(19)國家知識產(chǎn)權(quán)局(10)申請公布號CN120131743A(71)申請人日照市地博蟾酥中藥科技有限公司地址276800山東省日照市經(jīng)濟開發(fā)區(qū)奎山街道許家園村村委西北380米(72)發(fā)明人許建波(74)專利代理機構(gòu)重慶微云智聯(lián)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)50330專利代理師秦卓妍A61K9/16(2006.01)A61K35/65(2015.01)(54)發(fā)明名稱本發(fā)明公開了一種用于治療腫瘤的配方及制備工藝，涉及藥劑技術(shù)領(lǐng)域，研發(fā)一種安全有效、能針對中晚期腫瘤發(fā)揮較好治療作用且兼具對相關(guān)病癥治療效果的藥物。它包括由以下重量份的原料組成：干蟾皮10-30份、五指毛桃根15-5-15份。本發(fā)明配方具有解毒，消腫，止痛的功起到清熱解毒，消腫散結(jié)的作用，可用于熱毒壅合衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。將收集好的牛膽汁立即轉(zhuǎn)移至低溫冷藏環(huán)境(冷藏庫)中保存，以延緩變質(zhì)過程，等待后續(xù)處理。21.一種用于治療腫瘤的配方，其特征在于，由以下重量份的原料組成：干蟾皮10-30份、五指毛桃根15-35份、黃芪精5-20份、人參3-15份、體外培育牛黃1-5份、人工麝香0.1-1份、醋乳香5-15份、醋沒藥5-15份。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于治療腫瘤的配方，其特征在于：所述配方中干蟾皮的重量份為15-25份；所述配方中五指毛桃根的重量份為20-30份；所述配方中黃芪精的重量份為8-15份；所述配方中人參的重量份為5-10份。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于治療腫瘤的配方，其特征在于：所述配方中體外培育牛黃的重量份為2-4份。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于治療腫瘤的配方，其特征在于：所述配方中人工麝香的重量份為0.3-0.8份；所述配方中醋乳香的重量份為8-12份。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于治療腫瘤的配方制備工藝，其特征在于，包括以下步步驟4、向混合粉末中加入適量的藥用輔料，制成軟材，所述藥用輔料的用量為混合粉末重量的10%-30%;步驟6、將制成的顆粒在40-60℃下干燥至含水量為3%-8%,即得用于治療腫瘤的藥物6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種用于治療腫瘤的配方制備工藝，其特征在于，步驟2中，體外培育牛黃獲取步驟分為，步驟21、原料準(zhǔn)備，牛膽汁，選用新鮮、無變質(zhì)且符合衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的牛膽汁作牛膽汁來自經(jīng)過正規(guī)屠宰檢驗的牛只，收集后需立即進行處理或妥善冷藏保存?zhèn)溆?；添加物：?zhǔn)備膽酸、膽紅素、豬去氧膽酸、膽固醇、微量元素鋅以及生物活性酶輔助物7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種用于治療腫瘤的配方制備工藝，其特征在于，步驟2中，體外培育牛黃獲取步驟分為，步驟22、預(yù)處理步驟，牛膽汁過濾，將收集的牛膽汁通過多層無菌紗布或精細過濾器進添加物溶解與混合：將膽酸、膽紅素、豬去氧膽酸、膽固醇脂溶性物質(zhì)分別用有機溶劑將微量元素和生物活性酶水溶性物質(zhì)用適量的蒸餾水或無菌水進行溶解，制成相應(yīng)的按照預(yù)定的配方比例，將上述各種溶解好的溶液緩慢加入到經(jīng)過過濾的牛膽汁濾液中，同時在恒溫攪拌器的作用下進行充分?jǐn)嚢杌旌?