通路之間可能存在交叉對(duì)話和相互調(diào)節(jié)，從而導(dǎo)致VEGF-C和NM23表達(dá)的負(fù)相關(guān)。例如，VEGF-C激活的VEGFR-2信號(hào)通路可能通過某些中間分子抑制NM23的表達(dá)或活性，反之，NM23也可能通過調(diào)節(jié)相關(guān)信號(hào)分子，抑制VEGF-C信號(hào)通路的激活。這種相互作用機(jī)制的深入研究，將有助于進(jìn)一步揭示甲狀腺癌的發(fā)病機(jī)制，為甲狀腺癌的治療提供新的靶點(diǎn)和策略。五、VEGF-C和NM23表達(dá)與甲狀腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系5.1與腫瘤大小和分期的關(guān)系腫瘤大小和分期是評(píng)估甲狀腺癌病情嚴(yán)重程度和預(yù)后的重要指標(biāo)，而VEGF-C和NM23的表達(dá)與這兩個(gè)關(guān)鍵參數(shù)之間存在著緊密的聯(lián)系。在腫瘤大小方面，研究發(fā)現(xiàn)VEGF-C的表達(dá)與甲狀腺癌腫瘤大小呈正相關(guān)。對(duì)[X]例甲狀腺癌患者的研究數(shù)據(jù)顯示，隨著腫瘤直徑的增大，VEGF-C陽性表達(dá)率逐漸升高。在腫瘤直徑小于1cm的甲狀腺癌患者中，VEGF-C陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）；而在腫瘤直徑大于4cm的患者中，VEGF-C陽性表達(dá)率高達(dá)[X]%（[X]/[X]），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這表明VEGF-C的高表達(dá)可能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和生長，使得腫瘤體積不斷增大。從機(jī)制上分析，VEGF-C通過與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的VEGFR-2和VEGFR-3結(jié)合，激活下游信號(hào)通路，促進(jìn)血管生成和淋巴管生成。新生的血管為腫瘤細(xì)胞提供了豐富的營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣，滿足了腫瘤細(xì)胞快速增殖的需求，從而導(dǎo)致腫瘤體積增大。此外，VEGF-C還可以調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲，使得腫瘤向周圍組織浸潤，進(jìn)一步增大腫瘤的體積。與之相反，NM23的表達(dá)與甲狀腺癌腫瘤大小呈負(fù)相關(guān)。隨著腫瘤直徑的增加，NM23的陽性表達(dá)率逐漸降低。在腫瘤直徑小于1cm的甲狀腺癌患者中，NM23陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）；而在腫瘤直徑大于4cm的患者中，NM23陽性表達(dá)率僅為[X]%（[X]/[X]），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這說明NM23在抑制腫瘤生長方面發(fā)揮著重要作用。NM23可以通過多種機(jī)制抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和生長。NM23具有核苷二磷酸激酶（NDPK）活性，能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的能量代謝，影響腫瘤細(xì)胞的DNA復(fù)制和RNA轉(zhuǎn)錄，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。NM23還可以通過調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的組裝和解聚，影響腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和遷移能力，減少腫瘤細(xì)胞向周圍組織的浸潤和擴(kuò)散，進(jìn)而抑制腫瘤的生長。在甲狀腺癌分期方面，VEGF-C和NM23的表達(dá)同樣呈現(xiàn)出明顯的差異。根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟（UICC）的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，將甲狀腺癌患者分為Ⅰ-Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期。研究結(jié)果顯示，VEGF-C在Ⅲ-Ⅳ期甲狀腺癌中的陽性表達(dá)率顯著高于Ⅰ-Ⅱ期患者。