畜牧系化驗(yàn)室畢業(yè)論文一.摘要

在畜牧業(yè)現(xiàn)代化進(jìn)程中，動(dòng)物疫病防控與飼料質(zhì)量檢測(cè)成為保障產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。本研究以某畜牧系化驗(yàn)室為背景，針對(duì)當(dāng)前動(dòng)物疫病檢測(cè)與飼料營(yíng)養(yǎng)分析中存在的效率與精度問(wèn)題，設(shè)計(jì)并優(yōu)化了一套綜合檢測(cè)方案。研究采用分子生物學(xué)技術(shù)、色譜分析和光譜檢測(cè)相結(jié)合的方法，對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)采集的動(dòng)物血清樣本及飼料樣品進(jìn)行系統(tǒng)性分析。通過(guò)建立多重PCR檢測(cè)體系，提高了疫病診斷的靈敏度和特異性；利用高效液相色譜法（HPLC）對(duì)飼料中主要營(yíng)養(yǎng)成分進(jìn)行定量分析，并結(jié)合近紅外光譜（NIRS）技術(shù)進(jìn)行快速篩查，有效縮短了檢測(cè)周期。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，優(yōu)化后的檢測(cè)方案可將疫病診斷時(shí)間縮短40%，飼料成分分析誤差控制在5%以?xún)?nèi)，且成本較傳統(tǒng)方法降低25%。此外，通過(guò)對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析，揭示了特定疫病與飼料營(yíng)養(yǎng)素的關(guān)聯(lián)性，為養(yǎng)殖場(chǎng)的精準(zhǔn)防控和營(yíng)養(yǎng)管理提供了科學(xué)依據(jù)。研究結(jié)論表明，集成化檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用不僅提升了化驗(yàn)室的檢測(cè)效率，也為畜牧業(yè)生產(chǎn)提供了強(qiáng)有力的技術(shù)支撐，對(duì)推動(dòng)產(chǎn)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化和智能化具有重要意義。

二.關(guān)鍵詞

動(dòng)物疫病檢測(cè)；飼料營(yíng)養(yǎng)分析；分子生物學(xué)；色譜分析；光譜檢測(cè)

三.引言

畜牧業(yè)作為國(guó)民經(jīng)濟(jì)的重要組成部分，其發(fā)展水平直接影響著食品安全、農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)優(yōu)化乃至國(guó)家經(jīng)濟(jì)穩(wěn)定。隨著全球貿(mào)易的深入和養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大，動(dòng)物疫病防控與飼料質(zhì)量監(jiān)管面臨前所未有的挑戰(zhàn)。一方面，各類(lèi)病毒性、細(xì)菌性和寄生蟲(chóng)性疫病不斷涌現(xiàn)或變異，如非洲豬瘟、高致病性禽流感等，這些疾病不僅造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，甚至威脅到公共衛(wèi)生安全；另一方面，飼料作為動(dòng)物生長(zhǎng)的基石，其營(yíng)養(yǎng)全面性、安全性及有效性直接關(guān)系到養(yǎng)殖效益和產(chǎn)品品質(zhì)。然而，傳統(tǒng)的疫病檢測(cè)方法往往存在周期長(zhǎng)、靈敏度低、假陽(yáng)性率高等問(wèn)題，而飼料營(yíng)養(yǎng)分析則常受限于檢測(cè)成本高、樣品處理復(fù)雜等限制，這些因素嚴(yán)重制約了畜牧業(yè)的精細(xì)化管理水平。

在此背景下，現(xiàn)代分析技術(shù)的應(yīng)用為解決上述難題提供了新的思路。分子生物學(xué)技術(shù)，特別是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）及其衍生技術(shù)，已成為病原體快速診斷的主流工具，其高靈敏度和高特異性在疫病早期篩查中展現(xiàn)出顯著優(yōu)勢(shì)。色譜分析技術(shù)，包括高效液相色譜（HPLC）、氣相色譜（GC）等，在飼料中蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、微量元素等營(yíng)養(yǎng)成分的定量分析中具有不可替代的作用，能夠滿(mǎn)足嚴(yán)格的監(jiān)管標(biāo)準(zhǔn)。近年來(lái)，光譜檢測(cè)技術(shù)，尤其是近紅外光譜（NIRS）和拉曼光譜，憑借其快速、無(wú)損、無(wú)需復(fù)雜前處理的特性，在飼料成分的快速篩查和質(zhì)量控制領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。將這三類(lèi)技術(shù)集成應(yīng)用于畜牧系化驗(yàn)室，構(gòu)建一套綜合性的檢測(cè)方案，有望實(shí)現(xiàn)疫病與飼料營(yíng)養(yǎng)的同步、高效、精準(zhǔn)分析，從而為養(yǎng)殖場(chǎng)提供更及時(shí)、更可靠的決策支持。

當(dāng)前，國(guó)內(nèi)外雖已開(kāi)展相關(guān)研究，但在實(shí)際應(yīng)用中仍存在諸多不足。例如，單一技術(shù)的局限性導(dǎo)致檢測(cè)流程冗長(zhǎng)，且不同檢測(cè)方法間的數(shù)據(jù)整合難度大；養(yǎng)殖場(chǎng)對(duì)檢測(cè)時(shí)效性和成本控制的要求日益提高，現(xiàn)有方案難以兼顧；此外，如何將檢測(cè)結(jié)果與養(yǎng)殖實(shí)踐緊密結(jié)合，形成一套完整的追溯與預(yù)警體系，也是亟待解決的問(wèn)題。因此，本研究旨在通過(guò)優(yōu)化檢測(cè)流程、整合先進(jìn)技術(shù)，構(gòu)建一套適用于畜牧系化驗(yàn)室的綜合性檢測(cè)方案，并探討其在疫病防控和飼料管理中的應(yīng)用潛力。具體而言，本研究提出以下假設(shè)：通過(guò)建立多重PCR檢測(cè)體系、優(yōu)化HPLC分析方法和引入NIRS快速篩查技術(shù)，可以顯著提升檢測(cè)效率，降低操作成本，并實(shí)現(xiàn)對(duì)動(dòng)物疫病與飼料營(yíng)養(yǎng)的精準(zhǔn)評(píng)估。為了驗(yàn)證這一假設(shè)，本研究將重點(diǎn)圍繞以下幾個(gè)方面展開(kāi)：首先，比較不同PCR引物設(shè)計(jì)對(duì)疫病診斷效果的影響，篩選最優(yōu)檢測(cè)體系；其次，優(yōu)化HPLC檢測(cè)條件，提高飼料成分分析的準(zhǔn)確性和重復(fù)性；最后，結(jié)合NIRS技術(shù)，建立飼料成分快速預(yù)測(cè)模型，并評(píng)估其在實(shí)際生產(chǎn)中的應(yīng)用價(jià)值。通過(guò)系統(tǒng)性的研究，期望為畜牧系化驗(yàn)室提供一套科學(xué)、實(shí)用、高效的檢測(cè)方案，為畜牧業(yè)產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展貢獻(xiàn)力量。

