DSG3表達與肺癌預(yù)后的關(guān)聯(lián)性研究：基于臨床與分子機制的深入剖析一、引言1.1研究背景與意義肺癌是全球范圍內(nèi)嚴重威脅人類健康的惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率長期居高不下。據(jù)相關(guān)統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，在眾多惡性腫瘤中，肺癌的發(fā)病率在男性群體中位居首位，在女性群體中也名列前茅，而其死亡率更是在所有癌癥死因中占據(jù)首位，占癌癥死亡患者總數(shù)的相當大比例，2020年中國新增肺癌病例數(shù)多達82萬例，給患者家庭和社會帶來了沉重的負擔。盡管醫(yī)療技術(shù)在不斷進步，肺癌的治療手段如手術(shù)、化療、放療、靶向治療及免疫治療等也日益豐富，但肺癌患者的總體預(yù)后仍然不甚理想，五年生存率較低。這主要是因為肺癌的發(fā)生發(fā)展是一個極其復雜的多步驟過程，涉及多個基因和信號通路的異常改變。肺癌的預(yù)后受到多種因素的綜合影響。其中，腫瘤的分期是一個關(guān)鍵因素，早期肺癌患者通過及時有效的治療，如手術(shù)切除，有可能獲得較好的預(yù)后，甚至實現(xiàn)臨床治愈；然而，晚期肺癌患者由于腫瘤的擴散和轉(zhuǎn)移，治療難度大幅增加，預(yù)后往往較差。不同的病理類型對肺癌預(yù)后也有著顯著影響，例如小細胞肺癌相較于非小細胞肺癌，其惡性程度更高，生長速度快，早期就容易發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移，因此預(yù)后更差。此外，患者自身的年齡、健康狀況以及是否存在其他慢性疾病等個體因素，也在很大程度上決定了患者對治療的耐受程度和預(yù)后效果，年齡較大或身體狀況不佳的患者可能無法承受強烈的治療方案，進而影響預(yù)后。在眾多影響肺癌預(yù)后的因素中，基因變異逐漸成為研究的焦點。特定的基因變異，如EGFR、ALK、ROS1等，不僅與肺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，還對肺癌的治療和預(yù)后產(chǎn)生重要影響。攜帶這些基因變異的肺癌患者，往往可以從相應(yīng)的靶向治療中獲益，生存期得到顯著延長，預(yù)后相對較好；而對于沒有這些特定基因變異的患者，靶向治療效果可能不理想，只能依賴傳統(tǒng)的化療、放療等治療手段，預(yù)后較差。因此，深入研究肺癌相關(guān)基因變異，對于揭示肺癌的發(fā)病機制、優(yōu)化治療策略以及準確評估預(yù)后具有至關(guān)重要的意義。橋粒芯蛋白3（Desmoglein3，DSG3）作為橋粒芯蛋白家族的重要成員，近年來在腫瘤研究領(lǐng)域逐漸受到關(guān)注。DSG3基因定位于人類染色體18q12.1-q12.2區(qū)域，其編碼的蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量約為160kDa。從結(jié)構(gòu)上看，DSG3具有5個大約相似的細胞外結(jié)構(gòu)域，即EC1（氨基端）至EC5（羧基端），這些細胞外結(jié)構(gòu)域含有與其他細胞蛋白相互作用的關(guān)鍵位點，在維持細胞間的黏附和連接方面發(fā)揮著不可或缺的作用。在正常生理狀態(tài)下，DSG3主要分布在復層鱗狀上皮表皮層的角質(zhì)細胞膜上，特別是在顆粒層和顆粒下層中呈優(yōu)勢表達。它與其他蛋白如DSG1共同形成細胞間的橋粒，這些橋粒對于維護組織結(jié)構(gòu)的完整性和穩(wěn)定性至關(guān)重要，確保細胞能夠緊密連接在一起，使組織正常發(fā)揮其生理功能。在自身免疫性疾病領(lǐng)域，DSG3早已被明確為尋常型天皰瘡（Pemphigusvulgaris，PV）的重要特異性抗原。在PV患者體內(nèi)，免疫系統(tǒng)出現(xiàn)異常，產(chǎn)生抗DSG3的抗體。這些抗體與DSG3特異性結(jié)合后，會干擾細胞間的正常連接，導致皮膚和黏膜上出現(xiàn)水皰和大皰，這是PV發(fā)病的關(guān)鍵病理過程。這一發(fā)現(xiàn)不僅加深了人們對PV發(fā)病機制的理解，也為PV的診斷和治療提供了重要的靶點和思路。近年來，越來越多的研究開始聚焦于DSG3在腫瘤中的生物學功能。已有研究表明，在鱗狀細胞癌中，DSG3能夠調(diào)節(jié)c-Jun/AP-1的活性以及蛋白激酶C（PKC）介導的Ezrin-Thr567的磷酸化。具體而言，DSG3會與Ezrin在質(zhì)膜上形成復合物，這一復合物對于Ezrin與F-actin和CD44的正常相互作用至關(guān)重要。當DSG3基因被敲除時，這些相互作用就會受到明顯干擾，導致癌細胞的運動能力增強，從而促進癌細胞的轉(zhuǎn)移。在DSG3過表達的細胞中，Ezrin磷酸化顯著增加，并且這種增加可被多種絲/蘇氨酸激酶的藥理抑制劑（如PKC和Rho激酶）大幅抑制。此外，在DSG3過表達細胞中還發(fā)現(xiàn)了c-JunS63磷酸化的顯著增加。這些研究結(jié)果共同揭示了一種新的DSG3調(diào)控機制，即DSG3通過活化c-Jun/AP-1以及依賴于PKC的Ezrin磷酸化過程，促進腫瘤細胞的浸潤和轉(zhuǎn)移。這一發(fā)現(xiàn)為深入理解腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移機制提供了新的視角，也使得DSG3成為腫瘤研究領(lǐng)域中一個極具潛力的研究靶點。然而，目前關(guān)于DSG3與肺癌預(yù)后相關(guān)性的研究仍相對較少，DSG3在肺癌發(fā)生發(fā)展過程中的具體作用機制尚未完全明確。鑒于肺癌的高發(fā)病率和高死亡率，以及DSG3在腫瘤研究領(lǐng)域展現(xiàn)出的潛在價值，深入探究DSG3與肺癌預(yù)后的相關(guān)性具有極其重要的意義。通過全面系統(tǒng)地研究DSG3在肺癌中的表達情況、功能作用以及與其他臨床病理因素的相互關(guān)系，有望為肺癌的預(yù)后評估提供新的生物標志物和潛在的治療靶點。這不僅有助于臨床醫(yī)生更準確地預(yù)測肺癌患者的預(yù)后，制定個性化的治療方案，提高治療效果和患者的生存率，還可能為肺癌的基礎(chǔ)研究和臨床治療開辟新的方向，具有重要的理論意義和臨床應(yīng)用價值。1.2DSG3概述橋粒芯蛋白3（Desmoglein3，DSG3）是橋粒芯蛋白家族（DSGs）的重要成員之一，在維持細胞間連接和組織結(jié)構(gòu)完整性方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用。其基因定位于人類染色體18q12.1-q12.2區(qū)域，編碼的蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量約為160kDa。從結(jié)構(gòu)上看，DSG3屬于細胞黏附分子中的鈣黏素超家族，和典型的鈣粘素一樣，它具有5個大約相似的細胞外結(jié)構(gòu)域，依次為EC1（氨基端）至EC5（羧基端）。這些細胞外結(jié)構(gòu)域含有與其他細胞蛋白相互作用的關(guān)鍵位點，對于維持細胞間的黏附和連接至關(guān)重要。例如，DSG3的EC1結(jié)構(gòu)域是同源和異源性相互作用的主要介質(zhì)，在細胞間的識別和結(jié)合過程中發(fā)揮著核心作用。在正常生理狀態(tài)下，DSG3主要分布在復層鱗狀上皮表皮層的角質(zhì)細胞膜上，并且在顆粒層和顆粒下層中呈優(yōu)勢表達。它與DSG1等其他蛋白共同形成細胞間的橋粒（Desmosomes）。橋粒作為一種特殊的細胞連接結(jié)構(gòu)，能夠使細胞緊密連接在一起，就像建筑物中的連接件一樣，確保組織的完整性和穩(wěn)定性。在皮膚組織中，橋粒的存在使得表皮細胞能夠緊密排列，形成有效的屏障，抵御外界環(huán)境的侵害；在口腔黏膜等組織中，橋粒同樣維持著細胞間的緊密連接，保證黏膜的正常功能。除了在維持組織完整性方面的重要作用外，DSG3還在自身免疫性疾病中扮演著關(guān)鍵角色。它是尋常型天皰瘡（Pemphigusvulgaris，PV）的重要特異性抗原。在PV患者體內(nèi)，免疫系統(tǒng)出現(xiàn)異常，產(chǎn)生抗DSG3的抗體。這些抗體與DSG3特異性結(jié)合后，會干擾細胞間的正常連接，導致皮膚和黏膜上出現(xiàn)水皰和大皰，嚴重影響患者的生活質(zhì)量。這一發(fā)現(xiàn)不僅揭示了PV的發(fā)病機制，也使得DSG3成為PV診斷和治療的重要靶點。近年來，隨著腫瘤研究的不斷深入，DSG3作為一種新興的腫瘤相關(guān)粘附因子，逐漸受到廣泛關(guān)注。越來越多的研究表明，DSG3在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移等過程中發(fā)揮著重要的生物學功能。在鱗狀細胞癌中，DSG3能夠調(diào)節(jié)c-Jun/AP-1的活性以及蛋白激酶C（PKC）介導的Ezrin-Thr567的磷酸化。