，確保各種成分均勻分布在牛膽汁中；攪拌速度控制在50-100轉(zhuǎn)/分鐘，溫度保持在35-40℃左右，攪拌時間約為1-2小時。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種用于治療腫瘤的配方制備工藝，其特征在于，步驟2中，體3外培育牛黃獲取步驟分為，步驟23、接種微生物，然后按照接種量，將微生物均勻接種到上述經(jīng)過預(yù)處理的牛膽汁混合液中。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種用于治療腫瘤的配方制備工藝，其特征在于，步驟2中，體外培育牛黃獲取步驟分為，步驟24、后處理步驟，分離與收集：培育結(jié)束后，將培育容器內(nèi)的混合液通過離心分離機進行離心分離，轉(zhuǎn)速可設(shè)置在3000-5000轉(zhuǎn)/分鐘，離心時間為10-20沉淀出類似牛黃的物質(zhì)，將上清液小心倒出，收集底部的沉淀物；洗滌與純化，將收集到的沉淀物用適量的無菌生理鹽水進行多次洗滌，每次洗滌后通過離心分離去除洗滌液，以去除附著在沉淀物表面的雜質(zhì)、未反應(yīng)的添加物；干燥與成型，將經(jīng)過洗滌和純化后的沉淀物放入真空干燥箱中進行干燥，設(shè)置溫度為40-60℃,真空度為-0.08MPa至-0.09MPa,干燥時間2-4小時，直至沉淀物完全干燥成粉末狀或塊狀物質(zhì)，即得到體外培育牛黃成品。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種用于治療腫瘤的配方制備工藝，其特征在于，步驟23中、接種微生物，具體的，體外培育牛黃的工藝可能涉及到接種微生物菌株，微生物能夠參與牛黃形成過程中的生化反應(yīng)；在接種前，需對微生物進行活化培養(yǎng)，使其處于生長旺盛期；然后按照接種量，將微生物均勻接種到上述經(jīng)過預(yù)處理的牛膽汁混合液中。4一種用于治療腫瘤的配方及制備工藝技術(shù)領(lǐng)域[0001]本發(fā)明涉及藥劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于治療腫瘤的配方及制備工藝。背景技術(shù)[0002]腫瘤是嚴(yán)重威脅人類健康的重大疾病之一，目前臨床上治療腫瘤的方法眾多，但中晚期腫瘤發(fā)揮較好治療作用且兼具對相關(guān)病癥治療效果的藥物具有重要意義。發(fā)明內(nèi)容[0003]本發(fā)明目的是旨在提供了一種用于治療腫瘤的配方，由以下重量份的原料組成：干蟾皮10-30份、五指毛桃根15-35份、黃芪精5-20份、人參3-15份、體外[0004]為實現(xiàn)上述技術(shù)目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：[0009]步驟4、向混合粉末中加入適量的藥用輔料，制成軟材，所述藥用輔料的用量為混合粉末重量的10%-30%;[0010]步驟5、將軟材通過制粒機制成顆粒，顆粒粒徑控制在0.5-2mm;[0011]步驟6、將制成的顆粒在40-60℃下干燥至含水量為3%-8%,即得用于治療腫瘤的藥物制劑。[0012]其中，人工麝香含有多種活性成分，其可能通過促進機體的新陳代謝，加速肝臟等解毒器官對這些腫瘤相關(guān)毒素的代謝轉(zhuǎn)化過程，使其更易排出體外。[0014]步驟21、原料準(zhǔn)備，牛膽汁，選用新鮮、無變質(zhì)且符合衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的牛膽汁作為基礎(chǔ)原料；牛膽汁來自經(jīng)過正規(guī)屠宰檢驗的牛只，收集后需立即進行處理或妥善冷藏保存?zhèn)溆?；[0016]步驟22、預(yù)處理步驟，牛膽汁過濾，將收集的牛膽汁通過多層無菌紗布或精細過濾[0017]添加物溶解與混合：將膽酸、膽紅素、豬去氧膽酸、膽固醇等脂溶性物質(zhì)分別用適量的有機溶劑(如乙醇、氯仿等)進行溶解，制成各自的溶液；注意控制有機溶劑的使用量，避免殘留過多影響后續(xù)產(chǎn)品質(zhì)量。