ICS65.020.20CCSB61DB6111楊凌農業(yè)高新技術產業(yè)示范區(qū)地方標準Technicalstandardforvirus-freebreedingofstrawberryseedlings楊凌示范區(qū)市場監(jiān)督管理局發(fā)布IDB6111/T171—2021本文件依據(jù)GB/T1.1-2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》起草。本文件由楊凌龍德盛農業(yè)科技有限公司提出。本文件由楊凌示范區(qū)農業(yè)標準化技術委員會歸口。本文件起草單位：楊凌龍德盛農業(yè)科技有限公司、西北農林科技大學、蛟河市草莓研究所。本文件主要起草人：趙磊、李懷財、劉占杰、巨興耀、吳云鋒。本文件由楊凌龍德盛農業(yè)科技有限公司、西北農林科技大學負責解釋。聯(lián)系人：趙磊聯(lián)系方式18792627895聯(lián)系地址：楊凌示范區(qū)邰城路3號DB6111/T171—20211草莓脫毒苗育苗技術規(guī)程本文件規(guī)定了草莓脫毒苗育苗技術的術語與定義、脫毒原原種苗、脫毒原種苗和脫毒商品苗的生產技術。本文件適用于楊凌示范區(qū)草莓脫毒苗的培育管理。生態(tài)環(huán)境、物候條件相似地區(qū)可參考執(zhí)行。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。NY/T406-2000脫毒草莓種苗病毒檢測技術規(guī)程3術語和定義下列術語與定義適用于本文件。3.1莖尖培養(yǎng)脫毒methodforviruseliminationbyshoottipculture用植株莖尖經組織培養(yǎng)獲得脫毒植株的過程。3.2超低溫脫毒methodforviruseliminationbycryotherapy植株莖尖經過預培養(yǎng)、冷凍保護劑（PVS2）處理、液氮冷凍、復蘇后組織培養(yǎng)，獲得脫毒植株的過程。3.3熱處理脫毒thermotherapy-basedmethodforviruseradication組培苗在35℃~40℃條件下，光照繼代培養(yǎng)1個月～2個月，取莖尖經組織培養(yǎng)獲得脫毒植株的過程。3.4脫毒原原種苗breeder’sviruseradicationstock經脫毒處理的原始植株。3.52DB6111/T171—2021脫毒原種苗originalviruseradicationstock用脫毒原原種苗匍匐莖繁殖出的脫毒植株。3.6脫毒商品苗viruseradicationculturestock用脫毒原種苗匍匐莖繁殖出的脫毒植株。4脫毒原原種苗生產4.1外植體建立在封閉無害蟲的設施內選擇表現(xiàn)品種特性的健壯待脫毒植株，采集2cm匍匐莖頂端，置于組培瓶中，加入適量中性洗滌劑在流動的自來水下沖洗1h～2h。用75%乙醇表面消毒30s，再用2%次氯酸鈉溶液消毒10min，無菌水沖洗5遍。用濾紙吸干水分，將莖尖置于MS＋0.1mg/LNAA＋0.5mg/L6-BA＋8g/L瓊脂＋30g/L蔗糖(pH5.8)培養(yǎng)基中無菌培養(yǎng)1個月左右。培養(yǎng)條件為溫度23℃,光照時間16h/d，光照強度2400Lx。4.2病毒檢測培養(yǎng)得到的外植體，按NY/T406-2000的規(guī)定檢測病毒。4.3檢測后處理4.3.1無毒外植體直接作為脫毒苗原原種使用。4.3.2帶毒外植體4.3.2.1莖尖培養(yǎng)經檢測只攜帶草莓輕型黃邊病毒的外植體，在超凈工作臺中用無菌刀片切取0.2mm～0.5mm生長點莖尖，接種到MS＋0.05mg/LNAA＋0.3mg/L6-BA＋8g/L瓊脂＋30g/L蔗糖培養(yǎng)基中，在23℃,光照時間16h/d，光照強度2400Lx條件下培養(yǎng)50d～60d。注：超凈工作臺使用前打開紫外消毒燈消毒30min，關閉紫外燈，打開風機用中等風量通風1h后方可使用。