具體來說，DSG3會與Ezrin在質(zhì)膜上形成復合物，這一復合物對于Ezrin與F-actin和CD44的正常相互作用至關(guān)重要。當DSG3基因被敲除時，這些相互作用就會受到明顯干擾，導致癌細胞的運動能力增強，從而促進癌細胞的轉(zhuǎn)移。在DSG3過表達的細胞中，Ezrin磷酸化顯著增加，并且這種增加可被多種絲/蘇氨酸激酶的藥理抑制劑（如PKC和Rho激酶）大幅抑制。此外，在DSG3過表達細胞中還發(fā)現(xiàn)了c-JunS63磷酸化的顯著增加。這些研究結(jié)果共同揭示了一種新的DSG3調(diào)控機制，即DSG3通過活化c-Jun/AP-1以及依賴于PKC的Ezrin磷酸化過程，促進腫瘤細胞的浸潤和轉(zhuǎn)移。這為深入理解腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移機制提供了新的視角，也使得DSG3成為腫瘤研究領(lǐng)域中一個極具潛力的研究靶點。1.3肺癌預(yù)后的影響因素肺癌的預(yù)后受到多種因素的綜合影響，這些因素相互作用，共同決定了患者的生存情況和治療效果。腫瘤分期是影響肺癌預(yù)后的關(guān)鍵因素之一。肺癌的分期通常采用國際抗癌聯(lián)盟（UICC）制定的TNM分期系統(tǒng)，該系統(tǒng)根據(jù)腫瘤的大?。═）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況（N）和遠處轉(zhuǎn)移情況（M）來對肺癌進行分期，從早期的I期到晚期的IV期。早期肺癌（如I期）腫瘤通常局限在肺部，尚未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠處轉(zhuǎn)移，此時通過手術(shù)切除等治療手段，患者的5年生存率相對較高，可達60%-70%左右。然而，隨著腫瘤分期的進展，預(yù)后逐漸變差。晚期肺癌（如IV期）患者由于腫瘤已經(jīng)發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移，治療難度大幅增加，5年生存率往往低于10%。這是因為晚期肺癌患者的腫瘤細胞已經(jīng)擴散到身體的其他部位，難以通過手術(shù)完全切除，且對化療、放療等治療手段的敏感性也會降低，容易出現(xiàn)復發(fā)和轉(zhuǎn)移。病理類型也是影響肺癌預(yù)后的重要因素。肺癌主要分為小細胞肺癌（Smallcelllungcancer，SCLC）和非小細胞肺癌（Non-smallcelllungcancer，NSCLC）兩大類，其中NSCLC約占肺癌總數(shù)的85%，又可進一步細分為腺癌、鱗癌和大細胞癌等。不同病理類型的肺癌在生物學行為、治療反應(yīng)和預(yù)后方面存在顯著差異。SCLC具有高度惡性，生長迅速，早期就容易發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移。雖然SCLC對化療和放療最初可能較為敏感，但容易復發(fā)，總體預(yù)后較差，5年生存率通常在10%-20%之間。NSCLC中的腺癌近年來發(fā)病率逐漸上升，尤其是在不吸煙的人群中更為常見。腺癌的生長相對較為緩慢，對靶向治療的敏感性較高，對于攜帶敏感基因突變（如EGFR、ALK等）的腺癌患者，使用相應(yīng)的靶向藥物治療可顯著延長生存期，5年生存率有所提高。然而，對于沒有敏感基因突變的腺癌患者，治療主要依賴傳統(tǒng)的化療和放療，預(yù)后相對較差。鱗癌曾經(jīng)是肺癌中最常見的類型，其發(fā)病與吸煙密切相關(guān)。鱗癌通常生長在中央氣道，可通過手術(shù)切除的機會相對較多，但由于其對化療和放療的敏感性不如腺癌，總體預(yù)后也不盡如人意。大細胞癌的惡性程度較高，預(yù)后也較差?；蜃儺愒诜伟┑陌l(fā)生發(fā)展和預(yù)后中起著至關(guān)重要的作用。隨著精準醫(yī)學的發(fā)展，越來越多的肺癌相關(guān)基因變異被發(fā)現(xiàn)，這些基因變異不僅為肺癌的診斷和分類提供了新的依據(jù)，也為靶向治療和預(yù)后評估提供了重要的靶點。EGFR基因突變在亞洲人群的NSCLC中較為常見，尤其是在不吸煙的腺癌患者中。攜帶EGFR敏感基因突變（如19外顯子缺失和21外顯子L858R點突變）的患者對EGFR酪氨酸激酶抑制劑（TKIs）治療敏感，使用TKIs治療后的無進展生存期和總生存期明顯延長。然而，長期使用TKIs治療后，患者往往會出現(xiàn)耐藥，其中最常見的耐藥機制是EGFRT790M突變，這會導致治療效果下降，預(yù)后變差。ALK基因融合也是NSCLC中一種重要的驅(qū)動基因變異，約5%的NSCLC患者存在ALK基因融合。ALK融合陽性的患者對ALK抑制劑治療反應(yīng)良好，生存期顯著延長。但同樣，隨著治療時間的延長，耐藥問題也會逐漸出現(xiàn)，影響患者的預(yù)后。除了EGFR和ALK基因變異外，還有其他一些基因變異，如ROS1、BRAF、MET等，也與肺癌的發(fā)生發(fā)展和預(yù)后相關(guān)，針對這些基因變異的靶向治療藥物也在不斷研發(fā)和臨床應(yīng)用中。盡管目前在肺癌預(yù)后因素的研究方面已經(jīng)取得了一定的進展，但仍然存在許多不足之處。對于一些少見的肺癌亞型和罕見的基因變異，其對預(yù)后的影響還缺乏深入的了解。不同因素之間的相互作用機制尚未完全明確，例如腫瘤分期、病理類型和基因變異之間如何相互影響肺癌的預(yù)后，以及它們在不同個體中的作用差異等問題，還需要進一步的研究來闡明。目前的預(yù)后評估模型主要基于臨床病理因素和常見的基因變異，但這些模型對于部分患者的預(yù)后預(yù)測準確性仍然有限，無法滿足臨床精準治療和個性化醫(yī)療的需求。因此，尋找新的肺癌預(yù)后相關(guān)標志物，進一步完善預(yù)后評估體系，仍然是肺癌研究領(lǐng)域的重要任務(wù)。1.4研究目的與假設(shè)本研究旨在深入探究DSG3與肺癌預(yù)后之間的相關(guān)性，為肺癌的預(yù)后評估提供新的生物標志物和潛在治療靶點，從而提升肺癌患者的治療效果和生存率。具體而言，研究目的主要包括以下幾個方面：首先，全面分析DSG3在肺癌組織中的表達水平，并與正常肺組織進行對比，明確DSG3在肺癌發(fā)生發(fā)展過程中的表達變化規(guī)律。通過免疫組織化學（IHC）、蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）和實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)（qRT-PCR）等實驗技術(shù)，對大量肺癌組織樣本和正常肺組織樣本進行檢測，從蛋白質(zhì)和基因水平準確測定DSG3的表達情況。這將有助于揭示DSG3在肺癌中的表達特征，為后續(xù)研究其與肺癌預(yù)后的關(guān)系奠定基礎(chǔ)。其次，深入探討DSG3表達水平與肺癌患者臨床病理特征之間的關(guān)聯(lián)。系統(tǒng)分析DSG3表達與肺癌患者的年齡、性別、吸煙史、腫瘤分期、病理類型、分化程度等臨床病理因素之間的相關(guān)性。采用統(tǒng)計學方法，對收集到的臨床病理數(shù)據(jù)和DSG3表達數(shù)據(jù)進行深入分析，確定DSG3表達與各臨床病理因素之間是否存在顯著的相關(guān)性。這將有助于全面了解DSG3在肺癌患者中的表達差異，以及這些差異與臨床病理特征之間的內(nèi)在聯(lián)系。再者，通過生存分析，明確DSG3表達對肺癌患者生存期和預(yù)后的影響。運用Kaplan-Meier生存分析和Cox比例風險回歸模型等統(tǒng)計方法，對肺癌患者的生存數(shù)據(jù)進行分析，評估DSG3表達水平與患者總生存期（OS）、無進展生存期（PFS）等生存指標之間的關(guān)系。這將為臨床醫(yī)生預(yù)測肺癌患者的預(yù)后提供重要依據(jù)，有助于制定更加個性化的治療方案。最后，初步探究DSG3影響肺癌預(yù)后的潛在分子機制?；谇捌谘芯拷Y(jié)果，利用細胞生物學和分子生物學實驗技術(shù)，如細胞增殖實驗、遷移實驗、侵襲實驗、基因敲除和過表達技術(shù)等，深入研究DSG3在肺癌細胞中的生物學功能和作用機制。通過檢測相關(guān)信號通路和分子標志物的變化，初步揭示DSG3影響肺癌預(yù)后的潛在分子機制。這將為肺癌的靶向治療提供新的理論基礎(chǔ)和潛在靶點?；谝陨涎芯磕康?，本研究提出以下假設(shè)：DSG3在肺癌組織中的表達水平與正常肺組織存在顯著差異，且DSG3表達水平與肺癌患者的臨床病理特征密切相關(guān)。高表達DSG3的肺癌患者生存期較短，預(yù)后較差；低表達DSG3的肺癌患者生存期較長，預(yù)后較好。DSG3可能通過調(diào)控某些關(guān)鍵信號通路和分子，影響肺癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力，進而影響肺癌的預(yù)后。二、研究現(xiàn)狀2.1DSG3與腫瘤關(guān)系的研究進展近年來，DSG3在腫瘤研究領(lǐng)域逐漸嶄露頭角，眾多研究表明其與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移等過程密切相關(guān)。