152024-07-31發(fā)布本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定h)增加了瓶裝液體菌種檢驗(yàn)要求（見(jiàn)6i)更改了菌種罐液體菌種裝罐和滅菌要求（見(jiàn)6.2.3.1，2016版6.2.3.1——2016年首次發(fā)布為DB15/T1I香菇菌種制作技術(shù)規(guī)程通過(guò)生產(chǎn)試驗(yàn)驗(yàn)證具有特異性、均一性和穩(wěn)定性，豐產(chǎn)性好、抗性強(qiáng)的香菇菌株或品種，生長(zhǎng)在適宜基質(zhì)上具結(jié)實(shí)性的菌絲培養(yǎng)物，包括母種、原種和栽試管和培養(yǎng)皿為培養(yǎng)容器和使用單位，也稱為一級(jí)種、試12在液體培養(yǎng)基中，通過(guò)搖瓶震蕩培養(yǎng)或深層發(fā)酵技術(shù)快速獲得的大量的總體要求交通運(yùn)輸便利，地勢(shì)較高，通風(fēng)良好，有充足的水源和電源，排水通暢，遠(yuǎn)離污染源。4.2廠房菌種生產(chǎn)需要粉碎機(jī)、電子秤、攪拌機(jī)、裝袋(瓶)機(jī)、高壓滅菌鍋或常壓滅菌鍋、離子凈化器、超凈工作臺(tái)或接種箱、恒溫培養(yǎng)箱、培養(yǎng)架、搖床、液體菌種灌(30L～250L)、冰箱、顯微鏡等設(shè)馬鈴薯200g加水1200ml煮沸20min,濾液定容至1000ml,加入葡萄糖1.5g、酵母粉1.5g、硫酸鎂(MgSO?)0.5g、磷酸二氫鉀(KH?PO?)1g、瓊脂粉8g～10g,pH自然；麥粒100g加水1200ml煮沸20min,濾液定容至1000ml,加入葡萄糖10g、蔗糖10g、蛋白胨5馬鈴薯200g加水600ml煮沸20min,濾液定容至500ml;麥麩100g加水600ml煮沸20min,濾液定容至500ml,二者混合，加入葡萄糖10g、蔗糖10g、蛋白胨1.8g、硫酸鎂(MgSO?)0.5g、磷酸二3分裝培養(yǎng)基至試管1/4處，用棉塞或硅膠塞子封閉試管口，每5支試管為1把，牛皮紙包棉塞，橡皮筋扎緊，棉塞向上放置。棉塞應(yīng)采用梳棉，不能使用脫脂棉。在121℃~122℃(0.11MPa～0.12MPa)降溫至(65±5)℃時(shí)取出試管，在空氣清潔的室內(nèi)擺斜面，斜面長(zhǎng)度不超過(guò)試管長(zhǎng)度的2/3。自然培養(yǎng)基裝入300ml～500ml三角瓶至刻度的2/3處，用帶濾膜的封口包好，放入滅菌鍋。121℃~122℃(0.11MPa～0.12MPa)恒溫滅菌25min。降溫至(65±5)℃時(shí)，在超凈工作臺(tái)內(nèi)將三角瓶中的培養(yǎng)基分裝至培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)基占培養(yǎng)皿高抽取3%～5%滅菌后的試管和培養(yǎng)皿，在28℃下培養(yǎng)48h,無(wú)微生物長(zhǎng)出為滅菌合格。超凈工作臺(tái)或接種箱內(nèi)紫外燈照射30min后吹風(fēng)，之后用75%酒精進(jìn)行表面消毒。接菌過(guò)程嚴(yán)格執(zhí)在通風(fēng)避光、22℃~26℃下培養(yǎng)。糧食培養(yǎng)基：谷粒、麥?；蛴衩琢?9%,檸條粉、棉籽殼、木屑、玉米芯粉或豆秸粉9%,石膏1%、過(guò)磷酸鈣%,水分含量(60±2)%,石灰水調(diào)節(jié)pH6.0～pH6.6。組合培養(yǎng)基：木屑78%,麥麩或細(xì)米糠20%,石膏1%,過(guò)磷酸鈣1%,水分含量(60±2)%,石灰水調(diào)節(jié)pH值到6～6.6;檸條粉60%,玉米芯20%,麩子18%,石膏1%,過(guò)磷酸鈣1%,水分含量(60±2)%,石灰水調(diào)節(jié)pH值到6～6.6;豆秸粉60%，玉米芯20%，麩子18%，石膏1%，過(guò)磷酸鈣1%，水分含量（60±2）%，石灰水調(diào)節(jié)pH值硬雜木屑87%，麥麩12%，石膏1%，水分含量（60±2）%，石灰水調(diào)節(jié)pH值到6～6硬雜木屑84%，麩皮12%，高粱殼3%，石膏1%，水分含量（60±2）%，石灰水調(diào)節(jié)pH值到6～6.1.5cm深度為8cm～12cm，每袋（瓶）裝培養(yǎng)基500g～600g。塑料袋用無(wú)棉蓋體套環(huán)每批接種應(yīng)為單一品種，如中途換品種時(shí)采用75%酒精對(duì)超凈工作臺(tái)或接種箱及接種工具進(jìn)行表面通風(fēng)避光、22℃~27℃下培養(yǎng)。原種和栽培種0℃~4℃下貯存，貯存期不超過(guò)50d。采用150ml～500ml三角瓶，培養(yǎng)基添加至刻度的2/3處，用帶濾膜的封口膜封口后滅在121℃~122℃（0.11MPa～0.12MPa）保持25min。4取3mm～5mm大小母種10～15塊接r/min～160r/min下振蕩培養(yǎng)6d～10接種后第3天對(duì)三角瓶逐個(gè)進(jìn)行純度檢驗(yàn)，及時(shí)清理未活或污染的140r/min～180r/min，灌格執(zhí)行無(wú)菌操作，每袋接種10ml～15無(wú)無(wú)5無(wú)無(wú)菌種外觀無(wú)無(wú)香菇液體菌種種感