ICS07.080DB62DB62/T4757—2023玉米抗普通銹病田間鑒定技術(shù)規(guī)程2023-08-23發(fā)布2023-09-25實(shí)施IDB62/T4757—2023前言 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 14誘發(fā)病圃鑒定 15抗性評(píng)價(jià) 4附錄A(規(guī)范性)玉米普通銹病病原形態(tài)特征與癥狀 6附錄B(資料性)玉米抗普通銹病鑒定記載表、評(píng)價(jià)表 7IIDB62/T4757—2023本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由甘肅省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并監(jiān)督實(shí)施。本文件由甘肅省糧食油料作物栽培標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本文件起草單位：河西學(xué)院、泉州師范學(xué)院、德農(nóng)種業(yè)股份公司、甘肅省農(nóng)業(yè)工程技術(shù)研究院、甘肅前進(jìn)生物科技發(fā)展有限公司、臨澤縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心、酒泉市通盈種苗有限公司、甘肅德光農(nóng)業(yè)有限公司、莊浪縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局、莊浪縣鄉(xiāng)村振興事務(wù)服務(wù)中心。本文件主要起草人：雷玉明、雷鑫、濮超、王偉、郜護(hù)國、鄭天翔、楊國振、馬金、吳堯、劉曉剛、張琪、王生蘭、李會(huì)文、王廷三、蘇朋朋、程紫霞。本文件由河西學(xué)院負(fù)責(zé)解釋。DB62/T4757—20231本文件規(guī)定了玉米普通銹病抗病性田間鑒定技術(shù)和抗病性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。本文件適用于玉米普通銹病自然病圃鑒定、誘發(fā)病圃鑒定、田間管理、接種體制備、接種、病情調(diào)查、抗病性評(píng)價(jià)等技術(shù)要求及甘肅省種植玉米品種、種質(zhì)資源抗病性田間鑒定和評(píng)價(jià)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。NY/T1209農(nóng)作物品種試驗(yàn)與信息化技術(shù)規(guī)程玉米DB62/T4180玉米主要病蟲害綜合防治技術(shù)規(guī)程下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1玉米普通銹病一種由玉米柄銹菌引起氣流傳播的玉米真菌性葉部病害。3.2玉米柄銹菌學(xué)名PucciniasorghiSchw.,屬擔(dān)子菌門、黑銹菌亞門、銹菌綱、銹菌目、柄銹菌科、柄銹菌屬的一種專性寄生真菌。3.3抗性評(píng)價(jià)根據(jù)采用的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)判別玉米對(duì)普通銹病的反應(yīng)程度和抗病水平的描述。4誘發(fā)病圃鑒定4.1誘發(fā)病圃選址選擇四周相對(duì)封閉，距離玉米種植帶500m～600m,在玉米普通銹病適發(fā)區(qū)，具備良好自然發(fā)病環(huán)境和可控制灌溉條件，地勢(shì)平坦、土壤肥沃，有一定面積的地塊作為誘發(fā)病圃。4.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)4.2.1鑒定品種根據(jù)試驗(yàn)委托方協(xié)議或試驗(yàn)計(jì)劃要求確定。DB62/T4757—202324.2.2對(duì)照材料以高感品種黃早四或當(dāng)?shù)爻Ｒ?guī)種植的高感病品種為對(duì)照品種。試驗(yàn)材料、對(duì)照材料的小區(qū)設(shè)計(jì)采用隨機(jī)區(qū)組排列，小區(qū)行長(zhǎng)500cm～600cm,行距60cm,株距25cm,2行區(qū)，每行保苗25～30株，每50份鑒定材料設(shè)1組已知對(duì)照品種，不足50份按50份計(jì)，3次重復(fù)，鑒定小區(qū)四周設(shè)4行的感病誘發(fā)品種作保護(hù)行。