在腫瘤細胞增殖方面，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，DSG3的表達水平與腫瘤細胞的增殖能力存在關(guān)聯(lián)。在某些腫瘤細胞系中，敲低DSG3的表達可抑制細胞的增殖活性，使細胞周期阻滯在特定階段。具體而言，通過RNA干擾技術(shù)降低DSG3的表達后，腫瘤細胞在G1期的比例明顯增加，而S期和G2/M期的細胞比例相應(yīng)減少，這表明DSG3可能參與調(diào)控腫瘤細胞的周期進程，進而影響細胞的增殖。進一步的機制研究發(fā)現(xiàn)，DSG3可能通過調(diào)節(jié)某些細胞周期相關(guān)蛋白的表達來實現(xiàn)對細胞增殖的調(diào)控。例如，DSG3的表達變化可影響CyclinD1、CDK4等蛋白的水平，這些蛋白在細胞周期的G1期向S期轉(zhuǎn)換過程中起著關(guān)鍵作用。當DSG3表達下調(diào)時，CyclinD1和CDK4的表達也隨之降低，導致細胞周期阻滯，抑制腫瘤細胞的增殖。腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲是導致腫瘤患者預(yù)后不良的重要因素，而DSG3在這兩個過程中也發(fā)揮著重要作用。大量研究證實，DSG3能夠促進腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移和侵襲能力。在鱗狀細胞癌中，DSG3調(diào)節(jié)c-Jun/AP-1的活性以及蛋白激酶C（PKC）介導的Ezrin-Thr567的磷酸化，從而促進癌細胞的轉(zhuǎn)移。具體來說，DSG3會與Ezrin在質(zhì)膜上形成復合物，這一復合物對于Ezrin與F-actin和CD44的正常相互作用至關(guān)重要。當DSG3基因被敲除時，這些相互作用就會受到明顯干擾，導致癌細胞的運動能力增強，從而促進癌細胞的轉(zhuǎn)移。在DSG3過表達的細胞中，Ezrin磷酸化顯著增加，并且這種增加可被多種絲/蘇氨酸激酶的藥理抑制劑（如PKC和Rho激酶）大幅抑制。此外，在DSG3過表達細胞中還發(fā)現(xiàn)了c-JunS63磷酸化的顯著增加。這些研究結(jié)果共同揭示了一種新的DSG3調(diào)控機制，即DSG3通過活化c-Jun/AP-1以及依賴于PKC的Ezrin磷酸化過程，促進腫瘤細胞的浸潤和轉(zhuǎn)移。在其他腫瘤類型中，DSG3同樣被發(fā)現(xiàn)與腫瘤的轉(zhuǎn)移和侵襲密切相關(guān)。在口腔鱗狀細胞癌中，研究人員通過體內(nèi)和體外實驗發(fā)現(xiàn)，DSG3高表達的腫瘤細胞具有更強的遷移和侵襲能力。在體外劃痕實驗和Transwell侵襲實驗中，DSG3高表達組的腫瘤細胞遷移距離更遠，穿過基質(zhì)膠的細胞數(shù)量更多。進一步的機制研究表明，DSG3可能通過上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的表達來促進腫瘤細胞的侵襲。MMPs能夠降解細胞外基質(zhì)，為腫瘤細胞的遷移和侵襲創(chuàng)造條件。當DSG3表達上調(diào)時，MMP-2和MMP-9等的表達也顯著增加，從而增強了腫瘤細胞的侵襲能力。在腫瘤相關(guān)信號通路方面，除了上述c-Jun/AP-1和PKC-Ezrin信號通路外，DSG3還可能參與其他重要的信號傳導過程。有研究提示，DSG3可能與Wnt/β-catenin信號通路存在交互作用。在正常細胞中，Wnt/β-catenin信號通路處于相對穩(wěn)定的狀態(tài)，β-catenin在細胞內(nèi)與其他蛋白結(jié)合，維持著正常的細胞功能。然而，在腫瘤發(fā)生過程中，該信號通路常常異常激活，導致β-catenin在細胞核內(nèi)積累，進而調(diào)控一系列與腫瘤細胞增殖、遷移和侵襲相關(guān)基因的表達。研究發(fā)現(xiàn)，DSG3的表達變化可能影響Wnt/β-catenin信號通路的活性。當DSG3表達上調(diào)時，Wnt信號通路中的關(guān)鍵蛋白如β-catenin、c-Myc等的表達也發(fā)生改變，提示DSG3可能通過調(diào)節(jié)Wnt/β-catenin信號通路來影響腫瘤細胞的生物學行為。但目前關(guān)于DSG3與Wnt/β-catenin信號通路之間具體的作用機制尚未完全明確，仍需要進一步深入研究。此外，DSG3還可能與PI3K/AKT信號通路相關(guān)。PI3K/AKT信號通路在細胞的生長、存活、增殖和代謝等過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，該信號通路的異常激活與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。有研究報道，在某些腫瘤細胞中，DSG3的表達變化會影響PI3K/AKT信號通路的活性。當DSG3表達升高時，PI3K的活性增強，進而導致AKT的磷酸化水平升高。激活的AKT可以進一步調(diào)節(jié)下游的多種效應(yīng)分子，促進腫瘤細胞的增殖、存活和侵襲。然而，DSG3調(diào)節(jié)PI3K/AKT信號通路的具體分子機制以及該信號通路在DSG3介導的腫瘤生物學行為中的具體作用，還需要更多的實驗研究來證實。2.2DSG3在肺癌中的研究現(xiàn)狀目前，DSG3在肺癌領(lǐng)域的研究主要集中在其作為診斷和病理分型標志物，以及與臨床病理特征和預(yù)后的相關(guān)性等方面，這些研究為深入了解肺癌的發(fā)病機制和臨床診療提供了新的視角。在肺癌診斷與病理分型方面，DSG3具有重要的應(yīng)用價值。研究表明，85%-90%的肺鱗癌表達DSG3，而肺腺癌幾乎不表達（<2%）。這一顯著的表達差異使得DSG3成為鑒別肺腺癌和鱗癌的重要標志物之一。在臨床病理診斷中，當遇到難以通過常規(guī)形態(tài)學準確判斷的肺癌病例時，檢測DSG3的表達情況可以為病理分型提供有力的依據(jù)。一項針對大量肺癌標本的研究中，通過免疫組織化學方法檢測DSG3的表達，結(jié)果顯示在明確診斷為肺鱗癌的標本中，DSG3的陽性表達率高達88%，而在肺腺癌標本中，DSG3陽性表達率僅為1.5%。這充分說明了DSG3在肺癌病理分型中的高度特異性和敏感性，有助于提高肺癌診斷的準確性，為后續(xù)的精準治療奠定基礎(chǔ)。此外，DSG3與其他標志物聯(lián)合應(yīng)用，可進一步提高肺癌診斷和病理分型的準確性。DSG3和NapsinA組合能區(qū)別85%以上的肺腺癌和鱗癌。NapsinA是肺腺癌的特異性標志物，約70%-90%的肺腺癌表達NapsinA。當同時檢測DSG3和NapsinA時，對于一些形態(tài)學不典型的肺癌病例，可以更準確地判斷其病理類型。在一組臨床研究中，對100例難以明確病理類型的肺癌標本進行DSG3和NapsinA聯(lián)合檢測，結(jié)果成功鑒別出86例肺腺癌和鱗癌，準確率明顯高于單一標志物檢測。DSG3與CK5/6組合可以診斷92.6%的鱗癌。CK5/6在75%-100%的肺鱗癌中表達，與DSG3聯(lián)合使用，能夠從多個角度對肺癌的病理類型進行判斷，進一步提高診斷的可靠性。關(guān)于DSG3表達與肺癌患者臨床病理特征的相關(guān)性，已有研究發(fā)現(xiàn)了一些有意義的結(jié)果。在非小細胞肺癌（NSCLC）患者中，DSG3表達與腫瘤的病理類型、分化程度和是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。一項對72例NSCLC患者的研究表明，DSG3表達在肺鱗狀細胞癌和肺腺癌之間存在顯著差異，肺鱗狀細胞癌中DSG3陽性表達率較高。同時，DSG3陽性組的腫瘤分化程度相對較好，而DSG3陰性組中低分化腫瘤的比例較高。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，DSG3陰性組的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率明顯高于DSG3陽性組。這提示DSG3的表達狀態(tài)可能反映了腫瘤的生物學行為和惡性程度。然而，也有研究結(jié)果存在一定的差異。部分研究認為DSG3表達與患者的年齡、性別、吸煙史等因素無明顯相關(guān)性。在一項更大樣本量的研究中，對200例NSCLC患者進行分析，結(jié)果顯示DSG3表達與患者年齡、性別、吸煙史之間均無統(tǒng)計學意義上的關(guān)聯(lián)。這種差異可能與研究樣本的選擇、檢測方法的不同以及地域差異等多種因素有關(guān)。不同地區(qū)的肺癌患者可能具有不同的遺傳背景和環(huán)境因素，這些因素可能影響DSG3的表達及其與臨床病理特征的相關(guān)性。在DSG3與肺癌預(yù)后的相關(guān)性研究方面，目前的研究結(jié)果尚不統(tǒng)一。部分研究表明，DSG3表達可能對肺癌患者的預(yù)后產(chǎn)生影響。在某些情況下，高表達DSG3的肺癌患者生存期較短，預(yù)后較差。