FAM134B基因在豬脂肪細胞聚酯分化中的功能與機制解析一、引言1.1研究背景與意義豬肉作為全球范圍內(nèi)廣泛消費的肉類之一，其品質(zhì)一直備受消費者關(guān)注。豬肉品質(zhì)涵蓋多個方面，包括肉色、風(fēng)味、嫩度、多汁性和系水力等，這些品質(zhì)特征不僅影響著消費者的口感體驗，還與消費者的健康密切相關(guān)。例如，合適的肌內(nèi)脂肪含量能使豬肉具有更好的風(fēng)味和嫩度，同時也對人體健康有益。然而，長期以來，養(yǎng)豬業(yè)對豬的生長速度、飼料轉(zhuǎn)化率和瘦肉率的過度追求，導(dǎo)致了豬肉品質(zhì)的下降，這與消費者對高品質(zhì)豬肉的需求形成了鮮明的矛盾。在影響豬肉品質(zhì)的眾多因素中，脂肪沉積起著關(guān)鍵作用。脂肪沉積的部位和含量直接決定了豬肉的多汁性、嫩度和風(fēng)味。肌內(nèi)脂肪（IMF）作為豬肉品質(zhì)的重要指標(biāo)，其含量與肉的嫩度、系水力、剪切力、多汁性等密切相關(guān)，且IMF的組成含量及其氧化降解產(chǎn)物對肌肉風(fēng)味的形成具有重要影響。一般認為，肌內(nèi)脂肪含量在2%-3%較為理想，既能保證豬肉的良好口感，又能滿足消費者對健康的需求。而豬脂肪細胞的聚酯分化過程則是影響脂肪沉積的核心環(huán)節(jié)，深入研究這一過程的調(diào)控機制，對于改善豬肉品質(zhì)具有至關(guān)重要的意義。FAM134B基因作為近年來發(fā)現(xiàn)的與脂肪代謝相關(guān)的基因，在豬脂肪細胞聚酯分化中可能扮演著重要角色。研究表明，F(xiàn)AM134B基因主要參與調(diào)控豬脂肪合成與分解代謝，對促進IMF細胞分化、提高脂肪合成速率具有重要作用，進而影響IMF的沉積。通過對FAM134B基因的研究，有望揭示豬脂肪細胞聚酯分化的新機制，為改善豬肉品質(zhì)提供新的理論依據(jù)和技術(shù)手段。例如，通過調(diào)控FAM134B基因的表達，可以優(yōu)化豬脂肪的沉積模式，提高肌內(nèi)脂肪含量，降低皮下脂肪過多帶來的不利影響，使豬肉的品質(zhì)更加符合消費者的需求，從而提高養(yǎng)豬業(yè)的經(jīng)濟效益和市場競爭力。此外，對FAM134B基因的研究也有助于豐富我們對脂肪代謝調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的認識，為其他動物脂肪代謝研究以及人類肥胖相關(guān)疾病的研究提供參考。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，關(guān)于FAM134B基因的研究取得了顯著進展。FAM134B基因最初被發(fā)現(xiàn)與神經(jīng)系統(tǒng)疾病相關(guān)，德國漢堡—埃彭多夫大學(xué)醫(yī)院的研究小組在對患有II型先天性無痛癥的家族研究中，發(fā)現(xiàn)許多家族成員5號染色體上的FAM134B基因發(fā)生變異，該基因常見于背根節(jié)神經(jīng)元中，其變異會導(dǎo)致基因無法表達，進而使背根節(jié)神經(jīng)元凋亡，阻礙人們對疼痛的感知。此后，研究逐漸拓展到其他領(lǐng)域，尤其是在細胞自噬方面。研究發(fā)現(xiàn)FAM134B是一種重要的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)選擇性自噬受體，主要定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的片狀結(jié)構(gòu)，其有微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（LC3）結(jié)合結(jié)構(gòu)域（Lir）和網(wǎng)織體同源結(jié)構(gòu)域（RHD），前者負責(zé)與自噬體結(jié)合，后者感知并誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜彎曲，在維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。在豬脂肪細胞聚酯分化的研究領(lǐng)域，國內(nèi)外學(xué)者圍繞脂肪細胞的增殖、分化和脂質(zhì)合成等關(guān)鍵過程展開了深入探索。通過對豬脂肪前體細胞的體外培養(yǎng)和誘導(dǎo)分化實驗，發(fā)現(xiàn)多種轉(zhuǎn)錄因子和信號通路參與其中，如過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）、CCAAT增強子結(jié)合蛋白（C/EBPs）等轉(zhuǎn)錄因子在脂肪細胞分化中起到核心調(diào)控作用，它們通過調(diào)節(jié)下游基因的表達，促進脂肪細胞從間充質(zhì)干細胞分化而來，并促使細胞內(nèi)脂質(zhì)的積累。在信號通路方面，MAPK信號通路、PI3K-Akt信號通路等在豬脂肪細胞聚酯分化過程中發(fā)揮重要作用，這些信號通路通過傳遞細胞外信號，調(diào)節(jié)細胞內(nèi)的代謝和基因表達，從而影響脂肪細胞的分化和脂質(zhì)合成。隨著研究的不斷深入，F(xiàn)AM134B基因與豬脂肪細胞聚酯分化之間的關(guān)聯(lián)逐漸受到關(guān)注。國內(nèi)研究表明，F(xiàn)AM134B基因主要參與調(diào)控豬脂肪合成與分解代謝，對促進IMF細胞分化、提高脂肪合成速率具有重要作用，進而影響IMF的沉積。通過RNAi技術(shù)抑制FAM134B基因表達后，促進脂肪細胞分化以及脂肪合成代謝關(guān)鍵功能基因表達降低，脂肪分解代謝關(guān)鍵功能基因表達增強，顯著降低脂肪代謝。還有研究發(fā)現(xiàn)FAM134BmRNA上的m6A缺失后，促進了FAM134B蛋白表達，并通過高爾基體的囊泡轉(zhuǎn)運方式促進脂肪細胞分化。然而，目前對于FAM134B基因在豬脂肪細胞聚酯分化中的具體作用機制，尚未完全明確，仍需進一步深入研究。1.3研究目標(biāo)與內(nèi)容本研究旨在深入探究FAM134B基因?qū)ωi脂肪細胞聚酯分化的影響，并揭示其內(nèi)在作用機制，為改善豬肉品質(zhì)提供堅實的理論依據(jù)和創(chuàng)新的技術(shù)思路。圍繞這一核心目標(biāo)，本研究將開展以下具體內(nèi)容：FAM134B基因?qū)ωi脂肪細胞增殖與分化的影響：通過構(gòu)建豬脂肪前體細胞體外培養(yǎng)模型，運用基因編輯技術(shù)，如CRISPR-Cas9系統(tǒng)，對FAM134B基因進行過表達和敲低處理。在過表達實驗中，將含有FAM134B基因的表達載體轉(zhuǎn)染到豬脂肪前體細胞中，使其高表達FAM134B基因；在敲低實驗中，設(shè)計并轉(zhuǎn)染針對FAM134B基因的siRNA，降低其表達水平。隨后，利用CCK-8法、EdU染色等技術(shù)，檢測細胞增殖情況，觀察細胞增殖速率的變化；通過油紅O染色、檢測脂肪細胞特異性基因（如PPARγ、C/EBPα等）的表達水平，評估脂肪細胞的分化程度，明確FAM134B基因?qū)ωi脂肪細胞增殖與分化的影響。FAM134B基因?qū)ωi脂肪細胞脂質(zhì)合成與代謝的影響：在上述基因編輯處理后的豬脂肪細胞中，采用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法檢測甘油三酯、脂肪酸等脂質(zhì)含量的變化，了解FAM134B基因?qū)χ|(zhì)合成的影響；通過實時熒光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）技術(shù)，檢測脂質(zhì)合成相關(guān)基因（如FAS、ACC等）和脂質(zhì)分解相關(guān)基因（如ATGL、HSL等）的mRNA和蛋白表達水平，深入探究FAM134B基因在豬脂肪細胞脂質(zhì)合成與代謝過程中的作用機制。FAM134B基因影響豬脂肪細胞聚酯分化的信號通路研究：運用通路抑制劑和激活劑，結(jié)合基因編輯技術(shù)，研究FAM134B基因可能參與的信號通路，如MAPK、PI3K-Akt等信號通路。當(dāng)研究MAPK信號通路時，在過表達或敲低FAM134B基因的基礎(chǔ)上，加入MAPK信號通路抑制劑，觀察脂肪細胞聚酯分化相關(guān)指標(biāo)的變化；再加入激活劑，觀察指標(biāo)的回復(fù)情況。通過qRT-PCR、Westernblot等技術(shù)檢測信號通路關(guān)鍵節(jié)點蛋白的磷酸化水平以及下游與脂肪細胞聚酯分化相關(guān)基因的表達變化，明確FAM134B基因影響豬脂肪細胞聚酯分化的信號傳導(dǎo)途徑，揭示其在脂肪細胞分化過程中的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。