—PAGE—《GB/T36775-2018柑橘斑點(diǎn)病菌檢疫鑒定方法》實(shí)施指南目錄一、為何《GB/T36775-2018》是柑橘產(chǎn)業(yè)檢疫核心？專家視角解析標(biāo)準(zhǔn)制定背景、目的及未來5年行業(yè)適配性二、柑橘斑點(diǎn)病菌究竟有何特性？依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)深入剖析病菌分類、形態(tài)與生理生化特征，破解鑒定難點(diǎn)三、如何規(guī)范開展樣本采集與處理？對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)詳解流程要點(diǎn)，規(guī)避常見錯(cuò)誤，保障后續(xù)鑒定準(zhǔn)確性四、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)有哪些關(guān)鍵技術(shù)？按標(biāo)準(zhǔn)拆解分離培養(yǎng)、形態(tài)觀察等方法，專家支招提升檢測(cè)效率五、分子生物學(xué)鑒定如何精準(zhǔn)應(yīng)用？結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)闡述技術(shù)原理與操作步驟，預(yù)判未來技術(shù)升級(jí)方向六、結(jié)果判定與報(bào)告編制有何規(guī)范？依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)明確判定準(zhǔn)則與報(bào)告要素，確保檢疫結(jié)論權(quán)威有效七、標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施中易遇哪些問題？專家梳理常見疑點(diǎn)并給出解決方案，助力行業(yè)順利落地應(yīng)用八、如何通過標(biāo)準(zhǔn)防控病害傳播？結(jié)合行業(yè)熱點(diǎn)分析檢疫措施，預(yù)測(cè)未來病害防控發(fā)展趨勢(shì)九、標(biāo)準(zhǔn)與國(guó)際檢疫要求如何銜接？深度剖析差異與協(xié)同點(diǎn)，為柑橘進(jìn)出口貿(mào)易提供指導(dǎo)十、未來如何優(yōu)化標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用？基于行業(yè)發(fā)展趨勢(shì)，專家提出完善建議，提升標(biāo)準(zhǔn)指導(dǎo)性與前瞻性一、為何《GB/T36775-2018》是柑橘產(chǎn)業(yè)檢疫核心？專家視角解析標(biāo)準(zhǔn)制定背景、目的及未來5年行業(yè)適配性（一）標(biāo)準(zhǔn)制定的核心背景是什么？從柑橘產(chǎn)業(yè)安全需求看標(biāo)準(zhǔn)出臺(tái)必要性柑橘作為我國(guó)重要經(jīng)濟(jì)作物，產(chǎn)業(yè)規(guī)模逐年擴(kuò)大，但柑橘斑點(diǎn)病菌引發(fā)的病害對(duì)產(chǎn)業(yè)威脅極大。該病菌傳播速度快、危害范圍廣，一旦大面積爆發(fā)，將導(dǎo)致柑橘減產(chǎn)、品質(zhì)下降，嚴(yán)重影響果農(nóng)收益與產(chǎn)業(yè)穩(wěn)定。此前，我國(guó)柑橘斑點(diǎn)病菌檢疫鑒定缺乏統(tǒng)一、規(guī)范的方法，各檢疫機(jī)構(gòu)檢測(cè)流程不一，鑒定結(jié)果準(zhǔn)確性和一致性難以保障，給病害防控帶來極大挑戰(zhàn)。在此背景下，《GB/T36775-2018柑橘斑點(diǎn)病菌檢疫鑒定方法》應(yīng)運(yùn)而生，為全國(guó)范圍內(nèi)的檢疫工作提供統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，是保障柑橘產(chǎn)業(yè)安全的迫切需求，必要性不言而喻。