在Ⅰ-Ⅱ期甲狀腺癌中，VEGF-C陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）；而在Ⅲ-Ⅳ期甲狀腺癌中，VEGF-C陽性表達(dá)率高達(dá)[X]%（[X]/[X]），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。隨著甲狀腺癌分期的升高，腫瘤細(xì)胞對(duì)血管生成和淋巴管生成的需求增加，VEGF-C的表達(dá)也相應(yīng)上調(diào)，以滿足腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移需要。VEGF-C的高表達(dá)促進(jìn)了腫瘤血管和淋巴管的生成，使得腫瘤細(xì)胞更容易進(jìn)入血液循環(huán)和淋巴循環(huán)，從而導(dǎo)致腫瘤的轉(zhuǎn)移和分期的進(jìn)展。而NM23在Ⅲ-Ⅳ期甲狀腺癌中的陽性表達(dá)率則顯著低于Ⅰ-Ⅱ期患者。在Ⅰ-Ⅱ期甲狀腺癌中，NM23陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）；在Ⅲ-Ⅳ期甲狀腺癌中，NM23陽性表達(dá)率降至[X]%（[X]/[X]），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這表明隨著甲狀腺癌病情的進(jìn)展，NM23的表達(dá)逐漸降低，其抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用減弱。在腫瘤發(fā)展的早期階段，NM23能夠有效抑制腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲，防止腫瘤的轉(zhuǎn)移。但隨著腫瘤分期的升高，腫瘤細(xì)胞可能通過多種機(jī)制下調(diào)NM23的表達(dá)，從而逃避NM23的抑制作用，使得腫瘤更容易發(fā)生轉(zhuǎn)移。例如，腫瘤細(xì)胞可能通過甲基化等表觀遺傳修飾機(jī)制，抑制NM23基因的表達(dá)，導(dǎo)致其蛋白水平降低，進(jìn)而失去對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移的抑制作用。5.2與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是甲狀腺癌常見的轉(zhuǎn)移方式，對(duì)患者的預(yù)后產(chǎn)生著深遠(yuǎn)影響。VEGF-C和NM23在甲狀腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，其表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。研究表明，VEGF-C的高表達(dá)與甲狀腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。對(duì)[X]例甲狀腺癌患者的分析顯示，存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，VEGF-C陽性表達(dá)率高達(dá)[X]%（[X]/[X]）；而在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，VEGF-C陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]），兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。VEGF-C促進(jìn)甲狀腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的機(jī)制主要與其促進(jìn)淋巴管生成的作用有關(guān)。VEGF-C能夠特異性地與淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞表面的受體VEGFR-3結(jié)合，激活下游信號(hào)通路，如PI3K/Akt、Ras/Raf/MEK/ERK等。這些信號(hào)通路的激活促進(jìn)了淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和存活，誘導(dǎo)腫瘤周邊和腫瘤內(nèi)部新生淋巴管的形成。新生的淋巴管結(jié)構(gòu)和功能存在異常，其管壁薄弱、基底膜不完整，且缺乏有效的瓣膜結(jié)構(gòu)，使得腫瘤細(xì)胞更容易進(jìn)入淋巴管。腫瘤細(xì)胞進(jìn)入淋巴管后，隨著淋巴液的流動(dòng)，到達(dá)局部淋巴結(jié)，從而導(dǎo)致淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。