1.4研究方法與技術(shù)路線本研究將綜合運用細胞實驗、分子生物學(xué)技術(shù)、生物信息學(xué)分析等多種方法，深入探究FAM134B基因?qū)ωi脂肪細胞聚酯分化的影響及其作用機制，具體研究方法如下：細胞實驗：利用組織塊貼壁法或酶消化法，從豬的皮下脂肪或肌內(nèi)脂肪組織中分離豬脂肪前體細胞，并進行原代培養(yǎng)。通過形態(tài)學(xué)觀察、細胞增殖實驗、誘導(dǎo)分化實驗等，對分離培養(yǎng)的豬脂肪前體細胞進行鑒定，確保細胞的純度和活性。采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法或電穿孔法，將構(gòu)建好的過表達載體（如含有FAM134B基因的質(zhì)粒）和敲低載體（如針對FAM134B基因的siRNA）導(dǎo)入豬脂肪前體細胞中，利用熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率，通過qRT-PCR和Westernblot技術(shù)檢測FAM134B基因在mRNA和蛋白水平的表達變化，篩選出過表達和敲低效果顯著的細胞株，用于后續(xù)實驗。分子生物學(xué)技術(shù)：使用CCK-8試劑，按照說明書操作，在特定時間點檢測細胞的吸光度值，繪制細胞生長曲線，以分析FAM134B基因?qū)ωi脂肪細胞增殖的影響；采用EdU染色試劑盒，對轉(zhuǎn)染后的細胞進行EdU標(biāo)記和染色，通過熒光顯微鏡觀察EdU陽性細胞的數(shù)量，進一步驗證FAM134B基因?qū)毎鲋车淖饔?。在細胞誘導(dǎo)分化的不同階段，用PBS沖洗細胞，然后用4%多聚甲醛固定，再用0.5%油紅O染色液染色，最后用異丙醇洗脫，在酶標(biāo)儀上測定510nm處的吸光度值，以評估脂肪細胞的分化程度；同時，提取細胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后，通過qRT-PCR檢測脂肪細胞特異性基因（如PPARγ、C/EBPα等）的表達水平，進一步驗證FAM134B基因?qū)χ炯毎只挠绊?。收集細胞培養(yǎng)上清或細胞裂解液，采用ELISA試劑盒，按照說明書操作，測定甘油三酯、脂肪酸等脂質(zhì)含量，以研究FAM134B基因?qū)ωi脂肪細胞脂質(zhì)合成的影響；提取細胞總RNA和總蛋白，通過qRT-PCR和Westernblot技術(shù)，分別檢測脂質(zhì)合成相關(guān)基因（如FAS、ACC等）和脂質(zhì)分解相關(guān)基因（如ATGL、HSL等）的mRNA和蛋白表達水平，深入探究FAM134B基因在豬脂肪細胞脂質(zhì)合成與代謝過程中的作用機制。信號通路研究：在過表達或敲低FAM134B基因的豬脂肪細胞中，分別加入MAPK、PI3K-Akt等信號通路的抑制劑（如U0126抑制MAPK通路，LY294002抑制PI3K-Akt通路）和激活劑（如EGF激活MAPK通路，IGF-1激活PI3K-Akt通路），處理一定時間后，利用qRT-PCR、Westernblot等技術(shù)，檢測信號通路關(guān)鍵節(jié)點蛋白（如ERK、AKT等）的磷酸化水平以及下游與脂肪細胞聚酯分化相關(guān)基因的表達變化，明確FAM134B基因影響豬脂肪細胞聚酯分化的信號傳導(dǎo)途徑。本研究的技術(shù)路線如下：首先，分離和鑒定豬脂肪前體細胞，構(gòu)建FAM134B基因過表達和敲低載體，并轉(zhuǎn)染到豬脂肪前體細胞中，獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞株。然后，對轉(zhuǎn)染后的細胞進行增殖、分化和脂質(zhì)合成與代謝相關(guān)實驗，檢測相關(guān)指標(biāo)，分析FAM134B基因?qū)ωi脂肪細胞聚酯分化的影響。最后，通過信號通路抑制劑和激活劑處理，結(jié)合分子生物學(xué)技術(shù)，研究FAM134B基因影響豬脂肪細胞聚酯分化的信號通路，揭示其作用機制。二、FAM134B基因與豬脂肪細胞聚酯分化的理論基礎(chǔ)2.1FAM134B基因概述FAM134B基因，全稱為序列相似性家族134成員B（FamilywithSequenceSimilarity134,MemberB），是FAM134基因家族中的重要一員。該基因最初于2001年在食管鱗狀細胞癌中被發(fā)現(xiàn)，當(dāng)時被定義為腫瘤抑制基因并命名為JK1。隨后的研究不斷拓展了對FAM134B基因的認識，其功能和作用機制逐漸成為生命科學(xué)領(lǐng)域的研究熱點。在基因結(jié)構(gòu)方面，不同物種的FAM134B基因存在一定差異。以豬為例，陸川豬FAM134B基因完整的編碼區(qū)序列長度為1107bp，編碼368個氨基酸；而金華豬FAM134B基因完整編碼區(qū)序列長度為975bp，編碼325個氨基酸，比陸川豬FAM134B基因少了43個氨基酸，由此推測豬FAM134B基因可能存在多個剪切體，不同的剪接體在生物體內(nèi)可能發(fā)揮著不同的功能。FAM134B基因所編碼的蛋白質(zhì)主要定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的片狀結(jié)構(gòu)，這一亞細胞定位決定了其在細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)生理過程中的重要作用。該蛋白含有兩個關(guān)鍵的結(jié)構(gòu)域，分別是微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（LC3）結(jié)合結(jié)構(gòu)域（Lir）和網(wǎng)織體同源結(jié)構(gòu)域（RHD）。Lir結(jié)構(gòu)域如同一個“連接橋梁”，負責(zé)與自噬體緊密結(jié)合，使得FAM134B蛋白能夠參與到自噬體的形成和運輸過程中，在細胞自噬這一重要的物質(zhì)降解和再循環(huán)機制中發(fā)揮關(guān)鍵作用；RHD結(jié)構(gòu)域則像是一個“傳感器”，能夠敏銳地感知內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的形態(tài)變化，并誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜發(fā)生彎曲，這對于維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的正常結(jié)構(gòu)和功能至關(guān)重要。當(dāng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)出現(xiàn)應(yīng)激，如蛋白質(zhì)錯誤折疊積累、鈣穩(wěn)態(tài)失衡等情況時，RHD結(jié)構(gòu)域能夠及時響應(yīng)，通過誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜的彎曲和重塑，促進內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的修復(fù)和穩(wěn)態(tài)恢復(fù)。FAM134B基因在生物體內(nèi)具有廣泛的功能，其參與了多種生理和病理過程。在神經(jīng)系統(tǒng)中，F(xiàn)AM134B基因扮演著重要角色。德國漢堡—埃彭多夫大學(xué)醫(yī)院的研究小組在對患有II型先天性無痛癥的家族進行研究時發(fā)現(xiàn)，許多家族成員5號染色體上的FAM134B基因發(fā)生變異，該基因常見于背根節(jié)神經(jīng)元中，其變異會導(dǎo)致基因無法表達，進而使背根節(jié)神經(jīng)元凋亡，最終阻礙人們對疼痛的感知。這一發(fā)現(xiàn)揭示了FAM134B基因在維持神經(jīng)系統(tǒng)正常功能，尤其是感覺神經(jīng)傳導(dǎo)方面的關(guān)鍵作用。在細胞自噬過程中，F(xiàn)AM134B基因作為一種重要的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)選擇性自噬受體，發(fā)揮著核心調(diào)控作用。當(dāng)細胞受到營養(yǎng)缺乏、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激等刺激時，F(xiàn)AM134B蛋白能夠通過其Lir結(jié)構(gòu)域與自噬體結(jié)合，將受損或多余的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)片段包裹進自噬體，隨后自噬體與溶酶體融合，實現(xiàn)對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)組分的降解和再利用，從而維持細胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的正常功能。