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152023-12-15發(fā)布本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會（SAM/TC1I羊肝細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和5.1.3磷酸氫二鈉、氯化鈉、鹽酸、氯化鈣、氯化鉀、氫氧化鈉、磷酸氫二鉀、氫氧化鉀、葡萄糖、5.1.4肝素鈉：將1g肝素鈉溶解于20mL水中，用0.2215.1.8Percoll細(xì)胞分離液：取27mLPercoll液，加入3mLPBS液（10×)混勻，再從混勻的液體中取9mL加入15mLPBS（1×5.1.9灌流液A：準(zhǔn)確稱取8.1816g氯化鈉、0.5.1.10灌流液B：準(zhǔn)確稱取8.1816g氯化鈉、0.尾狀突由中間至四周從暗紅色變至棕白色，流出的灌流液由血色變2min，棄上清液。5.2.3.2在培養(yǎng)皿中加入1mL胰蛋白酶溶液進(jìn)行消化，搖晃4～5次，使胰蛋白酶溶液與細(xì)胞充分接5.2.3.5加入適量凍存液，為凍5.2.4.2用RPMI1640培養(yǎng)液稀釋，5.2.5.3細(xì)胞重懸后，將一半轉(zhuǎn)入新培養(yǎng)皿中，分別補(bǔ)加含20%胎牛血清的34(資料性)羊肝細(xì)胞體外培養(yǎng)程序流程圖羊肝細(xì)胞體外培養(yǎng)程序流程圖參見圖A.1。肝細(xì)胞分離及培養(yǎng)(見5.2.1)羊只處理(見5.2.1.1)去除結(jié)締組織(見5.2.1.6)接種、培養(yǎng)(見5.2.1.9、5.2.1.10)肝細(xì)胞純化(見5.2.2)肝細(xì)胞凍存(見5.2.3)肝細(xì)胞復(fù)蘇(見5.2.4)肝細(xì)胞傳代(見5.2.5)圖A.1羊肝細(xì)胞體外培養(yǎng)程序流程圖[1]馮振月,劉德福,宋佰芬等.牛肝臟細(xì)胞體外培養(yǎng)和傳代細(xì)胞的[2]陳陽潔,高柯欣,王智豪等.肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的分離、鑒定及原代培養(yǎng)[J].畜牧與

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