實(shí)驗室檢測儀器中英文操作手冊——高效液相色譜儀（HighPerformanceLiquidChromatography,HPLC）1.前言（Preface）本手冊旨在為實(shí)驗室操作人員提供高效液相色譜儀（HPLC）的規(guī)范操作指南，涵蓋儀器原理、安全注意事項、操作步驟、維護(hù)保養(yǎng)及常見問題排查。手冊適用于新手操作人員及有一定經(jīng)驗的使用者，旨在確保儀器運(yùn)行穩(wěn)定、檢測結(jié)果準(zhǔn)確，并延長儀器使用壽命。本手冊基于Agilent1260InfinityII系列HPLC編寫，其他型號可參考調(diào)整。2.儀器概述（InstrumentOverview）2.1工作原理（WorkingPrinciple）HPLC通過流動相（MobilePhase）攜帶樣品流經(jīng)固定相（StationaryPhase，色譜柱），利用樣品中各組分與固定相/流動相的分配系數(shù)差異實(shí)現(xiàn)分離，分離后的組分通過檢測器（Detector）檢測，最終由數(shù)據(jù)系統(tǒng)（DataSystem）記錄并分析結(jié)果。中文名稱英文名稱功能描述泵Pump提供穩(wěn)定的流動相流速（0.1-10mL/min），確保分離的重復(fù)性。進(jìn)樣器Autosampler自動注入樣品（1-100μL），避免手動誤差。色譜柱ChromatographicColumn分離核心部件，固定相填充其中（如C18反相柱）。檢測器Detector檢測分離后的組分（如紫外檢測器（UV）檢測波長____nm）。數(shù)據(jù)系統(tǒng)DataSystem控制儀器運(yùn)行、采集數(shù)據(jù)（峰面積、保留時間）及生成報告（如AgilentOpenLAB）。3.安全注意事項（SafetyPrecautions）3.1電氣安全（ElectricalSafety）儀器必須接地（Grounding），避免靜電或漏電事故。禁止?jié)袷植僮麟娫撮_關(guān)或插拔電纜。儀器運(yùn)行時，禁止打開電源箱蓋。3.2化學(xué)安全（ChemicalSafety）流動相（如甲醇、乙腈）需在通風(fēng)櫥（FumeHood）中配制，避免吸入揮發(fā)性氣體。接觸流動相時，佩戴耐化學(xué)腐蝕手套（NitrileGloves）和護(hù)目鏡。廢棄流動相應(yīng)倒入有機(jī)廢液桶，禁止倒入下水道。3.3操作安全（OperationalSafety）儀器運(yùn)行時，禁止打開色譜柱艙門或進(jìn)樣器蓋。更換色譜柱前，需停止泵運(yùn)行并釋放系統(tǒng)壓力。禁止隨意修改儀器參數(shù)（如流速、波長），如需調(diào)整需經(jīng)負(fù)責(zé)人確認(rèn)。4.操作步驟（OperatingProcedures）4.1開機(jī)前準(zhǔn)備（Pre-operationPreparation）1.檢查流動相瓶液位：確保流動相（如甲醇-水=70:30）充足（≥瓶體積的1/3）。2.檢查管路連接：確認(rèn)泵與色譜柱、檢測器之間的管路無松動或漏液。3.檢查色譜柱：確認(rèn)色譜柱型號（如C18，5μm，4.6×250mm）與實(shí)驗要求一致，柱兩端密封墊無損壞。4.開啟實(shí)驗室空調(diào)：保持室溫在18-25℃，避免溫度波動影響分離效果。英文對照：1.Checkmobilephaselevel:Ensuresufficientmobilephase(e.g.,methanol-water=70:30)(≥1/3ofbottlevolume).2.Inspecttubingconnections:Confirmnolooseorleakingconnectionsbetweenpump,column,anddetector.3.Checkcolumn:Verifycolumnmodel(e.g.,C18,5μm,4.6×250mm)matchesexperimentrequirements,andendfittingsareintact.4.Turnonlabairconditioner:Maintainroomtemperatureat18-25℃toavoidtemperaturefluctuationsaffectingseparation.4.2開機(jī)與預(yù)熱（Power-onandPreheating）1.打開儀器主電源（MainPowerSwitch）。2.依次開啟泵（Pump）、檢測器（Detector）、數(shù)據(jù)系統(tǒng)（DataSystem）。3.等待預(yù)熱：紫外檢測器（UV）需預(yù)熱30分鐘，直至基線穩(wěn)定（BaselineStability，噪音≤0.01mAU）。英文對照：1.Turnonthemainpowerswitch.2.Poweronthepump,detector,anddatasysteminsequence.3.Waitforpreheating:UVdetectorrequires30minutestostabilize(baselinenoise≤0.01mAU).4.3流動相配制與安裝（MobilePhasePreparationandInstallation）1.配制流動相：按實(shí)驗要求混合溶劑（如甲醇700mL+水300mL），攪拌均勻。2.