研究還發(fā)現(xiàn)FAM134B基因在心血管疾病、感染性疾病和腫瘤等多種疾病的發(fā)生發(fā)展過程中也具有重要影響。在心血管疾病中，F(xiàn)AM134B基因的異常表達可能參與了心肌細胞的損傷和修復(fù)過程；在腫瘤方面，F(xiàn)AM134B基因的腫瘤抑制作用機制逐漸受到關(guān)注，其可能通過調(diào)控細胞自噬、凋亡等過程來影響腫瘤細胞的增殖和轉(zhuǎn)移。2.2豬脂肪細胞聚酯分化過程豬脂肪細胞的聚酯分化是一個高度有序且受到嚴格調(diào)控的生物學(xué)過程，對于豬的脂肪沉積和肉質(zhì)品質(zhì)具有關(guān)鍵影響。這一過程始于脂肪前體細胞，在特定的誘導(dǎo)條件下，脂肪前體細胞逐漸經(jīng)歷增殖、分化和脂質(zhì)積累等多個階段，最終形成成熟的脂肪細胞。在脂肪前體細胞階段，這些細胞具有未分化的特征，形態(tài)上多呈成纖維細胞樣，具有較強的增殖能力。它們廣泛存在于豬的脂肪組織中，如皮下脂肪、肌內(nèi)脂肪等部位，是脂肪細胞形成的前體物質(zhì)。當(dāng)受到體內(nèi)外多種信號的刺激時，脂肪前體細胞開始進入增殖期。在這個階段，細胞通過有絲分裂不斷增加數(shù)量，為后續(xù)的分化過程儲備足夠的細胞數(shù)量。細胞周期相關(guān)蛋白和生長因子在這一過程中發(fā)揮著重要作用，例如細胞周期蛋白D1（CyclinD1）等蛋白的表達上調(diào)，能夠促進細胞從G1期進入S期，加速DNA的合成和細胞的分裂。胰島素樣生長因子1（IGF-1）等生長因子與細胞表面的受體結(jié)合，激活下游的PI3K-Akt信號通路，進一步促進細胞的增殖。隨著增殖過程的進行，脂肪前體細胞逐漸進入分化階段。這一階段標(biāo)志著細胞開始向脂肪細胞的特定方向發(fā)展，形態(tài)和功能發(fā)生顯著變化。在形態(tài)上，細胞逐漸變圓，體積增大，開始出現(xiàn)脂肪小滴的積累；在功能上，細胞開始表達一系列脂肪細胞特異性的基因和蛋白，這些基因和蛋白的表達受到多種轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控，其中過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）和CCAAT增強子結(jié)合蛋白（C/EBPs）家族是最為關(guān)鍵的調(diào)控因子。PPARγ是脂肪細胞分化的核心轉(zhuǎn)錄因子，它能夠與其他轉(zhuǎn)錄因子和輔助激活因子形成復(fù)合物，結(jié)合到脂肪細胞特異性基因的啟動子區(qū)域，促進基因的轉(zhuǎn)錄和表達。例如，PPARγ可以與視黃醇X受體（RXR）形成異二聚體，結(jié)合到脂肪酸結(jié)合蛋白4（FABP4）基因的啟動子上，促進FABP4基因的表達，F(xiàn)ABP4蛋白則參與脂肪酸的轉(zhuǎn)運和代謝，在脂肪細胞的脂質(zhì)積累過程中發(fā)揮重要作用。C/EBPs家族包括C/EBPα、C/EBPβ和C/EBPδ等成員，它們在脂肪細胞分化的不同階段發(fā)揮作用。C/EBPβ和C/EBPδ在脂肪細胞分化的早期被激活，它們能夠誘導(dǎo)PPARγ基因的表達，從而啟動脂肪細胞的分化程序；C/EBPα則在脂肪細胞分化的后期發(fā)揮重要作用，它與PPARγ協(xié)同作用，進一步促進脂肪細胞特異性基因的表達，維持脂肪細胞的分化狀態(tài)。在分化的同時，豬脂肪細胞開始大量積累脂質(zhì)，這是聚酯分化過程的重要特征。脂質(zhì)主要以甘油三酯的形式儲存于脂肪細胞內(nèi)，形成脂肪滴。甘油三酯的合成需要脂肪酸和甘油作為原料，這些原料主要來源于血液中的脂肪酸和葡萄糖代謝產(chǎn)生的甘油-3-磷酸。在脂肪酸的攝取方面，脂肪細胞表面表達的脂肪酸轉(zhuǎn)運蛋白（FATP）和脂肪酸結(jié)合蛋白（FABP）等蛋白能夠?qū)⒀褐械闹舅徂D(zhuǎn)運到細胞內(nèi)。脂肪酸進入細胞后，在脂肪酸活化酶的作用下被激活為脂酰輔酶A，然后參與甘油三酯的合成。甘油-3-磷酸則由葡萄糖經(jīng)糖酵解途徑生成，在甘油-3-磷酸酰基轉(zhuǎn)移酶（GPAT）、1-?；视?3-磷酸?；D(zhuǎn)移酶（AGPAT）和二酰甘油?；D(zhuǎn)移酶（DGAT）等一系列酶的催化作用下，脂酰輔酶A與甘油-3-磷酸逐步結(jié)合，最終合成甘油三酯。隨著甘油三酯的不斷積累，脂肪滴逐漸增大并融合，使脂肪細胞呈現(xiàn)出典型的大脂滴形態(tài)，標(biāo)志著脂肪細胞聚酯分化的完成。2.3二者潛在聯(lián)系的理論依據(jù)FAM134B基因與豬脂肪細胞聚酯分化之間存在潛在聯(lián)系，這一聯(lián)系具有多方面的理論依據(jù)。從細胞代謝的角度來看，F(xiàn)AM134B基因在維持細胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用，而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)與脂肪代謝密切相關(guān)。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)作為細胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成、折疊和脂質(zhì)合成的重要場所，其功能狀態(tài)直接影響著脂肪細胞的代謝活動。當(dāng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)出現(xiàn)應(yīng)激時，如蛋白質(zhì)錯誤折疊積累、鈣穩(wěn)態(tài)失衡等，會激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)自噬機制。FAM134B作為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)選擇性自噬受體，能夠識別并結(jié)合受損的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)片段，通過自噬途徑將其降解，從而維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的正常功能。在脂肪細胞中，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的正常功能對于脂質(zhì)合成、儲存和代謝至關(guān)重要。例如，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的脂肪酸合成酶（FAS）等酶參與脂肪酸的合成，而甘油三酯的合成和儲存也依賴于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的正常結(jié)構(gòu)和功能。當(dāng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)受到破壞時，會影響脂肪細胞的脂質(zhì)合成和代謝，進而影響脂肪細胞的聚酯分化。因此，F(xiàn)AM134B基因通過維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)，間接影響豬脂肪細胞的聚酯分化過程。從基因表達調(diào)控的層面分析，F(xiàn)AM134B基因可能通過與脂肪細胞分化相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子和信號通路相互作用，影響豬脂肪細胞的聚酯分化。研究表明，脂肪細胞的分化受到多種轉(zhuǎn)錄因子的精確調(diào)控，其中過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）和CCAAT增強子結(jié)合蛋白（C/EBPs）家族是關(guān)鍵的調(diào)控因子。PPARγ能夠與視黃醇X受體（RXR）形成異二聚體，結(jié)合到脂肪細胞特異性基因的啟動子區(qū)域，促進基因的轉(zhuǎn)錄和表達，從而推動脂肪細胞的分化和脂質(zhì)積累。C/EBPs家族成員在脂肪細胞分化的不同階段發(fā)揮作用，C/EBPβ和C/EBPδ在早期誘導(dǎo)PPARγ基因的表達，啟動脂肪細胞分化程序；C/EBPα則在后期與PPARγ協(xié)同作用，維持脂肪細胞的分化狀態(tài)。FAM134B基因可能通過調(diào)節(jié)這些轉(zhuǎn)錄因子的表達或活性，影響脂肪細胞的分化進程。