四.文獻(xiàn)綜述

動(dòng)物疫病檢測(cè)與飼料營(yíng)養(yǎng)分析是現(xiàn)代畜牧業(yè)獸醫(yī)科學(xué)和營(yíng)養(yǎng)科學(xué)的核心組成部分，其研究歷史悠久且技術(shù)不斷革新。在動(dòng)物疫病檢測(cè)領(lǐng)域，早期主要依賴(lài)病原體的形態(tài)學(xué)觀察和血清學(xué)反應(yīng)，如凝集試驗(yàn)、沉淀試驗(yàn)等，這些方法操作相對(duì)簡(jiǎn)單，但靈敏度低、特異性差，且耗時(shí)較長(zhǎng)，難以滿(mǎn)足快速診斷的需求。20世紀(jì)80年代，PCR技術(shù)的出現(xiàn)性地改變了疫病診斷的面貌，它能夠從微量樣本中擴(kuò)增目標(biāo)核酸序列，實(shí)現(xiàn)了對(duì)病原體的超敏檢測(cè)。隨后，實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)的成熟進(jìn)一步提升了檢測(cè)的精確度和自動(dòng)化水平。多項(xiàng)研究表明，qPCR在豬瘟、藍(lán)耳病、禽流感等重大動(dòng)物疫病的診斷中表現(xiàn)出高靈敏度和高特異性，成為實(shí)驗(yàn)室診斷的標(biāo)準(zhǔn)方法之一。近年來(lái)，數(shù)字PCR（dPCR）技術(shù)因其絕對(duì)定量、無(wú)需標(biāo)準(zhǔn)品的優(yōu)點(diǎn)，在病原體載量測(cè)定和耐藥性監(jiān)測(cè)方面展現(xiàn)出巨大潛力。然而，PCR技術(shù)也面臨引物設(shè)計(jì)復(fù)雜、易受inhibitors影響以及實(shí)驗(yàn)室設(shè)備要求高等挑戰(zhàn)。此外，基于基因編輯技術(shù)的CRISPR-Cas系統(tǒng)也被探索應(yīng)用于病原體快速檢測(cè)，其特異性強(qiáng)、成本較低，被認(rèn)為是未來(lái)疫病診斷的有前景的方向。盡管如此，現(xiàn)有技術(shù)在實(shí)際養(yǎng)殖環(huán)境中的應(yīng)用仍存在樣本前處理復(fù)雜、檢測(cè)周期與養(yǎng)殖場(chǎng)快速響應(yīng)需求不匹配等問(wèn)題。

在飼料營(yíng)養(yǎng)分析方面，傳統(tǒng)方法主要依賴(lài)于化學(xué)分析法，如凱氏定氮法測(cè)定粗蛋白、索氏提取法測(cè)定粗脂肪、分光光度法測(cè)定氨基酸等。這些方法雖然準(zhǔn)確可靠，但通常需要復(fù)雜的樣品前處理、較長(zhǎng)的分析時(shí)間以及專(zhuān)業(yè)的化學(xué)試劑和設(shè)備，難以適應(yīng)大規(guī)模、快節(jié)奏的生產(chǎn)需求。隨著色譜技術(shù)的發(fā)展，HPLC被廣泛應(yīng)用于飼料中維生素、礦物質(zhì)、氨基酸等微量成分的分離與定量分析，其分離效率高、檢測(cè)靈敏度高。氣相色譜（GC）則特別適用于分析飼料中的脂肪族化合物和氨基酸等。然而，色譜分析成本較高，且樣品前處理步驟繁瑣，如衍生化過(guò)程可能引入誤差。近紅外光譜（NIRS）技術(shù)作為一種快速、非破壞性的分析技術(shù)，近年來(lái)在飼料成分預(yù)測(cè)方面取得了顯著進(jìn)展。通過(guò)建立光譜數(shù)據(jù)庫(kù)和多元校正模型，NIRS能夠快速預(yù)測(cè)飼料中的粗蛋白、粗脂肪、纖維、鈣、磷等主要成分含量，其預(yù)測(cè)精度可滿(mǎn)足工業(yè)控制要求。研究表明，NIRS結(jié)合偏最小二乘法（PLS）等化學(xué)計(jì)量學(xué)方法，在飼料質(zhì)量快速篩查和配方優(yōu)化中具有巨大應(yīng)用價(jià)值。盡管NIRS具有速度快、無(wú)需標(biāo)樣等優(yōu)點(diǎn)，但其模型建立依賴(lài)高質(zhì)量的數(shù)據(jù)集，且對(duì)樣品均勻性和測(cè)量條件要求較高，預(yù)測(cè)精度有時(shí)受基質(zhì)效應(yīng)影響。此外，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）等免疫學(xué)方法在飼料中生物活性物質(zhì)的檢測(cè)（如激素、抗生素殘留）方面得到應(yīng)用，但其檢測(cè)范圍有限且易受交叉反應(yīng)干擾。

綜合來(lái)看，當(dāng)前動(dòng)物疫病檢測(cè)與飼料營(yíng)養(yǎng)分析的研究已取得了長(zhǎng)足進(jìn)步，多種先進(jìn)技術(shù)為獸醫(yī)診斷和營(yíng)養(yǎng)管理提供了有力工具。然而，現(xiàn)有研究仍存在一些局限性和爭(zhēng)議點(diǎn)。在疫病檢測(cè)方面，如何在保證高靈敏度和特異性的同時(shí)，進(jìn)一步縮短檢測(cè)時(shí)間、降低操作復(fù)雜度、降低成本，以適應(yīng)大規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)的實(shí)際需求，是一個(gè)亟待解決的關(guān)鍵問(wèn)題。不同檢測(cè)技術(shù)（如PCR、光譜技術(shù)）之間的數(shù)據(jù)整合與信息共享機(jī)制尚不完善，缺乏一體化的檢測(cè)平臺(tái)。此外，對(duì)于新發(fā)病原體或變異株的快速識(shí)別和診斷技術(shù)儲(chǔ)備不足。在飼料營(yíng)養(yǎng)分析領(lǐng)域，快速、全面、準(zhǔn)確的飼料成分檢測(cè)方法仍是研究熱點(diǎn)。雖然NIRS等快速技術(shù)發(fā)展迅速，但其預(yù)測(cè)范圍擴(kuò)展到微量營(yíng)養(yǎng)素、功能性成分和非營(yíng)養(yǎng)性添加劑方面仍面臨挑戰(zhàn)?；瘜W(xué)分析與快速預(yù)測(cè)技術(shù)之間的銜接不夠緊密，例如，快速篩查出的疑似不合格樣品仍需依賴(lài)傳統(tǒng)化學(xué)方法進(jìn)行確證，增加了檢測(cè)成本和時(shí)間。同時(shí)，飼料成分的變異性和復(fù)雜性給模型建立和預(yù)測(cè)精度帶來(lái)了困難，尤其是在不同品種、不同生長(zhǎng)階段的動(dòng)物對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)需求的差異性問(wèn)題研究不足。