VEGF-C還可以通過調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境，招募免疫抑制細(xì)胞，抑制機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)，為腫瘤細(xì)胞的淋巴轉(zhuǎn)移創(chuàng)造有利條件。相反，NM23的低表達(dá)與甲狀腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)。在本研究中，甲狀腺癌伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，NM23陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]），明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的[X]%（[X]/[X]），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。NM23抑制甲狀腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制較為復(fù)雜。它可以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的黏附能力，上調(diào)E-鈣黏蛋白的表達(dá)，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞之間的黏附力，從而抑制腫瘤細(xì)胞從原發(fā)灶的脫離和侵襲，減少腫瘤細(xì)胞進(jìn)入淋巴管的機(jī)會(huì)。NM23能夠抑制腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力，通過調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架蛋白的組裝和解聚，影響腫瘤細(xì)胞的偽足形成和細(xì)胞遷移能力，使腫瘤細(xì)胞難以在淋巴管內(nèi)遷移和擴(kuò)散。NM23還可以抑制與腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲相關(guān)的信號(hào)通路，如PI3K/Akt、RhoGTPases等信號(hào)通路，從而降低腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移潛能。通過檢測VEGF-C和NM23的表達(dá)水平，能夠有效預(yù)測甲狀腺癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)。在臨床實(shí)踐中，對(duì)于VEGF-C高表達(dá)且NM23低表達(dá)的甲狀腺癌患者，應(yīng)高度警惕淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生，加強(qiáng)術(shù)前評(píng)估和術(shù)后隨訪。術(shù)前可通過超聲、CT等影像學(xué)檢查，以及細(xì)針穿刺活檢等手段，更準(zhǔn)確地判斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，為手術(shù)方案的制定提供依據(jù)。術(shù)后則需密切監(jiān)測患者的病情變化，及時(shí)發(fā)現(xiàn)和處理可能出現(xiàn)的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)。這對(duì)于提高甲狀腺癌的治療效果，改善患者的預(yù)后具有重要意義。5.3與腫瘤分化程度的關(guān)系腫瘤分化程度是反映腫瘤細(xì)胞成熟程度和惡性程度的重要指標(biāo)，它在很大程度上決定了腫瘤的生物學(xué)行為和患者的預(yù)后。VEGF-C和NM23在甲狀腺癌中的表達(dá)與腫瘤分化程度之間存在著緊密而復(fù)雜的聯(lián)系，深入探究這種聯(lián)系對(duì)于準(zhǔn)確判斷腫瘤的惡性程度和指導(dǎo)臨床治療具有至關(guān)重要的意義。在甲狀腺癌中，VEGF-C的表達(dá)與腫瘤分化程度呈負(fù)相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，隨著腫瘤分化程度的降低，VEGF-C的表達(dá)水平顯著升高。在高分化的甲狀腺癌組織中，VEGF-C的陽性表達(dá)率相對(duì)較低；而在低分化的甲狀腺癌組織中，VEGF-C的陽性表達(dá)率明顯升高。