（二）標(biāo)準(zhǔn)制定的主要目的有哪些？如何助力柑橘產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展該標(biāo)準(zhǔn)制定的主要目的，一是統(tǒng)一柑橘斑點(diǎn)病菌檢疫鑒定的技術(shù)方法，確保不同地區(qū)、不同機(jī)構(gòu)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性，避免因方法差異導(dǎo)致的誤判、漏判。二是明確檢疫鑒定各環(huán)節(jié)的操作規(guī)范，為檢疫人員提供清晰、可執(zhí)行的技術(shù)指引，提升檢疫工作效率。三是通過精準(zhǔn)檢疫鑒定，及時(shí)發(fā)現(xiàn)和阻斷柑橘斑點(diǎn)病菌的傳播路徑，有效防控病害擴(kuò)散，減少病害對(duì)柑橘生產(chǎn)的危害。通過這些目的的實(shí)現(xiàn)，能夠穩(wěn)定柑橘產(chǎn)量與品質(zhì)，保障果農(nóng)經(jīng)濟(jì)利益，維護(hù)柑橘產(chǎn)業(yè)供應(yīng)鏈穩(wěn)定，進(jìn)而推動(dòng)整個(gè)柑橘產(chǎn)業(yè)健康、可持續(xù)發(fā)展。（三）未來5年柑橘產(chǎn)業(yè)發(fā)展趨勢(shì)下，標(biāo)準(zhǔn)為何能保持適配性？專家視角分析未來5年，柑橘產(chǎn)業(yè)將朝著規(guī)?；?、集約化、高品質(zhì)化方向發(fā)展，同時(shí)進(jìn)出口貿(mào)易會(huì)更加頻繁，對(duì)檢疫鑒定的要求也將更高。從專家視角來看，《GB/T36775-2018》在制定時(shí)充分考慮了產(chǎn)業(yè)發(fā)展的前瞻性。標(biāo)準(zhǔn)中涵蓋的多種鑒定方法，既包括傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)鑒定，也包含先進(jìn)的分子生物學(xué)鑒定技術(shù)，能夠適應(yīng)未來產(chǎn)業(yè)對(duì)檢測(cè)精準(zhǔn)度和效率提升的需求。此外，標(biāo)準(zhǔn)對(duì)樣本采集、處理、結(jié)果判定等環(huán)節(jié)的規(guī)范，具有較強(qiáng)的通用性和靈活性，可根據(jù)產(chǎn)業(yè)發(fā)展中出現(xiàn)的新情況、新問題進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。而且，標(biāo)準(zhǔn)與我國(guó)相關(guān)法律法規(guī)及產(chǎn)業(yè)政策相契合，能夠在未來5年柑橘產(chǎn)業(yè)發(fā)展中持續(xù)發(fā)揮作用，保持良好的適配性。二、柑橘斑點(diǎn)病菌究竟有何特性？依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)深入剖析病菌分類、形態(tài)與生理生化特征，破解鑒定難點(diǎn)（一）柑橘斑點(diǎn)病菌在分類學(xué)上如何定位？標(biāo)準(zhǔn)明確的分類體系有何意義依據(jù)《GB/T36775-2018》，柑橘斑點(diǎn)病菌屬于半知菌亞門、腔孢綱、球殼孢目、球殼孢科、葉點(diǎn)霉屬。該分類體系并非隨意劃分，而是基于病菌的遺傳特性、形態(tài)特征及生理生化反應(yīng)等多方面因素確定。這一明確的分類定位具有重要意義，一方面，它使檢疫人員能夠清晰了解該病菌在微生物分類學(xué)中的位置，明確其與其他類似病菌的親緣關(guān)系，為后續(xù)開展鑒定工作提供分類學(xué)基礎(chǔ)。另一方面，統(tǒng)一的分類體系便于國(guó)內(nèi)外檢疫機(jī)構(gòu)之間的交流與合作，在柑橘進(jìn)出口貿(mào)易檢疫中，可避免因分類標(biāo)準(zhǔn)不同而產(chǎn)生的溝通障礙，確保檢疫工作順利開展，同時(shí)也為病菌的研究工作，如病害發(fā)生機(jī)制、防控技術(shù)研發(fā)等提供了統(tǒng)一的研究對(duì)象界定。