[0018]將微量元素和生物活性酶等水溶性物質(zhì)用適量的蒸餾水或無菌水進行溶解，制成5相應(yīng)的溶液。[0019]按照預(yù)定的配方比例，將上述各種溶解好的溶液緩慢加入到經(jīng)過過濾的牛膽汁濾液中，同時在恒溫攪拌器的作用下進行充分?jǐn)嚢杌旌?，確保各種成分均勻分布在牛膽汁中；攪拌速度一般控制在50-100轉(zhuǎn)/分鐘，溫度保持在35-40℃左右，攪拌時間約為1-2小時。[0020]步驟23、接種微生物(如有需要):某些體外培育牛黃的工藝可能涉及到接種特定的微生物菌株，這些微生物能夠參與牛黃形成過程中的某些生化反應(yīng)。在接種前，需對微生物進行活化培養(yǎng)，使其處于生長旺盛期。然后按照一定的接種量(如每升牛膽汁混合液接種10^5-10^7個活菌)將微生物均勻接種到上述經(jīng)過預(yù)處理的牛膽汁混合液中。[0022]分離與收集：培育結(jié)束后，將培育容器內(nèi)的混合液通過離心分離機進行離心分離，轉(zhuǎn)速可設(shè)置在3000-5000轉(zhuǎn)/分鐘，離心時間為10-20分鐘。離心后，底部會沉淀出類似牛黃[0024]將收集到的沉淀物用適量的無菌生理鹽水進行多次洗滌，每次洗滌后通過離心分離去除洗滌液，以去除附著在沉淀物表面的雜質(zhì)、未反應(yīng)的添加物等。[0025]可根據(jù)需要，進一步采用一些純化技術(shù)，如柱色譜分離、超濾等方法對洗滌后的沉淀物進行純化處理，以提高產(chǎn)物的純度和質(zhì)量，使其更接近天然牛黃的成分和特性。[0027]將經(jīng)過洗滌和純化后的沉淀物放入真空干燥箱中進行干燥，設(shè)置溫度為40-60℃,真空度為-0.08MPa至-0.09MPa,干燥時間根據(jù)沉淀物的量而定，一般為2-4小時，直至沉淀物完全干燥成粉末狀或塊狀物質(zhì)，即得到體外培育牛黃成品。[0028]利用本技術(shù)方案制備的含有體外培育牛黃的藥劑，第一，對正常生理功能造成干擾。體外培育牛黃含有多種活性成分，如膽紅素等。膽紅素具有一定的抗氧化作用，可中和腫瘤細胞代謝過程中產(chǎn)生的自由基等有害物質(zhì)，減少其對機體細胞的[0029]牛黃中的某些成分還可能參與肝臟的解毒代謝過程，促進肝臟對腫瘤相關(guān)毒素的[0030]實驗中，我們還發(fā)現(xiàn)，本藥劑還具備消腫作用：具體的，腫瘤組織的不斷增殖會壓黃可能通過改善局部血液循環(huán)來發(fā)揮消腫作用。例如，其成分可能影響血管內(nèi)皮細胞的功能，調(diào)節(jié)血管的通透性，使?jié)B出到組織間隙的液體能夠更順暢地回流到血管內(nèi)，從而減輕局部腫脹。[0031]第二，對慢性乙型肝炎具備解毒作用，具體的，在慢性乙型肝炎患者體內(nèi)，乙肝病毒持續(xù)復(fù)制，其代謝產(chǎn)物以及引發(fā)的免疫反應(yīng)會產(chǎn)生一些對肝臟細胞有毒害作用的物質(zhì)。體外培育牛黃可以通過增強肝臟自身的解毒功能來應(yīng)對這些毒素。例如，牛黃中的某些成分可能激活肝臟細胞內(nèi)的解毒酶系(如細胞色素P450酶系等),使肝臟能夠更有效地代謝和轉(zhuǎn)化這些有毒物質(zhì)，將其轉(zhuǎn)化為更易排出體外的形式，從而減輕肝臟的負擔(dān)，起到解毒的效6[0032]第三，對熱毒壅結(jié)所致的癰疽療毒、瘰疬、流注、癌腫具備清熱解毒作用，具體的，熱毒壅結(jié)是指體內(nèi)熱毒積聚，不能及時散發(fā)出去，從而引發(fā)一系列病癥。體外培育牛黃本身性涼，具有清熱的天然屬性，能夠中和體內(nèi)過多的熱毒，使其熱度降低，恢復(fù)機體的陰陽平衡。一方面，牛黃中的成分如膽紅素、膽酸等，可能通過參與機體的代謝調(diào)節(jié)過程，促進體內(nèi)熱毒物質(zhì)的代謝轉(zhuǎn)化，使其更快地通過尿液、汗液等途徑排出體外，達到清熱解毒的目的。另一方面，在癰疽療毒、瘰疬、流注等病癥中，熱毒往往會導(dǎo)致局部組織出現(xiàn)紅腫熱痛等炎癥表現(xiàn)。