天津pcr上崗證考試題庫(kù)及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的基本原理是（）A.基因重組B.核酸分子雜交C.體外DNA復(fù)制D.基因克隆答案：C2.在PCR反應(yīng)中，引物的作用是（）A.提供起始的DNA模板B.提供合成DNA的原料C.提供DNA聚合酶的結(jié)合位點(diǎn)D.提供DNA連接酶的結(jié)合位點(diǎn)答案：C3.PCR反應(yīng)中，變性溫度一般為（）A.90-95℃B.70-75℃C.50-55℃D.30-35℃答案：A4.以下哪種酶是PCR反應(yīng)所必需的（）A.限制酶B.DNA連接酶C.TaqDNA聚合酶D.逆轉(zhuǎn)錄酶答案：C5.PCR產(chǎn)物的特異性主要取決于（）A.模板B.引物C.溫度D.緩沖液答案：B6.在PCR反應(yīng)體系中，dNTP的作用是（）A.提供能量B.構(gòu)建DNA鏈的原料C.穩(wěn)定反應(yīng)體系D.激活酶的活性答案：B7.以下關(guān)于PCR循環(huán)次數(shù)的說(shuō)法正確的是（）A.循環(huán)次數(shù)越多越好B.一般為20-30次C.只需要進(jìn)行10次D.循環(huán)次數(shù)由模板量決定，與其他因素?zé)o關(guān)答案：B8.PCR反應(yīng)的退火溫度主要取決于（）A.引物的長(zhǎng)度和GC含量B.模板的長(zhǎng)度和GC含量C.酶的活性D.dNTP的濃度答案：A9.對(duì)于痕量模板的PCR檢測(cè)，以下哪種方法可以提高檢測(cè)靈敏度（）A.增加循環(huán)次數(shù)B.增加模板量C.提高退火溫度D.降低引物濃度答案：A10.在進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，防止污染的關(guān)鍵措施不包括（）A.嚴(yán)格分區(qū)操作B.定期對(duì)儀器設(shè)備進(jìn)行清潔和消毒C.使用一次性耗材D.減少反應(yīng)體系的體積答案：D二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)體系包括以下哪些成分（）A.模板DNAB.引物C.TaqDNA聚合酶D.dNTPE.緩沖液答案：ABCDE2.以下哪些因素會(huì)影響PCR的擴(kuò)增效率（）A.引物的質(zhì)量B.模板的純度C.酶的活性D.dNTP的濃度E.反應(yīng)體系的pH值答案：ABCDE3.以下關(guān)于引物設(shè)計(jì)的原則正確的是（）A.引物長(zhǎng)度一般為15-30bpB.引物的GC含量在40%-60%C.引物自身不能形成二級(jí)結(jié)構(gòu)D.引物之間不能互補(bǔ)E.引物3'端要與模板嚴(yán)格配對(duì)答案：ABCDE4.在PCR實(shí)驗(yàn)中，防止污染的措施有（）A.物理隔離B.嚴(yán)格的操作規(guī)程C.采用UNG-dUTP防污染系統(tǒng)D.定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行清潔和消毒E.實(shí)驗(yàn)人員嚴(yán)格培訓(xùn)答案：ABCDE5.以下屬于PCR衍生技術(shù)的有（）A.逆轉(zhuǎn)錄PCRB.實(shí)時(shí)熒光定量PCRC.巢式PCRD.多重PCRE.原位PCR答案：ABCDE6.PCR技術(shù)在以下哪些領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用（）A.醫(yī)學(xué)診斷B.法醫(yī)學(xué)鑒定C.基因克隆D.遺傳疾病檢測(cè)E.病原體檢測(cè)答案：ABCDE7.以下關(guān)于TaqDNA聚合酶的特點(diǎn)正確的是（）A.熱穩(wěn)定性高B.缺乏3'→5'外切酶活性C.催化效率高D.最適反應(yīng)溫度為72℃E.對(duì)鎂離子濃度敏感答案：ABCDE8.影響PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果的因素有（）A.瓊脂糖的濃度B.電泳電壓C.電泳緩沖液的種類(lèi)D.溴化乙錠的濃度E.PCR產(chǎn)物的大小答案：ABCDE9.