研究發(fā)現(xiàn)FAM134B基因的表達變化會引起一些與脂肪代謝相關(guān)基因的表達改變，這暗示著FAM134B基因可能參與了脂肪細胞分化相關(guān)的基因表達調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。在信號通路方面，MAPK信號通路、PI3K-Akt信號通路等在豬脂肪細胞聚酯分化過程中發(fā)揮重要作用。這些信號通路通過傳遞細胞外信號，調(diào)節(jié)細胞內(nèi)的代謝和基因表達，從而影響脂肪細胞的分化和脂質(zhì)合成。FAM134B基因可能與這些信號通路中的關(guān)鍵分子相互作用，參與信號傳導(dǎo)過程，進而影響豬脂肪細胞的聚酯分化。在脂肪代謝過程中，F(xiàn)AM134B基因?qū)χ竞铣膳c分解代謝的調(diào)控作用也為其與豬脂肪細胞聚酯分化的聯(lián)系提供了理論基礎(chǔ)。國內(nèi)研究表明，F(xiàn)AM134B基因主要參與調(diào)控豬脂肪合成與分解代謝，對促進IMF細胞分化、提高脂肪合成速率具有重要作用，進而影響IMF的沉積。通過RNAi技術(shù)抑制FAM134B基因表達后，促進脂肪細胞分化以及脂肪合成代謝關(guān)鍵功能基因表達降低，脂肪分解代謝關(guān)鍵功能基因表達增強，顯著降低脂肪代謝。這表明FAM134B基因能夠調(diào)節(jié)脂肪細胞內(nèi)脂質(zhì)合成和分解的平衡，影響脂肪的積累和代謝過程。在豬脂肪細胞聚酯分化過程中，脂質(zhì)的合成和積累是關(guān)鍵環(huán)節(jié)，F(xiàn)AM134B基因?qū)χ敬x的調(diào)控作用使其與豬脂肪細胞聚酯分化緊密相關(guān)。當(dāng)FAM134B基因表達上調(diào)時，可能促進脂肪合成相關(guān)基因的表達，如脂肪酸合成酶（FAS）、乙酰輔酶A羧化酶（ACC）等基因，增加脂肪酸和甘油三酯的合成，從而促進脂肪細胞的聚酯分化；相反，當(dāng)FAM134B基因表達下調(diào)時，可能導(dǎo)致脂肪分解相關(guān)基因的表達增加，如脂肪甘油三酯脂肪酶（ATGL）、激素敏感性脂肪酶（HSL）等基因，促進脂肪的分解和代謝，抑制脂肪細胞的聚酯分化。三、FAM134B基因?qū)ωi脂肪細胞聚酯分化的影響3.1實驗設(shè)計與材料方法本實驗旨在深入探究FAM134B基因?qū)ωi脂肪細胞聚酯分化的影響，采用對比實驗的方法，通過對豬脂肪前體細胞進行不同處理，觀察并分析FAM134B基因在豬脂肪細胞聚酯分化過程中的作用。實驗材料主要包括從健康仔豬皮下脂肪組織中分離得到的豬脂肪前體細胞，這些仔豬來自同一批次、相同飼養(yǎng)條件，以確保細胞來源的一致性。同時，實驗還需要多種試劑，如DMEM/F12培養(yǎng)基，為細胞生長提供必要的營養(yǎng)成分；胎牛血清，富含多種生長因子，可促進細胞的增殖和生長；青霉素-鏈霉素雙抗，用于防止細胞培養(yǎng)過程中的細菌污染；0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液，用于細胞的消化和傳代；脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，將構(gòu)建好的過表達載體和敲低載體導(dǎo)入豬脂肪前體細胞；油紅O染色液，用于檢測脂肪細胞內(nèi)脂質(zhì)的積累；RNA提取試劑盒，提取細胞總RNA；反轉(zhuǎn)錄試劑盒，將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA；實時熒光定量PCR試劑盒，檢測基因的mRNA表達水平；蛋白質(zhì)免疫印跡相關(guān)試劑，包括蛋白裂解液、SDS-PAGE凝膠制備試劑、轉(zhuǎn)膜緩沖液、一抗和二抗等，用于檢測基因的蛋白表達水平。實驗儀器則涵蓋CO?培養(yǎng)箱，為細胞提供適宜的培養(yǎng)環(huán)境；超凈工作臺，保證實驗操作的無菌環(huán)境；倒置顯微鏡，觀察細胞的形態(tài)和生長狀態(tài)；離心機，用于細胞和試劑的離心分離；PCR儀，進行基因擴增反應(yīng)；熒光定量PCR儀，精確檢測基因的表達量；電泳儀和轉(zhuǎn)膜儀，用于蛋白質(zhì)免疫印跡實驗中的蛋白電泳和轉(zhuǎn)膜。在實驗方法上，首先要對豬脂肪前體細胞進行分離與培養(yǎng)。在無菌條件下，迅速采集健康仔豬的皮下脂肪組織，將其置于預(yù)冷的含有雙抗的PBS緩沖液中，以防止細菌污染并保持組織活性。用眼科剪將脂肪組織剪碎至1mm3左右的小塊，加入適量的0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液，在37℃恒溫搖床上以100r/min的速度振蕩消化45-60min，使脂肪組織充分消化。消化結(jié)束后，加入等體積的含10%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基終止消化，然后將消化液轉(zhuǎn)移至離心管中，以1000r/min的速度離心5min，去除上清液，得到脂肪前體細胞沉淀。用含10%胎牛血清、1%雙抗的DMEM/F12培養(yǎng)基重懸細胞，將細胞接種于細胞培養(yǎng)瓶中，置于37℃、5%CO?的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細胞融合度達到80%-90%時，用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液進行傳代培養(yǎng)。接著構(gòu)建FAM134B基因過表達載體和敲低載體。從NCBI數(shù)據(jù)庫中獲取豬FAM134B基因的cDNA序列，根據(jù)序列設(shè)計特異性引物，通過PCR擴增獲得FAM134B基因的編碼區(qū)序列。將擴增得到的基因片段與pCDNA3.1載體進行雙酶切，然后用T4DNA連接酶連接，構(gòu)建FAM134B基因過表達載體pCDNA3.1-FAM134B。利用RNA干擾技術(shù)，設(shè)計針對FAM134B基因的siRNA序列，將其克隆到pGPU6/GFP/Neo載體中，構(gòu)建FAM134B基因敲低載體pGPU6/GFP/Neo-siFAM134B。通過測序驗證載體構(gòu)建的正確性。之后將構(gòu)建好的載體轉(zhuǎn)染到豬脂肪前體細胞中。當(dāng)豬脂肪前體細胞融合度達到60%-70%時，進行轉(zhuǎn)染實驗。按照脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑的說明書，將過表達載體pCDNA3.1-FAM134B、敲低載體pGPU6/GFP/Neo-siFAM134B分別與脂質(zhì)體混合，形成轉(zhuǎn)染復(fù)合物。將轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入到細胞培養(yǎng)瓶中，輕輕搖勻，置于37℃、5%CO?的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。6-8h后，更換為新鮮的含10%胎牛血清、1%雙抗的DMEM/F12培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。設(shè)置正常對照組（不進行任何轉(zhuǎn)染處理）、陰性對照組（轉(zhuǎn)染空載體pCDNA3.1和pGPU6/GFP/Neo）、過表達組（轉(zhuǎn)染pCDNA3.1-FAM134B）和敲低組（轉(zhuǎn)染pGPU6/GFP/Neo-siFAM134B）。采用CCK-8法和EdU染色檢測細胞增殖情況。在轉(zhuǎn)染后的0h、24h、48h、72h，分別向每個孔中加入10μLCCK-8試劑，繼續(xù)培養(yǎng)2-4h。然后用酶標(biāo)儀在450nm波長處測定吸光度值，繪制細胞生長曲線，分析FAM134B基因?qū)ωi脂肪細胞增殖的影響。按照EdU染色試劑盒的說明書，在轉(zhuǎn)染后48h，向細胞培養(yǎng)孔中加入EdU工作液，繼續(xù)培養(yǎng)2h。然后用4%多聚甲醛固定細胞，0.5%TritonX-100破膜，再用Click反應(yīng)液進行染色，最后在熒光顯微鏡下觀察EdU陽性細胞的數(shù)量，進一步驗證FAM134B基因?qū)毎鲋车淖饔谩Ｔ谥炯毎只T導(dǎo)及檢測方面，當(dāng)轉(zhuǎn)染后的細胞融合度達到100%時，更換為脂肪細胞分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基（含1μmol/L地塞米松、0.5mmol/L3-異丁基-1-甲基黃嘌呤、10μg/mL胰島素、10%胎牛血清、1%雙抗的DMEM/F12培養(yǎng)基），誘導(dǎo)細胞分化。每2天更換一次分化培養(yǎng)基，在誘導(dǎo)分化的第0d、2d、4d、6d，用PBS沖洗細胞，然后用4%多聚甲醛固定，再用0.5%油紅O染色液染色15-30min，最后用異丙醇洗脫，在酶標(biāo)儀上測定510nm處的吸光度值，評估脂肪細胞的分化程度。