以甲狀腺乳頭狀癌和甲狀腺未分化癌為例，甲狀腺乳頭狀癌屬于分化較好的甲狀腺癌類型，其VEGF-C陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）；而甲狀腺未分化癌是分化極差的高度惡性腫瘤，VEGF-C陽性表達(dá)率高達(dá)[X]%（[X]/[X]），兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這表明腫瘤分化程度越低，癌細(xì)胞的惡性程度越高，其對(duì)血管生成和淋巴管生成的需求也更為迫切，從而導(dǎo)致VEGF-C的表達(dá)上調(diào)。低分化的腫瘤細(xì)胞具有更強(qiáng)的增殖和侵襲能力，需要更多的營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣供應(yīng)，VEGF-C通過促進(jìn)血管生成和淋巴管生成，為腫瘤細(xì)胞提供了必要的生存條件，同時(shí)也增加了腫瘤轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。NM23的表達(dá)則與甲狀腺癌腫瘤分化程度呈正相關(guān)。腫瘤分化程度越高，NM23的表達(dá)水平越高；反之，腫瘤分化程度越低，NM23的表達(dá)水平越低。在高分化的甲狀腺癌組織中，NM23的陽性表達(dá)率較高；而在低分化的甲狀腺癌組織中，NM23的陽性表達(dá)率顯著降低。在甲狀腺乳頭狀癌中，NM23陽性表達(dá)率為[X]%（[X]/[X]）；而在甲狀腺未分化癌中，NM23陽性表達(dá)率僅為[X]%（[X]/[X]），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這說明NM23在維持腫瘤細(xì)胞的正常分化狀態(tài)和抑制腫瘤的惡性進(jìn)展方面發(fā)揮著重要作用。高表達(dá)的NM23可以通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，維持腫瘤細(xì)胞的分化特征，從而降低腫瘤的惡性程度。當(dāng)腫瘤細(xì)胞分化程度降低時(shí)，NM23的表達(dá)也隨之減少，使得腫瘤細(xì)胞更容易發(fā)生轉(zhuǎn)移和惡化。VEGF-C和NM23表達(dá)與腫瘤分化程度的這種相關(guān)性，為判斷甲狀腺癌的惡性程度提供了重要依據(jù)。在臨床實(shí)踐中，通過檢測甲狀腺癌組織中VEGF-C和NM23的表達(dá)水平，可以輔助醫(yī)生更準(zhǔn)確地評(píng)估腫瘤的分化程度和惡性程度。對(duì)于VEGF-C高表達(dá)且NM23低表達(dá)的甲狀腺癌患者，提示腫瘤分化程度低，惡性程度高，預(yù)后可能較差，臨床醫(yī)生應(yīng)采取更為積極的治療策略，如擴(kuò)大手術(shù)范圍、加強(qiáng)術(shù)后輔助治療等。而對(duì)于VEGF-C低表達(dá)且NM23高表達(dá)的患者，腫瘤分化程度相對(duì)較高，惡性程度較低，預(yù)后可能較好，治療方案可以相對(duì)保守。這種基于生物標(biāo)志物表達(dá)水平的個(gè)性化治療策略，有助于提高甲狀腺癌的治療效果，改善患者的預(yù)后。六、VEGF-C和NM23在甲狀腺癌中的臨床意義探討6.1作為診斷標(biāo)志物的潛力甲狀腺癌的早期診斷對(duì)于提高患者的生存率和生活質(zhì)量至關(guān)重要。目前，甲狀腺癌的診斷主要依賴于超聲檢查、細(xì)針穿刺活檢等方法，但這些方法存在一定的局限性。超聲檢查對(duì)于微小癌灶的診斷準(zhǔn)確性有限，且難以準(zhǔn)確判斷腫瘤的良惡性；細(xì)針穿刺活檢雖然是診斷甲狀腺癌的重要手段，但其屬于有創(chuàng)檢查，存在一定的并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)，且對(duì)于某些不典型病例，診斷結(jié)果可能存在誤差。因此，尋找新的可靠的診斷標(biāo)志物具有重要的臨床意義。VEGF-C和NM23作為與甲狀腺癌發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的生物標(biāo)志物，在甲狀腺癌的早期診斷中展現(xiàn)出了巨大的潛力。研究表明，VEGF-C在甲狀腺癌組織中的表達(dá)顯著高于正常甲狀腺組織，且其表達(dá)水平與腫瘤的大小、分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分化程度密切相關(guān)。在甲狀腺癌的早期階段，腫瘤細(xì)胞就開始高表達(dá)VEGF-C，通過促進(jìn)血管生成和淋巴管生成，為腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移提供必要條件。因此，檢測血清或組織中的VEGF-C水平，有可能成為早期發(fā)現(xiàn)甲狀腺癌的有效方法。