2025年實(shí)驗(yàn)動(dòng)物從業(yè)人員復(fù)習(xí)題(含參考答案)一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分類(lèi)與質(zhì)量控制1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按微生物控制程度分為哪幾類(lèi)？各類(lèi)的核心特征是什么？參考答案：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按微生物控制程度分為普通級(jí)、清潔級(jí)、無(wú)特定病原體（SPF）級(jí)和無(wú)菌級(jí)（包括悉生動(dòng)物）。普通級(jí)動(dòng)物不控制除特定病原體以外的微生物，允許存在非致病微生物；清潔級(jí)動(dòng)物排除人獸共患病原及動(dòng)物主要傳染病原；SPF級(jí)動(dòng)物除清潔級(jí)標(biāo)準(zhǔn)外，進(jìn)一步排除對(duì)實(shí)驗(yàn)有干擾的特定病原體；無(wú)菌級(jí)動(dòng)物體內(nèi)外無(wú)任何可檢測(cè)到的微生物，悉生動(dòng)物則是已知菌定植的無(wú)菌動(dòng)物。2.SPF級(jí)小鼠的微生物檢測(cè)項(xiàng)目中，必檢的病毒包括哪些？列舉3種常見(jiàn)排除的細(xì)菌。參考答案：SPF級(jí)小鼠必檢病毒包括小鼠肝炎病毒（MHV）、小鼠細(xì)小病毒（MPV）、淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒（LCMV）、仙臺(tái)病毒（Sendai）等。常見(jiàn)排除的細(xì)菌有鼠棒狀桿菌（Corynebacteriumkutscheri）、泰澤病原體（Clostridiumpiliforme）、支氣管鮑特菌（Bordetellabronchiseptica）。3.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳質(zhì)量控制中，近交系與封閉群的主要區(qū)別是什么？列舉2種常用近交系小鼠品系及其特點(diǎn)。參考答案：近交系是通過(guò)至少20代兄妹交配培育，個(gè)體基因型純合、表型一致；封閉群是5年以上不引入新血緣，群體基因頻率穩(wěn)定但個(gè)體雜合。常用近交系如C57BL/6（黑色，對(duì)致癌劑敏感，常用于腫瘤研究）、BALB/c（白色，免疫缺陷模型常用，易患乳腺癌）。二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境與設(shè)施管理4.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物屏障環(huán)境的主要功能是什么？溫濕度、照度、換氣次數(shù)的控制標(biāo)準(zhǔn)（以小鼠為例）？參考答案：屏障環(huán)境通過(guò)嚴(yán)格的微生物控制，為SPF級(jí)及以上實(shí)驗(yàn)動(dòng)物提供無(wú)菌或低菌環(huán)境，防止外源微生物侵入。小鼠環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)：溫度18-26℃（最適20-24℃），相對(duì)濕度40-70%（最適50-60%）；照度：動(dòng)物照度15-200lx（白天150-200lx，夜間10-20lx）；換氣次數(shù)10-20次/小時(shí)（屏障環(huán)境通常15-20次）。5.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物墊料的選擇需滿(mǎn)足哪些要求？舉例2種常用墊料及其優(yōu)缺點(diǎn)。參考答案：墊料需符合吸濕性好、無(wú)毒性、無(wú)刺激性、無(wú)病原微生物、粉塵少、成本適中等要求。常用墊料：①刨花（軟木類(lèi)）：吸濕性強(qiáng)，成本低，但需高溫高壓滅菌，可能含揮發(fā)性油脂（需預(yù)處理）；②玉米芯：吸濕性好，粉塵少，但易霉變，需控制儲(chǔ)存濕度。6.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施的分區(qū)原則是什么？