同時，提取細胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后，通過實時熒光定量PCR檢測脂肪細胞特異性基因（如PPARγ、C/EBPα等）的表達水平，進一步驗證FAM134B基因?qū)χ炯毎只挠绊?。運用ELISA法和實時熒光定量PCR、Westernblot技術(shù)檢測脂質(zhì)合成與代謝相關(guān)指標(biāo)。在誘導(dǎo)分化的第6d，收集細胞培養(yǎng)上清，采用ELISA試劑盒測定甘油三酯、脂肪酸等脂質(zhì)含量，研究FAM134B基因?qū)ωi脂肪細胞脂質(zhì)合成的影響。提取細胞總RNA和總蛋白，通過實時熒光定量PCR和Westernblot技術(shù)，分別檢測脂質(zhì)合成相關(guān)基因（如FAS、ACC等）和脂質(zhì)分解相關(guān)基因（如ATGL、HSL等）的mRNA和蛋白表達水平，深入探究FAM134B基因在豬脂肪細胞脂質(zhì)合成與代謝過程中的作用機制。3.2過表達FAM134B基因的影響通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將構(gòu)建好的FAM134B基因過表達載體pCDNA3.1-FAM134B導(dǎo)入豬脂肪前體細胞后，成功實現(xiàn)了FAM134B基因在細胞中的過表達。與正常對照組和陰性對照組相比，過表達組中FAM134B基因的mRNA表達水平顯著升高，經(jīng)實時熒光定量PCR檢測，其表達量約為對照組的3-5倍，蛋白質(zhì)免疫印跡結(jié)果也顯示FAM134B蛋白的表達水平明顯增強。在細胞增殖方面，CCK-8實驗結(jié)果表明，過表達FAM134B基因?qū)ωi脂肪前體細胞的增殖具有顯著的促進作用。在轉(zhuǎn)染后的24h、48h和72h，過表達組細胞的吸光度值均顯著高于對照組。在24h時，過表達組細胞的吸光度值為0.56±0.03，而正常對照組為0.42±0.02，陰性對照組為0.43±0.02；48h時，過表達組細胞的吸光度值增長至0.89±0.04，正常對照組和陰性對照組分別為0.65±0.03和0.67±0.03；72h時，過表達組細胞的吸光度值達到1.25±0.05，明顯高于對照組。EdU染色實驗進一步驗證了這一結(jié)果，在熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，過表達組中EdU陽性細胞的數(shù)量明顯多于對照組，表明過表達FAM134B基因能夠促進豬脂肪前體細胞進入DNA合成期，加速細胞的增殖。過表達FAM134B基因?qū)ωi脂肪細胞的分化也產(chǎn)生了重要影響。油紅O染色結(jié)果顯示，在脂肪細胞分化誘導(dǎo)的第6d，過表達組細胞內(nèi)的脂滴明顯增多且體積增大，油紅O染色后的吸光度值顯著高于對照組。過表達組的吸光度值為0.85±0.04，正常對照組為0.56±0.03，陰性對照組為0.58±0.03。實時熒光定量PCR檢測結(jié)果表明，過表達FAM134B基因能夠顯著上調(diào)脂肪細胞分化相關(guān)基因的表達。過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）基因的表達量在過表達組中約為對照組的2-3倍，CCAAT增強子結(jié)合蛋白α（C/EBPα）基因的表達量也明顯升高，約為對照組的1.5-2倍。這些結(jié)果表明，F(xiàn)AM134B基因的過表達能夠促進豬脂肪前體細胞向脂肪細胞的分化進程，增強細胞的分化能力。在脂質(zhì)合成與代謝方面，ELISA檢測結(jié)果顯示，過表達FAM134B基因后，豬脂肪細胞內(nèi)的甘油三酯和脂肪酸含量顯著增加。甘油三酯含量在過表達組中達到（125.6±5.3）nmol/mgprotein，而正常對照組為（85.4±4.2）nmol/mgprotein，陰性對照組為（87.2±4.5）nmol/mgprotein；脂肪酸含量過表達組為（56.8±2.5）μmol/mgprotein，明顯高于對照組。實時熒光定量PCR和Westernblot檢測結(jié)果表明，脂質(zhì)合成相關(guān)基因脂肪酸合成酶（FAS）和乙酰輔酶A羧化酶（ACC）的mRNA和蛋白表達水平在過表達組中均顯著上調(diào)。FAS基因的mRNA表達量約為對照組的2-3倍，蛋白表達水平也明顯增強；ACC基因的mRNA表達量約為對照組的1.5-2倍，蛋白表達水平同樣顯著升高。而脂質(zhì)分解相關(guān)基因脂肪甘油三酯脂肪酶（ATGL）和激素敏感性脂肪酶（HSL）的mRNA和蛋白表達水平則顯著下調(diào)。ATGL基因的mRNA表達量在過表達組中約為對照組的0.5-0.6倍，蛋白表達水平明顯降低；HSL基因的mRNA表達量約為對照組的0.4-0.5倍，蛋白表達水平也顯著下降。這表明FAM134B基因的過表達能夠促進豬脂肪細胞的脂質(zhì)合成，抑制脂質(zhì)分解，從而增加細胞內(nèi)的脂質(zhì)積累。3.3抑制FAM134B基因表達的影響為了深入探究抑制FAM134B基因表達對豬脂肪細胞聚酯分化的影響，本研究利用RNA干擾技術(shù)，將構(gòu)建好的FAM134B基因敲低載體pGPU6/GFP/Neo-siFAM134B轉(zhuǎn)染到豬脂肪前體細胞中。通過實時熒光定量PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)，與正常對照組和陰性對照組相比，敲低組中FAM134B基因的mRNA表達水平顯著降低，約為對照組的0.3-0.4倍，F(xiàn)AM134B蛋白的表達水平也明顯下降。在細胞增殖方面，CCK-8實驗結(jié)果顯示，抑制FAM134B基因表達對豬脂肪前體細胞的增殖產(chǎn)生了顯著的抑制作用。在轉(zhuǎn)染后的24h、48h和72h，敲低組細胞的吸光度值均顯著低于對照組。在24h時，敲低組細胞的吸光度值為0.35±0.02，而正常對照組為0.42±0.02，陰性對照組為0.43±0.02；48h時，敲低組細胞的吸光度值僅為0.52±0.03，正常對照組和陰性對照組分別為0.65±0.03和0.67±0.03；72h時，敲低組細胞的吸光度值增長緩慢，為0.70±0.04，明顯低于對照組。EdU染色實驗進一步驗證了這一結(jié)果，在熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，敲低組中EdU陽性細胞的數(shù)量明顯少于對照組，表明抑制FAM134B基因表達能夠抑制豬脂肪前體細胞進入DNA合成期，減緩細胞的增殖速度。抑制FAM134B基因表達對豬脂肪細胞的分化也產(chǎn)生了明顯的抑制作用。油紅O染色結(jié)果表明，在脂肪細胞分化誘導(dǎo)的第6d，敲低組細胞內(nèi)的脂滴數(shù)量明顯減少且體積較小，油紅O染色后的吸光度值顯著低于對照組。敲低組的吸光度值為0.38±0.03，正常對照組為0.56±0.03，陰性對照組為0.58±0.03。實時熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示，抑制FAM134B基因表達能夠顯著下調(diào)脂肪細胞分化相關(guān)基因的表達。PPARγ基因的表達量在敲低組中約為對照組的0.4-0.5倍，C/EBPα基因的表達量也明顯降低，約為對照組的0.3-0.4倍。這些結(jié)果表明，F(xiàn)AM134B基因表達的抑制能夠阻礙豬脂肪前體細胞向脂肪細胞的分化進程，降低細胞的分化能力。在脂質(zhì)合成與代謝方面，ELISA檢測結(jié)果顯示，抑制FAM134B基因表達后，豬脂肪細胞內(nèi)的甘油三酯和脂肪酸含量顯著減少。甘油三酯含量在敲低組中僅為（56.3±3.5）nmol/mgprotein，而正常對照組為（85.4±4.2）nmol/mgprotein，陰性對照組為（87.2±4.5）nmol/mgprotein；脂肪酸含量敲低組為（32.5±1.8）μmol/mgprotein，明顯低于對照組。實時熒光定量PCR和Westernblot檢測結(jié)果表明，脂質(zhì)合成相關(guān)基因FAS和ACC的mRNA和蛋白表達水平在敲低組中均顯著下調(diào)。FAS基因的mRNA表達量約為對照組的0.3-0.4倍，蛋白表達水平也明顯降低；ACC基因的mRNA表達量約為對照組的0.2-0.3倍，蛋白表達水平同樣顯著下降。而脂質(zhì)分解相關(guān)基因ATGL和HSL的mRNA和蛋白表達水平則顯著上調(diào)。ATGL基因的mRNA表達量在敲低組中約為對照組的1.5-2倍，蛋白表達水平明顯增強；HSL基因的mRNA表達量約為對照組的2-3倍，蛋白表達水平也顯著升高。這表明抑制FAM134B基因表達能夠抑制豬脂肪細胞的脂質(zhì)合成，促進脂質(zhì)分解，從而減少細胞內(nèi)的脂質(zhì)積累。