一項(xiàng)針對(duì)甲狀腺結(jié)節(jié)患者的研究發(fā)現(xiàn)，在最終確診為甲狀腺癌的患者中，術(shù)前血清VEGF-C水平明顯高于甲狀腺良性結(jié)節(jié)患者，且以某一特定值作為截?cái)嘀禃r(shí)，血清VEGF-C檢測診斷甲狀腺癌的靈敏度和特異度分別達(dá)到了[X]%和[X]%，這表明VEGF-C在甲狀腺癌的早期診斷中具有較高的價(jià)值。NM23在甲狀腺癌中的表達(dá)顯著低于正常甲狀腺組織，且其低表達(dá)與甲狀腺癌的惡性程度和轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)。在甲狀腺癌的早期，NM23的表達(dá)就開始下降，隨著腫瘤的進(jìn)展，其表達(dá)水平進(jìn)一步降低。通過檢測NM23的表達(dá)水平，可以輔助判斷甲狀腺結(jié)節(jié)的良惡性，提高早期診斷的準(zhǔn)確性。有研究對(duì)甲狀腺結(jié)節(jié)患者進(jìn)行術(shù)前穿刺活檢，檢測組織中NM23的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在甲狀腺癌患者中，NM23低表達(dá)的比例明顯高于甲狀腺良性病變患者，以NM23表達(dá)陰性或弱陽性作為診斷甲狀腺癌的標(biāo)準(zhǔn)，其診斷的靈敏度為[X]%，特異度為[X]%，顯示出NM23在甲狀腺癌早期診斷中的重要作用。將VEGF-C和NM23聯(lián)合檢測，能夠進(jìn)一步提高甲狀腺癌的診斷準(zhǔn)確性。由于兩者在甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著相反的作用，聯(lián)合檢測可以從多個(gè)角度反映腫瘤的生物學(xué)行為，彌補(bǔ)單一標(biāo)志物檢測的不足。本研究通過構(gòu)建受試者工作特征（ROC）曲線，對(duì)VEGF-C和NM23聯(lián)合檢測的診斷效能進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果顯示，VEGF-C和NM23聯(lián)合檢測診斷甲狀腺癌的曲線下面積（AUC）為[X]，顯著高于VEGF-C或NM23單獨(dú)檢測時(shí)的AUC（分別為[X]和[X]）。在最佳截?cái)嘀迪?，?lián)合檢測的靈敏度為[X]%，特異度為[X]%，明顯優(yōu)于單一標(biāo)志物檢測。這表明VEGF-C和NM23聯(lián)合檢測能夠更準(zhǔn)確地鑒別甲狀腺癌與正常甲狀腺組織或良性病變，為甲狀腺癌的早期診斷提供了更有效的方法。在臨床實(shí)踐中，對(duì)于甲狀腺結(jié)節(jié)患者，尤其是那些超聲檢查結(jié)果不典型或難以明確診斷的患者，檢測血清或組織中的VEGF-C和NM23水平，并進(jìn)行聯(lián)合分析，有助于提高甲狀腺癌的早期診斷率，為患者的及時(shí)治療提供依據(jù)。6.2對(duì)治療方案選擇的指導(dǎo)意義VEGF-C和NM23的表達(dá)情況對(duì)甲狀腺癌治療方案的選擇具有重要的指導(dǎo)意義，能夠幫助臨床醫(yī)生制定更為精準(zhǔn)、有效的治療策略，提高治療效果，改善患者預(yù)后。在手術(shù)方式的選擇上，VEGF-C和NM23的表達(dá)可提供關(guān)鍵信息。對(duì)于VEGF-C高表達(dá)且NM23低表達(dá)的甲狀腺癌患者，由于這類患者腫瘤的侵襲性和轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)較高，可能需要采取更為激進(jìn)的手術(shù)方式。在甲狀腺乳頭狀癌患者中，若檢測到VEGF-C高表達(dá)，提示腫瘤可能已發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或具有較高的轉(zhuǎn)移傾向，此時(shí)應(yīng)考慮行甲狀腺全切術(shù)及中央?yún)^(qū)淋巴結(jié)清掃術(shù)，以徹底清除腫瘤組織，降低復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。研究表明，對(duì)于VEGF-C陽性表達(dá)的甲狀腺癌患者，行甲狀腺全切術(shù)聯(lián)合中央?yún)^(qū)淋巴結(jié)清掃術(shù)，其術(shù)后5年無病生存率明顯高于僅行甲狀腺部分切除術(shù)的患者。而對(duì)于VEGF-C低表達(dá)且NM23高表達(dá)的患者，腫瘤的惡性程度相對(duì)較低，轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)較小，可考慮采用相對(duì)保守的手術(shù)方式，如甲狀腺腺葉切除術(shù)，在保證腫瘤根治的前提下，最大程度地保留甲狀腺功能，減少手術(shù)對(duì)患者身體的創(chuàng)傷和術(shù)后甲狀腺功能減退的發(fā)生，提高患者的生活質(zhì)量。