雙條杉天牛信息化學(xué)物質(zhì):結(jié)構(gòu)解析、活性驗(yàn)證與應(yīng)用展望_第1頁(yè)
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雙條杉天牛信息化學(xué)物質(zhì):結(jié)構(gòu)解析、活性驗(yàn)證與應(yīng)用展望一、引言1.1研究背景與意義雙條杉天牛(SemanotusbifasciatusMotschulsky)作為亞洲東部地區(qū)特有的鞘翅目害蟲,在我國(guó)分布廣泛,涵蓋東北、華北、西北和華東等多個(gè)區(qū)域,并波及朝鮮、韓國(guó)、日本等周邊國(guó)家。該害蟲主要侵襲側(cè)柏、檜柏、扁柏和羅漢松等樹種,對(duì)我國(guó)北方地區(qū)的側(cè)柏資源構(gòu)成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)威脅。雙條杉天牛的成蟲具有獨(dú)特的產(chǎn)卵習(xí)性,偏好于在衰弱樹或新伐倒木樹皮的翹裂縫深處產(chǎn)卵。其幼蟲孵化后,會(huì)在寄主的木質(zhì)部表層蛀蝕出形狀不規(guī)則的坑道。這些坑道不僅切斷了寄主植物的水分和養(yǎng)分輸導(dǎo)組織,阻礙了營(yíng)養(yǎng)成分的正常運(yùn)輸,還破壞了樹木的生理結(jié)構(gòu),導(dǎo)致寄主生長(zhǎng)衰弱,最終走向死亡。由于幼蟲在木質(zhì)部?jī)?nèi)蛀食,生活環(huán)境隱蔽,使得化學(xué)藥劑難以有效觸及,大大增加了防控的難度。在林業(yè)生態(tài)系統(tǒng)中,雙條杉天牛的危害不容小覷。它嚴(yán)重破壞了森林資源,影響了林木的速生豐產(chǎn)和優(yōu)質(zhì)良材的形成,導(dǎo)致木材產(chǎn)量和質(zhì)量下降,給林業(yè)產(chǎn)業(yè)帶來(lái)了直接的經(jīng)濟(jì)損失。例如,在一些側(cè)柏純林區(qū)域,由于雙條杉天牛的爆發(fā),大量側(cè)柏死亡,不僅影響了木材的采伐收益,還使得森林生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性受到破壞。此外,雙條杉天牛的危害還間接影響了生態(tài)環(huán)境,降低了森林的生態(tài)服務(wù)功能,如水源涵養(yǎng)、土壤保持、生物多樣性維護(hù)等。許多依賴森林生存的動(dòng)植物因棲息地受損而受到威脅,生態(tài)平衡被打破。目前,針對(duì)雙條杉天牛的防治手段主要包括物理防治、化學(xué)防治和生物防治。物理防治方法如人工捕捉成蟲、設(shè)置餌木誘捕等,雖然具有一定的效果,但效率較低,難以大規(guī)模應(yīng)用,且對(duì)于隱蔽性強(qiáng)的幼蟲防治效果不佳?;瘜W(xué)防治手段,如噴灑殺蟲劑,雖然能夠在一定程度上控制害蟲數(shù)量,但存在環(huán)境污染、殺傷天敵等問(wèn)題,還可能導(dǎo)致害蟲產(chǎn)生抗藥性,長(zhǎng)期效果難以保證。生物防治利用天敵昆蟲、病原菌等進(jìn)行防治,具有環(huán)保、可持續(xù)等優(yōu)點(diǎn),但受到天敵昆蟲繁殖速度、生存環(huán)境等因素的限制,防治效果不夠穩(wěn)定。因此,尋找更加高效、環(huán)保、可持續(xù)的防治方法迫在眉睫。研究雙條杉天牛的信息化學(xué)物質(zhì)具有重要的理論和實(shí)踐意義。信息化學(xué)物質(zhì)在昆蟲的行為調(diào)控中發(fā)揮著關(guān)鍵作用,包括尋找寄主、交配、產(chǎn)卵等行為。通過(guò)對(duì)雙條杉天牛信息化學(xué)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)鑒定,可以深入了解其化學(xué)通訊機(jī)制,為開發(fā)新型的害蟲監(jiān)測(cè)和防治技術(shù)提供理論基礎(chǔ)。