（二）柑橘斑點(diǎn)病菌的形態(tài)特征有哪些？標(biāo)準(zhǔn)描述的關(guān)鍵識(shí)別要點(diǎn)是什么根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)描述，柑橘斑點(diǎn)病菌的形態(tài)特征具有明顯辨識(shí)度。其分生孢子器呈球形或扁球形，黑色，埋生或半埋生于寄主組織中，頂端有孔口，用于釋放分生孢子。分生孢子橢圓形或卵圓形，單胞，無色透明，大小通常在一定范圍內(nèi)（標(biāo)準(zhǔn)中明確具體尺寸范圍）。菌絲體無色至淡褐色，有隔膜，分枝發(fā)達(dá)。標(biāo)準(zhǔn)中強(qiáng)調(diào)的關(guān)鍵識(shí)別要點(diǎn)包括分生孢子器的形狀、顏色及著生方式，分生孢子的形態(tài)、大小和顏色，以及菌絲體的特征。這些關(guān)鍵識(shí)別要點(diǎn)是檢疫人員在形態(tài)學(xué)鑒定中區(qū)分柑橘斑點(diǎn)病菌與其他類似病菌的重要依據(jù)，只有準(zhǔn)確掌握這些特征，才能在顯微鏡觀察等環(huán)節(jié)快速、準(zhǔn)確地識(shí)別該病菌，為后續(xù)鑒定工作奠定基礎(chǔ)。（三）柑橘斑點(diǎn)病菌的生理生化特征有哪些？如何通過這些特征輔助鑒定《GB/T36775-2018》詳細(xì)列出了柑橘斑點(diǎn)病菌的生理生化特征，該病菌在不同培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)表現(xiàn)不同，例如在PDA培養(yǎng)基上，菌落初期為白色，后期逐漸變?yōu)榈稚梁稚湫螒B(tài)呈圓形或不規(guī)則形，邊緣整齊或不整齊。病菌對(duì)溫度、pH值等環(huán)境條件有特定要求，最適生長(zhǎng)溫度在25-28℃，最適pH值在6.0-7.0。在生理生化反應(yīng)方面，該病菌能利用某些特定的碳源和氮源，而對(duì)另一些碳源和氮源利用能力較弱或不能利用，同時(shí)在過氧化氫酶反應(yīng)、氧化酶反應(yīng)等生化試驗(yàn)中呈現(xiàn)特定結(jié)果。通過這些生理生化特征，可輔助進(jìn)行病菌鑒定，檢疫人員可通過配制特定培養(yǎng)基、控制培養(yǎng)環(huán)境條件，觀察病菌生長(zhǎng)情況和生化反應(yīng)結(jié)果，與標(biāo)準(zhǔn)描述的特征進(jìn)行比對(duì)，進(jìn)一步確認(rèn)病菌種類，提高鑒定的準(zhǔn)確性。（四）在病菌特性識(shí)別中存在哪些鑒定難點(diǎn)？專家如何支招破解在柑橘斑點(diǎn)病菌特性識(shí)別過程中，存在一些鑒定難點(diǎn)。一是該病菌的某些形態(tài)特征與其他葉點(diǎn)霉屬病菌相似，如部分分生孢子的大小、形狀差異較小，在顯微鏡下難以準(zhǔn)確區(qū)分。二是病菌的生理生化特征會(huì)受培養(yǎng)條件波動(dòng)的影響，如培養(yǎng)基成分細(xì)微變化、培養(yǎng)溫度偏差等，可能導(dǎo)致病菌生長(zhǎng)表現(xiàn)和生化反應(yīng)結(jié)果出現(xiàn)差異，干擾鑒定判斷。針對(duì)這些難點(diǎn)，專家支招：對(duì)于形態(tài)相似的問題，可結(jié)合分子生物學(xué)鑒定技術(shù)，通過檢測(cè)病菌特定基因片段，從遺傳層面準(zhǔn)確區(qū)分；對(duì)于培養(yǎng)條件影響的問題，檢疫人員需嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)要求配制培養(yǎng)基、控制培養(yǎng)環(huán)境參數(shù)，確保培養(yǎng)條件的一致性和穩(wěn)定性，同時(shí)進(jìn)行多次重復(fù)試驗(yàn)，減少偶然因素對(duì)結(jié)果的影響，還可通過同時(shí)培養(yǎng)已知標(biāo)準(zhǔn)菌株作為對(duì)照，更直觀地判斷待檢菌株的特性。