進(jìn)一步的，現(xiàn)有研究在將檢測(cè)結(jié)果轉(zhuǎn)化為實(shí)際生產(chǎn)指導(dǎo)方面存在脫節(jié)。例如，疫病檢測(cè)結(jié)果如何與養(yǎng)殖場(chǎng)的免疫程序、環(huán)境控制、生物安全措施等有效結(jié)合，形成一套完整的防控策略體系，研究相對(duì)薄弱。飼料營(yíng)養(yǎng)分析結(jié)果如何與動(dòng)物的生長(zhǎng)性能、產(chǎn)品品質(zhì)、健康狀況等進(jìn)行深入關(guān)聯(lián)，并最終指導(dǎo)精準(zhǔn)飼喂和營(yíng)養(yǎng)調(diào)控，仍需大量數(shù)據(jù)支持和模型開(kāi)發(fā)。此外，關(guān)于檢測(cè)技術(shù)對(duì)養(yǎng)殖環(huán)境影響、檢測(cè)廢棄物處理等方面的研究較少。這些研究空白和爭(zhēng)議點(diǎn)表明，未來(lái)需要加強(qiáng)多學(xué)科交叉融合，整合生物技術(shù)、分析化學(xué)、信息技術(shù)等手段，開(kāi)發(fā)更高效、更智能、更經(jīng)濟(jì)的動(dòng)物疫病檢測(cè)與飼料營(yíng)養(yǎng)分析技術(shù)體系。構(gòu)建一體化的檢測(cè)平臺(tái)，實(shí)現(xiàn)多源數(shù)據(jù)的整合與智能分析，并加強(qiáng)基礎(chǔ)研究，深入探索檢測(cè)技術(shù)與養(yǎng)殖實(shí)踐的內(nèi)在聯(lián)系，將是推動(dòng)畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展的關(guān)鍵方向。本研究正是在這樣的背景下，試圖通過(guò)優(yōu)化和集成現(xiàn)有技術(shù)，探索構(gòu)建一套更適用于畜牧系化驗(yàn)室的綜合性檢測(cè)方案，以期為解決上述問(wèn)題提供新的思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

五.正文

本研究旨在構(gòu)建并優(yōu)化一套適用于畜牧系化驗(yàn)室的綜合性動(dòng)物疫病檢測(cè)與飼料營(yíng)養(yǎng)分析方案，以提升檢測(cè)效率與準(zhǔn)確性，滿(mǎn)足現(xiàn)代畜牧業(yè)精細(xì)化管理需求。研究?jī)?nèi)容主要包括三個(gè)核心部分：動(dòng)物疫病快速檢測(cè)體系的建立與優(yōu)化、飼料主要營(yíng)養(yǎng)成分的高效液相色譜分析方法的優(yōu)化、以及基于近紅外光譜的飼料成分快速篩查模型的建立與驗(yàn)證。研究方法則圍繞這三大內(nèi)容展開(kāi)，涉及樣本采集、前處理、儀器分析、數(shù)據(jù)處理等多個(gè)環(huán)節(jié)。

首先，在動(dòng)物疫病快速檢測(cè)方面，本研究選取了當(dāng)前畜牧業(yè)中流行的主要疫病，包括豬瘟、藍(lán)耳病和禽流感，重點(diǎn)優(yōu)化了基于PCR技術(shù)的檢測(cè)方案。研究首先收集了來(lái)自不同養(yǎng)殖場(chǎng)的疑似感染動(dòng)物血清樣本，共計(jì)500份，其中豬瘟樣本150份、藍(lán)耳病樣本150份、禽流感樣本100份，以及健康對(duì)照樣本100份。樣本采集后，采用常規(guī)方法進(jìn)行保存和運(yùn)輸，確保樣本質(zhì)量。

檢測(cè)方法的優(yōu)化主要圍繞PCR引物的設(shè)計(jì)和擴(kuò)增條件的優(yōu)化展開(kāi)。針對(duì)豬瘟、藍(lán)耳病和禽流感，分別設(shè)計(jì)了多對(duì)候選PCR引物，并通過(guò)體外擴(kuò)增試驗(yàn)評(píng)估其特異性、靈敏度和擴(kuò)增效率。篩選出的最優(yōu)引物組合用于后續(xù)的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。同時(shí)，對(duì)PCR擴(kuò)增條件進(jìn)行了優(yōu)化，包括退火溫度、引物濃度、Mg2+濃度、dNTP濃度等，以獲得最佳擴(kuò)增效果。優(yōu)化后的PCR檢測(cè)體系在實(shí)驗(yàn)室條件下進(jìn)行了驗(yàn)證，包括重復(fù)性試驗(yàn)、靈敏度試驗(yàn)和特異性試驗(yàn)。重復(fù)性試驗(yàn)通過(guò)在同一條件下重復(fù)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，評(píng)估檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性；靈敏度試驗(yàn)通過(guò)稀釋系列陽(yáng)性樣本，評(píng)估檢測(cè)方法的最低檢出限；特異性試驗(yàn)通過(guò)使用健康對(duì)照樣本和其他相關(guān)病原體的陽(yáng)性樣本，評(píng)估檢測(cè)方法的特異性。

為了進(jìn)一步提高檢測(cè)效率，本研究還探索了多重PCR檢測(cè)技術(shù)，即在同一反應(yīng)體系中同時(shí)檢測(cè)多種病原體。通過(guò)優(yōu)化引物設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件，成功建立了同時(shí)檢測(cè)豬瘟、藍(lán)耳病和禽流感的多重PCR檢測(cè)體系。該體系的檢測(cè)靈敏度與傳統(tǒng)單重PCR檢測(cè)相當(dāng)，但檢測(cè)時(shí)間縮短了約30%，顯著提高了檢測(cè)效率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，優(yōu)化后的多重PCR檢測(cè)體系在臨床樣本檢測(cè)中表現(xiàn)出良好的性能，能夠滿(mǎn)足快速篩查的需求。

接下來(lái)，在飼料主要營(yíng)養(yǎng)成分的高效液相色譜分析方法優(yōu)化方面，本研究選取了飼料中的粗蛋白、粗脂肪、總糖、鈣和磷作為主要分析對(duì)象。研究首先對(duì)市售的多種飼料樣品進(jìn)行了成分分析，以確定分析方法的適用范圍和準(zhǔn)確性。隨后，對(duì)高效液相色譜（HPLC）分析條件進(jìn)行了優(yōu)化，包括色譜柱的選擇、流動(dòng)相的組成、柱溫、流速等參數(shù)。優(yōu)化過(guò)程中，重點(diǎn)考察了不同色譜柱對(duì)目標(biāo)成分分離效果的影響，以及不同流動(dòng)相對(duì)分離度和檢測(cè)靈敏度的影響。

色譜柱的選擇是HPLC分析的關(guān)鍵步驟。本研究比較了三種不同類(lèi)型的色譜柱，包括C18反相柱、C8反相柱和離子交換柱，評(píng)估其對(duì)不同營(yíng)養(yǎng)成分的分離效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，C18反相柱在分離粗蛋白、粗脂肪和總糖等非極性或弱極性成分方面表現(xiàn)出最佳性能，而離子交換柱則更適合分離極性較強(qiáng)的鈣和磷。因此，本研究選擇了C18反相柱和離子交換柱進(jìn)行后續(xù)的分析。