無菌刀片使用前，用75%酒精消毒，再在酒精燈上燒1min以上，冷4.3.2.2超低溫脫毒經檢測攜帶草莓斑駁病毒（strawberrymottlevirus,SMoV）或同時攜帶草莓斑駁病毒與草莓輕型黃邊病毒（strawberrymildyellowedgevirus,SMYEV）的組培苗，在超凈工作臺中用無菌刀片切取1.0mm～2.0mm草莓生長點莖尖，接種到MS＋2mol/L甘油＋0.3mol/L蔗糖的預培養(yǎng)基上，在4℃黑暗條件下培養(yǎng)3d。切取1.0mm～2.0mm莖尖，在室溫下用60%PVS2（含0.6mol/L蔗糖的MS與100%PVS2體積比2:3混合）加載40min，更換100%PVS2于0℃條件下處理1h。將莖尖轉移至裝有新鮮100%PVS2冷凍管中，投入液氮30min～60min。在40℃水浴鍋中解凍2min，用MS＋1.2mol/L蔗糖培養(yǎng)基沖洗DB6111/T171—202132～3次，每次10min。將莖尖置于MS＋0.05mg/LNAA＋0.3mg/L6-BA＋8g/L瓊脂＋30g/L蔗糖培養(yǎng)基中，在23℃下黑暗培養(yǎng)1周，轉入23℃、光照時間16h/d、光照強度2400Lx環(huán)境下培養(yǎng)50d～60d。4.3.2.3熱處理經檢測攜帶草莓鑲脈病毒（strawberryveinbandingvirus,SVBV）或同時攜帶草莓鑲脈病毒及其它病毒的外植體，將組培苗置于白天36℃、黑夜32℃,光照時間16h/d，光照強度2400Lx的條件下培養(yǎng)30d。在超凈工作臺中用無菌刀片切取0.5mm左右的草莓生產點莖尖，接種到MS＋0.05mg/LNAA+0.3mg/L6-BA＋8g/L瓊脂＋30g/L蔗糖培養(yǎng)基中，在23℃、光照時間16h/d、光照強度2400Lx的條件下培養(yǎng)50d～60d。4.4莖尖分化按照4.4處理過的莖尖分化成帶有葉原基的小芽后，轉移到新的分化培養(yǎng)基中。長出葉片后，轉移到MS＋0.05mg/LBA＋0.02mg/LIBA＋0.1mg/LGA3＋8g/L瓊脂＋30g/L蔗糖中，在23℃、光照時間16h/d、光照強度2400Lx的條件下培養(yǎng)50d～60d。4.5病毒檢測莖尖分化成苗后，按NY/T406-2000的規(guī)定檢測病毒。4.6檢測后處理淘汰帶毒植株，保留無毒植株。4.7無毒植株培育4.7.1生根無毒植株剪去基部小芽，接種于1/2MS＋0.1mg/LIBA＋6g/L瓊脂＋30g/L蔗糖的生根培養(yǎng)基中，在23℃、光照時間16h/d、光照強度2400Lx的條件下培養(yǎng)30d～40d后。4.7.2移栽在100目防蟲網(wǎng)溫室中練苗7d。取出組培苗，用清水沖洗干凈培養(yǎng)基，移栽于穴盤中（培養(yǎng)基質配方為草炭土：蛭石：椰糠=1:1:1）。置于有100目防蟲網(wǎng)的溫室中，在穴盤上搭建小拱棚，覆蓋塑料薄膜，控制溫度15℃~25℃。移栽后7d內濕度保持在80%以上，7d后逐漸降低濕度。生長50d～60d即獲得可定植的脫毒原原種苗。5脫毒原種苗生產脫毒原原種苗抽生匍匐莖后，疏理匍匐莖蔓，使其伸展分布在子苗槽內并固定，保證通風透光。匍匐莖抽生出的苗即為脫毒原種苗。6脫毒商品苗生產6.1生產方式脫毒原種苗在100目防蟲網(wǎng)室中抽生匍匐莖后，疏理匍匐莖蔓，使其伸展分布在子苗槽內并固定，保證通風透光。匍匐莖抽生出的苗即為脫毒商品苗。DB6111/T171—202146.2培育管理水肥要小水勤澆，脫毒原種苗定植20d后開始沖施水溶肥，每次沖施5kg/667m2。第一次N:P:K比例為15:15:15；10d后沖施第二次，N:P:K比例為15:10:10；20d后沖施第三次，N:P:K比例為15:8:30。匍匐莖大量發(fā)生時期，沖施3次含腐殖酸的水溶肥，每次5kg/667m2，N:P:K比例為15:15:15，每次間隔10d。及時摘除枯黃老葉、殘葉。6.3起苗一般在每年的8月中旬到9月中旬，苗齡90d～120d時，根據(jù)生產需