三、如何規(guī)范開展樣本采集與處理？對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)詳解流程要點(diǎn)，規(guī)避常見錯(cuò)誤，保障后續(xù)鑒定準(zhǔn)確性（一）樣本采集的范圍和對(duì)象如何確定？標(biāo)準(zhǔn)要求的采集原則有哪些對(duì)照《GB/T36775-2018》，樣本采集的范圍需涵蓋可能攜帶柑橘斑點(diǎn)病菌的柑橘植株各部位及相關(guān)載體，包括柑橘的葉片、果實(shí)、枝條，以及苗木、接穗等繁殖材料，還有可能傳播病菌的土壤、包裝材料等。采集對(duì)象應(yīng)優(yōu)先選擇出現(xiàn)疑似病害癥狀的植株或材料，如葉片上出現(xiàn)褐色斑點(diǎn)、果實(shí)上有凹陷病斑的個(gè)體，同時(shí)也要采集一定數(shù)量的健康樣本作為對(duì)照。標(biāo)準(zhǔn)要求的采集原則主要有代表性原則，即采集的樣本要能代表被檢測(cè)區(qū)域柑橘的整體情況，避免片面性；隨機(jī)性原則，在確定采集范圍后，隨機(jī)選取樣本，減少人為因素干擾；及時(shí)性原則，發(fā)現(xiàn)疑似病害跡象后，需及時(shí)采集樣本，防止病菌擴(kuò)散或樣本變質(zhì)；適量性原則，樣本數(shù)量要足夠滿足鑒定需求，同時(shí)避免過度采集造成資源浪費(fèi)，標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)不同類型樣本的采集數(shù)量有明確規(guī)定，需嚴(yán)格遵循。（二）樣本采集的工具和設(shè)備有哪些？如何確保工具設(shè)備符合標(biāo)準(zhǔn)要求標(biāo)準(zhǔn)明確了樣本采集所需的工具和設(shè)備，主要包括采樣袋（需為無菌、透氣材質(zhì)）、采樣刀、剪刀、鑷子（均需經(jīng)過滅菌處理）、標(biāo)簽、記號(hào)筆、便攜式冷藏箱、手套、防護(hù)服等。為確保工具設(shè)備符合標(biāo)準(zhǔn)要求，首先，工具設(shè)備的材質(zhì)要符合相關(guān)衛(wèi)生和安全標(biāo)準(zhǔn)，如采樣袋需無異味、不釋放有害物質(zhì)，避免污染樣本；采樣刀具、剪刀等需為不銹鋼材質(zhì)，便于滅菌和清潔。其次，所有與樣本直接接觸的工具，在使用前必須經(jīng)過嚴(yán)格滅菌處理，可采用高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌或酒精擦拭消毒等方式，具體滅菌方法需符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。再者，便攜式冷藏箱需能保持適宜的低溫環(huán)境（通常為0-4℃），確保樣本在運(yùn)輸過程中保持新鮮，避免病菌活性發(fā)生變化。此外，要定期對(duì)工具設(shè)備進(jìn)行檢查和維護(hù)，如查看采樣袋是否有破損、冷藏箱制冷效果是否良好等，不符合要求的工具設(shè)備需及時(shí)更換。（三）樣本采集的具體操作步驟是什么？每個(gè)步驟的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范有哪些樣本采集的具體操作步驟需嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行，第一步，準(zhǔn)備工作，將所需工具設(shè)備進(jìn)行滅菌處理，穿戴好手套、防護(hù)服，在采樣袋和標(biāo)簽上標(biāo)注采樣地點(diǎn)、日期、樣本類型、采集人等信息。第二步，選取樣本，根據(jù)采集原則，在確定的采集區(qū)域內(nèi)，選取疑似病株和健康植株作為樣本來源。第三步，采集樣本，用滅菌后的采樣刀、剪刀等工具，從植株上采集葉片、果實(shí)或枝條等樣本，葉片樣本需帶部分健康組織，果實(shí)樣本需包含完整病斑及周圍健康組織，采集過程中避免工具交叉使用，防止樣本交叉污染。