ICS71.100.70 T/SHRH017-AntimicrobialEffectivenessTestingof 目前 范 附錄A培養(yǎng)基和試 化妝品安全技術(shù)規(guī)范（2015版）消毒技術(shù)規(guī)范（2002版）GB/T6682-2008GB19489-2008GB4789.28-2013為了保護(hù)實(shí)驗(yàn)室人員的安全，應(yīng)由具備資格的工作人員進(jìn)行檢測，所有培養(yǎng)物和廢棄物應(yīng)參照GB19489中的有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。中和產(chǎn)物（productof水浴鍋：48℃±20.5μL~10μL10μL~100μL100μL~1000μL無菌吸管，10.0mL（0.1mL刻度）離心機(jī)：2000玻璃試管（18恒溫培養(yǎng)箱：32.5℃±2.522.5℃±2.5實(shí)驗(yàn)用水：應(yīng)符合GB/T6682營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：見附錄A.2沙氏瓊脂培養(yǎng)基（SDA）：見附錄A.3EugonLT100A.4D/E中和肉湯（Dey/Engley中和肉湯）:見附錄A.5附小磁珠接種于沙氏葡萄糖瓊脂斜面，28℃±218-24h1代培養(yǎng)物，劃線接SDA平板，28℃±218-24h2SDA瓊20sPBS緩沖液將其稀釋成約1.0106cfu/mL~1.0107cfu/mL2h2℃~824h。取適量的菌體或菌種吸附小磁珠接種于胰蛋白胨大豆瓊脂斜面，36℃±118-24h。用接種環(huán)1代培養(yǎng)物，劃線接種于TSA平板，36℃±118-24h2代培養(yǎng)物中典型菌落，劃線接種于TSA瓊脂斜面，36℃±118-24h3代培養(yǎng)物。吸取適量的20s。1.0107cfu/m~1.0108cfu/mLL2h內(nèi)2℃~824h。磁珠接種于馬鈴薯葡萄糖瓊脂斜面，22.5℃±2.57d-11d0.05%(v/v)吐溫80生理鹽水加入斜面試管內(nèi)，刮洗黑曲霉分生孢子于溶液中。將孢子懸液轉(zhuǎn)移至裝有玻璃珠的無菌三1min后，用無菌玻璃棉過濾除去菌絲。過濾后，顯微鏡下（400倍）觀察懸液中是2000g20min除去菌絲。再次在顯微鏡下觀察，若仍cfu/mL2℃~82d，使用前混合均勻化學(xué)中和劑的選擇：為了中和化妝品中的防腐劑，多采用D/E中和肉湯、EugonLT100液體培養(yǎng)基將1g或1mL樣品加入到9mL中和劑中，徹底混勻，室溫作用30±15min，制成中和產(chǎn)物；若中和效果不理想，可用中和劑作為稀釋液進(jìn)行二次倍比稀釋。將1mL稀釋液（PBS）加入到9mL中和劑中，徹底混勻，室溫作用30±15min，作為對照組。分別接種1mL7.2.3.1中制備的菌液至測試管（含10mL中和產(chǎn)物）和對照管中，渦旋混勻。同時(shí)接種1mL7.2.3.1中制備的菌液至10mL稀釋液（PBS）中，作為陽性對照組。為TSA，36℃±1℃，培養(yǎng)48h；白色假絲酵母菌培養(yǎng)基為SDA，28℃±2℃，培養(yǎng)48-72h。接種：取0.2mL7.1中制備的菌液，加入到裝有20g或20mL樣品的無菌塑料瓶中，徹底混合均Nx（X=7，14，28計(jì)數(shù)：培養(yǎng)至特定時(shí)間后（7，14，21，28天，取1mL或1g接種后的樣品，加入含有9mL無菌假單胞菌\金黃色葡萄球菌\大腸桿菌和白色假絲酵母菌在32.5℃±2.5℃培養(yǎng)48-72h。并按照Nx=C/(Vd)計(jì)算樣品中的活菌濃度（C代表計(jì)數(shù)平板上的菌落平均數(shù)；V代表計(jì)數(shù)平板上的加菌樣品接種量，一般為1mL；d代表計(jì)數(shù)平板對應(yīng)的稀釋倍數(shù)。品）的防腐挑戰(zhàn)試驗(yàn)中，推薦增加魯氏接合酵母NCYC381。1 b：NINx與前一測試時(shí)間點(diǎn)相比未增長。附錄0.03mol/L磷酸鹽緩沖液121℃高壓蒸汽滅菌15min。蛋白 10.0牛肉 氯化 瓊 15.0g–蒸餾 1000:除瓊脂外其他成分溶解于蒸餾水中，調(diào)pH至7.2~7.4，然后加入瓊脂，加熱溶解，分裝；121℃高壓蒸汽滅菌15min后備用。蛋白 葡萄 瓊 蒸餾 1000700ml蒸餾水將瓊脂溶解，300mL蒸餾水將葡萄糖與蛋白胨溶解，混合上述兩部分，調(diào)pH至5.6±0.2，搖勻后分裝,115℃壓力蒸汽滅菌15min；使用前，用過濾除菌方法加入0.1g/L的氯霉素或者0.03g/L的鏈霉素。EugonLT100 15.0 5.0 0.7氯化 4.0 5.0葡萄 0.2卵磷 5.5 5.0 1.0蒸餾 1000制法：將上述各成分，吐溫80，辛苯聚醇—9以及卵磷脂依次加入到沸水中煮沸至完全溶解。待溶液冷卻后，調(diào)節(jié)pH至7.0±0.2，將培養(yǎng)基分裝至合適容器中，于121℃高壓滅菌15min。D/E中和肉湯（Dey/Engley中和肉湯葡萄 10.0 7.0 6.0吐溫 5.0 5.0 2.5 2.5 1.0 0.02蒸餾 10007.0±0.212115min 5.0氯化 5.0 0.1蒸餾 100080以及卵磷脂依次加入到沸水中煮沸至完全溶解，加熱時(shí)混合其他成分溶解，輕輕15min 15.0 5.0氯化 5.0瓊 15.0蒸餾 1000滅菌15min后備用。附錄B80,30g/L+卵磷脂，3脂肪醇環(huán)氧乙烷冷凝液，7g/L+20g/L+80,4DEa；SDCLPbg/L80,580,30g/LSDS4g/L+脂，380,30g/L+皂素，30g/L+DEg/L80,5+組氨酸，180,30g/L+皂素，30g/L+L-1g/L L-半胱氨酸，1DE80,3g/LL-組氨酸，0.58030g/L+皂素，30g/L+卵磷脂，3