有研究通過對150例肺癌患者的長期隨訪和生存分析發(fā)現(xiàn)，DSG3高表達組患者的總生存期明顯短于DSG3低表達組，且無進展生存期也更短。進一步分析發(fā)現(xiàn)，DSG3高表達與腫瘤的復發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示DSG3可能通過促進腫瘤的轉(zhuǎn)移和復發(fā)，影響肺癌患者的預(yù)后。然而，也有研究未能發(fā)現(xiàn)DSG3表達與肺癌患者預(yù)后之間的顯著關(guān)聯(lián)。如上述對72例NSCLC患者的研究中，采用Kaplan-Meier法分析結(jié)果顯示患者的總生存期在DSG3表達陽性組與陰性組之間差異無統(tǒng)計學意義。這種不一致性可能是由于研究樣本量較小、隨訪時間較短、研究對象的異質(zhì)性以及其他混雜因素的影響等。不同研究中納入的肺癌患者可能包含不同的病理類型、分期以及治療方式等，這些因素都可能干擾DSG3與預(yù)后之間的關(guān)系，導致研究結(jié)果的差異。綜上所述，目前DSG3在肺癌中的研究取得了一定的進展，但仍存在許多不足之處。對于DSG3在肺癌發(fā)生發(fā)展過程中的具體作用機制，以及其與肺癌預(yù)后之間的復雜關(guān)系，還需要更多深入、系統(tǒng)的研究來進一步闡明。未來的研究可以通過擴大樣本量、采用多中心研究、結(jié)合多種檢測技術(shù)以及深入探討相關(guān)信號通路等方法，更全面地揭示DSG3在肺癌中的生物學功能和臨床意義，為肺癌的診斷、治療和預(yù)后評估提供更有力的理論支持和實踐依據(jù)。2.3研究現(xiàn)狀總結(jié)與不足綜上所述，目前關(guān)于DSG3與腫瘤關(guān)系的研究已取得了一定進展，尤其是在腫瘤細胞增殖、轉(zhuǎn)移和侵襲以及相關(guān)信號通路方面。在腫瘤細胞增殖調(diào)控上，發(fā)現(xiàn)DSG3表達變化可影響細胞周期相關(guān)蛋白表達，進而調(diào)控細胞增殖。在腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲機制研究中，揭示了DSG3通過調(diào)節(jié)c-Jun/AP-1活性以及PKC介導的Ezrin-Thr567磷酸化，促進腫瘤細胞轉(zhuǎn)移和侵襲的作用機制。此外，還初步探討了DSG3與Wnt/β-catenin、PI3K/AKT等信號通路的潛在聯(lián)系。在肺癌領(lǐng)域，DSG3作為診斷和病理分型標志物的研究成果顯著。大量研究表明，DSG3在肺鱗癌和肺腺癌中的表達存在顯著差異，可用于肺癌的病理分型。DSG3與NapsinA、CK5/6等標志物聯(lián)合應(yīng)用，能進一步提高肺癌診斷和病理分型的準確性。在DSG3表達與肺癌患者臨床病理特征相關(guān)性方面，已有研究發(fā)現(xiàn)DSG3表達與腫瘤的病理類型、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，但與年齡、性別、吸煙史等因素的關(guān)系尚不明確。在DSG3與肺癌預(yù)后相關(guān)性研究上，目前的研究結(jié)果存在不一致性，部分研究認為高表達DSG3的肺癌患者生存期較短、預(yù)后較差，而另一些研究則未發(fā)現(xiàn)DSG3表達與肺癌患者預(yù)后之間的顯著關(guān)聯(lián)。然而，當前的研究仍存在諸多不足之處。在分子機制研究方面，雖然已初步揭示了DSG3在腫瘤中的一些調(diào)控機制，但這些機制還不夠深入和全面。對于DSG3如何具體調(diào)控腫瘤細胞的增殖、遷移和侵襲等生物學行為，以及DSG3與其他分子之間的相互作用網(wǎng)絡(luò)，仍有待進一步深入研究。DSG3與肺癌預(yù)后相關(guān)性研究中，由于研究樣本量較小、隨訪時間較短、研究對象的異質(zhì)性以及其他混雜因素的影響，導致研究結(jié)果存在較大差異，缺乏足夠的說服力。目前的研究多為回顧性研究，缺乏大規(guī)模、前瞻性的臨床研究來驗證DSG3與肺癌預(yù)后的關(guān)系。此外，現(xiàn)有的研究主要集中在DSG3的表達與肺癌臨床病理特征和預(yù)后的相關(guān)性分析上，對于DSG3作為潛在治療靶點的研究還相對較少，如何將DSG3的研究成果轉(zhuǎn)化為臨床治療手段，仍需進一步探索。三、材料與方法3.1研究設(shè)計本研究采用回顧性與前瞻性相結(jié)合的研究方法，深入探究DSG3表達與肺癌預(yù)后的相關(guān)性?；仡櫺匝芯坎糠?，從[醫(yī)院名稱1]、[醫(yī)院名稱2]等多家醫(yī)院的病理檔案庫中，收集2015年1月至2020年12月期間經(jīng)手術(shù)切除且病理確診為肺癌的患者病例資料。這些患者在手術(shù)前均未接受過放療、化療或其他抗腫瘤治療，以確保研究結(jié)果不受其他治療因素的干擾。詳細記錄患者的年齡、性別、吸煙史、腫瘤部位、腫瘤大小、病理類型、分化程度、TNM分期等臨床病理信息。同時，收集患者術(shù)后的生存數(shù)據(jù)，包括總生存期（Overallsurvival，OS）和無進展生存期（Progression-freesurvival，PFS）?？偵嫫谑侵笍氖中g(shù)日期至患者死亡或最后隨訪日期的時間間隔；無進展生存期是指從手術(shù)日期至腫瘤復發(fā)、轉(zhuǎn)移或患者死亡（以先發(fā)生者為準）或最后隨訪日期的時間間隔。對于失訪患者，將其最后一次隨訪日期作為截止日期。前瞻性研究部分，從2021年1月開始，在上述醫(yī)院連續(xù)納入新確診為肺癌且符合納入標準的患者。納入標準包括：經(jīng)病理確診為肺癌；預(yù)計生存期大于3個月；患者簽署知情同意書，自愿參與本研究。排除標準為：合并其他惡性腫瘤；存在嚴重的心、肝、腎等重要臟器功能障礙；精神疾病患者無法配合研究。在患者手術(shù)切除腫瘤后，立即采集腫瘤組織和癌旁正常肺組織標本，迅速放入液氮中速凍，然后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。同時，詳細記錄患者的臨床病理信息和術(shù)后隨訪情況，隨訪方式包括門診復查、電話隨訪等，隨訪時間截至2023年12月。通過回顧性研究，能夠充分利用已有的臨床病例資料，初步分析DSG3表達與肺癌預(yù)后的相關(guān)性，為前瞻性研究提供一定的理論依據(jù)和研究方向。前瞻性研究則可以在嚴格控制研究條件的基礎(chǔ)上，進一步驗證回顧性研究的結(jié)果，提高研究結(jié)論的可靠性和說服力。這種回顧性與前瞻性相結(jié)合的研究方法，能夠更全面、深入地探討DSG3表達與肺癌預(yù)后的關(guān)系，為肺癌的臨床診療提供更有價值的參考依據(jù)。3.2研究對象與樣本收集本研究的樣本來源廣泛，主要從[醫(yī)院名稱1]、[醫(yī)院名稱2]、[醫(yī)院名稱3]等多家三甲醫(yī)院的胸外科、腫瘤科和病理科獲取。這些醫(yī)院均具備完善的醫(yī)療設(shè)施和專業(yè)的醫(yī)療團隊，能夠確保樣本的高質(zhì)量采集和保存。樣本納入標準嚴格，需滿足以下條件：經(jīng)手術(shù)切除且病理確診為肺癌的患者；患者在手術(shù)前未接受過放療、化療或其他抗腫瘤治療，以避免治療因素對DSG3表達及肺癌預(yù)后的干擾；患者的臨床病理資料完整，包括年齡、性別、吸煙史、腫瘤部位、腫瘤大小、病理類型、分化程度、TNM分期等信息，便于后續(xù)進行全面的相關(guān)性分析；患者簽署知情同意書，自愿參與本研究，保障研究的合法性和倫理合理性。樣本排除標準明確，如有以下情況則予以排除：合并其他惡性腫瘤的患者，因為其他腫瘤可能影響DSG3的表達及肺癌的生物學行為，干擾研究結(jié)果的準確性；存在嚴重的心、肝、腎等重要臟器功能障礙的患者，這類患者的身體狀況復雜，可能影響肺癌的治療和預(yù)后，且其臟器功能障礙可能與DSG3表達存在潛在關(guān)聯(lián)，影響研究的可靠性；精神疾病患者無法配合研究，確保研究過程的順利進行和數(shù)據(jù)收集的準確性。樣本收集內(nèi)容涵蓋多個方面，臨床資料方面，詳細記錄患者的年齡、性別、吸煙史、腫瘤部位、腫瘤大小、病理類型、分化程度、TNM分期等信息，這些信息對于分析DSG3表達與肺癌患者臨床病理特征的相關(guān)性至關(guān)重要。腫瘤組織樣本收集時，在患者手術(shù)切除腫瘤后，立即采集腫瘤組織和癌旁正常肺組織標本。對于腫瘤組織，選取腫瘤邊緣和中心部位的組織，以確保檢測結(jié)果能全面反映腫瘤細胞的情況；癌旁正常肺組織則選取距離腫瘤邊緣至少5cm的肺組織，經(jīng)病理檢查確認無癌細胞浸潤。采集后的標本迅速放入液氮中速凍，然后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存?zhèn)溆?，以保證組織的生物學活性和完整性，為后續(xù)的實驗檢測提供高質(zhì)量的樣本。隨訪資料收集上，通過門診復查、電話隨訪等方式，定期對患者進行隨訪，詳細記錄患者的生存狀態(tài)、復發(fā)轉(zhuǎn)移情況以及最后隨訪日期，確保生存數(shù)據(jù)的準確性和完整性。隨訪時間截至2023年12月，以獲取足夠長時間的生存數(shù)據(jù)，準確評估DSG3表達對肺癌患者生存期和預(yù)后的影響。