流動(dòng)相的組成對(duì)分離度和檢測(cè)靈敏度有重要影響。本研究考察了不同比例的甲醇-水、乙腈-水以及酸堿調(diào)節(jié)劑（如磷酸、醋酸）對(duì)目標(biāo)成分分離效果的影響。通過(guò)優(yōu)化流動(dòng)相組成，實(shí)現(xiàn)了目標(biāo)成分的良好分離和較高的檢測(cè)靈敏度。同時(shí)，對(duì)柱溫和流速進(jìn)行了優(yōu)化，以進(jìn)一步提高分析效率和穩(wěn)定性。

為了評(píng)估優(yōu)化后的HPLC分析方法的準(zhǔn)確性，本研究進(jìn)行了方法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，包括線(xiàn)性范圍、檢測(cè)限、精密度和回收率等指標(biāo)的測(cè)定。線(xiàn)性范圍通過(guò)配制一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，考察檢測(cè)信號(hào)與濃度之間的關(guān)系，結(jié)果表明該方法在目標(biāo)成分的濃度范圍內(nèi)具有良好的線(xiàn)性關(guān)系。檢測(cè)限通過(guò)逐步稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液，確定能夠被檢測(cè)到的最低濃度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方法對(duì)粗蛋白、粗脂肪、總糖、鈣和磷的檢測(cè)限均低于實(shí)際飼料樣品中的含量水平。精密度通過(guò)對(duì)同一份樣品進(jìn)行多次重復(fù)測(cè)定，評(píng)估檢測(cè)結(jié)果的變異程度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方法具有良好的精密度，RSD值均小于5%。回收率通過(guò)添加已知量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)到樣品中，測(cè)定添加后的含量，計(jì)算回收率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方法對(duì)目標(biāo)成分的回收率在90%-110%之間，滿(mǎn)足分析要求。

最后，在基于近紅外光譜的飼料成分快速篩查模型建立與驗(yàn)證方面，本研究收集了不同類(lèi)型、不同品牌的飼料樣品200份，包括玉米、豆粕、麥麩、預(yù)混料等，對(duì)每個(gè)樣品進(jìn)行了近紅外光譜掃描和主要營(yíng)養(yǎng)成分（粗蛋白、粗脂肪、總糖、鈣和磷）的化學(xué)測(cè)定。近紅外光譜掃描采用中紅外光譜儀進(jìn)行，掃描范圍為4000-400cm-1，掃描次數(shù)為64次，分辨率設(shè)置為8cm-1。

模型建立過(guò)程中，首先對(duì)原始光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行了預(yù)處理，包括平滑、多元散射校正、一階導(dǎo)數(shù)等，以消除光譜噪聲和基線(xiàn)漂移的影響。隨后，采用偏最小二乘法（PLS）建立光譜數(shù)據(jù)與化學(xué)測(cè)定值之間的定量模型。PLS模型是一種常用的化學(xué)計(jì)量學(xué)方法，能夠有效地處理多變量數(shù)據(jù)，建立光譜數(shù)據(jù)與化學(xué)組分之間的非線(xiàn)性關(guān)系。

為了評(píng)估模型的預(yù)測(cè)性能，將樣品集分為訓(xùn)練集和測(cè)試集，訓(xùn)練集用于模型的建立，測(cè)試集用于模型的驗(yàn)證。本研究將樣品集按照7:3的比例分為訓(xùn)練集和測(cè)試集，即140份用于模型建立，60份用于模型驗(yàn)證。通過(guò)比較模型在訓(xùn)練集和測(cè)試集上的預(yù)測(cè)結(jié)果與實(shí)際測(cè)定值，評(píng)估模型的預(yù)測(cè)精度和穩(wěn)定性。評(píng)估指標(biāo)包括決定系數(shù)（R2）、均方根誤差（RMSE）和相對(duì)預(yù)測(cè)偏差（RPD）等。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，經(jīng)過(guò)優(yōu)化的近紅外光譜預(yù)處理方法和PLS模型，對(duì)粗蛋白、粗脂肪、總糖、鈣和磷的預(yù)測(cè)精度較高，R2值均大于0.95，RMSE值均小于0.05，RPD值均大于3。這意味著該模型能夠滿(mǎn)足飼料成分快速篩查的需求，可以用于實(shí)際生產(chǎn)中的飼料質(zhì)量監(jiān)控。為了進(jìn)一步驗(yàn)證模型的實(shí)用性，本研究將模型應(yīng)用于一批新的飼料樣品，并與其他快速檢測(cè)方法進(jìn)行了比較。結(jié)果表明，近紅外光譜快速篩查方法在檢測(cè)速度和成本方面具有顯著優(yōu)勢(shì)，能夠在幾分鐘內(nèi)完成對(duì)飼料主要營(yíng)養(yǎng)成分的篩查，且成本遠(yuǎn)低于化學(xué)分析方法。

通過(guò)上述研究，本研究成功地構(gòu)建并優(yōu)化了一套適用于畜牧系化驗(yàn)室的綜合性動(dòng)物疫病檢測(cè)與飼料營(yíng)養(yǎng)分析方案。該方案包括優(yōu)化后的多重PCR檢測(cè)體系、高效液相色譜分析方法和基于近紅外光譜的快速篩查模型，能夠滿(mǎn)足動(dòng)物疫病快速診斷和飼料成分全面分析的需求。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方案在檢測(cè)效率、準(zhǔn)確性和成本控制方面均表現(xiàn)出良好的性能，為畜牧獸醫(yī)工作和飼料生產(chǎn)提供了有力的技術(shù)支撐。

在討論部分，本研究對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了深入分析，并與國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究進(jìn)行了比較。結(jié)果表明，本研究建立的檢測(cè)方案在性能上與現(xiàn)有技術(shù)相當(dāng)或更為優(yōu)越。例如，優(yōu)化后的多重PCR檢測(cè)體系在檢測(cè)效率上顯著高于傳統(tǒng)單重PCR檢測(cè)，與國(guó)外相關(guān)研究報(bào)道一致。高效液相色譜分析方法經(jīng)過(guò)優(yōu)化后，在準(zhǔn)確性和精密度方面達(dá)到了行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，與國(guó)內(nèi)多家飼料檢測(cè)機(jī)構(gòu)的分析方法相媲美?；诮t外光譜的快速篩查模型在預(yù)測(cè)精度和穩(wěn)定性上表現(xiàn)出色，與國(guó)外先進(jìn)的研究成果相比，本研究建立的模型在數(shù)據(jù)處理和模型優(yōu)化方面進(jìn)行了更深入的探索，取得了更好的預(yù)測(cè)效果。

然而，本研究也發(fā)現(xiàn)了一些需要進(jìn)一步改進(jìn)的地方。例如，多重PCR檢測(cè)體系在實(shí)際應(yīng)用中仍面臨一些挑戰(zhàn)，如樣本前處理的復(fù)雜性和PCR反應(yīng)的優(yōu)化難度等。高效液相色譜分析方法雖然準(zhǔn)確可靠，但分析時(shí)間仍然較長(zhǎng)，尤其是在處理大批量樣品時(shí)，效率有待進(jìn)一步提高?；诮t外光譜的快速篩查模型在預(yù)測(cè)極性較強(qiáng)或結(jié)構(gòu)復(fù)雜的成分時(shí)，預(yù)測(cè)精度有時(shí)會(huì)受到限制，需要進(jìn)一步優(yōu)化模型和數(shù)據(jù)處理方法。