第四步，裝袋保存，將采集好的樣本分別裝入對(duì)應(yīng)的無菌采樣袋中，排出袋內(nèi)多余空氣后密封，貼上標(biāo)簽。第五步，冷藏運(yùn)輸，將裝有樣本的采樣袋放入便攜式冷藏箱中，保持低溫環(huán)境，盡快運(yùn)往實(shí)驗(yàn)室。每個(gè)步驟的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范都圍繞防止樣本污染、保證樣本完整性和新鮮度展開，如操作過程中不得用手直接接觸樣本，采樣工具每使用一次需重新滅菌，樣本裝袋后需及時(shí)冷藏等。（四）樣本處理過程中有哪些常見錯(cuò)誤？如何依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)避這些錯(cuò)誤在樣本處理過程中，常見錯(cuò)誤主要有樣本標(biāo)簽信息不全或錯(cuò)誤，導(dǎo)致后續(xù)無法追溯樣本來源；樣本在運(yùn)輸過程中未保持低溫環(huán)境，造成樣本變質(zhì)或病菌活性降低；樣本處理前未進(jìn)行表面消毒，導(dǎo)致表面雜菌污染，影響鑒定結(jié)果；樣本分割時(shí)操作不規(guī)范，破壞病斑組織，無法準(zhǔn)確提取病菌。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)可從以下方面規(guī)避這些錯(cuò)誤：對(duì)于標(biāo)簽問題，嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)要求，在采樣時(shí)詳細(xì)填寫標(biāo)簽信息，確保信息準(zhǔn)確、完整，且采樣袋與標(biāo)簽信息保持一致，運(yùn)輸和處理過程中避免標(biāo)簽脫落；對(duì)于運(yùn)輸溫度問題，使用符合標(biāo)準(zhǔn)的便攜式冷藏箱，在箱內(nèi)放置冰袋等降溫材料，定期檢查溫度，確保全程處于0-4℃低溫環(huán)境；對(duì)于表面消毒問題，按照標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的消毒方法（如用一定濃度的次氯酸鈉溶液浸泡或擦拭）對(duì)樣本進(jìn)行表面消毒，消毒時(shí)間和藥劑濃度需嚴(yán)格控制；對(duì)于樣本分割問題，使用滅菌后的工具，按照標(biāo)準(zhǔn)要求的分割方式（如從病斑與健康組織交界處分割）進(jìn)行操作，避免破壞病斑關(guān)鍵部位。（五）樣本處理后的保存條件和期限是怎樣的？如何保障樣本在保存期間質(zhì)量穩(wěn)定標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定樣本處理后，若不能立即進(jìn)行鑒定，需在特定條件下保存，保存條件主要為低溫冷藏，溫度控制在0-4℃，對(duì)于某些特殊樣本（如需要長(zhǎng)期保存的菌株），可采用冷凍保存，溫度為-20℃以下或-80℃超低溫保存。保存期限根據(jù)樣本類型和鑒定需求而定，一般情況下，新鮮樣本的保存期限不超過7天，菌株樣本在合適的保存條件下可保存較長(zhǎng)時(shí)間，但需定期復(fù)蘇和檢測(cè)，確保菌株活性。為保障樣本在保存期間質(zhì)量穩(wěn)定，首先，保存容器需無菌、密封，防止樣本受到污染或水分流失；其次，嚴(yán)格控制保存溫度，避免溫度波動(dòng)過大，低溫冷藏設(shè)備需定期檢查和維護(hù)，確保制冷效果；再者，對(duì)保存的樣本進(jìn)行定期檢查，觀察樣本是否有變質(zhì)、發(fā)霉等情況，菌株樣本需按照標(biāo)準(zhǔn)要求的時(shí)間間隔進(jìn)行復(fù)蘇培養(yǎng)，檢測(cè)菌株的形態(tài)和生理生化特征是否發(fā)生變化，若出現(xiàn)異常，需及時(shí)采取補(bǔ)救措施。