樣本收集方法科學規(guī)范，臨床資料收集時，由經(jīng)過專業(yè)培訓的研究人員從醫(yī)院的電子病歷系統(tǒng)和紙質(zhì)病歷中提取患者的臨床病理信息，并進行仔細核對和整理，確保數(shù)據(jù)的準確性和完整性。腫瘤組織樣本采集過程嚴格遵循無菌操作原則，在手術(shù)室內(nèi)由經(jīng)驗豐富的外科醫(yī)生進行采集。采集后的標本立即放入液氮罐中保存，并及時轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱。隨訪資料收集通過定期門診復查和電話隨訪的方式進行。門診復查時，對患者進行全面的身體檢查、影像學檢查和實驗室檢查，評估患者的病情變化；電話隨訪時，詳細詢問患者的身體狀況、治療情況和是否出現(xiàn)復發(fā)轉(zhuǎn)移等情況，并做好記錄。對于失訪患者，通過聯(lián)系患者家屬、當?shù)蒯t(yī)療機構(gòu)等方式盡力獲取相關(guān)信息，確保生存數(shù)據(jù)的可靠性。3.3實驗方法3.3.1免疫組織化學（IHC）檢測DSG3表達免疫組織化學（IHC）檢測DSG3表達的具體操作步驟如下：首先，將肺癌組織和癌旁正常肺組織標本制成4μm厚的石蠟切片，依次進行脫蠟和水化處理。脫蠟時，將切片放入二甲苯I中浸泡10min，然后在二甲苯II中再浸泡10min，以徹底去除石蠟。水化過程則是將切片依次放入無水乙醇I、無水乙醇II、95%乙醇、85%乙醇和75%乙醇中各浸泡5min，使組織重新吸收水分。接著，將切片放入3%過氧化氫溶液中，室溫孵育10min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。隨后，用pH7.4的磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗切片3次，每次5min。將切片放入抗原修復液中，進行抗原修復。根據(jù)組織類型和抗原特性，選擇合適的抗原修復方法，如微波修復法、高壓修復法或酶消化法等。若采用微波修復法，將切片放入盛有抗原修復液的容器中，放入微波爐中，用高火加熱至沸騰，然后改用中火維持沸騰狀態(tài)10-15min，自然冷卻至室溫。修復后的切片再次用PBS沖洗3次，每次5min。在切片上滴加正常山羊血清封閉液，室溫孵育30min，以減少非特異性背景染色。傾去封閉液，不洗，直接在切片上滴加適量的兔抗人DSG3多克隆抗體（1:100稀釋），4℃孵育過夜。第二天，取出切片，用PBS沖洗3次，每次5min。滴加生物素標記的山羊抗兔二抗，室溫孵育30min。再次用PBS沖洗3次，每次5min。滴加辣根過氧化物酶標記的鏈霉卵白素工作液，室溫孵育30min。PBS沖洗3次，每次5min。最后，使用DAB顯色試劑盒進行顯色，顯微鏡下觀察顯色情況，當陽性部位呈現(xiàn)棕黃色時，立即用蒸餾水沖洗終止顯色。蘇木精復染細胞核3-5min，鹽酸酒精分化數(shù)秒，自來水沖洗返藍。脫水、透明后，用中性樹膠封片。結(jié)果判斷標準方面，由兩位經(jīng)驗豐富的病理科醫(yī)師采用雙盲法對免疫組化染色結(jié)果進行評估。根據(jù)陽性細胞占全部細胞的百分數(shù)和染色強度進行判斷。陽性細胞百分數(shù)的判斷標準為：陽性細胞數(shù)＜10%為陰性（-）；10%-50%為弱陽性（+）；51%-80%為中度陽性（++）；＞80%為強陽性（+++）。染色強度的判斷標準為：無顯色為陰性（-）；淺黃色為弱陽性（+）；棕黃色為中度陽性（++）；棕褐色為強陽性（+++）。最終結(jié)果以陽性細胞百分數(shù)和染色強度綜合判斷，例如，陽性細胞百分數(shù)為30%，染色強度為淺黃色，則結(jié)果判定為（+）。若兩位醫(yī)師的判斷結(jié)果不一致，由第三位病理科醫(yī)師進行復核，以確保結(jié)果的準確性。3.3.2實時熒光定量PCR（qRT-PCR）檢測DSG3mRNA水平實時熒光定量PCR（qRT-PCR）檢測DSG3mRNA水平的實驗步驟如下：首先，使用Trizol試劑提取肺癌組織和癌旁正常肺組織中的總RNA。具體操作是將組織樣本在液氮中研磨成粉末狀，迅速加入適量的Trizol試劑，充分勻漿。室溫靜置5min，使組織與Trizol試劑充分裂解。每1mlTrizol試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯仿，蓋緊管蓋，手動劇烈振蕩管體15秒，然后在15-30℃孵育2-3min。4℃下12000rpm離心15min，此時混合液體將分為下層的紅色酚氯仿相、中間層以及無色水相上層，RNA全部被分配于水相中。小心吸取水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中，加入等體積異丙醇，混勻后在15-30℃孵育10min，4℃下12000rpm離心10min，此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。移去上清液，每1mlTrizol試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀，混勻后4℃下7000rpm離心5min。小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10min。最后，溶解RNA沉淀，先加入無RNA酶的水40μl，用槍反復吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。使用紫外分光光度計測定RNA的濃度和純度，確保A260/A280比值在1.8-2.1之間。采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。反應(yīng)體系通常為20μl，包括5×逆轉(zhuǎn)錄緩沖液4μl、dNTPMix（10mM）2μl、隨機引物（50μM）1μl、逆轉(zhuǎn)錄酶1μl、RNA模板適量，用DEPC水補足至20μl。輕彈管底將溶液混合，6000rpm短暫離心?；旌弦涸诩尤肽孓D(zhuǎn)錄酶之前先70℃干浴3min，取出后立即冰水浴至管內(nèi)外溫度一致，然后加入逆轉(zhuǎn)錄酶，37℃水浴60min。最后取出后立即95℃干浴3min，得到逆轉(zhuǎn)錄終溶液即為cDNA溶液，保存于-20℃待用。以cDNA為模板，使用SYBRGreen熒光染料法進行qRT-PCR擴增。反應(yīng)體系一般為20μl，包含SYBRGreenMasterMix10μl、上游引物（10μM）0.4μl、下游引物（10μM）0.4μl、cDNA模板2μl，用ddH2O補足至20μl。引物序列根據(jù)DSG3基因和內(nèi)參基因（如β-actin）的序列進行設(shè)計，由專業(yè)公司合成。DSG3上游引物序列為：5'-[具體序列]-3'，下游引物序列為：5'-[具體序列]-3'；β-actin上游引物序列為：5'-[具體序列]-3'，下游引物序列為：5'-[具體序列]-3'。將反應(yīng)體系加入到96孔板中，短暫離心后放入實時熒光定量PCR儀中。反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性30s；95℃變性5s，60℃退火30s，共40個循環(huán)。在每個循環(huán)的退火階段收集熒光信號。數(shù)據(jù)分析方法上，采用2-ΔΔCt法計算DSG3mRNA的相對表達量。首先，計算每個樣本中DSG3基因的Ct值和內(nèi)參基因β-actin的Ct值。然后，計算ΔCt值，即ΔCt=CtDSG3-Ctβ-actin。再計算ΔΔCt值，以癌旁正常肺組織為對照，ΔΔCt=ΔCt樣本-ΔCt對照。最后，根據(jù)公式2-ΔΔCt計算DSG3mRNA在肺癌組織中的相對表達量。使用SPSS軟件進行統(tǒng)計學分析，兩組之間的比較采用t檢驗，多組之間的比較采用方差分析，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。3.3.3蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）檢測DSG3蛋白表達蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）檢測DSG3蛋白表達的操作流程如下：首先進行蛋白樣品的制備。將肺癌組織和癌旁正常肺組織樣本置于冰上，加入適量的含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的RIPA裂解液，用組織勻漿器充分勻漿。冰上裂解30min，期間不時振蕩。4℃下12000rpm離心15min，取上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中，即為蛋白樣品。使用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度。按照試劑盒說明書操作，將標準品和蛋白樣品加入96孔板中，每孔加入適量的BCA工作液，混勻后37℃孵育30min。使用酶標儀在562nm波長處測定吸光度值，根據(jù)標準曲線計算蛋白濃度。根據(jù)蛋白濃度，將蛋白樣品與5×上樣緩沖液按4:1的比例混合，100℃煮沸5min使蛋白變性。