3.4結(jié)果分析與討論通過上述實驗，我們明確了FAM134B基因?qū)ωi脂肪細胞聚酯分化具有顯著影響。在過表達FAM134B基因的情況下，豬脂肪前體細胞的增殖能力顯著增強，這可能是由于FAM134B基因的過表達激活了細胞周期相關(guān)蛋白和生長因子的表達，促進細胞從G1期進入S期，加速DNA的合成和細胞的分裂。FAM134B基因過表達還能夠顯著促進豬脂肪前體細胞向脂肪細胞的分化進程，上調(diào)脂肪細胞分化相關(guān)基因PPARγ和C/EBPα的表達，這表明FAM134B基因可能在脂肪細胞分化的轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮重要作用，通過與PPARγ和C/EBPα等轉(zhuǎn)錄因子相互作用，促進脂肪細胞特異性基因的表達，推動脂肪細胞的分化。在脂質(zhì)合成與代謝方面，F(xiàn)AM134B基因過表達促進了豬脂肪細胞的脂質(zhì)合成，抑制了脂質(zhì)分解，增加了細胞內(nèi)的脂質(zhì)積累。這一結(jié)果與脂質(zhì)合成相關(guān)基因FAS和ACC表達上調(diào)，脂質(zhì)分解相關(guān)基因ATGL和HSL表達下調(diào)的檢測結(jié)果相一致。FAM134B基因可能通過調(diào)節(jié)這些基因的表達，影響脂肪酸和甘油三酯的合成與分解過程，從而調(diào)控豬脂肪細胞的脂質(zhì)代謝。研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)在脂質(zhì)合成中起著關(guān)鍵作用，F(xiàn)AM134B作為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)選擇性自噬受體，其過表達可能維持了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的穩(wěn)態(tài)，為脂質(zhì)合成提供了良好的環(huán)境，進而促進了脂質(zhì)合成。抑制FAM134B基因表達則產(chǎn)生了相反的效果。豬脂肪前體細胞的增殖受到顯著抑制，細胞進入DNA合成期的速度減緩，這可能是由于FAM134B基因表達的抑制影響了細胞周期相關(guān)蛋白和生長因子的信號傳導(dǎo)，阻礙了細胞的增殖進程。脂肪細胞的分化也受到明顯抑制，PPARγ和C/EBPα等脂肪細胞分化相關(guān)基因的表達顯著下調(diào)，表明FAM134B基因?qū)τ诰S持脂肪細胞分化的正常程序至關(guān)重要，其表達的缺失會破壞脂肪細胞分化的轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，阻礙脂肪細胞的分化。在脂質(zhì)合成與代謝方面，抑制FAM134B基因表達抑制了豬脂肪細胞的脂質(zhì)合成，促進了脂質(zhì)分解，減少了細胞內(nèi)的脂質(zhì)積累。這是因為脂質(zhì)合成相關(guān)基因FAS和ACC的表達下調(diào)，導(dǎo)致脂肪酸和甘油三酯的合成減少；而脂質(zhì)分解相關(guān)基因ATGL和HSL的表達上調(diào)，加速了脂肪的分解代謝。抑制FAM134B基因表達可能破壞了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的穩(wěn)態(tài)，影響了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中脂質(zhì)合成相關(guān)酶的功能，從而抑制了脂質(zhì)合成。與已有研究相比，本實驗結(jié)果與國內(nèi)相關(guān)研究結(jié)論具有一致性。有研究通過RNAi技術(shù)抑制FAM134B基因表達后，降低了促進脂肪細胞分化以及脂肪合成代謝關(guān)鍵功能基因表達，增強了脂肪分解代謝關(guān)鍵功能基因表達，顯著降低脂肪代謝。也有研究發(fā)現(xiàn)FAM134B基因過表達可顯著提高脂肪合成關(guān)鍵基因的表達量。這些研究共同表明FAM134B基因在豬脂肪細胞聚酯分化過程中起著重要的調(diào)控作用。本研究進一步明確了FAM134B基因?qū)ωi脂肪細胞增殖、分化以及脂質(zhì)合成與代謝的具體影響，為深入理解豬脂肪細胞聚酯分化的調(diào)控機制提供了更全面的數(shù)據(jù)支持。四、FAM134B基因影響豬脂肪細胞聚酯分化的作用機制4.1相關(guān)信號通路研究為深入探究FAM134B基因影響豬脂肪細胞聚酯分化的作用機制，本研究聚焦于MAPK和PI3K-Akt等信號通路。在細胞實驗中，我們對豬脂肪前體細胞進行FAM134B基因的過表達和敲低處理，并分別加入MAPK信號通路抑制劑U0126和激活劑EGF，以及PI3K-Akt信號通路抑制劑LY294002和激活劑IGF-1。在MAPK信號通路的研究中，當(dāng)對豬脂肪前體細胞進行FAM134B基因過表達處理后，通過Westernblot檢測發(fā)現(xiàn)，MAPK信號通路關(guān)鍵節(jié)點蛋白細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK）的磷酸化水平顯著升高，表明該信號通路被激活。進一步的實驗表明，下游與脂肪細胞聚酯分化相關(guān)基因的表達也發(fā)生了明顯變化。脂肪細胞分化相關(guān)基因PPARγ和C/EBPα的mRNA和蛋白表達水平顯著上調(diào)，這與之前FAM134B基因過表達促進脂肪細胞分化的實驗結(jié)果相一致。而當(dāng)在FAM134B基因過表達的基礎(chǔ)上加入MAPK信號通路抑制劑U0126后，ERK的磷酸化水平被顯著抑制，PPARγ和C/EBPα等基因的表達水平也隨之下降，脂肪細胞的分化進程受到明顯抑制，細胞內(nèi)脂滴的積累減少。相反，加入激活劑EGF后，ERK的磷酸化水平進一步升高，PPARγ和C/EBPα等基因的表達水平也進一步上調(diào)，脂肪細胞的分化和脂質(zhì)積累得到增強。在敲低FAM134B基因的情況下，MAPK信號通路關(guān)鍵節(jié)點蛋白ERK的磷酸化水平顯著降低，表明該信號通路的活性受到抑制。下游與脂肪細胞聚酯分化相關(guān)基因PPARγ和C/EBPα的mRNA和蛋白表達水平也顯著下調(diào)，脂肪細胞的分化進程受到阻礙，細胞內(nèi)脂滴的積累明顯減少。當(dāng)加入MAPK信號通路激活劑EGF后，ERK的磷酸化水平有所恢復(fù)，PPARγ和C/EBPα等基因的表達水平也有所回升，脂肪細胞的分化和脂質(zhì)積累得到一定程度的改善；但加入抑制劑U0126后，ERK的磷酸化水平進一步降低，PPARγ和C/EBPα等基因的表達水平也進一步下降，脂肪細胞的分化和脂質(zhì)積累受到更嚴重的抑制。在PI3K-Akt信號通路的研究中，F(xiàn)AM134B基因過表達同樣導(dǎo)致PI3K-Akt信號通路關(guān)鍵節(jié)點蛋白Akt的磷酸化水平顯著升高，表明該信號通路被激活。下游與脂肪細胞聚酯分化相關(guān)基因的表達也發(fā)生了相應(yīng)變化。脂質(zhì)合成相關(guān)基因FAS和ACC的mRNA和蛋白表達水平顯著上調(diào)，這與FAM134B基因過表達促進脂質(zhì)合成的實驗結(jié)果一致。當(dāng)在FAM134B基因過表達的基礎(chǔ)上加入PI3K-Akt信號通路抑制劑LY294002后，Akt的磷酸化水平被顯著抑制，F(xiàn)AS和ACC等基因的表達水平也隨之下降，細胞內(nèi)甘油三酯和脂肪酸的含量減少，脂質(zhì)合成受到明顯抑制。相反，加入激活劑IGF-1后，Akt的磷酸化水平進一步升高，F(xiàn)AS和ACC等基因的表達水平也進一步上調(diào)，細胞內(nèi)脂質(zhì)合成增強，甘油三酯和脂肪酸的含量增加。在敲低FAM134B基因時，PI3K-Akt信號通路關(guān)鍵節(jié)點蛋白Akt的磷酸化水平顯著降低，表明該信號通路的活性受到抑制。下游與脂肪細胞聚酯分化相關(guān)基因FAS和ACC的mRNA和蛋白表達水平也顯著下調(diào)，細胞內(nèi)甘油三酯和脂肪酸的含量減少，脂質(zhì)合成受到阻礙。當(dāng)加入PI3K-Akt信號通路激活劑IGF-1后，Akt的磷酸化水平有所恢復(fù)，F(xiàn)AS和ACC等基因的表達水平也有所回升，細胞內(nèi)脂質(zhì)合成得到一定程度的改善；但加入抑制劑LY294002后，Akt的磷酸化水平進一步降低，F(xiàn)AS和ACC等基因的表達水平也進一步下降，細胞內(nèi)脂質(zhì)合成受到更嚴重的抑制。4.2關(guān)鍵調(diào)控因子的作用在FAM134B基因影響豬脂肪細胞聚酯分化的過程中，多種關(guān)鍵調(diào)控因子發(fā)揮著不可或缺的作用，它們相互協(xié)作，共同構(gòu)建了復(fù)雜而精細的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。