明確這些信息化學(xué)物質(zhì)的行為活性,能夠?yàn)檠邪l(fā)特異性的引誘劑、驅(qū)避劑提供科學(xué)依據(jù)。利用引誘劑可以高效地監(jiān)測(cè)和誘捕雙條杉天牛,減少其種群數(shù)量;驅(qū)避劑則可以阻止害蟲接近寄主植物,降低危害風(fēng)險(xiǎn)。這不僅有助于提高防治效果,還能減少化學(xué)農(nóng)藥的使用,降低對(duì)環(huán)境的負(fù)面影響,保護(hù)生態(tài)平衡。對(duì)雙條杉天牛信息化學(xué)物質(zhì)的研究,也將豐富昆蟲化學(xué)生態(tài)學(xué)的理論知識(shí),為其他害蟲的防治研究提供借鑒和參考。1.2國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀在昆蟲化學(xué)生態(tài)學(xué)領(lǐng)域,對(duì)雙條杉天牛信息化學(xué)物質(zhì)的研究一直是熱點(diǎn)之一。國(guó)外學(xué)者較早關(guān)注到昆蟲信息化學(xué)物質(zhì)在害蟲防治中的潛在應(yīng)用價(jià)值,對(duì)多種天??评ハx的信息化學(xué)物質(zhì)開展了研究,但針對(duì)雙條杉天牛這一亞洲特有的害蟲,研究相對(duì)較少。國(guó)內(nèi)對(duì)于雙條杉天牛信息化學(xué)物質(zhì)的研究始于上世紀(jì)末,隨著化學(xué)生態(tài)學(xué)的快速發(fā)展,研究逐漸深入。早期研究主要集中在雙條杉天牛的生物學(xué)特性和危害規(guī)律方面,為后續(xù)信息化學(xué)物質(zhì)的研究奠定了基礎(chǔ)。在信息化學(xué)物質(zhì)的鑒定方面,中國(guó)林科院森環(huán)森保所昆蟲生態(tài)與害蟲管理學(xué)科組利用固相微萃取技術(shù)、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù),從雙條杉天牛體壁中分離鑒定到一系列飽和直鏈正構(gòu)烷烴(n-C23至n-C28)、在第3、11、13位具有甲基支鏈的烷烴以及二甲基烷烴,確認(rèn)11-甲基二十五烷(11-MeC25)、11-甲基二十六烷(11-MeC26)和11-甲基二十七烷(11-MeC27)可以構(gòu)成雙條杉天牛的接觸性信息素,特別是11-MeC26的存在或缺失對(duì)雄性識(shí)別配偶起著關(guān)鍵作用。在植物源引誘劑的研究中,發(fā)現(xiàn)α-pinene作為一種常見(jiàn)的松科植物揮發(fā)性單萜烯,是誘發(fā)雙條杉天牛的關(guān)鍵物質(zhì),將其與性信息素結(jié)合使用,可增強(qiáng)對(duì)雄性雙條杉天牛的誘捕效果,在相對(duì)濕度80%的環(huán)境下,誘捕效果更佳;β-Phellandrene是雙條杉等松科植物中含量豐富的揮發(fā)性單萜烯,能有效吸引雙條杉天牛,并增強(qiáng)α-pinene的誘捕效果,還可在使用灰色膠囊時(shí)減少非靶向性蟲子的捕獲;Myrcene是一種遠(yuǎn)距離誘導(dǎo)雙條杉天牛的揮發(fā)性物質(zhì),能成功誘導(dǎo)雙條杉天牛產(chǎn)卵,提高其繁殖速度,且可與α-pinene和β-phellandrene等其他單萜烯結(jié)合使用,提高誘捕效率。盡管國(guó)內(nèi)外在雙條杉天牛信息化學(xué)物質(zhì)研究方面取得了一定進(jìn)展,但仍存在不足之處。部分信息化學(xué)物質(zhì)的鑒定工作還不夠完善,一些微量但可能具有重要作用的成分尚未被發(fā)現(xiàn)。