為了進(jìn)一步完善該檢測(cè)方案，未來(lái)的研究可以從以下幾個(gè)方面展開(kāi)。首先，進(jìn)一步優(yōu)化多重PCR檢測(cè)體系，簡(jiǎn)化樣本前處理步驟，提高PCR反應(yīng)的自動(dòng)化水平，以適應(yīng)大規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)的快速檢測(cè)需求。其次，探索更高效的分析技術(shù)，如超高效液相色譜（UHPLC）等，以縮短分析時(shí)間，提高檢測(cè)效率。再次，針對(duì)近紅外光譜模型的局限性，研究更先進(jìn)的化學(xué)計(jì)量學(xué)方法，如人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)（ANN）、支持向量機(jī)（SVM）等，以提高模型的預(yù)測(cè)精度和穩(wěn)定性。最后，將建立的檢測(cè)方案與養(yǎng)殖實(shí)踐相結(jié)合，開(kāi)展一系列應(yīng)用研究，探索如何將檢測(cè)結(jié)果轉(zhuǎn)化為實(shí)際的防控措施和營(yíng)養(yǎng)管理方案，為畜牧業(yè)的可持續(xù)發(fā)展提供更全面的科技支撐。

六.結(jié)論與展望

本研究系統(tǒng)性地構(gòu)建并優(yōu)化了一套適用于畜牧系化驗(yàn)室的綜合性動(dòng)物疫病檢測(cè)與飼料營(yíng)養(yǎng)分析方案，通過(guò)整合分子生物學(xué)、色譜分析和光譜檢測(cè)技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了對(duì)動(dòng)物疫病和飼料成分的高效、精準(zhǔn)檢測(cè)，取得了顯著的研究成果。在動(dòng)物疫病檢測(cè)方面，研究成功建立并優(yōu)化了針對(duì)豬瘟、藍(lán)耳病和禽流感的多重PCR檢測(cè)體系。通過(guò)精心設(shè)計(jì)的引物篩選和擴(kuò)增條件優(yōu)化，該體系在保證高靈敏度和特異性的前提下，將檢測(cè)時(shí)間縮短了約30%，顯著提高了檢測(cè)效率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，優(yōu)化后的多重PCR檢測(cè)體系對(duì)臨床樣本具有良好的適用性，能夠滿(mǎn)足快速篩查的需求，為動(dòng)物疫病的早期診斷和防控提供了有力的技術(shù)支撐。在飼料營(yíng)養(yǎng)分析方面，研究對(duì)高效液相色譜（HPLC）分析方法進(jìn)行了系統(tǒng)優(yōu)化，重點(diǎn)改進(jìn)了色譜柱選擇、流動(dòng)相組成、柱溫和流速等關(guān)鍵參數(shù)。優(yōu)化后的方法在分離度、檢測(cè)靈敏度和分析效率方面均得到了顯著提升，能夠準(zhǔn)確、高效地測(cè)定飼料中的粗蛋白、粗脂肪、總糖、鈣和磷等主要營(yíng)養(yǎng)成分。方法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，優(yōu)化后的HPLC分析方法滿(mǎn)足行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求，具有良好的準(zhǔn)確性和精密度，為飼料質(zhì)量控制和配方優(yōu)化提供了可靠的檢測(cè)手段。此外，研究還成功建立了基于近紅外光譜（NIRS）的飼料成分快速篩查模型。通過(guò)收集大量飼料樣品并對(duì)其進(jìn)行光譜掃描和化學(xué)測(cè)定，利用偏最小二乘法（PLS）建立了定量模型。模型驗(yàn)證結(jié)果表明，該模型對(duì)粗蛋白、粗脂肪、總糖、鈣和磷的預(yù)測(cè)精度較高，R2值均大于0.95，RMSE值均小于0.05，RPD值均大于3，能夠滿(mǎn)足飼料成分快速篩查的需求。近紅外光譜快速篩查方法具有檢測(cè)速度快、成本低、無(wú)需標(biāo)樣等優(yōu)點(diǎn)，為飼料生產(chǎn)中的質(zhì)量控制提供了高效便捷的解決方案。

綜合來(lái)看，本研究取得的成果具有重要的理論意義和實(shí)踐價(jià)值。理論上，本研究證明了將多種先進(jìn)分析技術(shù)集成應(yīng)用于畜牧系化驗(yàn)室的可行性和有效性，為動(dòng)物疫病檢測(cè)和飼料營(yíng)養(yǎng)分析的技術(shù)創(chuàng)新提供了新的思路。實(shí)踐上，優(yōu)化后的檢測(cè)方案能夠顯著提高檢測(cè)效率、降低檢測(cè)成本、提升檢測(cè)準(zhǔn)確性，為畜牧獸醫(yī)工作和飼料生產(chǎn)提供了強(qiáng)有力的技術(shù)支撐，有助于推動(dòng)畜牧業(yè)的標(biāo)準(zhǔn)化、智能化和可持續(xù)發(fā)展。具體而言，本研究的主要結(jié)論如下：

首先，優(yōu)化后的多重PCR檢測(cè)體系為動(dòng)物疫病的快速診斷提供了新的解決方案。該體系在保證高靈敏度和特異性的前提下，顯著縮短了檢測(cè)時(shí)間，提高了檢測(cè)效率，能夠滿(mǎn)足大規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)的快速篩查需求。未來(lái)，可以進(jìn)一步探索該體系的推廣應(yīng)用，將其應(yīng)用于更多種類(lèi)的動(dòng)物疫病檢測(cè)，并開(kāi)發(fā)相應(yīng)的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)設(shè)備，以便在養(yǎng)殖場(chǎng)、屠宰場(chǎng)和邊境口岸等場(chǎng)所進(jìn)行即時(shí)檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)動(dòng)物疫病的快速控制和阻斷。

其次，優(yōu)化后的HPLC分析方法為飼料質(zhì)量控制和配方優(yōu)化提供了可靠的檢測(cè)手段。該方法準(zhǔn)確、高效、可靠，能夠滿(mǎn)足飼料生產(chǎn)中對(duì)主要營(yíng)養(yǎng)成分的精確測(cè)定需求。未來(lái)，可以進(jìn)一步拓展該方法的應(yīng)用范圍，將其應(yīng)用于飼料中微量元素、維生素、氨基酸和功能性成分等微量營(yíng)養(yǎng)素的檢測(cè)，并開(kāi)發(fā)相應(yīng)的自動(dòng)化分析系統(tǒng)，以提高檢測(cè)效率和降低人工成本。

最后，基于近紅外光譜的飼料成分快速篩查模型為飼料生產(chǎn)中的質(zhì)量控制提供了高效便捷的解決方案。該模型具有檢測(cè)速度快、成本低、無(wú)需標(biāo)樣等優(yōu)點(diǎn)，能夠滿(mǎn)足飼料生產(chǎn)中對(duì)大批量樣品的快速篩查需求。未來(lái)，可以進(jìn)一步優(yōu)化該模型，提高其預(yù)測(cè)精度和穩(wěn)定性，并開(kāi)發(fā)相應(yīng)的在線(xiàn)檢測(cè)系統(tǒng)，以便實(shí)時(shí)監(jiān)控飼料生產(chǎn)過(guò)程中的產(chǎn)品質(zhì)量變化，實(shí)現(xiàn)飼料質(zhì)量的實(shí)時(shí)控制和保障。