污染區(qū)與清潔區(qū)的隔離措施包括哪些？參考答案：分區(qū)原則為“人流、物流、動(dòng)物流”單向不交叉，分為準(zhǔn)備區(qū)（飼料/墊料存放、籠具清洗）、飼養(yǎng)區(qū)（動(dòng)物房）、實(shí)驗(yàn)區(qū)（操作間）、廢棄物處理區(qū)。隔離措施：物理隔斷（緩沖間、傳遞窗）、壓差控制（清潔區(qū)＞飼養(yǎng)區(qū)＞污染區(qū)，壓差10-15Pa）、人員更衣消毒（一更換拖鞋，二更穿滅菌服，緩沖間風(fēng)淋）、物品經(jīng)傳遞窗紫外線(xiàn)消毒或高壓滅菌后進(jìn)入。三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物操作技術(shù)7.大鼠尾靜脈注射的操作步驟及常見(jiàn)失敗原因？參考答案：步驟：①固定大鼠（可用自制鼠袋或雙手保定，暴露尾部）；②45-50℃溫水浸泡尾部1-2分鐘，或用酒精擦拭，使血管擴(kuò)張；③選擇尾兩側(cè)靜脈（背側(cè)靜脈易滾動(dòng)），持針與尾部呈15-30°角刺入，見(jiàn)回血后緩慢推注；④拔針后用棉球按壓止血。失敗原因：血管未充分?jǐn)U張（溫度不夠）、進(jìn)針角度過(guò)大（刺破血管）、固定不牢（大鼠掙扎導(dǎo)致針頭移位）、選擇尾尖1/3段（血管過(guò)細(xì)易穿破）。8.小鼠腹腔注射的正確部位及藥物劑量限制？注射不當(dāng)可能導(dǎo)致哪些并發(fā)癥？參考答案：部位：以小鼠腹部正中線(xiàn)為界，選擇左或右下腹（避開(kāi)肝臟、膀胱），進(jìn)針點(diǎn)距恥骨聯(lián)合2-3cm，與皮膚呈30-45°角刺入皮下，再稍提起針頭以45°角刺入腹腔（有落空感）。劑量限制：成年小鼠單次腹腔注射不超過(guò)0.5ml（體重20g時(shí)），最大不超過(guò)1ml（體重＞30g）。并發(fā)癥：刺傷肝臟（出血）、刺破膀胱（尿液污染）、藥液注入腸腔（吸收不良）、感染（未消毒或操作污染）。9.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物麻醉時(shí)，戊巴比妥鈉與異氟烷的適用場(chǎng)景及注意事項(xiàng)？參考答案：戊巴比妥鈉（靜脈或腹腔注射）適用于長(zhǎng)時(shí)間實(shí)驗(yàn)（如手術(shù)），麻醉深度易控制，但需注意劑量（小鼠40-50mg/kg，大鼠30-40mg/kg），過(guò)量可致呼吸抑制；異氟烷（吸入麻醉）適用于短時(shí)間操作或需快速蘇醒的實(shí)驗(yàn)，麻醉誘導(dǎo)和恢復(fù)快，但需專(zhuān)用麻醉機(jī)，注意保持氣道通暢（避免分泌物堵塞），長(zhǎng)期吸入對(duì)操作人員有職業(yè)暴露風(fēng)險(xiǎn)（需在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行）。四、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理與福利10.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理審查的核心內(nèi)容包括哪些？倫理委員會(huì)的職責(zé)有哪些？參考答案：審查核心內(nèi)容：①實(shí)驗(yàn)?zāi)康牡目茖W(xué)性（是否必要，是否有替代方案）；②動(dòng)物數(shù)量的合理性（是否符合“減少”原則）；③操作的人道性（麻醉、鎮(zhèn)痛措施是否到位）；④實(shí)驗(yàn)結(jié)束后動(dòng)物處置（安樂(lè)死是否符合規(guī)范）。倫理委員會(huì)職責(zé)：審查實(shí)驗(yàn)方案的倫理合規(guī)性，監(jiān)督實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的動(dòng)物福利，受理違規(guī)投訴并提出處理意見(jiàn)，定期培訓(xùn)從業(yè)人員倫理知識(shí)。11.“3R原則”的具體含義及在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中的應(yīng)用舉例？