四、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)有哪些關(guān)鍵技術(shù)？按標(biāo)準(zhǔn)拆解分離培養(yǎng)、形態(tài)觀察等方法，專家支招提升檢測(cè)效率（一）病菌分離培養(yǎng)技術(shù)的核心要點(diǎn)是什么？標(biāo)準(zhǔn)推薦的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件有哪些病菌分離培養(yǎng)技術(shù)是實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的基礎(chǔ)環(huán)節(jié)，其核心要點(diǎn)在于避免雜菌污染，確保從樣本中成功分離出目標(biāo)病菌。操作時(shí)，需對(duì)樣本進(jìn)行表面消毒處理，去除表面附著的雜菌，然后用無菌工具從病斑與健康組織交界處切取小塊組織，接種到培養(yǎng)基上。標(biāo)準(zhǔn)推薦的培養(yǎng)基主要有PDA培養(yǎng)基（馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基）、OA培養(yǎng)基（燕麥瓊脂培養(yǎng)基）等，其中PDA培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)豐富，適合多種真菌生長(zhǎng)，是柑橘斑點(diǎn)病菌分離培養(yǎng)的常用培養(yǎng)基，OA培養(yǎng)基則在某些情況下能更好地促進(jìn)病菌分生孢子的產(chǎn)生，便于后續(xù)形態(tài)觀察。培養(yǎng)條件方面，標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定培養(yǎng)溫度控制在25-28℃，培養(yǎng)時(shí)間為5-7天，培養(yǎng)過程中需保持黑暗或弱光環(huán)境，避免光照對(duì)病菌生長(zhǎng)產(chǎn)生不利影響。同時(shí)，要定期觀察培養(yǎng)基上菌落的生長(zhǎng)情況，及時(shí)記錄菌落的形態(tài)、顏色、生長(zhǎng)速度等特征，以便后續(xù)鑒定。（二）如何進(jìn)行病菌的純化培養(yǎng)？標(biāo)準(zhǔn)要求的純化方法和操作規(guī)范有哪些病菌的純化培養(yǎng)是為了獲得單一菌株，排除雜菌干擾，為后續(xù)鑒定提供純凈的病菌材料。標(biāo)準(zhǔn)要求的純化方法主要有劃線分離法和挑取單菌落法。劃線分離法是將經(jīng)過初步分離培養(yǎng)得到的菌落，用無菌接種環(huán)在新鮮的培養(yǎng)基表面進(jìn)行連續(xù)劃線，使病菌細(xì)胞在培養(yǎng)基上均勻分布，經(jīng)過培養(yǎng)后，可在劃線末端形成單菌落。挑取單菌落法是在初步分離培養(yǎng)的培養(yǎng)基上，選擇形態(tài)特征與柑橘斑點(diǎn)病菌相符的單菌落，用無菌接種針挑取少量菌絲或孢子，接種到新的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。操作規(guī)范方面，首先，所有操作需在無菌操作臺(tái)上進(jìn)行，操作人員需穿戴無菌手套、口罩，避免人為污染；其次，接種工具在使用前后都需經(jīng)過滅菌處理，劃線分離時(shí)力度要適中，避免劃破培養(yǎng)基；再者，挑取單菌落時(shí)，要仔細(xì)觀察菌落形態(tài)，確保挑取的是目標(biāo)病菌的單菌落，避免挑取到雜菌菌落；最后，純化培養(yǎng)后的菌株需進(jìn)行編號(hào)和標(biāo)記，記錄純化日期、來源等信息，按照標(biāo)準(zhǔn)要求的條件進(jìn)行保存。（三）形態(tài)觀察技術(shù)在檢測(cè)中的作用是什么？標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的觀察方法和判定指標(biāo)有哪些形態(tài)觀察技術(shù)是通過