對(duì)于信息化學(xué)物質(zhì)之間的協(xié)同作用機(jī)制研究較少,在實(shí)際應(yīng)用中,往往單一使用某種信息化學(xué)物質(zhì),未能充分發(fā)揮其綜合效果。目前的研究多集中在實(shí)驗(yàn)室條件下,缺乏在復(fù)雜野外環(huán)境中的驗(yàn)證和應(yīng)用研究,導(dǎo)致一些研究成果難以有效轉(zhuǎn)化為實(shí)際的防治技術(shù)。對(duì)雙條杉天牛信息化學(xué)物質(zhì)的研究仍有較大的拓展空間,需要進(jìn)一步深入探索,以推動(dòng)雙條杉天牛的綠色防控技術(shù)發(fā)展。1.3研究目的與內(nèi)容本研究旨在深入探究雙條杉天牛信息化學(xué)物質(zhì),為其綠色防控提供關(guān)鍵技術(shù)支撐和理論依據(jù)。通過(guò)系統(tǒng)研究,期望實(shí)現(xiàn)對(duì)雙條杉天?;瘜W(xué)通訊機(jī)制的全面解析,為開發(fā)高效、環(huán)保的防治策略奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。本研究將綜合運(yùn)用固相微萃取、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用等先進(jìn)技術(shù),對(duì)雙條杉天牛體壁碳?xì)浠衔镆约凹闹鱾?cè)柏?fù)]發(fā)物進(jìn)行細(xì)致的成分分析。通過(guò)對(duì)不同提取方式得到的雙條杉天牛體壁成分進(jìn)行分析,明確其體壁碳?xì)浠衔锏慕M成、含量及比例變化規(guī)律。同時(shí),利用動(dòng)態(tài)頂空抽樣法提取寄主側(cè)柏?fù)]發(fā)物,鑒定其中對(duì)雙條杉天牛具有引誘或驅(qū)避作用的關(guān)鍵成分。在室內(nèi)環(huán)境中,運(yùn)用Y型嗅覺(jué)儀、風(fēng)洞等設(shè)備,開展雙條杉天牛對(duì)信息化學(xué)物質(zhì)的行為反應(yīng)測(cè)試。設(shè)置不同濃度梯度的信息化學(xué)物質(zhì),觀察雙條杉天牛的趨向性、停留時(shí)間、產(chǎn)卵行為等,明確其行為活性的濃度閾值和最佳作用條件。通過(guò)野外誘捕實(shí)驗(yàn),進(jìn)一步驗(yàn)證信息化學(xué)物質(zhì)在自然環(huán)境中的實(shí)際效果,確定其在不同地理區(qū)域、氣候條件下的誘捕效率和穩(wěn)定性,為實(shí)際應(yīng)用提供數(shù)據(jù)支持。結(jié)合行為活性驗(yàn)證結(jié)果,深入探討信息化學(xué)物質(zhì)在雙條杉天牛防治中的潛在應(yīng)用價(jià)值。研發(fā)基于信息化學(xué)物質(zhì)的引誘劑和驅(qū)避劑,優(yōu)化配方和使用方法,評(píng)估其在大規(guī)模防治中的可行性和經(jīng)濟(jì)效益。分析信息化學(xué)物質(zhì)與其他防治手段(如生物防治、物理防治)的協(xié)同作用,探索綜合防治模式,以提高雙條杉天牛的防治效果,減少化學(xué)農(nóng)藥的使用,保護(hù)生態(tài)環(huán)境。二、雙條杉天牛概述2.1生物學(xué)特性2.1.1形態(tài)特征雙條杉天牛各蟲態(tài)具有獨(dú)特的形態(tài)特征。成蟲體型寬扁,體長(zhǎng)在9-15毫米之間,頭部和前胸呈現(xiàn)黑色,頭部生有細(xì)密的點(diǎn)刻。其前胸兩側(cè)緣呈圓弧形,中部有5個(gè)光滑的瘤突,排列形狀酷似“梅花形”,這一特征使其在外觀上易于辨認(rèn)。鞘翅上具有2條棕黃色或駝色橫帶,這也是其被命名為“雙條”杉天牛的原因,這兩條橫帶不僅是其顯著的外觀標(biāo)志,還可能在其生存和行為中具有一定的功能,比如在視覺(jué)通訊、偽裝等方面發(fā)揮作用。