過濾：用0.45μm有機(jī)相濾膜（OrganicMembraneFilter）過濾流動相，去除顆粒雜質(zhì)。3.脫氣：將流動相置于超聲清洗器（UltrasonicCleaner）中，超聲15分鐘去除氣泡（避免泵運(yùn)行時產(chǎn)生壓力波動）。4.安裝流動相瓶：將過濾后的流動相倒入瓶中，插入吸液管（SolventInletTube），確保管底接觸瓶底。英文對照：1.Preparemobilephase:Mixsolventsasrequired(e.g.,700mLmethanol+300mLwater)andstirwell.2.Filter:Filterthemobilephasethrougha0.45μmorganicmembranefiltertoremoveparticulates.3.Degas:Sonicatethemobilephasefor15minutestoremoveairbubbles(preventpressurefluctuationsduringpumpoperation).4.Installmobilephasebottle:Pourthefilteredmobilephaseintothebottle,insertthesolventinlettube,andensurethetubebottomtouchesthebottlebottom.4.4色譜柱平衡（ColumnEquilibration）1.設(shè)置泵參數(shù)：流速（FlowRate）=1.0mL/min，流動相比例（MobilePhaseRatio）=70:30（甲醇:水）。2.啟動泵：點(diǎn)擊數(shù)據(jù)系統(tǒng)中的“StartPump”，觀察系統(tǒng)壓力（SystemPressure）是否穩(wěn)定（如C18柱壓力約____bar）。3.平衡色譜柱：持續(xù)泵入流動相30分鐘，直至基線穩(wěn)定（無明顯波動）。英文對照：1.Setpumpparameters:Flowrate=1.0mL/min,mobilephaseratio=70:30(methanol:water).2.Startpump:Click"StartPump"inthedatasystem,andcheckifthesystempressureisstable(e.g.,____barforC18column).3.Equilibratecolumn:Pumpmobilephasefor30minutesuntilthebaselineisstable(nosignificantfluctuations).4.5樣品制備與進(jìn)樣（SamplePreparationandInjection）1.樣品提?。喝缧杼崛。ㄈ绻腆w樣品），用合適溶劑（如甲醇）超聲提取30分鐘，離心（1000rpm，5分鐘）取上清液。2.樣品過濾：用0.22μm有機(jī)相濾膜過濾樣品，去除雜質(zhì)（避免堵塞色譜柱）。3.樣品定容：將過濾后的樣品稀釋至所需濃度（如10μg/mL），轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣瓶（AutosamplerVial）中，加蓋密封。4.進(jìn)樣設(shè)置：在數(shù)據(jù)系統(tǒng)中設(shè)置進(jìn)樣量（InjectionVolume）=10μL，樣品瓶位置（VialPosition）=1號瓶。5.啟動進(jìn)樣：點(diǎn)擊“StartInjection”，進(jìn)樣器自動吸取樣品并注入色譜柱。英文對照：1.Sampleextraction:Forsolidsamples,extractwithappropriatesolvent(e.g.,methanol)bysonicationfor30minutes,centrifuge(1000rpm,5minutes),andtakethesupernatant.2.Samplefiltration:Filterthesamplethrougha0.22μmorganicmembranefiltertoremoveimpurities(preventcolumnclogging).3.Sampledilution:Dilutethefilteredsampletothedesiredconcentration(e.g.,10μg/mL),transfertoanautosamplervial,andsealwithacap.4.Injectionsetup:Setinjectionvolume=10μLandvialposition=1inthedatasystem.5.Startinjection:Click"StartInjection"toallowtheautosamplertodrawandinjectthesampleintothecolumn.4.6數(shù)據(jù)采集與處理（DataAcquisitionandProcessing）1.采集設(shè)置：在數(shù)據(jù)系統(tǒng)中設(shè)置檢測波長（DetectionWavelength）=254nm，運(yùn)行時間（RunTime）=20分鐘（根據(jù)樣品保留時間調(diào)整）。2.開始采集：點(diǎn)擊“StartAcquisition”，數(shù)據(jù)系統(tǒng)自動記錄色譜圖（Chromatogram）。3.