參考答案：3R原則即替代（Replacement）、減少（Reduction）、優(yōu)化（Refinement）。替代：用非活體系統(tǒng)（如細(xì)胞培養(yǎng)、計(jì)算機(jī)模擬）或低等動(dòng)物（如果蠅）替代哺乳動(dòng)物實(shí)驗(yàn)（如用斑馬魚(yú)胚胎替代小鼠致畸實(shí)驗(yàn)）；減少：通過(guò)優(yōu)化統(tǒng)計(jì)設(shè)計(jì)（如隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)）減少動(dòng)物使用量（如將每組樣本量從10只優(yōu)化為8只仍滿(mǎn)足統(tǒng)計(jì)效力）；優(yōu)化：改進(jìn)實(shí)驗(yàn)方法（如使用無(wú)創(chuàng)檢測(cè)替代有創(chuàng)采樣，術(shù)后提供鎮(zhèn)痛藥物），降低動(dòng)物痛苦。12.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利的基本要求包括哪些方面？列舉2項(xiàng)違反福利的常見(jiàn)行為。參考答案：基本要求：①環(huán)境福利（適宜的溫濕度、足夠活動(dòng)空間）；②生理福利（充足清潔的飲食）；③健康福利（定期檢測(cè)，及時(shí)治療疾病）；④行為福利（提供墊料、玩具滿(mǎn)足自然行為）；⑤心理福利（減少應(yīng)激，避免粗暴操作）。常見(jiàn)違規(guī)行為：①長(zhǎng)期將大鼠單籠飼養(yǎng)（群居動(dòng)物需社交，單籠導(dǎo)致焦慮）；②術(shù)后未給予鎮(zhèn)痛（如骨折模型不使用止痛藥）；③抓取小鼠時(shí)僅提尾（導(dǎo)致脊柱損傷和應(yīng)激）。五、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物法律法規(guī)與安全管理13.《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》中對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證制度的規(guī)定是什么？使用單位需取得哪兩類(lèi)許可證？參考答案：條例規(guī)定，從事實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)、使用的單位需取得相應(yīng)許可證，未取得許可證不得開(kāi)展相關(guān)活動(dòng)。使用單位需取得《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證》（證明具備相應(yīng)設(shè)施、人員和管理能力）；生產(chǎn)單位需取得《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證》（證明種源、質(zhì)量符合標(biāo)準(zhǔn)）。許可證有效期5年，需定期復(fù)核。14.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生物安全防護(hù)的等級(jí)劃分依據(jù)是什么？二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL-2）的基本要求？參考答案：劃分依據(jù)是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物攜帶病原體的危害程度（感染性、傳播性、致病性）。BSL-2適用于操作中度危害病原體（如鼠痘病毒）或未知病原的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物?；疽螅孩賹?shí)驗(yàn)室入口有生物危害標(biāo)識(shí)；②配備生物安全柜（II級(jí)）；③人員穿防護(hù)服、戴手套，操作后消毒；④廢棄物高壓滅菌后處理；⑤有應(yīng)急處置預(yù)案（如動(dòng)物咬傷、體液泄漏）。15.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物運(yùn)輸過(guò)程中需遵守哪些規(guī)定？運(yùn)輸工具的環(huán)境控制要求？