1糧油檢驗(yàn)糧食中磷化物殘留量的測(cè)定氣相色譜法本文件描述了氣相色譜測(cè)定糧食中磷化物殘留量的方法。本文件適用于糧食中磷化物殘留量的氣相色譜測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T5491糧食、油料檢驗(yàn)扦樣、分樣法GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1磷化物殘留量phosphideresidues在一定條件下測(cè)得的殘留在糧食中的磷化物含量。3.2基體糧食matrixgrain和被檢樣品同一種屬,未經(jīng)磷化物熏蒸的糧食樣品。4原理樣品中的磷化物與水和酸在密閉容器中反應(yīng)生成磷化氫氣體，在特定溫度下經(jīng)過一定時(shí)間孵化后，達(dá)到氣相/液相間濃度的動(dòng)態(tài)平衡，采用頂空氣相色譜法檢測(cè)上層氣相中磷化氫的含量，根據(jù)色譜峰的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。5試劑和材料除另有說明外，所用試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)室用水應(yīng)符合GB/T6682中三級(jí)水的要求。5.1磷化氫標(biāo)準(zhǔn)氣體：經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)氣體；5.2濃硫酸（H2SO4≥98%；5.3溫度計(jì)：最小分度值0.1℃;5.4壓力計(jì)：最小分度值100Pa；5.5量筒：100mL；5.6移液管：10mL；5.7硫酸溶液（1+9）：移取10mL濃硫酸（5.2）緩緩加入到80mL水中，冷卻后加水至100mL。25.8頂空進(jìn)樣瓶：20mL，配備鋁蓋和PTFE/硅膠隔墊；5.9氣密進(jìn)樣針：25μL和100μL，最小分度值分別為1μL和2μL；5.10氣體采樣袋：1L～2L，具有2個(gè)直通閥和硅膠墊，材質(zhì)為聚全氟乙丙烯膜（FEP）或其他具有相同性能的材質(zhì)，使用前檢查氣密性。5.11減壓閥。5.12橡膠軟管。6儀器設(shè)備6.1氣相色譜儀：配火焰光度檢測(cè)器（FPD）和頂空進(jìn)樣器。6.2天平：分度值0.01g。7樣品制備7.1扦樣按GB/T5491執(zhí)行，樣品量不少于500g，混勻后密封。7.2樣品制備及保存實(shí)驗(yàn)室收到樣品后應(yīng)立即測(cè)定。如需保存，應(yīng)將試樣密閉冷藏保存。8分析步驟8.1樣品處理稱取5g（精確到0.01g）樣品于20mL頂空進(jìn)樣瓶（5.8）中，向每個(gè)頂空進(jìn)樣瓶中加入5mL硫酸溶液（5.7），迅速蓋住瓶蓋，水平搖勻，保持頂空進(jìn)樣瓶直立，待分析。注：制備過程中液體不能接觸到密封墊，如果有8.2儀器參考條件8.2.1頂空進(jìn)樣參考條件a)平衡溫度：50℃;b)定量環(huán)溫度：60℃;c)傳輸線溫度：70℃;d)平衡時(shí)間：10min；e)進(jìn)樣體積：1000μL。8.2.2氣相色譜參考條件a)色譜柱固定液為5%苯基-甲基聚硅氧烷）30m×0.32mm×0.25μm或等效；b)柱溫度程序：80℃保持1min，10℃/min升溫至150℃,20℃/min升溫至250℃保持1min；c)進(jìn)樣口溫度：210℃;d)檢測(cè)器溫度：250℃;e)氫氣：75mL/min；f)空氣：100mL/min；g)載氣：60mL/min；h)進(jìn)樣口壓力：5.6psi；i)色譜柱壓力：恒定流量，1.0mL/min；j)分流進(jìn)樣：分流比100:1。38.3標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制8.3.1氣體采樣袋清洗將氣體采樣袋（5.10）出氣口閥門關(guān)閉，打開進(jìn)氣口閥門，充入高純氮?dú)庵翚怏w采樣袋四個(gè)角膨起，用手輕輕按壓氣體采樣袋，然后排空袋內(nèi)氣體。用高純氮?dú)夥磸?fù)充入、排空氣體采樣袋5次以上，用注射器將氣體采樣袋內(nèi)抽至真空，關(guān)閉閥門，備用。