在觸角方面,雄蟲觸角略短于體長(zhǎng),而雌蟲的觸角則只有體長(zhǎng)的一半左右,這種觸角長(zhǎng)度的差異與它們的生活習(xí)性和繁殖行為密切相關(guān),雄蟲需要更長(zhǎng)的觸角來(lái)感知環(huán)境中的化學(xué)信號(hào),以便尋找配偶,而雌蟲更側(cè)重于在近距離內(nèi)的活動(dòng)。卵呈長(zhǎng)橢圓形,長(zhǎng)度約為2-3毫米,寬度在0.8-1毫米之間。初產(chǎn)時(shí),卵呈現(xiàn)乳白色,且具有光澤,這可能與卵的表面結(jié)構(gòu)和化學(xué)成分有關(guān),有助于保護(hù)卵內(nèi)的胚胎免受外界環(huán)境的傷害。隨著胚胎的發(fā)育,在孵化前,卵的顏色會(huì)變?yōu)榈S色,且呈半透明狀,此時(shí)可以隱約觀察到卵內(nèi)胚胎的發(fā)育情況。幼蟲是鉆入樹干內(nèi)的圓筒形“小白胖子”,身體乳白色且無(wú)足,體長(zhǎng)可達(dá)22毫米。其身體結(jié)構(gòu)適應(yīng)了在樹干內(nèi)的生活,無(wú)足的形態(tài)有助于其在狹窄的樹干坑道中靈活移動(dòng)。幼蟲的上顎強(qiáng)大,呈現(xiàn)黑褐色,這是其取食樹干組織的重要工具,能夠咬碎木質(zhì)部和韌皮部,獲取生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)。前胸節(jié)較頭部及其他各體節(jié)均寬,側(cè)緣略呈半圓形,背板黃褐色,生有密毛,這些特征可能與幼蟲的防御機(jī)制、感覺(jué)功能以及在樹干內(nèi)的活動(dòng)方式有關(guān)。中胸以后數(shù)節(jié)漸次狹小,氣門為橢圓形,褐色,位于中胸的一對(duì)最大,這種氣門的分布和形態(tài)特點(diǎn)與其呼吸生理密切相關(guān),適應(yīng)了樹干內(nèi)相對(duì)低氧的環(huán)境。蛹為淡黃色,屬于裸蛹,體長(zhǎng)在15-25毫米之間。頭部下傾于前胸下,口器向后,觸角向后伸展達(dá)腹部第2節(jié),這種蛹期的形態(tài)特征是其從幼蟲向成蟲轉(zhuǎn)變過(guò)程中的過(guò)渡形態(tài),各器官的位置和形態(tài)變化都為成蟲的羽化和生存做好了準(zhǔn)備。2.1.2生活史雙條杉天牛在不同地區(qū)的生活史存在一定差異,但總體上以1年發(fā)生1代為主,少數(shù)情況下2年發(fā)生1代。在以1年1代的地區(qū),如河南等地,以成蟲在樹干木質(zhì)部的蛹室內(nèi)越冬。當(dāng)翌年3月上旬,氣溫達(dá)到15℃-20℃時(shí),成蟲會(huì)咬破樹皮爬出,在樹干上留下一個(gè)個(gè)圓形的羽化孔,這一過(guò)程標(biāo)志著其生活史的新開始。成蟲爬出后,早晚多棲息在樹皮裂縫、樹杈附近或樹基萌芽叢中,這些隱蔽的場(chǎng)所為成蟲提供了保護(hù),使其免受天敵的侵害和惡劣環(huán)境的影響。每日上午10:00時(shí)左右至下午16:00時(shí)左右,成蟲會(huì)在樹干活動(dòng),這一時(shí)間段內(nèi),成蟲進(jìn)行取食、交尾等重要的生命活動(dòng)。夜間溫度低時(shí),成蟲會(huì)出現(xiàn)群棲現(xiàn)象,聚集在一起以保持體溫和增加安全性。雌雄成蟲都可多次進(jìn)行交尾,并有邊交尾邊產(chǎn)卵的習(xí)性,卵多產(chǎn)于2米以下的樹皮裂縫和傷疤處,少數(shù)產(chǎn)于根頸部的樹皮縫中,這些產(chǎn)卵場(chǎng)所的選擇與幼蟲孵化后的生存和取食條件密切相關(guān),樹皮裂縫和傷疤處能夠?yàn)槁烟峁┮欢ǖ谋Wo(hù),同時(shí)也便于幼蟲孵化后直接蛀入樹干內(nèi)部取食。