參考答案：規(guī)定：①運(yùn)輸前需取得輸出單位的檢疫證明（7日內(nèi)有效）；②運(yùn)輸籠具需符合動(dòng)物大小（小鼠籠具面積≥280cm2/只），通風(fēng)良好，防逃逸；③短途運(yùn)輸（＜6小時(shí)）可禁食，長(zhǎng)途需提供水和飼料（用凝膠飼料防灑漏）；④不得與有毒、有害物品混運(yùn)。環(huán)境控制：溫度18-26℃（恒溫運(yùn)輸箱），濕度40-70%，避免劇烈顛簸（加速度≤1g），通風(fēng)量≥0.5m3/小時(shí)·只（小鼠）。六、應(yīng)急處置與常見(jiàn)問(wèn)題16.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房突發(fā)停電時(shí)，應(yīng)采取哪些應(yīng)急措施？參考答案：①立即啟動(dòng)備用電源（如UPS或發(fā)電機(jī)），確保屏障環(huán)境空調(diào)系統(tǒng)運(yùn)行（維持壓差和換氣）；②檢查動(dòng)物狀態(tài)（尤其高溫季節(jié)，防止中暑；低溫季節(jié)注意保暖）；③若備用電源失效，30分鐘內(nèi)將動(dòng)物轉(zhuǎn)移至備用設(shè)施（需提前備案）；④記錄停電時(shí)間、處理過(guò)程及動(dòng)物反應(yīng)，報(bào)告上級(jí)主管部門(mén)。17.實(shí)驗(yàn)人員被小鼠咬傷后，正確的處理流程是什么？參考答案：①立即用流動(dòng)清水沖洗傷口15分鐘（擠壓傷口周邊血液，減少病毒殘留）；②用2%碘酒或75%酒精消毒；③評(píng)估暴露等級(jí)（無(wú)出血為I級(jí)，出血為II級(jí)）：I級(jí)需消毒觀(guān)察；II級(jí)需24小時(shí)內(nèi)接種狂犬病疫苗（如小鼠來(lái)源不明）；④報(bào)告實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人，記錄咬傷時(shí)間、動(dòng)物來(lái)源、處理措施；⑤若小鼠曾接觸病原體（如B病毒），需額外進(jìn)行特異性預(yù)防（如免疫球蛋白注射）。18.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物出現(xiàn)群體性腹瀉時(shí)，可能的原因及處理步驟？參考答案：可能原因：①飼料霉變（黃曲霉毒素）；②墊料污染（細(xì)菌或寄生蟲(chóng)）；③病原體感染（如鼠傷寒沙門(mén)氏菌、輪狀病毒）；④環(huán)境應(yīng)激（溫度驟變、密度過(guò)高）。處理步驟：①隔離病鼠，采集糞便樣本送檢（細(xì)菌培養(yǎng)、病毒檢測(cè)）；②更換可疑飼料/墊料，徹底消毒籠具（高壓滅菌或過(guò)氧乙酸噴霧）；③對(duì)同群動(dòng)物觀(guān)察72小時(shí)，必要時(shí)預(yù)防性給藥（如抗生素需符合實(shí)驗(yàn)方案，避免干擾結(jié)果）；④記錄疫情，上報(bào)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理部門(mén)，追溯污染源（如飼料供應(yīng)商質(zhì)檢報(bào)告）。19.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，安樂(lè)死的選擇原則是什么？列舉2種適用于大鼠的安樂(lè)死方法及操作要點(diǎn)。參考答案：原則：快速、無(wú)痛、無(wú)恐懼，不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果（如避免出血影響組織樣本）。大鼠適用方法：①二氧化碳吸入法：將大鼠放入密閉容器，以10-30%容器體積/分鐘的速度通入CO?（先排出空氣，再維持高濃度），觀(guān)察呼吸停止后持續(xù)3分鐘；要點(diǎn)：避免容器過(guò)小導(dǎo)致?lián)頂D應(yīng)激，CO?濃度需逐漸升高（過(guò)快會(huì)引起恐慌）。②脫頸椎法（僅限小鼠/大鼠）：一手固定頭部（拇指、食指卡緊雙耳后），另一手抓住尾部快速后拉，聽(tīng)到“咔嗒”聲確認(rèn)脊髓斷裂；要點(diǎn)：僅適用于體重＜300g的大鼠，操作需熟練（不熟練易導(dǎo)致動(dòng)物