8.3.2磷化氫標(biāo)準(zhǔn)氣體的使用將減壓閥（5.11）連接到磷化氫標(biāo)準(zhǔn)氣體鋼瓶，確保減壓閥處于關(guān)閉狀態(tài)，然后將橡膠管（5.12）兩端分別與減壓閥出口和采樣袋進(jìn)氣口閥門連接，關(guān)閉氣體采樣袋出氣口閥門，打開磷化氫標(biāo)準(zhǔn)氣體鋼瓶閥門，然后緩慢打開減壓閥，待氣體采樣袋四個(gè)角都膨起，關(guān)閉減壓閥、氣體采樣袋進(jìn)氣口閥門、磷化氫標(biāo)準(zhǔn)氣體鋼瓶閥門，取下橡膠導(dǎo)管，現(xiàn)用現(xiàn)取。注：氣體采樣袋充入氣體切勿過于飽滿，以防脹破。8.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線制備稱取5g（精確到0.01g）基體糧食樣品6份于20mL頂空進(jìn)樣瓶中。向每個(gè)頂空進(jìn)樣瓶中加入5mL硫酸溶液（5.7加蓋密封后用氣密進(jìn)樣針（5.9）迅速向瓶中加入0μL、20μL、40μL、60μL、80μL、100μL的磷化氫標(biāo)準(zhǔn)氣體（5.1），保持頂空進(jìn)樣瓶直立，并在水平桌面上做快速的圓周運(yùn)動(dòng)，使物質(zhì)充分混合，上機(jī)分析。以各標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)磷化氫的含量為橫坐標(biāo)，色譜峰峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，外標(biāo)法定量。注：注入時(shí)針孔應(yīng)靠近頂空瓶蓋隔墊邊緣位置。8.3.4標(biāo)準(zhǔn)曲線各點(diǎn)磷化氫含量的計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線各點(diǎn)中磷化氫含量按公式（1）計(jì)算：式中：w——標(biāo)準(zhǔn)曲線某點(diǎn)磷化氫的量，ng；β——標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)下磷化氫標(biāo)準(zhǔn)氣體的質(zhì)量濃度，mg/L；P——溫度t下的大氣壓強(qiáng)，Pa；v——磷化氫標(biāo)準(zhǔn)氣體實(shí)際體積，μL；t——采集標(biāo)準(zhǔn)使用氣時(shí)的溫度，℃;273.15——標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)下的絕對(duì)溫度，K；101325——標(biāo)準(zhǔn)大氣壓強(qiáng)，Pa。結(jié)果保留至小數(shù)點(diǎn)后三位。8.4樣品測(cè)定儀器參考色譜條件下，將制備好的樣品上機(jī)分析，保留時(shí)間定性，測(cè)得磷化氫色譜峰面積，根據(jù)相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出試樣中磷化氫的含量。8.5空白試驗(yàn)稱取5g（精確到0.01g）與待測(cè)樣品同種屬的基體糧食樣品，按8.1、8.4的步驟做空白試驗(yàn)，應(yīng)確認(rèn)不含有干擾待測(cè)組分的物質(zhì)。9結(jié)果計(jì)算糧食中磷化物殘留量（以磷化氫計(jì)）按公式（2）計(jì)算：式中：X——試樣中磷化氫的含量，mg/kg；ω——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到試樣中磷化氫的質(zhì)量，ng；ω0——空白試樣中磷化氫的質(zhì)量，ng;m——試樣質(zhì)量，g；1000——換算系數(shù)。檢測(cè)結(jié)果以兩次測(cè)定值的算術(shù)平均值表示。計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。10精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不超過算術(shù)平均值的20%。本方法的檢出限為0.00070mg/kg，定量限為0.0025mg/kg。（資料性）磷化氫氣相色譜圖標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)色譜圖見A.1圖A.1磷化氫標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)氣相色譜圖（資料性）實(shí)