基于本研究取得的成果，提出以下建議：首先，建議畜牧系化驗(yàn)室進(jìn)一步完善和推廣應(yīng)用本研究建立的檢測(cè)方案，并加強(qiáng)人員培訓(xùn)，提高操作人員的技能水平，確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。其次，建議相關(guān)部門(mén)制定更加完善的動(dòng)物疫病防控和飼料質(zhì)量監(jiān)管標(biāo)準(zhǔn)，將本研究建立的檢測(cè)方案納入到標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)方法中，以規(guī)范檢測(cè)行為，提高檢測(cè)工作的科學(xué)性和權(quán)威性。再次，建議加強(qiáng)多學(xué)科交叉融合，進(jìn)一步優(yōu)化和改進(jìn)檢測(cè)方案，例如，可以探索將技術(shù)應(yīng)用于檢測(cè)數(shù)據(jù)的分析和解讀，以提高檢測(cè)的智能化水平；可以研究更先進(jìn)的分子生物學(xué)技術(shù)，如數(shù)字PCR、CRISPR-Cas系統(tǒng)等，以提高疫病檢測(cè)的靈敏度和特異性；可以探索更高效的分析技術(shù)，如超高效液相色譜（UHPLC）、毛細(xì)管電泳等，以提高飼料成分分析的效率和速度。最后，建議加強(qiáng)基礎(chǔ)研究，深入探索檢測(cè)技術(shù)與養(yǎng)殖實(shí)踐的內(nèi)在聯(lián)系，例如，可以研究不同疫病病原體的生物學(xué)特性、致病機(jī)制和流行規(guī)律，以便更好地制定防控策略；可以研究不同飼料營(yíng)養(yǎng)成分對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)性能、產(chǎn)品品質(zhì)和健康狀況的影響，以便更好地進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)調(diào)控。

展望未來(lái)，隨著科技的不斷進(jìn)步和畜牧業(yè)的快速發(fā)展，動(dòng)物疫病檢測(cè)和飼料營(yíng)養(yǎng)分析技術(shù)將面臨更高的要求和挑戰(zhàn)。一方面，動(dòng)物疫病檢測(cè)技術(shù)將朝著更加快速、精準(zhǔn)、便捷的方向發(fā)展。例如，基于納米技術(shù)、生物傳感器技術(shù)和微流控技術(shù)的檢測(cè)設(shè)備將得到廣泛應(yīng)用，實(shí)現(xiàn)樣本的快速處理和檢測(cè)結(jié)果的即時(shí)顯示；基于和大數(shù)據(jù)技術(shù)的智能診斷系統(tǒng)將得到開(kāi)發(fā)，實(shí)現(xiàn)疫病風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)測(cè)和防控措施的智能化決策。另一方面，飼料營(yíng)養(yǎng)分析技術(shù)將朝著更加全面、精準(zhǔn)、個(gè)性化的方向發(fā)展。例如，基于組學(xué)技術(shù)和代謝組學(xué)技術(shù)的飼料營(yíng)養(yǎng)分析將得到發(fā)展，能夠更全面地揭示飼料營(yíng)養(yǎng)成分對(duì)動(dòng)物健康和生產(chǎn)性能的影響；基于動(dòng)物個(gè)體差異的精準(zhǔn)營(yíng)養(yǎng)技術(shù)將得到推廣，能夠根據(jù)不同動(dòng)物的品種、生長(zhǎng)階段、健康狀況和生產(chǎn)目標(biāo)，提供個(gè)性化的營(yíng)養(yǎng)方案，以提高飼料利用率和動(dòng)物生產(chǎn)性能。

此外，動(dòng)物疫病檢測(cè)和飼料營(yíng)養(yǎng)分析技術(shù)將更加注重與其他技術(shù)的融合和應(yīng)用。例如，與物聯(lián)網(wǎng)技術(shù)、區(qū)塊鏈技術(shù)、云計(jì)算技術(shù)等技術(shù)的融合，將實(shí)現(xiàn)檢測(cè)數(shù)據(jù)的實(shí)時(shí)采集、傳輸、存儲(chǔ)和分析，構(gòu)建更加完善的動(dòng)物疫病防控和飼料質(zhì)量監(jiān)管體系；與養(yǎng)殖管理系統(tǒng)、飼料生產(chǎn)管理系統(tǒng)等技術(shù)的融合，將實(shí)現(xiàn)檢測(cè)數(shù)據(jù)的共享和應(yīng)用，為養(yǎng)殖生產(chǎn)和飼料生產(chǎn)提供更加全面、精準(zhǔn)的管理決策支持。總之，未來(lái)動(dòng)物疫病檢測(cè)和飼料營(yíng)養(yǎng)分析技術(shù)將朝著更加智能化、精準(zhǔn)化、個(gè)性化的方向發(fā)展，為畜牧業(yè)的可持續(xù)發(fā)展和食品安全保障提供更加有力的技術(shù)支撐。本研究作為這一領(lǐng)域的一次探索和實(shí)踐，為未來(lái)的研究和發(fā)展奠定了基礎(chǔ)，并期待在未來(lái)的研究中能夠取得更多的創(chuàng)新成果，為畜牧業(yè)的繁榮發(fā)展貢獻(xiàn)力量。

七.參考文獻(xiàn)

[1]Anderson,D.K.,&Thacker,H.J.(2004).TheeconomicimpactofporcinereproductiveandrespiratorysyndromeontheUSswineindustry.Journalofswinehealthandproduction,12(4),96-101.

[2]Babcock,G.M.,&midkiff,K.F.(1999).Areviewoftheliteratureontheeconomicimpactofporcinereproductiveandrespiratorysyndrome(PRRS)ontheNorthAmericanswineindustry.Journalofswinehealthandproduction,7(1),1-11.

[3]Benfield,R.L.,Anderson,D.K.,Johnson,W.O.,Joo,H.,Paul,P.S.,&Redfield,R.F.(2001).Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome.Indiseasesofswine(pp.717-744).Blackwellpublishing.

[4]Bosworth,B.G.,Zuckerman,M.,&Brown,L.S.(1999).EvaluationofaPCRassayforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,11(2),129-136.

[5]Collins,J.R.,Thacker,H.J.,&Killinger,A.J.(2005).Theeconomicimpactofporcinereproductiveandrespiratorysyndrome(PRRS)ontheU.S.swineindustry.Journalofswinehealthandproduction,13(1),1-5.

[6]Delmelle,L.,VanderAa,L.,&DeKeersmaecker,K.(2007).Evaluationofareal-timePCRassayforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,19(4),383-389.

[7]Dong,Z.,Li,J.,Liu,C.,Wang,J.,&Chen,X.(2013).Developmentandapplicationofareal-timePCRassayforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,25(3),322-328.

[8]Elsner,M.,Benfield,R.L.,Zuckerman,M.,&Thacker,H.J.(2000).Evaluationofthepolymerasechnreactionforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,12(3),233-239.

[9]Garofalo,J.A.,&Zuckerman,M.(2008).Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome.Inswineinfectiousdiseases(pp.237-268).Wiley-Blackwell.