在放化療方案的制定方面，VEGF-C和NM23的表達(dá)同樣具有重要參考價(jià)值。VEGF-C高表達(dá)的甲狀腺癌患者，腫瘤血管生成活躍，對(duì)放療和化療的敏感性可能較低。這是因?yàn)樨S富的腫瘤血管會(huì)增加腫瘤細(xì)胞的氧供和營養(yǎng)供應(yīng)，使其更具抵抗放化療損傷的能力。針對(duì)這類患者，可考慮在放化療的基礎(chǔ)上聯(lián)合抗VEGF-C治療，通過抑制VEGF-C的活性，阻斷腫瘤血管生成，提高腫瘤細(xì)胞對(duì)放化療的敏感性。有研究將抗VEGF-C的靶向藥物與化療藥物聯(lián)合應(yīng)用于VEGF-C高表達(dá)的甲狀腺癌患者，結(jié)果顯示，聯(lián)合治療組的腫瘤緩解率明顯高于單純化療組，患者的生存期也得到了顯著延長。對(duì)于NM23低表達(dá)的患者，由于其腫瘤轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)高，預(yù)后較差，可適當(dāng)加強(qiáng)術(shù)后的輔助放化療，以降低腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)。通過增加放療劑量、延長化療周期或選擇更強(qiáng)效的化療藥物等方式，對(duì)潛在的轉(zhuǎn)移病灶進(jìn)行有效的控制，提高患者的生存率。VEGF-C和NM23的表達(dá)情況在甲狀腺癌治療方案的選擇中起著關(guān)鍵的指導(dǎo)作用。臨床醫(yī)生應(yīng)充分重視這兩個(gè)生物標(biāo)志物的檢測結(jié)果，結(jié)合患者的具體病情，制定個(gè)性化的治療方案，實(shí)現(xiàn)甲狀腺癌的精準(zhǔn)治療，為患者帶來更好的治療效果和生存質(zhì)量。6.3與預(yù)后評(píng)估的相關(guān)性準(zhǔn)確評(píng)估甲狀腺癌患者的預(yù)后對(duì)于制定個(gè)性化的治療方案、指導(dǎo)臨床決策以及預(yù)測患者的生存情況至關(guān)重要。VEGF-C和NM23作為與甲狀腺癌發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的生物標(biāo)志物，在預(yù)后評(píng)估中展現(xiàn)出了重要的價(jià)值。研究表明，VEGF-C的高表達(dá)與甲狀腺癌患者的不良預(yù)后密切相關(guān)。對(duì)[X]例甲狀腺癌患者進(jìn)行長期隨訪，結(jié)果顯示，VEGF-C陽性表達(dá)的患者其生存率明顯低于VEGF-C陰性表達(dá)的患者。在隨訪期間，VEGF-C陽性患者的5年生存率為[X]%，而VEGF-C陰性患者的5年生存率高達(dá)[X]%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。VEGF-C高表達(dá)的患者復(fù)發(fā)率也顯著增加，5年內(nèi)復(fù)發(fā)率為[X]%，明顯高于VEGF-C陰性患者的[X]%。這是因?yàn)閂EGF-C通過促進(jìn)腫瘤血管生成和淋巴管生成，為腫瘤細(xì)胞提供了充足的營養(yǎng)供應(yīng)和轉(zhuǎn)移途徑，使得腫瘤細(xì)胞更容易生長、增殖和轉(zhuǎn)移，從而導(dǎo)致患者的預(yù)后變差。VEGF-C還可以調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境，抑制機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展和復(fù)發(fā)。NM23的低表達(dá)同樣與甲狀腺癌患者的不良預(yù)后相關(guān)。在本研究中，NM23陽性表達(dá)的甲狀腺癌患者5年生存率為[X]%，而NM23陰性表達(dá)的患者5年生存率僅為[X]%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。NM23低表達(dá)患者的復(fù)發(fā)率為[X]%，明顯高于NM23高表達(dá)患者的[X]%。NM23作為腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，其低表達(dá)使得腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移抑制作用減弱，腫瘤細(xì)胞更容易從原發(fā)灶脫離，侵入周圍組織和淋巴管，進(jìn)而發(fā)生轉(zhuǎn)移。NM23還可以通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，影響腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡和分化等過程，當(dāng)NM23表達(dá)降低時(shí)，腫瘤細(xì)胞的