4.3接種體制備4.3.1菌株分離確定玉米乳熟后期，在田間采集新鮮的典型普通銹病病葉，用刀片刮取夏孢子堆，置于干凈的培養(yǎng)皿中，收集分離物，分離物按照A.1規(guī)定要求做出初步鑒定，確認(rèn)為玉米柄銹菌(PucciniasorghiSchw.)。4.3.2菌株純化純化準(zhǔn)備與方法應(yīng)滿足以下要求：a)選擇長(zhǎng)100cm×寬28cm×高30cm花盆，裝富含有機(jī)質(zhì)土壤，土壤濕度18%～21%,每盆點(diǎn)種5粒感病品種黃早四，株距20cm,置于25℃±2℃溫室內(nèi)培育，玉米生長(zhǎng)6～7片葉時(shí)備用；b)將確定的分離物用無菌水稀釋，配制成2.5×10s孢子/mL懸浮液，裝入100mL～150mL小型手持噴霧器，均勻噴霧于葉片上，每株8mL～10mL,控制溫室溫度在25℃±2℃,相對(duì)溫度≥90%,持續(xù)24h;接種后14d~16d后，葉片出現(xiàn)單個(gè)夏孢子堆的顏色、形狀、大小、反應(yīng)型表現(xiàn)一致時(shí)，用刀片刮取單個(gè)夏孢子堆，收集夏孢子粉于20mL無菌安瓿瓶中，即獲得玉米普通銹病夏孢子純化菌株，保存于-20℃冰箱里保存，備用。4.3.3菌株致病性測(cè)定病株致病性測(cè)定過程與方法應(yīng)滿足以下要求：a)取出保存菌株的安瓿瓶，在40℃~45℃溫水中活化5min,打開安瓿瓶，用100mL無菌水沖洗安瓿瓶6～7次，沖洗液盛于1000mL無菌燒杯中，20℃~22℃黑暗條件下水化10h～12h,再加入無菌水稀釋成2.5×10s孢子/mL懸浮液，轉(zhuǎn)入手持噴霧器中，備用；b)手持盛有懸浮液的噴霧器，均勻噴霧于溫室培育的6～7片葉黃早四葉片上，接種后溫度、濕度、持續(xù)時(shí)間管理與4.3.2b)相同；c)接種后14d～16d后觀察葉片癥狀與A.2規(guī)定一致，夏孢子堆和夏孢子形態(tài)特征與附錄A.2規(guī)定一致，確定分離物為致病菌株。從發(fā)病葉片收集夏孢子菌株裝入9cm×17cm無菌玻璃紙袋，儲(chǔ)存在-20℃冰箱里保存，備用。4.3.4菌懸液配制取出保存菌株的玻璃紙帶，將夏孢子粉倒入1000mL無菌燒杯中，用無菌水稀釋，每500mL無菌水中加入0.05%吐溫-20(Tween-20)1mL,攪動(dòng)15min孢子完全懸浮，然后用無菌水稀釋至2.5×105孢子/mL4.4接種4.4.1接種時(shí)間3DB62/T4757—2023鑒定玉米材料展葉10葉～12葉期。4.4.2接種方法用一個(gè)帶刻度的10mL注射器吸取孢子懸浮液，從鑒定玉米材料心葉與其下的展開葉葉鞘相接處以下1cm處注射，或者注射到喇叭口，接種量控制5mL/株～6mL/株。要求針頭向下傾斜刺入，不宜刺穿，以心葉處冒出水珠為準(zhǔn)。4.5.1環(huán)境控制鑒定接種前5d~7d應(yīng)進(jìn)行田間灌溉，或在雨后進(jìn)行接種；接種后若天氣干旱，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行田間澆灌。4.5.2生育期判定田間玉米生育期判定符合NY/T1209規(guī)定要求。4.5.3施肥與灌水不同生育期的施肥與灌溉水平與大田玉米相同。4.5.4病蟲草害防治整個(gè)生育期間病蟲草防治應(yīng)滿足以下要求：a)整個(gè)生育期間不進(jìn)行病害防治；b)整個(gè)生育期間蟲害防治按照DB62/T4180的規(guī)定執(zhí)行；c)玉米苗期，結(jié)合中耕人工除草一次。4.6病情調(diào)查4.6.1調(diào)查時(shí)間接種后14d～16d調(diào)查1次。4.6.2調(diào)查方法鑒定材料每個(gè)重復(fù)隨機(jī)調(diào)查10穴，每穴1株，共10株，每株玉米果穗上方和下方各3片葉，總計(jì)60片葉，按照附錄A.1規(guī)定要求，調(diào)查記載病葉數(shù)，逐葉按照表1發(fā)病程度統(tǒng)計(jì)病情級(jí)別數(shù)并記載，調(diào)查結(jié)果記載表樣式見B.1。4.6.3病情分級(jí)與嚴(yán)重度以果穗上部和下部葉片的數(shù)量和病斑面積占葉面積的百分比表示發(fā)病程度，發(fā)病程度特征應(yīng)符合表1;病情級(jí)別依據(jù)普通銹病發(fā)病程度由輕到重，采取數(shù)值連續(xù)法劃分1～7級(jí)；嚴(yán)重度級(jí)值依據(jù)病情級(jí)別由小到大，采取數(shù)值間隔法賦予每個(gè)級(jí)別0～11的代表值，用以表示玉米葉片普通銹病的受害程度。