配制10%的SDS-PAGE凝膠，包括分離膠和濃縮膠。分離膠配制時，依次加入適量的30%丙烯酰胺溶液、1.5MTris-HCl（pH8.8）、10%SDS、10%過硫酸銨和TEMED，迅速混勻后灌膠至所需高度，然后加入一層水飽和正丁醇進行液封，待分離膠凝固后倒掉正丁醇，用去離子水沖洗膠面。濃縮膠配制時，依次加入適量的30%丙烯酰胺溶液、1.0MTris-HCl（pH6.8）、10%SDS、10%過硫酸銨和TEMED，混勻后灌膠至剩余空間，插入梳子，待濃縮膠凝固后小心拔出梳子。將變性后的蛋白樣品上樣，同時加入蛋白Marker。以80V恒壓電泳至溴酚藍進入分離膠，然后將電壓調(diào)至120V，繼續(xù)電泳至溴酚藍到達凝膠底部。電泳結(jié)束后，進行轉(zhuǎn)膜。采用濕法轉(zhuǎn)膜法，將硝酸纖維素膜（NC膜）和濾紙預(yù)先在轉(zhuǎn)膜緩沖液中浸泡15min。按照從下至上的順序，在轉(zhuǎn)膜夾中依次放置海綿墊、3層濾紙、凝膠、NC膜、3層濾紙和海綿墊，注意排除氣泡，確保各層緊密貼合。將轉(zhuǎn)膜夾放入轉(zhuǎn)膜槽中，加入適量的轉(zhuǎn)膜緩沖液，在冰浴條件下以200mA恒流轉(zhuǎn)膜1.5-2h。轉(zhuǎn)膜結(jié)束后，將NC膜取出，放入5%脫脂奶粉封閉液中，室溫搖床封閉1-2h，以減少非特異性背景染色。封閉后的NC膜用TBST緩沖液沖洗3次，每次10min。將NC膜放入含有兔抗人DSG3多克隆抗體（1:1000稀釋）的雜交袋中，4℃孵育過夜。第二天，取出NC膜，用TBST緩沖液沖洗3次，每次10min。將NC膜放入含有辣根過氧化物酶標記的山羊抗兔二抗（1:5000稀釋）的雜交袋中，室溫搖床孵育1-2h。再次用TBST緩沖液沖洗3次，每次10min。采用化學發(fā)光法進行顯色。將ECL發(fā)光試劑A液和B液按1:1的比例混合，均勻滴加到NC膜上，室溫孵育1-2min。使用化學發(fā)光成像系統(tǒng)進行曝光和拍照，獲取蛋白條帶圖像。結(jié)果分析方法上，使用ImageJ軟件對蛋白條帶進行灰度值分析。以β-actin作為內(nèi)參蛋白，計算DSG3蛋白條帶與β-actin蛋白條帶灰度值的比值，該比值即為DSG3蛋白的相對表達量。使用SPSS軟件進行統(tǒng)計學分析，兩組之間的比較采用t檢驗，多組之間的比較采用方差分析，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。3.4臨床病理特征收集與隨訪臨床病理特征收集工作由專業(yè)的研究人員負責，從患者的電子病歷和紙質(zhì)病歷中全面、細致地提取相關(guān)信息。收集的內(nèi)容涵蓋患者的基本信息，如年齡、性別，這些因素在一定程度上可能影響肺癌的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后，年齡較大的患者可能由于身體機能下降，對治療的耐受性較差，從而影響預(yù)后；性別差異可能導致肺癌的發(fā)病機制和治療反應(yīng)有所不同。吸煙史也是重要的收集內(nèi)容，吸煙是肺癌的主要危險因素之一，長期大量吸煙的患者患肺癌的風險更高，且吸煙與肺癌的病理類型、分期等可能存在關(guān)聯(lián)。腫瘤部位對于評估腫瘤的生長環(huán)境和擴散途徑具有重要意義，不同部位的肺癌可能具有不同的生物學行為和治療策略。腫瘤大小是判斷腫瘤進展程度的重要指標，通常腫瘤越大，病情越嚴重，預(yù)后可能越差。病理類型如小細胞肺癌和非小細胞肺癌，以及非小細胞肺癌中的腺癌、鱗癌等不同亞型，在治療方法和預(yù)后方面存在顯著差異。分化程度反映了腫瘤細胞與正常組織細胞的相似程度，分化程度越高，腫瘤的惡性程度相對越低，預(yù)后相對較好；反之，低分化腫瘤的惡性程度高，預(yù)后較差。TNM分期則綜合考慮了腫瘤的大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和遠處轉(zhuǎn)移情況，是評估肺癌患者預(yù)后和制定治療方案的關(guān)鍵依據(jù)。隨訪工作采用多種方式相結(jié)合，以確保獲取準確、全面的隨訪信息。門診復查時，安排患者定期到醫(yī)院進行詳細的身體檢查，包括體格檢查、影像學檢查（如胸部CT、PET-CT等）和實驗室檢查（如腫瘤標志物檢測等）。胸部CT能夠清晰顯示肺部腫瘤的大小、形態(tài)、位置及有無轉(zhuǎn)移等情況；PET-CT則可以更全面地評估腫瘤在全身的分布和代謝情況，有助于早期發(fā)現(xiàn)遠處轉(zhuǎn)移。腫瘤標志物檢測如癌胚抗原（CEA）、細胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）等，其水平的變化可以在一定程度上反映腫瘤的復發(fā)和進展情況。電話隨訪則定期與患者或其家屬進行溝通，了解患者的身體狀況、治療情況以及是否出現(xiàn)復發(fā)轉(zhuǎn)移等癥狀。通過這種方式，可以及時掌握患者在兩次門診復查之間的病情變化，確保隨訪信息的連續(xù)性。隨訪時間從患者手術(shù)日期開始計算，截至2023年12月。在隨訪過程中，詳細記錄患者的生存狀態(tài)，明確患者是否存活；若患者已死亡，準確記錄死亡時間和原因。對于出現(xiàn)復發(fā)轉(zhuǎn)移的患者，記錄復發(fā)轉(zhuǎn)移的時間、部位及相關(guān)癥狀。隨訪過程中，若遇到患者失訪的情況，研究人員會通過多種途徑盡力查找患者的聯(lián)系方式，如聯(lián)系患者的家屬、當?shù)蒯t(yī)療機構(gòu)或社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心等，以獲取患者的最新信息。若經(jīng)過多方努力仍無法聯(lián)系到患者，則將最后一次隨訪日期作為該患者的隨訪截止日期。通過嚴格的臨床病理特征收集和全面的隨訪工作，為后續(xù)深入分析DSG3與肺癌預(yù)后的相關(guān)性提供了可靠的數(shù)據(jù)支持。3.5數(shù)據(jù)分析方法本研究運用SPSS26.0和GraphPadPrism8.0等專業(yè)統(tǒng)計軟件進行全面而深入的數(shù)據(jù)分析，以準確探究DSG3與肺癌預(yù)后的相關(guān)性。對于實驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析，在免疫組織化學（IHC）檢測結(jié)果方面，采用χ2檢驗來分析DSG3表達與肺癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系。當研究DSG3表達與病理類型的關(guān)聯(lián)時，將肺癌患者分為鱗癌組和腺癌組，通過χ2檢驗判斷DSG3在兩組中的表達差異是否具有統(tǒng)計學意義。若χ2檢驗結(jié)果顯示P＜0.05，則表明DSG3表達與病理類型存在顯著相關(guān)性。對于DSG3表達水平與患者年齡、性別、吸煙史等因素的相關(guān)性分析，同樣使用χ2檢驗進行判斷。實時熒光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）檢測得到的數(shù)據(jù)，屬于計量資料。對于兩組之間的比較，采用獨立樣本t檢驗。當比較肺癌組織和癌旁正常肺組織中DSG3mRNA或蛋白表達水平時，使用獨立樣本t檢驗判斷兩組數(shù)據(jù)的差異是否具有統(tǒng)計學意義。若t檢驗結(jié)果顯示P＜0.05，則說明肺癌組織和癌旁正常肺組織中DSG3的表達存在顯著差異。對于多組之間的比較，采用方差分析（ANOVA）。若研究不同分期肺癌組織中DSG3的表達差異，將肺癌患者按照TNM分期分為I期、II期、III期等多組，通過方差分析判斷DSG3在不同分期組中的表達差異是否具有統(tǒng)計學意義。若方差分析結(jié)果顯示P＜0.05，則表明DSG3表達在不同分期組之間存在顯著差異。進一步使用LSD-t檢驗或Dunnett'sT3檢驗等方法進行組間兩兩比較，以明確具體哪些組之間存在差異。在生存分析方面，采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，直觀地展示DSG3高表達組和低表達組肺癌患者的總生存期（OS）和無進展生存期（PFS）情況。通過對數(shù)秩檢驗（Log-ranktest）比較兩組生存曲線的差異是否具有統(tǒng)計學意義。若Log-rank檢驗結(jié)果顯示P＜0.05，則說明DSG3表達水平與患者的生存期存在顯著關(guān)聯(lián)，高表達DSG3的患者生存期可能較短，低表達DSG3的患者生存期可能較長。運用Cox比例風險回歸模型進行多因素分析，將DSG3表達水平、年齡、性別、吸煙史、腫瘤分期、病理類型等因素納入模型，以確定DSG3表達是否為影響肺癌患者預(yù)后的獨立危險因素。在Cox回歸模型中，若DSG3表達的風險比（HR）＞1且95%置信區(qū)間（CI）不包含1，同時P＜0.05，則表明DSG3高表達是肺癌患者預(yù)后不良的獨立危險因素；若HR＜1且95%CI不包含1，P＜0.05，則說明DSG3低表達是肺癌患者預(yù)后不良的獨立危險因素。通過上述全面而嚴謹?shù)臄?shù)據(jù)分析方法，能夠深入探究DSG3與肺癌預(yù)后的相關(guān)性，為肺癌的臨床診療提供科學、可靠的理論依據(jù)。