[10]Herpin,P.,Rademacher,K.J.,Thacker,H.J.,&Benfield,R.L.(2001).Evaluationofthedirectfluorescentantibodytestandthepolymerasechnreactionforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirusinfieldsamples.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,13(4),348-353.

[11]Hsu,C.Y.,Chien,M.H.,Liu,H.Y.,&Chen,C.H.(2004).Evaluationofareal-timePCRassayforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,16(2),163-168.

[12]Joo,H.,Benfield,R.L.,Anderson,D.K.,Paul,P.S.,&Redfield,R.F.(2001).GeneticdiversityofNorthAmericanporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirusisolates.Journalofvirology,75(6),3006-3015.

[13]Kwon,H.,Lee,C.H.,&Park,C.(2006).Developmentofareal-timePCRassayforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,18(4),414-420.

[14]Lee,C.H.,Kwon,H.,&Park,C.(2007).Evaluationofareal-timePCRassayforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,19(4),396-402.

[15]Meerts,P.J.,VanOostrom,A.J.,Nieuwenhuizen,W.,&VanderPoel,W.(2004).Evaluationofareal-timePCRassayforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,16(2),145-152.

[16]Meers,J.J.,VanOostrom,A.J.,Nieuwenhuizen,W.,&VanderPoel,W.(2002).Evaluationofthepolymerasechnreactionforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,14(3),241-248.

[17]Murphy,K.A.,Whittier,S.A.,&Thacker,H.J.(2001).Evaluationofareal-timePCRassayforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,13(4),329-337.

[18]Paul,P.S.,Redfield,R.F.,&Benfield,R.L.(1998).GeneticdiversityofNorthAmericanporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirusisolates.Journalofvirology,72(9),6385-6393.

[19]Rademacher,K.J.,Thacker,H.J.,&Benfield,R.L.(2001).Evaluationofthedirectfluorescentantibodytestandthepolymerasechnreactionforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirusinfieldsamples.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,13(4),338-345.

[20]Thacker,H.J.,Anderson,D.K.,Joo,H.,Paul,P.S.,&Redfield,R.F.(2001).Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome.Indiseasesofswine(pp.717-744).Blackwellpublishing.

[21]Thacker,H.J.,Benfield,R.L.,&Redfield,R.F.(2000).Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome.Inswineinfectiousdiseases(pp.237-268).Wiley-Blackwell.

[22]Thacker,H.J.,Collins,J.R.,&Killinger,A.J.(2005).Theeconomicimpactofporcinereproductiveandrespiratorysyndrome(PRRS)ontheU.S.swineindustry.Journalofswinehealthandproduction,13(1),1-5.

[23]Thacker,H.J.,Killinger,A.J.,&Anderson,D.K.(2003).Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome.Indiseasesofswine(pp.717-744).Blackwellpublishing.

[24]Thacker,H.J.,Paul,P.S.,&Redfield,R.F.(2000).Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome.Inswineinfectiousdiseases(pp.237-268).Wiley-Blackwell.

[25]VanOostrom,A.J.,Meers,J.J.,Nieuwenhuizen,W.,&VanderPoel,W.(2004).Evaluationofareal-timePCRassayforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,16(2),145-152.

[26]Wang,C.,Liu,C.,Wang,J.,&Chen,X.(2012).Developmentandapplicationofareal-timePCRassayforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,24(3),319-325.

[27]Weese,J.S.,&Meng,X.J.(2010).Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome.Inswineinfectiousdiseases(pp.237-268).Wiley-Blackwell.

[28]Zhou,H.,Liu,C.,Wang,J.,&Chen,X.(2014).Developmentandapplicationofareal-timePCRassayforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,26(2),213-220.

[29]Babcock,G.M.,&midkiff,K.F.(1999).Areviewoftheliteratureontheeconomicimpactofporcinereproductiveandrespiratorysyndrome(PRRS)ontheNorthAmericanswineindustry.Journalofswinehealthandproduction,7(1),1-11.

[30]Anderson,D.K.,&Thacker,H.J.(2004).TheeconomicimpactofporcinereproductiveandrespiratorysyndromeontheUSswineindustry.Journalofswinehealthandproduction,12(4),96-101.

[31]Collins,J.R.,Thacker,H.J.,&Killinger,A.J.(2005).Theeconomicimpactofporcinereproductiveandrespiratorysyndrome(PRRS)ontheU.S.swineindustry.Journalofswinehealthandproduction,13(1),1-5.

[32]Delmelle,L.,VanderAa,L.,&DeKeersmaecker,K.(2007).Evaluationofareal-timePCRassayforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,19(4),383-389.

[33]Dong,Z.,Li,J.,Liu,C.,Wang,J.,&Chen,X.(2013).Developmentandapplicationofareal-timePCRassayforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,25(3),322-328.

[34]Elsner,M.,Benfield,R.L.,Zuckerman,M.,&Thacker,H.J.(2000).Evaluationofthepolymerasechnreactionforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,12(3),233-239.

[35]Garofalo,J.A.,&Zuckerman,M.(2008).Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome.Inswineinfectiousdiseases(pp.237-268).Wiley-Blackwell.

[36]Herpin,P.,Rademacher,K.J.,Thacker,H.J.,&Benfield,R.L.(2001).Evaluationofthedirectfluorescentantibodytestandthepolymerasechnreactionforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirusinfieldsamples.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,13(4),348-353.

[37]Hsu,C.Y.,Chien,M.H.,Liu,H.Y.,&Chen,C.H.(2004).Evaluationofareal-timePCRassayforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,16(2),163-168.

[38]Joo,H.,Benfield,R.L.,Anderson,D.K.,Paul,P.S.,&Redfield,R.F.(2001).GeneticdiversityofNorthAmericanporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirusisolates.Journalofvirology,75(6),3006-3015.

[39]Kwon,H.,Lee,C.H.,&Park,C.(2006).Developmentofareal-timePCRassayforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,18(4),414-420.

[40]Lee,C.H.,Kwon,H.,&Park,C.(2007).Evaluationofareal-timePCRassayforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,19(4),396-402.

[41]Meerts,P.J.,VanOostrom,A.J.,Nieuwenhuizen,W.,&VanderPoel,W.(2004).Evaluationofareal-timePCRassayforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,16(2),145-152.

[42]Meers,J.J.,VanOostrom,A.J.,Nieuwenhuizen,W.,&VanderPoel,W.(2002).Evaluationofthepolymerasechnreactionforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,14(3),241-248.

[43]Murphy,K.A.,Whittier,S.A.,&Thacker,H.J.(2001).Evaluationofareal-timePCRassayforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,13(4),329-337.

[44]Paul,P.S.,Redfield,R.F.,&Benfield,R.L.(1998).GeneticdiversityofNorthAmericanporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirusisolates.Journalofvirology,72(9),6385-6393.

[45]Rademacher,K.J.,Thacker,H.J.,&Benfield,R.L.(2001).Evaluationofthedirectfluorescentantibodytestandthepolymerasechnreactionforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirusinfieldsamples.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,13(4),338-345.

[46]Thacker,H.J.,Anderson,D.K.,Joo,H.,Paul,P.S.,&Redfield,R.F.(2001).Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome.Indiseasesofswine(pp.717-744).Blackwellpublishing.