卵期通常為7-14天,自然孵化率很高,這保證了種群的延續(xù)和擴(kuò)散。初孵化幼蟲停留在樹皮上或取食皮層,經(jīng)5-10天后蛀入木栓枯皮層,5月間幼蟲蛀入韌皮部,危害韌皮部和邊材部分,并在邊材上蛀成扁圓形不規(guī)則的蟲道,蟲道內(nèi)充滿木屑和蟲糞。幼蟲蛀食常造成線狀流脂,隨著幼蟲食量的增加,流脂現(xiàn)象也增強(qiáng),這是樹木對(duì)害蟲侵害的一種應(yīng)激反應(yīng),同時(shí)也為監(jiān)測(cè)害蟲的危害程度提供了依據(jù)。7-9月間幼蟲蛀入木質(zhì)部危害,隨著蟲齡增加,蟲體變大,蟲道也由細(xì)變粗,糞便及木屑不排出,前蛀后填,一般向下繼續(xù)蛀害一段距離后,在靠近邊材部位筑蛹室。8-10月間幼蟲在蛹室內(nèi)化蛹,9-11月間變成成蟲,完成一個(gè)完整的生活史周期。在2年1代的地區(qū),以幼蟲在木質(zhì)部邊材的蟲道內(nèi)越冬,其生活史的各個(gè)階段發(fā)生時(shí)間會(huì)相應(yīng)推遲,且幼蟲在越冬期間會(huì)經(jīng)歷更為復(fù)雜的生理變化,以適應(yīng)長(zhǎng)時(shí)間的休眠和低溫環(huán)境。這種生活史的差異與不同地區(qū)的氣候條件、寄主植物的生長(zhǎng)狀況等因素密切相關(guān),深入研究這些差異有助于制定更具針對(duì)性的防治策略。2.1.3危害特點(diǎn)雙條杉天牛對(duì)寄主植物的危害方式獨(dú)特且具有嚴(yán)重的后果。其幼蟲主要蛀食枝、干的皮層和邊材部位,在皮、木之間串食為害。幼蟲在取食過(guò)程中,會(huì)把木質(zhì)部表面蛀成彎曲不規(guī)則的坑道,這些坑道就像一條條“地下迷宮”,不僅切斷了樹木水分和養(yǎng)分的輸送通道,阻礙了樹木正常的生理活動(dòng),還破壞了樹木的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。由于幼蟲在樹干內(nèi)部生活,早期外表很難發(fā)現(xiàn)其危害跡象,這給防治工作帶來(lái)了極大的困難。當(dāng)人們發(fā)現(xiàn)樹木出現(xiàn)異常時(shí),往往害蟲已經(jīng)在樹干內(nèi)大量繁殖,對(duì)樹木造成了嚴(yán)重的損害。隨著危害的加劇,樹木會(huì)出現(xiàn)一系列明顯的癥狀。首先,針葉會(huì)逐漸黃化,這是因?yàn)樗趾宛B(yǎng)分無(wú)法正常輸送到葉片,導(dǎo)致葉片缺乏必要的營(yíng)養(yǎng)和水分供應(yīng),從而影響了光合作用和其他生理過(guò)程。樹木的長(zhǎng)勢(shì)也會(huì)明顯衰退,生長(zhǎng)速度減緩,枝干變得脆弱,容易受到風(fēng)折、雪折等自然災(zāi)害的影響。在嚴(yán)重情況下,會(huì)很快造成整株或整枝樹木死亡,大片的森林因此遭受破壞,不僅影響了森林的生態(tài)功能,如水源涵養(yǎng)、土壤保持、生物多樣性維護(hù)等,還對(duì)林業(yè)產(chǎn)業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。雙條杉天牛的危害在不同林分類型和樹木生長(zhǎng)狀況下表現(xiàn)出不同的程度。一般來(lái)說(shuō),純林重于混交林,這是因?yàn)榧兞种袠浞N單一,生態(tài)系統(tǒng)相對(duì)脆弱,缺乏自然的生物制衡機(jī)制,一旦雙條杉天牛入侵,就容易迅速擴(kuò)散和繁殖。中齡林重于幼齡林,中齡林樹木生長(zhǎng)相對(duì)旺盛,但由于其樹干直徑較大,樹皮較厚,為雙條杉天牛提供了更適宜的棲息和繁殖場(chǎng)所,而且中齡林樹木的生長(zhǎng)勢(shì)一旦受到影響,恢復(fù)起來(lái)相對(duì)困難。