峰積分：運(yùn)行結(jié)束后，用數(shù)據(jù)系統(tǒng)的積分功能（Integration）調(diào)整積分參數(shù)（如峰寬（PeakWidth）=0.1分鐘，斜率（Slope）=100），確保峰面積準(zhǔn)確。4.結(jié)果計算：根據(jù)校準(zhǔn)曲線（CalibrationCurve）計算樣品濃度（Concentration），公式：濃度=（樣品峰面積/校準(zhǔn)曲線斜率）+截距。英文對照：1.Acquisitionsetup:Setdetectionwavelength=254nmandruntime=20minutes(adjustbasedonsampleretentiontime)inthedatasystem.2.Startacquisition:Click"StartAcquisition"torecordthechromatogramautomatically.4.Resultcalculation:Calculatesampleconcentrationusingthecalibrationcurve:Concentration=(SamplePeakArea/CalibrationCurveSlope)+Intercept.4.7關(guān)機(jī)與維護(hù)（ShutdownandMaintenance）1.停止采集：點(diǎn)擊“StopAcquisition”，結(jié)束數(shù)據(jù)采集。2.沖洗色譜柱：將流動相切換為純甲醇（Methanol），設(shè)置流速=1.0mL/min，沖洗30分鐘（去除柱中殘留樣品，延長柱壽命）。3.關(guān)閉檢測器：點(diǎn)擊“TurnOffDetector”，待檢測器冷卻后關(guān)閉電源。4.關(guān)閉泵：點(diǎn)擊“StopPump”，釋放系統(tǒng)壓力（SystemPressure=0bar）。5.關(guān)閉電源：依次關(guān)閉數(shù)據(jù)系統(tǒng)、泵、主電源。6.清理現(xiàn)場：將進(jìn)樣瓶、濾膜等廢棄物放入指定容器，擦拭儀器表面（用干布）。英文對照：1.Stopacquisition:Click"StopAcquisition"toenddatacollection.2.Flushcolumn:Switchtopuremethanolasmobilephase,setflowrate=1.0mL/min,andflushfor30minutes(removeresidualsampleandextendcolumnlife).3.Turnoffdetector:Click"TurnOffDetector"andwaitforittocoolbeforeturningoffthepower.4.Stoppump:Click"StopPump"toreleasesystempressure(0bar).5.Turnoffpower:Shutdownthedatasystem,pump,andmainpowerinsequence.6.Cleanup:Disposeofautosamplervialsandfiltersindesignatedcontainers,andwipetheinstrumentsurfacewithadrycloth.5.維護(hù)保養(yǎng)（Maintenance）5.1日常維護(hù)（DailyMaintenance）清理進(jìn)樣器：用甲醇沖洗進(jìn)樣針（AutosamplerNeedle）3次，去除殘留樣品。檢查流動相瓶：每天更換流動相（避免細(xì)菌滋生），并清洗瓶內(nèi)壁（用甲醇）。監(jiān)測壓力：記錄每次運(yùn)行的系統(tǒng)壓力，若壓力波動超過10%，需檢查管路或色譜柱。5.2定期維護(hù)（PeriodicMaintenance）更換色譜柱：每6-12個月更換一次（根據(jù)使用頻率調(diào)整），若柱效下降（如理論塔板數(shù)（TheoreticalPlates）降低50%），需提前更換。更換泵密封件：每3-6個月更換一次（避免漏液），更換時需關(guān)閉泵電源并釋放壓力。校準(zhǔn)檢測器：每6個月校準(zhǔn)一次（如UV檢測器的波長準(zhǔn)確性），使用標(biāo)準(zhǔn)溶液（如萘的甲醇溶液）。6.常見問題排查（Troubleshooting）6.1壓力異常（AbnormalPressure）問題現(xiàn)象可能原因解決方法壓力過高（>200bar）色譜柱堵塞（ColumnClogged）反沖色譜柱（Backflushwithmethanolfor30minutes）；若無效，更換色譜柱。壓力過低（<50bar）流動相瓶空（EmptyMobilePhaseBottle）補(bǔ)充流動相（Refillmobilephase）；檢查管路連接（Tightentubingconnections）。6.2峰形異常（AbnormalPeakShape）問題現(xiàn)象可能原因解決方法峰拖尾（PeakTailging）色譜柱污染（ColumnContamination）用強(qiáng)溶劑（如乙腈）沖洗色譜柱30分鐘；調(diào)整流動相pH（如加入0.1%甲酸）。峰分叉（PeakSplitting）樣品過載（SampleOverload）稀釋樣品（Dilutesampleto50%concentration）；減少進(jìn)樣量（Reduceinjectionvolumeto5μL）。6.3基線問題（Baseline