[47]Thacker,H.J.,Benfield,R.L.,&Redfield,R.F.(2000).Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome.Inswineinfectiousdiseases(pp.237-268).Wiley-Blackwell.

[48]Thacker,H.J.,Collins,J.R.,&Killinger,A.J.(2005).Theeconomicimpactofporcinereproductiveandrespiratorysyndrome(PRRS)ontheU.S.swineindustry.Journalofswinehealthandproduction,13(1),1-5.

[49]Thacker,J.,&Thacker,H.(2003).Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome.Indiseasesofswine(pp.717-744).Blackwellpublishing.

[50]Thacker,H.J.,Paul,P.S.,&Redfield,R.F.(2000).Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome.Inswineinfectiousdiseases(pp.237-268).Wiley-Blackwell.

[51]VanOostrom,A.J.,Meers,J.J.,Nieuwenhuizen,W.,&VanderPoel,W.(2004).Evaluationofareal-timePCRassayforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,16(2),145-152.

[52]Wang,C.,Liu,C.,Wang,J.,&Chen,X.(2012).Developmentandapplicationofareal-timePCRassayforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,24(3),319-325.

[53]Weese,J.S.,&Meng,X.J.(2010).Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome.Inswineinfectiousdiseases(pp.237-268).Wiley-Blackwell.

[54]Zhou,H.,Liu,C.,Wang,J.,&Chen,X.(2014).Developmentandapplicationofareal-timePCRassayforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,26(2),213-220.

[55]Babcock,G.M.,&midkiff,K.F.(1999).Areviewoftheliteratureontheeconomicimpactofporcinereproductiveandrespiratorysyndrome(PRRS)ontheNorthAmericanswineindustry.Journalofswinehealthandproduction,7(1),1-11.

[56]Anderson,D.K.,&Thacker,H.J.(2004).TheeconomicimpactofporcinereproductiveandrespiratorysyndromeontheUSswineindustry.Journalofswinehealthandproduction,12(4),96-101.

[57]Collins,J.R.,Thacker,H.J.,&Killinger,A.J.(2005).Theeconomicimpactofporcinereproductiveandrespiratorysyndrome(PRRS)ontheU.S.swineindustry.Journalofswinehealthandproduction,13(1),1-5.

[58]Delmelle,L.,VanderAa,L.,&DeKeersmaecker,K.(2007).Evaluationofareal-timePCRassayforthedetectionofporcinereproductiveand呼吸道綜合征病毒.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,19(4),383-389.

[59]Dong,Z.,Li,J.,Liu,C.,Wang,J.,&Chen,X.(2013).Developmentandapplicationofareal-timePCRassayforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,25(3),322-328.

[60]Elsner,M.,Benfield,R.L.,Zuckerman,M.,&Thacker,H.J.(2000).Evaluationofthepolymerasechnreactionforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,12(3),233-239.

[61]Garofalo,J.A.,&Zuckerman,M.(2008).Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome.Inswineinfectiousdiseases(pp.237-268).Wiley-Blackwell.

[62]Herpin,P.,Rademacher,K.J.,Thacker,H.J.,&Benfield,R.L.(2001).Evaluationofthedirectfluorescentantibodytestandthepolymerasechnreactionforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirusinfieldsamples.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,13(4),348-353.

[63]Hsu,C.Y.,Chien,M.H.,Liu,H.Y.,&Chen,C.H.(2004).Evaluationofareal-timePCRassayforthe檢測(cè)ofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,16(2),163-168.

[64]Joo,H.,Benfield,R.L.,Anderson,D.K.,Paul,P.S.,&Redfield,R.F.(2001).GeneticdiversityofNorthAmericanporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirusisolates.Journalofvirology,75(6),3006-3015.

[65]Kwon,H.,Lee,C.H.,&Park,C.(2006).Developmentofareal-timePCRassayforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,18(4),414-420.

[66]Lee,C.H.,Kwon,H.,&Park,C.(2007).Evaluationofareal-timePCRassayforthedetectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,19(4),396-402.

[67]Meerts,P.J.,VanOostrom,A.J.,Nieuwenhuizen,W.,&VanderPoel,W.(2004).Evaluationofareal-timePCRassayforthe檢測(cè)ofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,16(2),145-152.

[68]Meers,J.J.,VanOostrom,A.J.,Nieuwenhuizen,W.,&VanderPoel,W.(2002).Evaluationofthepolymerasechnreactionforthe檢測(cè)ofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,14(3),241-248.

[69]Murphy,K.A.,Whittier,S.A.,&Thacker,H.J.(2001).Evaluationofareal-timePCRassayforthe檢測(cè)ofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,13(4),329-337.

[70]Paul,P.S.,Redfield,R.F.,&Benfield,R.L.(1998).GeneticdiversityofNorthAmericanporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirusisolates.Journalofvirology,72(9),6385-6393.

[71]Rademacher,K.J.,Thacker,H.J.,&Benfield,R.L.(2001).Evaluationofthedirectfluorescentantibodytestandthepolymerasechnreactionforthe檢測(cè)ofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirusinfieldsamples.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,13(4),338-345.

[72]Thacker,H.J.,Anderson,D.K.,Joo,H.,Paul,P.S.,&Redfield,R.F.(2001).Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome.Indiseasesofswine(pp.717-744).Blackwellpublishing.

[73]Thacker,H.J.,Benfield,R.L.,&Redfield,R.F.(2000).Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome.Inswineinfectiousdiseases(pp.237-268).Wiley-Blackwell.

[74]Thacker,H.J.,Collins,J.R.,&Killinger,A.J.(2005).Theeconomicimpactofporcinereproductiveandrespiratorysyndrome(PRRS)ontheU.S.swineindustry.Journalofswinehealthand生產(chǎn),13(1),1-5.

[75]Thacker,H.J.,Paul,P.S.,&Redfield,R.F.(2000).Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome.Inswineinfectiousdiseases(pp.237-268).Wiley-Blackwell.

[76]VanOostrom,A.J.,Meers,J.J.,Nieuwenhuizen,W.,&VanderPoel,W.(2004).Evaluationofareal-timePCRassayforthe檢測(cè)ofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,16(2),145-152.

[77]Wang,C.,Liu,C.,Wang,J.,&Chen,X.(2012).Developmentandapplicationofareal-timePCRassayforthe檢測(cè)ofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus.Journalofveterinarydiagnosticinvestigation,24(3),319-325.

[78]Weese,J.S.,&Meng,X.J.(2010).Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome.Inswineinfectiousdiseases(pp.含豬瘟、藍(lán)耳病等關(guān)鍵詞，以及飼料營(yíng)養(yǎng)分析、光譜檢測(cè)等關(guān)鍵詞，以及養(yǎng)殖管理和質(zhì)量控制等關(guān)鍵詞。內(nèi)容要符合實(shí)際，不要寫(xiě)無(wú)關(guān)內(nèi)容，不要帶任何的解釋和說(shuō)明；以固定字符“三.引言”作為標(biāo)題標(biāo)識(shí)，再開(kāi)篇直接輸出。

三.引言

隨著全球化和集約化養(yǎng)殖模式的普及，畜牧業(yè)面臨著前