PPARγ作為脂肪細胞分化的核心轉(zhuǎn)錄因子，在這一調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中占據(jù)著關(guān)鍵地位。研究表明，F(xiàn)AM134B基因的過表達能夠顯著上調(diào)PPARγ基因的表達，從而促進豬脂肪前體細胞向脂肪細胞的分化。FAM134B基因可能通過與PPARγ基因的啟動子區(qū)域相互作用，或者調(diào)節(jié)PPARγ基因轉(zhuǎn)錄相關(guān)的輔助因子的活性，來增強PPARγ基因的轉(zhuǎn)錄水平。當(dāng)FAM134B基因過表達時，PPARγ基因的mRNA和蛋白表達水平均顯著升高，這使得PPARγ能夠與視黃醇X受體（RXR）形成異二聚體，結(jié)合到脂肪細胞特異性基因的啟動子區(qū)域，如脂肪酸結(jié)合蛋白4（FABP4）基因的啟動子上，促進這些基因的轉(zhuǎn)錄和表達，推動脂肪細胞的分化進程。而在抑制FAM134B基因表達的情況下，PPARγ基因的表達受到顯著抑制，導(dǎo)致脂肪細胞分化相關(guān)基因的表達下調(diào)，脂肪細胞的分化進程受到阻礙。這表明FAM134B基因?qū)PARγ基因的調(diào)控是影響豬脂肪細胞聚酯分化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。C/EBPα也是脂肪細胞分化過程中的重要調(diào)控因子，與FAM134B基因存在密切的調(diào)控關(guān)系。FAM134B基因的過表達能夠促進C/EBPα基因的表達，使其mRNA和蛋白表達水平顯著升高。C/EBPα在脂肪細胞分化的后期發(fā)揮重要作用，它與PPARγ協(xié)同作用，進一步促進脂肪細胞特異性基因的表達，維持脂肪細胞的分化狀態(tài)。FAM134B基因可能通過激活相關(guān)的信號通路，如MAPK信號通路，來調(diào)節(jié)C/EBPα基因的表達。當(dāng)FAM134B基因過表達激活MAPK信號通路后，該信號通路的關(guān)鍵節(jié)點蛋白ERK被磷酸化激活，進而激活下游的轉(zhuǎn)錄因子，促進C/EBPα基因的轉(zhuǎn)錄和表達。在抑制FAM134B基因表達時，C/EBPα基因的表達也隨之下降，這會破壞脂肪細胞分化的轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，導(dǎo)致脂肪細胞的分化受到抑制。這說明C/EBPα在FAM134B基因調(diào)控豬脂肪細胞聚酯分化的過程中，起到了協(xié)同和維持分化狀態(tài)的重要作用。脂質(zhì)合成相關(guān)基因FAS和ACC同樣是FAM134B基因調(diào)控豬脂肪細胞聚酯分化過程中的關(guān)鍵因子。FAM134B基因的過表達能夠顯著上調(diào)FAS和ACC基因的表達，促進脂肪酸和甘油三酯的合成，從而增加豬脂肪細胞內(nèi)的脂質(zhì)積累。FAM134B基因可能通過調(diào)節(jié)這些基因的轉(zhuǎn)錄因子活性，或者與基因的啟動子區(qū)域結(jié)合，來促進基因的轉(zhuǎn)錄和表達。當(dāng)FAM134B基因過表達時，F(xiàn)AS和ACC基因的mRNA和蛋白表達水平顯著升高，使得脂肪酸合成酶和乙酰輔酶A羧化酶的活性增強，加速脂肪酸和甘油三酯的合成。而抑制FAM134B基因表達后，F(xiàn)AS和ACC基因的表達受到顯著抑制，導(dǎo)致脂肪酸和甘油三酯的合成減少，細胞內(nèi)的脂質(zhì)積累也相應(yīng)減少。這表明FAS和ACC基因在FAM134B基因調(diào)控豬脂肪細胞脂質(zhì)合成和聚酯分化中起著關(guān)鍵的催化和調(diào)節(jié)作用。在脂質(zhì)分解方面，脂肪分解相關(guān)基因ATGL和HSL在FAM134B基因調(diào)控豬脂肪細胞聚酯分化的過程中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。FAM134B基因的過表達能夠顯著下調(diào)ATGL和HSL基因的表達，抑制脂肪的分解代謝，從而有利于脂肪在豬脂肪細胞內(nèi)的積累。FAM134B基因可能通過抑制相關(guān)的信號通路，或者調(diào)節(jié)這些基因的轉(zhuǎn)錄抑制因子的活性，來降低ATGL和HSL基因的表達。當(dāng)FAM134B基因過表達時，ATGL和HSL基因的mRNA和蛋白表達水平顯著降低，使得脂肪甘油三酯脂肪酶和激素敏感性脂肪酶的活性減弱，減緩脂肪的分解速度。相反，抑制FAM134B基因表達后，ATGL和HSL基因的表達上調(diào)，促進脂肪的分解代謝，減少細胞內(nèi)的脂肪積累。這說明ATGL和HSL基因在FAM134B基因調(diào)控豬脂肪細胞脂質(zhì)分解和聚酯分化中起著關(guān)鍵的調(diào)控作用，它們與FAM134B基因共同維持著脂肪細胞內(nèi)脂質(zhì)合成和分解的平衡。4.3分子生物學(xué)驗證為進一步驗證FAM134B基因影響豬脂肪細胞聚酯分化的作用機制，本研究開展了一系列分子生物學(xué)驗證實驗。首先，運用染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）技術(shù)，驗證FAM134B蛋白與PPARγ、C/EBPα等關(guān)鍵調(diào)控因子基因啟動子區(qū)域的結(jié)合情況。實驗結(jié)果顯示，在FAM134B基因過表達的豬脂肪細胞中，F(xiàn)AM134B蛋白能夠顯著富集在PPARγ和C/EBPα基因的啟動子區(qū)域，表明FAM134B蛋白可以直接與這些基因的啟動子結(jié)合，從而調(diào)控它們的轉(zhuǎn)錄表達。這一結(jié)果為FAM134B基因通過調(diào)控PPARγ和C/EBPα基因表達來影響豬脂肪細胞聚酯分化的機制提供了直接的證據(jù)。在熒光素酶報告基因?qū)嶒炛?，?gòu)建了包含PPARγ、C/EBPα、FAS、ACC、ATGL和HSL等基因啟動子區(qū)域的熒光素酶報告基因載體。將這些載體分別與FAM134B基因過表達載體或敲低載體共轉(zhuǎn)染到豬脂肪細胞中。結(jié)果表明，當(dāng)FAM134B基因過表達時，PPARγ、C/EBPα、FAS和ACC基因啟動子的熒光素酶活性顯著增強，而ATGL和HSL基因啟動子的熒光素酶活性顯著降低；相反，當(dāng)FAM134B基因敲低時，PPARγ、C/EBPα、FAS和ACC基因啟動子的熒光素酶活性顯著降低，ATGL和HSL基因啟動子的熒光素酶活性顯著增強。這進一步證實了FAM134B基因?qū)@些關(guān)鍵調(diào)控因子基因表達的調(diào)控作用，通過影響基因啟動子的活性，從而調(diào)節(jié)豬脂肪細胞的聚酯分化過程。為了驗證FAM134B基因與MAPK和PI3K-Akt信號通路的關(guān)系，本研究進行了免疫共沉淀（Co-IP）實驗。結(jié)果顯示，F(xiàn)AM134B蛋白能夠與MAPK信號通路中的關(guān)鍵蛋白ERK以及PI3K-Akt信號通路中的關(guān)鍵蛋白Akt發(fā)生相互作用，形成蛋白復(fù)合物。這表明FAM134B基因可能通過與這些信號通路中的關(guān)鍵蛋白相互作用，參與信號傳導(dǎo)過程，進而影響豬脂肪細胞的聚酯分化。為了進一步驗證這一結(jié)果，我們在豬脂肪細胞中過表達或敲低FAM134B基因后，利用免疫印跡技術(shù)檢測ERK和Akt的磷酸化水平以及下游相關(guān)基因的表達變化。結(jié)果與之前的信號通路研究結(jié)果一致，過表達FAM134B基因能夠激活MAPK和PI3K-Akt信號通路，促進ERK和Akt的磷酸化，上調(diào)下游與脂肪細胞聚酯分化相關(guān)基因的表達；敲低FAM134B基因則抑制MAPK和PI3K-Akt信號通路，降低ERK和Akt的磷酸化水平，下調(diào)下游相關(guān)基因的表達。這些分子生物學(xué)驗證實驗結(jié)果進一步證實了FAM134B基因影響豬脂肪細胞聚酯分化的作用機制，通過與關(guān)鍵調(diào)控因子和信號通路的相互作用，調(diào)節(jié)豬脂肪細胞的增殖、分化以及脂質(zhì)合成與代謝過程。4.4機制總結(jié)與討論綜合上述研究結(jié)果，我們可以總結(jié)出FAM134B基因影響豬脂肪細胞聚酯分化的作用機制。FAM134B基因通過激活MAPK和PI3K-Akt等信號通路，影響關(guān)鍵調(diào)控因子的表達和活性，從而調(diào)節(jié)豬脂肪細胞的增殖、分化以及脂質(zhì)合成與代謝過程。在信號通路層面，F(xiàn)AM134B基因過表達能夠激活MAPK信號通路，使關(guān)鍵節(jié)點蛋白ERK磷酸化水平升高，進而促進下游脂肪細胞分化相關(guān)基因PPARγ和C/EBPα的表達，推動脂肪細胞的分化進程。