上海市pcr上崗證考試題及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的基本原理是（）A.基因重組B.核酸分子雜交C.體外酶促合成特異DNA片段D.體內(nèi)基因克隆答案：C2.以下哪種酶是PCR反應(yīng)中所必需的（）A.解旋酶B.RNA聚合酶C.Taq酶D.逆轉(zhuǎn)錄酶答案：C3.PCR反應(yīng)的變性溫度一般為（）A.90-95℃B.70-75℃C.50-55℃D.30-35℃答案：A4.在PCR反應(yīng)中，引物的作用是（）A.提供起始的模板B.提供起始的核苷酸C.引導(dǎo)DNA聚合酶合成新鏈的起始點(diǎn)D.終止DNA合成答案：C5.以下關(guān)于PCR產(chǎn)物的分析，錯(cuò)誤的是（）A.瓊脂糖凝膠電泳可用于檢測(cè)PCR產(chǎn)物大小B.熒光定量PCR可用于定量分析產(chǎn)物C.不需要對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行純度檢測(cè)D.測(cè)序可分析PCR產(chǎn)物的堿基序列答案：C6.PCR反應(yīng)體系中，dNTP的作用是（）A.作為模板B.作為緩沖劑C.提供合成DNA的原料D.激活酶答案：C7.為防止PCR反應(yīng)中的污染，以下措施錯(cuò)誤的是（）A.嚴(yán)格區(qū)分不同的操作區(qū)域B.定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行清潔和消毒C.使用一次性耗材D.不同樣品可以使用同一套加樣器具答案：D8.在熒光定量PCR中，常用的熒光染料是（）A.溴化乙錠B.SYBRGreenC.考馬斯亮藍(lán)D.臺(tái)盼藍(lán)答案：B9.PCR反應(yīng)的退火溫度主要取決于（）A.模板的長(zhǎng)度B.引物的長(zhǎng)度和序列C.酶的活性D.dNTP的濃度答案：B10.以下哪種情況可能導(dǎo)致PCR假陰性結(jié)果（）A.模板量過(guò)多B.引物濃度過(guò)高C.酶失活D.退火溫度過(guò)低答案：C二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)在以下哪些領(lǐng)域有應(yīng)用（）A.疾病診斷B.基因克隆C.法醫(yī)鑒定D.遺傳疾病研究答案：ABCD2.一個(gè)完整的PCR反應(yīng)體系通常包括（）A.模板DNAB.引物C.Taq酶D.dNTP答案：ABCD3.以下哪些因素會(huì)影響PCR反應(yīng)的特異性（）A.引物設(shè)計(jì)B.退火溫度C.模板純度D.酶的種類答案：ABC4.在進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備以下哪些區(qū)域（）A.試劑準(zhǔn)備區(qū)B.標(biāo)本制備區(qū)C.擴(kuò)增區(qū)D.產(chǎn)物分析區(qū)答案：ABCD5.以下關(guān)于引物設(shè)計(jì)的原則，正確的是（）A.引物長(zhǎng)度一般為15-30bpB.引物的GC含量在40%-60%為宜C.引物自身不能形成二級(jí)結(jié)構(gòu)D.引物之間不能互補(bǔ)答案：ABCD6.PCR產(chǎn)物出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增的原因可能是（）A.引物特異性差B.退火溫度過(guò)低C.模板純度低D.酶量過(guò)多答案：ABCD7.熒光定量PCR的優(yōu)點(diǎn)包括（）A.靈敏度高B.特異性強(qiáng)C.可定量分析D.自動(dòng)化程度高答案：ABCD8.在PCR反應(yīng)中，為了提高反應(yīng)的效率可以（）A.優(yōu)化引物濃度B.優(yōu)化退火溫度C.增加模板量D.提高酶的活性答案：ABD9.以下屬于PCR反應(yīng)的循環(huán)參數(shù)的是（）A.變性時(shí)間B.退火時(shí)間C.延伸時(shí)間D.循環(huán)次數(shù)答案：ABCD10.PCR技術(shù)的局限性包括（）A.容易出現(xiàn)污染B.只能對(duì)已知序列進(jìn)行擴(kuò)增C.對(duì)模板要求較高D.定量結(jié)果可能存在偏差答案：ABCD三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)可以在體內(nèi)進(jìn)行。（）答案：錯(cuò)誤2.引物的3'端與模板的互補(bǔ)性對(duì)PCR反應(yīng)影響不大。（）答案：錯(cuò)誤3.在PCR反應(yīng)中，延伸溫度通常為72℃。（）答案：正確4.所有的DNA聚合酶都可以用于PCR反應(yīng)。（）答案：錯(cuò)誤5.PCR產(chǎn)物一定是單一條帶。（）答案：錯(cuò)誤6.熒光定量PCR只能用于檢測(cè)DNA。（）答案：錯(cuò)誤7.只要有模板，PCR反應(yīng)就一定能成功。（）答案：錯(cuò)誤8.增加循環(huán)次數(shù)一定會(huì)提高PCR產(chǎn)物的產(chǎn)量。（）答案：錯(cuò)誤9.瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物時(shí)，DNA片段越大，遷移速度越快。（）答案：錯(cuò)誤10.在PCR反應(yīng)體系中，緩沖液的主要作用是維持pH值穩(wěn)定。（）答案：正確四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共4題）1.簡(jiǎn)述PCR反應(yīng)的基本步驟。答案：PCR反應(yīng)的基本步驟包括變性、退火和延伸。變性是將模板DNA在高溫（90-95℃）下雙鏈解開成為單鏈；退火是引物與模板單鏈在一定溫度（根據(jù)引物和模板的特性而定）下特異性結(jié)合；延伸是在Taq酶作用下，以dNTP為原料，從引物的3'端開始合成新的DNA鏈，通常延伸溫度為72℃。2.如何防止PCR反應(yīng)中的污染？答案：防止PCR污染可從多方面入手。一是嚴(yán)格區(qū)分操作區(qū)域，如試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)等；二是使用一次性耗材；三是定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行清潔和消毒；四是在操作過(guò)程中規(guī)范加樣，不同樣品避免使用同一套加樣器具等。3.簡(jiǎn)述引物設(shè)計(jì)的主要要點(diǎn)。答案：引物設(shè)計(jì)要點(diǎn)包括長(zhǎng)度一般15-30bp，GC含量40%-60%，自身不能形成二級(jí)結(jié)構(gòu)，引物之間不能互補(bǔ)，并且要與模板特異性結(jié)合等。4.簡(jiǎn)述熒光定量PCR的原理。答案：熒光定量PCR原理是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，產(chǎn)物不斷累積，熒光信號(hào)強(qiáng)度也相應(yīng)增加。通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)的變化來(lái)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR反應(yīng)進(jìn)程，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板的定量分析。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論影響PCR反應(yīng)特異性的因素有哪些？答案：影響PCR反應(yīng)特異性的因素有引物設(shè)計(jì)（長(zhǎng)度、特異性等）、退火溫度（合適溫度保證引物與模板特異性結(jié)合）、模板純度（雜質(zhì)可能導(dǎo)致非特異性結(jié)合）等。2.請(qǐng)闡述PCR技術(shù)在疾病診斷中的應(yīng)用價(jià)值。答案：PCR技術(shù)在疾病診斷中有重要價(jià)值?？蓹z測(cè)病原體的核酸，快速確定感染類型；能檢測(cè)基因變異，輔助診斷遺傳疾?。贿€可用于腫瘤相關(guān)基因檢測(cè)，輔助腫瘤診斷等。3.如何提高PCR反應(yīng)的效率？答案：提高PCR反應(yīng)效率