牛黃藥劑的清熱解毒作用可以有效降低局部組織的溫度，減輕炎癥反應(yīng)的熱度，緩解紅腫熱痛等癥狀。[0033]綜上所述，本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明配方具有解毒，消腫，止痛的功效。用于中、晚期腫瘤，慢性乙型肝炎等癥；還能起到清熱解毒，消腫散結(jié)的作用，可用于熱毒壅結(jié)所附圖說明[0034]本發(fā)明可以通過附圖給出的非限定性實施例進一步說明；[0035]圖1為本發(fā)明體外培育牛黃的牛膽汁收集步驟示意圖；[0036]圖2為本發(fā)明用于治療腫瘤的配方制備工藝步驟示意圖；具體實施方式[0037]為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以更好地理解本發(fā)明，下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明技術(shù)方案進一步說明。[0038]一種用于治療腫瘤的配方，由以下重量份的原料組成：干蟾皮10-30份、五指毛桃根15-35份、黃芪精5-20份、人參3-15份、體外培育牛黃1-5份、人工麝香0.1-1份、醋乳香5-15份、醋沒藥5-15份。[0039]優(yōu)選的，所述配方中干蟾皮的重量份為15-25份。[0040]優(yōu)選的，所述配方中五指毛桃根的重量份為20-30份。[0041]優(yōu)選的，所述配方中黃芪精的重量份為8-15份。[0042]優(yōu)選的，所述配方中人參的重量份為5-10份。[0043]優(yōu)選的，所述配方中體外培育牛黃的重量份為2-4份。[0044]優(yōu)選的，所述配方中人工麝香的重量份為0.3-0.8份。[0045]優(yōu)選的，所述配方中醋乳香的重量份為8-12份。[0046]優(yōu)選的，所述配方中醋沒藥的重量份為8-12份。[0047]一種用于治療腫瘤的配方制備工藝，包括以下步驟：[0048]步驟1、取規(guī)定重量份的干蟾皮、五指毛桃根、黃芪精、人參、醋乳香晾干，分別粉碎成粗粉，過80-100目篩備用；[0049]步驟2、將體外培育牛黃、人工麝香分別研細，過120-150目篩備用；[0050]步驟3、按配方比例稱取上述處理后的各原料，混合均勻，得到混合粉末；[0051]步驟4、向混合粉末中加入適量的藥用輔料，制成軟材，所述藥用輔料的用量為混合粉末重量的10%-30%;[0052]步驟5、將軟材通過制粒機制成顆粒，顆粒粒徑控制在0.5-2mm;7[0053]步驟6、將制成的顆粒在40-60℃下干燥至含水量為3%-8%,即得用于治療腫瘤的藥物制劑。[0055]步驟21、原料準(zhǔn)備，牛膽汁，選用新鮮、無變質(zhì)且符合衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的牛膽汁作為基礎(chǔ)原料；牛膽汁來自經(jīng)過正規(guī)屠宰檢驗的牛只，收集后需立即進行處理或妥善冷藏保存?zhèn)溆?；物質(zhì)；這些添加物需符合藥用級別標(biāo)準(zhǔn)，保證[0057]步驟22、預(yù)處理步驟，牛膽汁過濾，將收集的牛膽汁通過多層無菌紗布或精細過濾[0058]添加物溶解與混合：將膽酸、膽紅素、豬去氧膽酸、膽固醇等脂溶性物質(zhì)分別用適量的有機溶劑(如乙醇、氯仿等)進行溶解，制成各自的溶液；注意控制有機溶劑的使用量，避免殘留過多影響后續(xù)產(chǎn)品質(zhì)量。[0059]將微量元素和生物活性酶等水溶性物質(zhì)用適量的蒸餾水或無菌水進行溶解，制成相應(yīng)的溶液。[0060]按照預(yù)定的配方比例，將上述各種溶解好的溶液緩慢加入到經(jīng)過過濾的牛膽汁濾液中，同時在恒溫攪拌器的作用下進行充分?jǐn)嚢杌旌?，確保各種成分均勻分布在牛膽汁中；攪拌速度一般控制在50-100轉(zhuǎn)/分鐘，溫度保持在35-40℃左右，攪拌時間約為1-2小時。[0061]步驟23、接種微生物(如有需要):某些體外培育牛黃的工藝可能涉及到接種特定的微生物菌株，這些微生物能夠參與牛黃形成過程中的某些生化反應(yīng)。