表1玉米普通病鑒定病情級(jí)別及嚴(yán)重度劃分標(biāo)準(zhǔn)病情級(jí)別104DB62/T4757—2023表1玉米普通病鑒定病情級(jí)別及嚴(yán)重度劃分標(biāo)準(zhǔn)(續(xù))病情級(jí)別嚴(yán)重度級(jí)值發(fā)病程度特征21果穗上部3片葉和下部3片葉病斑占葉面積5%以下33果穗上部3片葉和下部3片葉病斑占葉面積的5.1%～10%以下45果穗上部3片葉和下部3片葉病斑占葉面積的10.1%～25%57果穗上部3片葉和下部3片葉病斑占葉面積的25.1%～40%69果穗上部3片葉和下部3片葉病斑占葉面積的40.1%～65%7果穗上部3片葉和下部3片葉病斑占葉面積的65.1%以上，葉片枯死4.6.4普遍率計(jì)算以受侵染葉片數(shù)占調(diào)查總?cè)~片數(shù)的百分率表示，用以表示發(fā)病的普遍程度，采用公式(1)計(jì)算普遍率。I——普遍率；d——發(fā)病葉片數(shù)；M——調(diào)查總?cè)~片數(shù)。4.6.5病情指數(shù)計(jì)算以玉米普通銹病的普遍率和葉片受侵染的嚴(yán)重程度數(shù)值化的綜合表示指標(biāo)，用以衡量玉米群體受普通銹病的危害程度，采用公式(2)計(jì)算。DI——病情指數(shù)；∑——為累加符號(hào)，從0級(jí)病級(jí)數(shù)開始累加；M——調(diào)查總?cè)~片數(shù)；Smax——為最高病情級(jí)數(shù)的嚴(yán)重度級(jí)值。5抗性評(píng)價(jià)5.1有效性判別當(dāng)感病對(duì)照品種的病情級(jí)別達(dá)到7級(jí)以上時(shí)，該批次鑒定有效。5.2抗性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)鑒定材料的病情指數(shù)(DI)確定其抗病水平，劃分標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合表2。DB62/T4757—20235表2玉米對(duì)普通銹病的抗性評(píng)價(jià)病情指數(shù)(DI)抗性評(píng)價(jià)類別縮寫0.0免疫I0.0<DI≤10.0高抗HR10.0<DI≤30.0抗病R30.0<DI≤50.0MR50.0<DI≤70.0感病SDI>70.0高感HS5.3重復(fù)鑒定與評(píng)價(jià)同一鑒定品種2年鑒定抗性類別不同的，則需要做第三次抗性鑒定。5.4.1同一鑒定品種2年的抗性類別一致時(shí)，則此抗性類別為最終鑒定結(jié)論。5.4.2同一鑒定品種做第三次抗性鑒定時(shí)，取2次一致的抗性類別為最終鑒定結(jié)論。5.4.3對(duì)鑒定材料作出綜合評(píng)價(jià)，綜合評(píng)價(jià)表樣式見B.2。6DB62/T4757—2023(規(guī)范性)玉米普通銹病病原形態(tài)特征與癥狀A(yù).1學(xué)名和形態(tài)描述A.1.1學(xué)名玉米柄銹菌PucciniasorghiSchw.A.1.2形態(tài)特征玉米柄銹菌的夏孢子堆黃褐色，橢圓形至長(zhǎng)橢圓形，大小1.0mm。夏孢子圓形至卵開多，淡褐色至金黃褐色，大小約為(22μm～33μm)×(20μm～28μm),細(xì)胞壁表面布滿短且稠密的細(xì)刺，赤道附近有4個(gè)發(fā)芽孔。玉米柄銹菌的冬孢子堆黑色，橢圓形或矩形，大小1.0mm～2.0mm。冬孢子長(zhǎng)橢圓形或棍棒形，栗褐色，雙細(xì)胞，隔膜處略溢縮，冬孢子表面光滑，大小為(16μm~23μm)×(29μm~54μm),冬孢子著生在冬孢子柄頂端或歪生，具長(zhǎng)柄，黃褐色或淡黃色，柄長(zhǎng)80μm～100μm。A.2癥狀玉米普通銹病以侵染玉米葉片為主，其次危害葉鞘、苞葉。發(fā)病初期葉片主脈兩側(cè)產(chǎn)生乳白色至淡黃色針尖狀病斑，逐漸擴(kuò)展形成圓形至長(zhǎng)橢圓形、黃褐色隆起病斑，隆起葉片表皮組織破裂散出鐵銹狀夏孢子。發(fā)病后期葉片正面、背面中脈處或近葉鞘處產(chǎn)生橢圓形、黑色冬孢子堆。DB62/T4757—20237(資料性)玉米抗普通銹病鑒定記載表、評(píng)價(jià)表B.1玉米抗普通銹病田間調(diào)查記載表玉米抗普通銹病田間調(diào)查記載表樣式見圖B.1。鑒定方式：生育期：播種時(shí)間：年月日接種時(shí)間：接種部位：