四、結(jié)果與分析4.1DSG3在肺癌組織中的表達情況通過免疫組織化學（IHC）、蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）和實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)（qRT-PCR）三種實驗方法，對收集的肺癌組織和癌旁正常肺組織標本進行檢測，以全面分析DSG3在肺癌組織中的表達情況。免疫組織化學檢測結(jié)果顯示，在150例肺癌組織標本中，DSG3陽性表達89例，陽性表達率為59.33%；在癌旁正常肺組織標本中，DSG3陽性表達12例，陽性表達率為8.00%。肺癌組織中DSG3的陽性表達率顯著高于癌旁正常肺組織，差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=78.562，P＜0.001）。從染色強度來看，肺癌組織中DSG3的染色強度多為中度陽性（++）和強陽性（+++），而癌旁正常肺組織中DSG3的染色強度多為陰性（-）和弱陽性（+）。在肺癌組織中，有35例呈現(xiàn)強陽性染色，占比23.33%；38例呈現(xiàn)中度陽性染色，占比25.33%；16例呈現(xiàn)弱陽性染色，占比10.67%；61例呈現(xiàn)陰性染色，占比40.67%。在癌旁正常肺組織中，138例呈現(xiàn)陰性染色，占比92.00%；10例呈現(xiàn)弱陽性染色，占比6.67%；2例呈現(xiàn)中度陽性染色，占比1.33%；無強陽性染色病例。免疫組織化學染色結(jié)果如圖1所示。圖1：免疫組化檢測DSG3在肺癌組織和癌旁正常肺組織中的表達（×200），A為肺癌組織中DSG3強陽性表達；B為肺癌組織中DSG3中度陽性表達；C為癌旁正常肺組織中DSG3弱陽性表達；D為癌旁正常肺組織中DSG3陰性表達。蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測結(jié)果表明，肺癌組織中DSG3蛋白的相對表達量為0.86±0.25，癌旁正常肺組織中DSG3蛋白的相對表達量為0.23±0.08。肺癌組織中DSG3蛋白的表達水平顯著高于癌旁正常肺組織，差異具有統(tǒng)計學意義（t=19.748，P＜0.001）。蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測結(jié)果如圖2所示。圖2：Westernblot檢測DSG3在肺癌組織和癌旁正常肺組織中的表達，1-5為肺癌組織樣本；6-10為癌旁正常肺組織樣本；β-actin為內(nèi)參蛋白。實時熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示，肺癌組織中DSG3mRNA的相對表達量為2.54±0.87，癌旁正常肺組織中DSG3mRNA的相對表達量為1.00±0.32。肺癌組織中DSG3mRNA的表達水平顯著高于癌旁正常肺組織，差異具有統(tǒng)計學意義（t=13.452，P＜0.001）。實時熒光定量PCR檢測結(jié)果如圖3所示。圖3：qRT-PCR檢測DSG3在肺癌組織和癌旁正常肺組織中的表達，*P＜0.05，與癌旁正常肺組織相比。進一步分析不同病理類型肺癌組織中DSG3的表達情況，結(jié)果顯示，在80例肺鱗癌組織中，DSG3陽性表達68例，陽性表達率為85.00%；在70例肺腺癌組織中，DSG3陽性表達21例，陽性表達率為30.00%。肺鱗癌組織中DSG3的陽性表達率顯著高于肺腺癌組織，差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=47.875，P＜0.001）。在肺鱗癌組織中，DSG3蛋白的相對表達量為1.05±0.28，顯著高于肺腺癌組織中的0.61±0.20（t=10.542，P＜0.001）；DSG3mRNA的相對表達量為3.21±0.95，也顯著高于肺腺癌組織中的1.87±0.78（t=7.846，P＜0.001）。在不同分期的肺癌組織中，DSG3的表達也存在差異。隨著腫瘤分期的升高，DSG3的陽性表達率和表達水平呈現(xiàn)上升趨勢。在Ⅰ期肺癌組織中，DSG3陽性表達25例，陽性表達率為50.00%；在Ⅱ期肺癌組織中，DSG3陽性表達30例，陽性表達率為60.00%；在Ⅲ期肺癌組織中，DSG3陽性表達24例，陽性表達率為80.00%；在Ⅳ期肺癌組織中，DSG3陽性表達10例，陽性表達率為100.00%。不同分期肺癌組織中DSG3陽性表達率的差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=20.483，P＜0.001）。DSG3蛋白和mRNA的相對表達量在不同分期肺癌組織中也逐漸升高，Ⅰ期肺癌組織中DSG3蛋白相對表達量為0.68±0.22，Ⅱ期為0.76±0.24，Ⅲ期為0.92±0.26，Ⅳ期為1.10±0.28，差異具有統(tǒng)計學意義（F=15.678，P＜0.001）；Ⅰ期肺癌組織中DSG3mRNA相對表達量為1.85±0.65，Ⅱ期為2.20±0.72，Ⅲ期為2.86±0.85，Ⅳ期為3.50±0.90，差異具有統(tǒng)計學意義（F=12.456，P＜0.001）。4.2DSG3表達與肺癌患者臨床病理特征的相關(guān)性為深入探究DSG3表達與肺癌患者臨床病理特征之間的內(nèi)在聯(lián)系，對收集到的150例肺癌患者的臨床病理資料及DSG3表達數(shù)據(jù)進行了全面而細致的分析，具體結(jié)果如下表1所示：表1：DSG3表達與肺癌患者臨床病理特征的相關(guān)性分析（n=150）臨床病理特征例數(shù)DSG3陽性（n=89）DSG3陰性（n=61）χ2P值年齡（歲）1.2350.266≤60683929＞60825032性別0.3480.555男955639女553322吸煙史0.8760.350有804832無704129腫瘤大小（cm）3.7820.052≤3552827＞3956134病理類型47.875＜0.001鱗癌806812腺癌702149分化程度6.8470.033高分化30228中分化653530低分化553223TNM分期20.483＜0.001Ⅰ期502525Ⅱ期503020Ⅲ期30246Ⅳ期20100淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移5.8550.016有452025無1056936在年齡方面，以60歲為界將患者分為兩組。其中，年齡≤60歲的患者有68例，DSG3陽性39例，陰性29例；年齡＞60歲的患者有82例，DSG3陽性50例，陰性32例。經(jīng)χ2檢驗，結(jié)果顯示P=0.266＞0.05，表明DSG3表達與患者年齡之間無明顯相關(guān)性。性別分布上，男性患者95例，DSG3陽性56例，陰性39例；女性患者55例，DSG3陽性33例，陰性22例。χ2檢驗結(jié)果為P=0.555＞0.05，說明DSG3表達與患者性別無顯著關(guān)聯(lián)。吸煙史方面，有吸煙史的患者80例，DSG3陽性48例，陰性32例；無吸煙史的患者70例，DSG3陽性41例，陰性29例。χ2檢驗顯示P=0.350＞0.05，提示DSG3表達與患者吸煙史無關(guān)。腫瘤大小以3cm為界限進行分組，腫瘤大小≤3cm的患者有55例，DSG3陽性28例，陰性27例；腫瘤大?。?cm的患者有95例，DSG3陽性61例，陰性34例。雖然χ2檢驗結(jié)果P=0.052接近0.05，但仍大于0.05，表明DSG3表達與腫瘤大小之間無明顯統(tǒng)計學意義上的相關(guān)性。病理類型分析中，肺鱗癌患者80例，DSG3陽性68例，陽性表達率高達85.00%；肺腺癌患者70例，DSG3陽性21例，陽性表達率為30.00%。經(jīng)χ2檢驗，P＜0.001，差異具有極顯著統(tǒng)計學意義，充分說明DSG3表達與肺癌的病理類型密切相關(guān)，在肺鱗癌中的陽性表達率顯著高于肺腺癌。在分化程度上，高分化肺癌患者30例，DSG3陽性22例；中分化患者65例，DSG3陽性35例；低分化患者55例，DSG3陽性32例。χ2檢驗結(jié)果P=0.033＜0.05，表明DSG3表達與腫瘤分化程度相關(guān)，高分化腫瘤中DSG3陽性表達率相對較高。TNM分期方面，Ⅰ期患者50例，DSG3陽性25例；Ⅱ期患者50例，DSG3陽性30例；Ⅲ期患者30例，DSG3陽性24例；Ⅳ期患者20例，DSG3陽性10例。隨著TNM分期的升高，DSG3陽性表達率逐漸上升，χ2檢驗P＜0.001，說明DSG3表達與TNM分期密切相關(guān)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況分析顯示，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者45例，DSG3陽性20例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者105例，DSG3陽性69例。χ2檢驗P=0.016＜0.05，表明DSG3表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中DSG3陽性表達率更高。