在接種前，需對微生物進行活化培養(yǎng)，使其處于生長旺盛期。然后按照一定的接種量(如每升牛膽汁混合液接種10^5-10^7個活菌)將微生物均勻接種到上述經(jīng)過預(yù)處理的牛膽汁混合液中。[0062]模擬體內(nèi)環(huán)境培育：將接種(或未接種微生物)后的牛膽汁混合液轉(zhuǎn)移至特制的培育容器中，該容器應(yīng)具備良好的密封性、可調(diào)節(jié)溫度和氣體環(huán)境等功能。[0063]設(shè)置培育容器的溫度條件，一般維持在37-39℃,以模擬牛體內(nèi)的生理溫度。[0064]調(diào)節(jié)容器內(nèi)的氣體成分，保持一定的二氧化碳濃度(如5%-10%)和氧氣濃度(如10%-20%),可通過向容器內(nèi)通入經(jīng)過混合和調(diào)節(jié)好的氣體來實現(xiàn)，以模擬牛體內(nèi)的氣體環(huán)境。[0065]在培育過程中，持續(xù)對牛膽汁混合液進行緩慢攪拌，攪拌速度約為20-50轉(zhuǎn)/分鐘，以保證混合液內(nèi)的物質(zhì)充分接觸和反應(yīng)。培育時間根據(jù)具體工藝要求而定，通常為7-14天左右。[0067]分離與收集：培育結(jié)束后，將培育容器內(nèi)的混合液通過離心分離機進行離心分離，轉(zhuǎn)速可設(shè)置在3000-5000轉(zhuǎn)/分鐘，離心時間為10-20分鐘。離心后，底部會沉淀出類似牛黃[0069]將收集到的沉淀物用適量的無菌生理鹽水進行多次洗滌，每次洗滌后通過離心分離去除洗滌液，以去除附著在沉淀物表面的雜質(zhì)、未反應(yīng)的添加物等。[0070]可根據(jù)需要，進一步采用一些純化技術(shù)，如柱色譜分離、超濾等方法對洗滌后的沉淀物進行純化處理，以提高產(chǎn)物的純度和質(zhì)量，使其更接近天然牛黃的成分和特性。8[0072]將經(jīng)過洗滌和純化后的沉淀物放入真空干燥箱中進行干燥，設(shè)置溫度為40-60℃,真空度為-0.08MPa至-0.09MPa,干燥時間根據(jù)沉淀物的量而定，一般為2-4小時，直至沉淀物完全干燥成粉末狀或塊狀物質(zhì)，即得到體外培育牛黃成品。[0073]如果需要將其制成特定的劑型(如丸劑、片劑等),可在干燥后按照相應(yīng)的制藥工藝進行后續(xù)的加工處理。[0074]其中，整個制備工藝的核心在于控制體外培育牛黃的冷藏的準(zhǔn)備，收集后需立即進行處理或妥善4℃左右的冷藏庫冷藏保存?zhèn)溆?；[0075]以下是一份關(guān)于體外培育牛黃在相關(guān)病癥(如中、晚期腫瘤，慢性乙型肝炎，熱毒壅結(jié)所致各類病癥等)方面涉及的實驗數(shù)據(jù)。[0076]一、體外培育牛黃對腫瘤細胞增殖抑制作用的實驗數(shù)據(jù)[0077]實驗?zāi)康模禾骄矿w外培育牛黃對常見腫瘤細胞系(如人肝癌細胞系HepG2、人肺癌[0079]體外培育牛黃樣品，經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量檢測和標(biāo)準(zhǔn)化處理。[0080]上述各腫瘤細胞系，由專業(yè)細胞庫提供，細胞培養(yǎng)條件嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進行。細胞培養(yǎng)及檢測相關(guān)試劑。[0083]將腫瘤細胞以一定的細胞密度(如每孔5×103個細胞)接種于96孔培養(yǎng)板中，在含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時，使細胞貼壁生長。[0084]分別設(shè)置不同濃度的體外培育牛黃處理組(如0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL等),每組設(shè)置多個復(fù)孔，同時設(shè)置空白對照組(只加培養(yǎng)基)和陽性對照組(加入已知的腫瘤細胞增殖抑制劑，如順鉑等)。