在進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR時(shí)，以下哪些指標(biāo)可以反映樣品中的初始模板量（）A.Ct值B.熒光信號(hào)強(qiáng)度C.熔解曲線D.擴(kuò)增曲線E.標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率答案：A10.在進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的要求包括（）A.清潔B.通風(fēng)良好C.溫度和濕度適宜D.無(wú)核酸污染E.空間布局合理答案：ABCDE三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)可以在常溫下進(jìn)行。（）答案：錯(cuò)誤2.引物的濃度越高，PCR擴(kuò)增效果越好。（）答案：錯(cuò)誤3.所有的DNA聚合酶都可以用于PCR反應(yīng)。（）答案：錯(cuò)誤4.PCR反應(yīng)中，延伸溫度一般為72℃。（）答案：正確5.在PCR反應(yīng)體系中，鎂離子濃度過(guò)高會(huì)抑制酶的活性。（）答案：正確6.實(shí)時(shí)熒光定量PCR只能檢測(cè)DNA模板。（）答案：錯(cuò)誤7.巢式PCR是為了提高PCR的特異性。（）答案：正確8.PCR產(chǎn)物可以直接用于基因克隆。（）答案：正確9.只要操作小心，PCR實(shí)驗(yàn)不需要防止污染。（）答案：錯(cuò)誤10.引物的3'端可以有一定的錯(cuò)配。（）答案：錯(cuò)誤四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共4題）1.簡(jiǎn)述PCR技術(shù)的主要步驟。答案：PCR主要步驟包括變性、退火和延伸。變性是將模板DNA加熱到90-95℃，使雙鏈DNA解鏈為單鏈；退火是將溫度降低到引物的退火溫度（一般50-55℃），使引物與模板單鏈結(jié)合；延伸是在72℃左右，TaqDNA聚合酶以dNTP為原料，根據(jù)模板鏈合成新的DNA鏈。2.說(shuō)明引物設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)注意的主要事項(xiàng)。答案：引物設(shè)計(jì)要注意：長(zhǎng)度15-30bp，GC含量40%-60%，自身不能形成二級(jí)結(jié)構(gòu)，引物間不能互補(bǔ)，3'端要與模板嚴(yán)格配對(duì)。3.簡(jiǎn)述在PCR實(shí)驗(yàn)中防止污染的主要方法。答案：主要方法有嚴(yán)格分區(qū)操作、使用一次性耗材、定期清潔消毒儀器設(shè)備、采用UNG-dUTP防污染系統(tǒng)、對(duì)實(shí)驗(yàn)人員嚴(yán)格培訓(xùn)等。4.闡述實(shí)時(shí)熒光定量PCR的原理。答案：在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，隨著PCR反應(yīng)進(jìn)行，每擴(kuò)增一次，熒光信號(hào)增加。通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)的變化，利用Ct值與初始模板量的反比關(guān)系來(lái)定量檢測(cè)樣品中的核酸量。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論P(yáng)CR技術(shù)在醫(yī)學(xué)診斷中的應(yīng)用價(jià)值。答案：PCR在醫(yī)學(xué)診斷中可檢測(cè)病原體核酸，如病毒、細(xì)菌等，輔助疾病診斷；可檢測(cè)基因變異，用于遺傳疾病診斷；還可用于腫瘤相關(guān)基因檢測(cè)，有助于腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)和治療方案制定。2.如何提高PCR反應(yīng)的特異性？答案：可通過(guò)優(yōu)化引物設(shè)計(jì)，保證引物特異性；調(diào)整退火溫度到合適范圍；采用巢式PCR等衍生技術(shù)；保證模板和試劑的純度等提高特異性。3.分析影響PC