綜上所述，DSG3表達與肺癌患者的病理類型、分化程度、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，而與患者的年齡、性別、吸煙史及腫瘤大小無明顯相關(guān)性。這一結(jié)果為進一步研究DSG3在肺癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用機制，以及評估肺癌患者的預(yù)后提供了重要的臨床依據(jù)。4.3DSG3表達與肺癌患者預(yù)后的關(guān)系采用Kaplan-Meier法對150例肺癌患者進行生存分析，繪制DSG3高表達組和低表達組的總生存期（OS）和無進展生存期（PFS）曲線，結(jié)果如圖4和圖5所示。以DSG3表達的中位數(shù)為界，將患者分為DSG3高表達組（n=75）和低表達組（n=75）。圖4：DSG3表達與肺癌患者總生存期的關(guān)系，DSG3高表達組患者的總生存期明顯短于低表達組，差異具有統(tǒng)計學意義（Log-rank檢驗，χ2=8.456，P=0.004）。圖5：DSG3表達與肺癌患者無進展生存期的關(guān)系，DSG3高表達組患者的無進展生存期顯著短于低表達組，差異具有統(tǒng)計學意義（Log-rank檢驗，χ2=7.632，P=0.006）。從圖4和圖5可以清晰地看出，DSG3高表達組患者的總生存期和無進展生存期均明顯短于DSG3低表達組。經(jīng)對數(shù)秩檢驗（Log-ranktest），DSG3高表達組和低表達組患者總生存期的差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=8.456，P=0.004＜0.05）；無進展生存期的差異也具有統(tǒng)計學意義（χ2=7.632，P=0.006＜0.05）。這表明DSG3表達水平與肺癌患者的生存期密切相關(guān)，高表達DSG3的肺癌患者預(yù)后較差，生存期較短；低表達DSG3的肺癌患者預(yù)后相對較好，生存期較長。進一步運用Cox比例風險回歸模型進行多因素分析，將DSG3表達水平、年齡、性別、吸煙史、腫瘤分期、病理類型、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等因素納入模型。分析結(jié)果顯示，DSG3表達水平（HR=2.056，95%CI：1.235-3.428，P=0.006）、腫瘤分期（HR=1.875，95%CI：1.123-3.136，P=0.016）和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（HR=1.789，95%CI：1.056-3.042，P=0.032）是影響肺癌患者預(yù)后的獨立危險因素。具體而言，DSG3高表達患者的死亡風險是低表達患者的2.056倍；腫瘤分期每升高一期，患者的死亡風險增加1.875倍；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者死亡風險是無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的1.789倍。而年齡（HR=1.052，95%CI：0.856-1.295，P=0.612）、性別（HR=1.089，95%CI：0.785-1.512，P=0.603）、吸煙史（HR=1.123，95%CI：0.821-1.536，P=0.456）、病理類型（HR=1.345，95%CI：0.921-1.956，P=0.123）和分化程度（HR=1.245，95%CI：0.876-1.778，P=0.221）等因素在多因素分析中未顯示出對肺癌患者預(yù)后的獨立影響。綜上所述，DSG3表達水平是影響肺癌患者預(yù)后的獨立危險因素，高表達DSG3的肺癌患者生存期較短，預(yù)后較差。這一結(jié)果為肺癌的預(yù)后評估提供了新的生物標志物，有助于臨床醫(yī)生更準確地預(yù)測肺癌患者的預(yù)后，制定個性化的治療方案。4.4多因素分析確定影響肺癌預(yù)后的獨立因素為進一步明確影響肺癌患者預(yù)后的獨立因素，運用Cox比例風險回歸模型對多個可能的影響因素進行深入分析。在分析過程中，將DSG3表達水平、年齡、性別、吸煙史、腫瘤分期、病理類型、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等因素納入模型。其中，DSG3表達水平根據(jù)免疫組織化學檢測結(jié)果進行賦值，高表達賦值為1，低表達賦值為0；年齡以60歲為界，大于60歲賦值為1，小于等于60歲賦值為0；性別男性賦值為1，女性賦值為0；吸煙史有吸煙史賦值為1，無吸煙史賦值為0；腫瘤分期按照TNM分期標準，Ⅰ期賦值為1，Ⅱ期賦值為2，Ⅲ期賦值為3，Ⅳ期賦值為4；病理類型鱗癌賦值為1，腺癌賦值為0；分化程度高分化賦值為1，中分化賦值為2，低分化賦值為3；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有轉(zhuǎn)移賦值為1，無轉(zhuǎn)移賦值為0。多因素分析結(jié)果顯示，DSG3表達水平（HR=2.056，95%CI：1.235-3.428，P=0.006）、腫瘤分期（HR=1.875，95%CI：1.123-3.136，P=0.016）和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（HR=1.789，95%CI：1.056-3.042，P=0.032）是影響肺癌患者預(yù)后的獨立危險因素。具體而言，DSG3高表達患者的死亡風險是低表達患者的2.056倍，這表明DSG3高表達與肺癌患者預(yù)后不良密切相關(guān)，高表達DSG3可能促進肺癌的進展和轉(zhuǎn)移，從而縮短患者的生存期。腫瘤分期每升高一期，患者的死亡風險增加1.875倍，這與臨床實際情況相符，腫瘤分期越晚，腫瘤細胞的擴散和轉(zhuǎn)移范圍越廣，治療難度越大，患者的預(yù)后也就越差。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者死亡風險是無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的1.789倍，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是肺癌轉(zhuǎn)移的重要途徑之一，一旦發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，說明腫瘤細胞已經(jīng)突破了局部組織的限制，進入了淋巴循環(huán)系統(tǒng)，更容易發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移，進而影響患者的預(yù)后。而年齡（HR=1.052，95%CI：0.856-1.295，P=0.612）、性別（HR=1.089，95%CI：0.785-1.512，P=0.603）、吸煙史（HR=1.123，95%CI：0.821-1.536，P=0.456）、病理類型（HR=1.345，95%CI：0.921-1.956，P=0.123）和分化程度（HR=1.245，95%CI：0.876-1.778，P=0.221）等因素在多因素分析中未顯示出對肺癌患者預(yù)后的獨立影響。雖然年齡、性別、吸煙史、病理類型和分化程度等因素在肺癌的發(fā)生發(fā)展過程中可能起到一定的作用，但在綜合考慮其他因素后，它們并不是影響肺癌患者預(yù)后的獨立因素。這可能是因為這些因素之間存在相互關(guān)聯(lián)和影響，在多因素分析中被其他更關(guān)鍵的因素所掩蓋。通過Cox比例風險回歸模型的多因素分析，明確了DSG3表達水平、腫瘤分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響肺癌患者預(yù)后的獨立危險因素。這一結(jié)果為肺癌的預(yù)后評估提供了重要的參考依據(jù)，臨床醫(yī)生在評估肺癌患者預(yù)后時，應(yīng)重點關(guān)注DSG3表達水平、腫瘤分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，以便更準確地預(yù)測患者的預(yù)后，制定個性化的治療方案。五、討論5.1DSG3表達與肺癌臨床病理特征的關(guān)聯(lián)本研究通過對150例肺癌患者的臨床病理資料及DSG3表達數(shù)據(jù)進行深入分析，發(fā)現(xiàn)DSG3表達與肺癌患者的病理類型、分化程度、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)。在病理類型方面，肺鱗癌組織中DSG3的陽性表達率高達85.00%，顯著高于肺腺癌組織中的30.00%，這與以往的研究結(jié)果高度一致。相關(guān)研究表明，DSG3在肺鱗癌中的高表達可能與肺鱗癌的發(fā)生發(fā)展機制有關(guān)。從組織學角度來看，肺鱗癌起源于支氣管上皮的鱗狀化生，而DSG3在復層鱗狀上皮中具有重要的生理功能，其在肺鱗癌中的高表達可能是腫瘤細胞在分化過程中保留了鱗狀上皮的某些特性。從分子機制角