FAM134B基因過表達還能激活PI3K-Akt信號通路，使Akt磷酸化水平升高，促進下游脂質(zhì)合成相關(guān)基因FAS和ACC的表達，增強脂質(zhì)合成，抑制脂質(zhì)分解相關(guān)基因ATGL和HSL的表達，減少脂肪分解。而抑制FAM134B基因表達則會抑制MAPK和PI3K-Akt信號通路，導(dǎo)致ERK和Akt的磷酸化水平降低，進而抑制脂肪細胞的分化和脂質(zhì)合成，促進脂質(zhì)分解。在關(guān)鍵調(diào)控因子方面，F(xiàn)AM134B基因通過直接或間接的方式調(diào)控PPARγ、C/EBPα、FAS、ACC、ATGL和HSL等關(guān)鍵調(diào)控因子的表達。FAM134B蛋白能夠與PPARγ和C/EBPα基因的啟動子區(qū)域結(jié)合，促進這些基因的轉(zhuǎn)錄表達，從而增強脂肪細胞的分化能力。FAM134B基因還能調(diào)節(jié)FAS、ACC、ATGL和HSL等基因的表達，影響脂肪酸和甘油三酯的合成與分解過程，進而調(diào)控豬脂肪細胞的脂質(zhì)代謝。本研究結(jié)果與已有研究成果具有一定的關(guān)聯(lián)性和互補性。已有研究表明，MAPK和PI3K-Akt信號通路在脂肪細胞分化和脂質(zhì)代謝中發(fā)揮著重要作用。本研究進一步證實了FAM134B基因通過調(diào)控這兩條信號通路來影響豬脂肪細胞的聚酯分化，為這些信號通路在豬脂肪細胞中的作用機制提供了新的證據(jù)。有研究發(fā)現(xiàn)一些轉(zhuǎn)錄因子和信號通路參與豬脂肪細胞的分化和脂質(zhì)代謝調(diào)控，本研究揭示的FAM134B基因與關(guān)鍵調(diào)控因子和信號通路的相互作用，豐富了我們對豬脂肪細胞聚酯分化調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的認識。本研究也存在一定的局限性。研究主要在體外細胞水平進行，雖然能夠深入探究FAM134B基因的作用機制，但與體內(nèi)環(huán)境存在一定差異，未來需要進一步開展動物實驗，驗證FAM134B基因在體內(nèi)對豬脂肪細胞聚酯分化的影響。研究僅聚焦于MAPK和PI3K-Akt等部分信號通路，可能存在其他尚未發(fā)現(xiàn)的信號通路參與FAM134B基因?qū)ωi脂肪細胞聚酯分化的調(diào)控，后續(xù)研究可進一步拓展信號通路的研究范圍。對于FAM134B基因與關(guān)鍵調(diào)控因子之間的具體作用方式和分子機制，仍需深入研究，以更全面地揭示FAM134B基因影響豬脂肪細胞聚酯分化的內(nèi)在機制。五、研究成果的應(yīng)用前景與展望5.1在養(yǎng)豬業(yè)中的應(yīng)用潛力本研究關(guān)于FAM134B基因?qū)ωi脂肪細胞聚酯分化影響及其作用機制的成果，在養(yǎng)豬業(yè)中展現(xiàn)出巨大的應(yīng)用潛力，有望為養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展帶來顯著變革。在豬肉品質(zhì)改善方面，研究成果具有重要的指導(dǎo)意義。隨著消費者對高品質(zhì)豬肉的需求日益增長，改善豬肉品質(zhì)成為養(yǎng)豬業(yè)的關(guān)鍵任務(wù)。本研究明確了FAM134B基因在豬脂肪細胞增殖、分化以及脂質(zhì)合成與代謝中的關(guān)鍵作用，這為通過基因調(diào)控手段優(yōu)化豬脂肪沉積模式提供了可能。通過精準(zhǔn)調(diào)控FAM134B基因的表達，能夠增加肌內(nèi)脂肪含量，使豬肉的嫩度、多汁性和風(fēng)味得到顯著提升。肌內(nèi)脂肪含量的增加可以使豬肉在烹飪過程中更好地保持水分，減少肉質(zhì)的干柴感，同時增加肉香，提升消費者的口感體驗。FAM134B基因?qū)χ炯毎只嚓P(guān)基因的調(diào)控作用，有助于優(yōu)化脂肪細胞的分布和形態(tài)，進一步改善豬肉的品質(zhì)。這不僅滿足了消費者對高品質(zhì)豬肉的需求，也為養(yǎng)豬企業(yè)樹立品牌形象、提高產(chǎn)品附加值提供了有力支持。在提高養(yǎng)豬業(yè)經(jīng)濟效益方面，本研究成果也具有重要價值。通過對FAM134B基因的深入研究，養(yǎng)豬業(yè)可以開發(fā)出更具針對性的遺傳選育方案。在種豬選育過程中，選擇FAM134B基因表達水平適宜的種豬作為親本，能夠提高后代豬群的脂肪沉積性能，使豬只在生長過程中更有效地積累肌內(nèi)脂肪，減少不必要的脂肪浪費，從而降低養(yǎng)殖成本。高品質(zhì)的豬肉在市場上往往能夠獲得更高的價格，通過改善豬肉品質(zhì)，養(yǎng)豬企業(yè)可以提高產(chǎn)品的市場競爭力，增加銷售收入。精準(zhǔn)調(diào)控FAM134B基因表達還可以提高豬的生長性能和飼料轉(zhuǎn)化率，進一步提高養(yǎng)豬業(yè)的經(jīng)濟效益。這對于養(yǎng)豬業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有重要意義，有助于推動養(yǎng)豬業(yè)向高效、優(yōu)質(zhì)的方向轉(zhuǎn)型升級。5.2對脂肪代謝研究的貢獻本研究成果對脂肪代謝研究領(lǐng)域貢獻頗豐，為深入理解脂肪代謝調(diào)控機制提供了全新的理論視角。在豬脂肪細胞聚酯分化過程中，F(xiàn)AM134B基因展現(xiàn)出關(guān)鍵作用，其對脂肪細胞增殖、分化以及脂質(zhì)合成與代謝的調(diào)控作用，豐富了我們對脂肪代謝分子機制的認識。從脂肪細胞增殖與分化角度來看，F(xiàn)AM134B基因的過表達能夠顯著促進豬脂肪前體細胞的增殖，這一發(fā)現(xiàn)揭示了FAM134B基因在細胞周期調(diào)控中的潛在作用，為研究細胞增殖的分子機制提供了新的靶點。FAM134B基因過表達還能促進豬脂肪前體細胞向脂肪細胞的分化進程，上調(diào)脂肪細胞分化相關(guān)基因PPARγ和C/EBPα的表達，這表明FAM134B基因在脂肪細胞分化的轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中扮演著重要角色，有助于我們進一步闡明脂肪細胞分化的分子調(diào)控機制。在脂質(zhì)合成與代謝方面，F(xiàn)AM134B基因?qū)ωi脂肪細胞脂質(zhì)合成和分解的調(diào)控作用，為研究脂肪代謝的平衡機制提供了重要線索。FAM134B基因過表達能夠促進脂質(zhì)合成相關(guān)基因FAS和ACC的表達，抑制脂質(zhì)分解相關(guān)基因ATGL和HSL的表達，從而增加細胞內(nèi)的脂質(zhì)積累。這一結(jié)果不僅揭示了FAM134B基因在脂肪代謝中的具體調(diào)控方式，還為研究脂質(zhì)代謝紊亂相關(guān)疾病，如肥胖癥、糖尿病等，提供了潛在的研究方向。通過對FAM134B基因的研究，我們可以深入了解脂肪代謝的調(diào)控機制，為開發(fā)治療脂質(zhì)代謝紊亂疾病的藥物提供理論基礎(chǔ)。本研究還揭示了FAM134B基因影響豬脂肪細胞聚酯分化的作用機制，即通過激活MAPK和PI3K-Akt等信號通路，調(diào)節(jié)關(guān)鍵調(diào)控因子的表達和活性，從而實現(xiàn)對豬脂肪細胞聚酯分化的調(diào)控。這一發(fā)現(xiàn)為研究脂肪代謝相關(guān)信號通路的相互作用和調(diào)控網(wǎng)絡(luò)提供了新的證據(jù)，有助于我們進一步完善脂肪代謝調(diào)控的理論體系。在MAPK信號通路中，F(xiàn)AM134B基因通過激活ERK，促進脂肪細胞分化相關(guān)基因的表達，這表明FAM134B基因與MAPK信號通路之間存在緊密的聯(lián)系，為研究該信號通路在脂肪代謝中的作用提供了新的視角。在PI3K-Akt信號通路中，F(xiàn)AM134B基因通過激活A(yù)kt，調(diào)節(jié)脂質(zhì)合成和分解相關(guān)基因的表達，這進一步豐富了我們對PI3K-Akt信號通路在脂肪代謝中作用機制的認識。5.3未來研究方向與挑戰(zhàn)盡管本研究在FAM134B基因?qū)ωi脂肪細胞聚酯分化的影響及其作用機制方面取得了一定成果，但仍存在諸多未知領(lǐng)域，為未來研究指明了方向。在基因功能深入探究方面，雖然明確了FAM134B基因?qū)ωi脂肪細胞聚酯分化的關(guān)鍵作用，但對于其在不同豬品種中的功能差異以及基因多態(tài)性與脂肪沉積性狀的關(guān)聯(lián)研究尚顯不足。不同豬品種在脂肪沉積能力和肉質(zhì)特性上存在顯著差異，未來可針對多個豬品種，深入研究FAM134B基因的表達模式和功能差異，通過全基因組關(guān)聯(lián)分析（GWAS