[0085]將體外培育牛黃樣品用培養(yǎng)基稀釋至相應(yīng)濃度后，加入到各處理組的培養(yǎng)孔中，[0086]在各時間點結(jié)束培養(yǎng)后，每孔加入MTT試劑(5mg/mL),繼續(xù)培養(yǎng)4小時，然后小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加入DMS0150μL,振蕩10分鐘使結(jié)晶物充分溶解。[0087]使用酶標(biāo)儀在490nm波長處測定各孔的吸光度值(OD值),根據(jù)OD值計算細胞增殖抑制率，公式為：抑制率=(1-處理組OD值/對照組OD值)×100%。9外培育牛黃濃度細胞增殖抑制細胞增殖抑制細胞增殖抑制549細胞增殖抑制率549細胞增殖抑制率549細胞增殖抑制率3細胞增殖抑制GC-803細胞增殖抑制GC-803細胞增殖抑制小時)率(48小時)率(72小時)小時)小時)小時)小時)率(48小時)率(72小時)±±2.1%±±±±±±±±22.1%±±±±±±±士±±±20.1%±±±4.1%±±±1±±±士±±士士±2±±6.1%±±±±6.1%士±±[0091]二、體外培育牛黃對慢性乙型肝炎病毒復(fù)制抑制作用的實驗數(shù)據(jù)實驗?zāi)康模貉芯矿w外培育牛黃對慢性乙型肝炎病毒(HBV)復(fù)制的影響。實驗材料：[0092]體外培育牛黃樣品。[0093]HBV感染的人肝癌細胞系(如HepG2.2.15細胞系，該細胞系能夠穩(wěn)定表達HBV病毒顆粒)。[0094]DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清、乙肝病毒核酸定量檢測試劑盒(熒光定量PCR法)、細胞培養(yǎng)相關(guān)試劑等。[0095]實驗方法：[0096]將HepG2.2.15細胞以適當(dāng)?shù)募毎芏?如每孔1×10?個細胞)接種于24孔培養(yǎng)板中，在含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)至細胞貼壁生長。[0097]設(shè)置不同濃度的體外培育牛黃處理組(如0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.5mg/mL等),每組設(shè)置多個復(fù)孔，同時設(shè)置空白對照組(只加培養(yǎng)基)和陽性對照組(加入已知的[0098]將體外培育牛黃樣品用培養(yǎng)基稀釋至相應(yīng)濃度后，加入到各處理組的培養(yǎng)孔中，繼續(xù)培養(yǎng)7天、14天等不同時間點。[0099]在各時間點結(jié)束培養(yǎng)后，收集細胞培養(yǎng)上清液，按照乙肝病毒核酸定量檢測試劑盒的操作說明，采用熒光定量PCR法檢測上清液中HBVDNA的含量，以評估HBV病毒的復(fù)制水[0100]實驗結(jié)果見表格二：體外培育牛黃濃度(copies/mL,7天)(copies/mL,14天)[0102]三、體外培育牛黃對熱毒壅結(jié)所致病癥相關(guān)炎癥指標(biāo)影響的實驗數(shù)據(jù)[0103]實驗?zāi)康模嚎疾祗w外培育牛黃對熱毒壅結(jié)所致病癥(如癰疽疔毒、瘰疬、流注等模型動物)相關(guān)炎癥指標(biāo)的影響。[0104]實驗材料：[0105]體外培育牛黃樣品。[0106]實驗動物(如大鼠或小鼠),用于建立熱毒壅結(jié)所致病癥的動物模型，一般選用健康、體重相近的動物，雌雄各半。[0107]脂多糖(LPS)等造模試劑，用于誘導(dǎo)動物體內(nèi)炎癥反應(yīng)，模擬熱毒壅結(jié)狀態(tài)。[0108]炎癥相關(guān)指標(biāo)檢測試劑盒(如白細胞介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-a(TNF-a)、C反應(yīng)蛋白(CRP)等檢測試劑盒),用于測定動物血液及組織中的炎癥指標(biāo)。[0