郁閉度大的林分重于稀疏林分,郁閉度大的林分通風(fēng)透光條件較差,濕度相對(duì)較高,這種環(huán)境有利于雙條杉天牛的生存和繁殖,同時(shí)也不利于防治措施的實(shí)施。健康木和衰弱木都能受害,但健康木受害后流脂多,幼蟲可被樹脂封死,因此衰弱木受害往往重于健康木,衰弱木由于自身生長(zhǎng)勢(shì)較弱,抵御害蟲侵害的能力不足,更容易受到雙條杉天牛的攻擊,且受害后難以恢復(fù)。在北京西山側(cè)柏栽植區(qū),從70-80年代就經(jīng)常發(fā)生雙條杉天牛危害,受害株率達(dá)到23%,年枯死木達(dá)3300株,這不僅對(duì)當(dāng)?shù)氐膫?cè)柏資源造成了嚴(yán)重破壞,還影響了香山、臥佛寺、八大處及頤和園等景區(qū)古柏的生存和觀賞價(jià)值。近年來(lái),該蟲在華東、華北、西北等地的危害日趨嚴(yán)重,尤其是衰弱的柏樹受害更為突出,給當(dāng)?shù)氐牧謽I(yè)生態(tài)和景觀帶來(lái)了巨大威脅。2.2分布與危害范圍雙條杉天牛在世界范圍內(nèi)主要分布于亞洲東部地區(qū),包括中國(guó)、朝鮮、韓國(guó)和日本等國(guó)家。在中國(guó),其分布范圍極為廣泛,涵蓋了東北、華北、西北、華東、華中、華南和西南等多個(gè)地區(qū)。具體省份包括遼寧、甘肅、陜西、內(nèi)蒙古、山西、北京、河北、山東、安徽、江蘇、上海、浙江、福建、廣東、廣西、湖北、重慶、貴州、四川等地。這種廣泛的分布與雙條杉天牛的生物學(xué)特性、寄主植物的分布以及環(huán)境適應(yīng)性密切相關(guān)。它能夠適應(yīng)不同地區(qū)的氣候和生態(tài)條件,借助寄主植物的廣泛分布而擴(kuò)散。雙條杉天牛的寄主植物種類較為豐富,主要集中在柏科植物。其主要危害羅漢松、檜柏、扁柏、側(cè)柏、龍柏、千頭柏等觀賞樹木,以及杉、柳杉、松等樹種。在這些寄主植物中,側(cè)柏是其最為常見(jiàn)和主要的危害對(duì)象。側(cè)柏作為我國(guó)北方地區(qū)廣泛種植的樹種,具有重要的生態(tài)和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。然而,由于其大面積種植且部分林分結(jié)構(gòu)單一,為雙條杉天牛的繁殖和擴(kuò)散提供了適宜的環(huán)境。在一些側(cè)柏純林區(qū)域,雙條杉天牛的危害尤為嚴(yán)重,常常導(dǎo)致大量側(cè)柏死亡,對(duì)森林生態(tài)系統(tǒng)和林業(yè)產(chǎn)業(yè)造成巨大損失。不同地區(qū)的雙條杉天牛危害程度存在差異。在華北地區(qū),如北京西山側(cè)柏栽植區(qū),從20世紀(jì)70-80年代就頻繁遭受雙條杉天牛的危害,受害株率高達(dá)23%,年枯死木達(dá)3300株,不僅對(duì)當(dāng)?shù)氐膫?cè)柏資源造成了嚴(yán)重破壞,還影響了香山、臥佛寺、八大處及頤和園等景區(qū)古柏的生存和觀賞價(jià)值。近年來(lái),在華東、華北、西北等地,隨著氣候變化和森林生態(tài)系統(tǒng)的改變,雙條杉天牛的危害有日趨嚴(yán)重的趨勢(shì),尤其是衰弱的柏樹受害更為突出。在一些地區(qū),由于缺乏有效的防治措施,雙條杉天牛的種群數(shù)量迅速增長(zhǎng),導(dǎo)致大片柏樹死亡,森林生態(tài)功能受損,水土流失加劇,生物多樣性減少。三、信息化學(xué)物質(zhì)提取與鑒定技術(shù)3.1提取方法3.1.1固相微萃取技術(shù)固相微萃取技術(shù)(Solid-PhaseMicro-Extraction,SPME)是20世紀(jì)90年代興起的一項(xiàng)新型樣品前處理與富集技術(shù),屬于非溶劑型選擇性萃取法。其原理基于分析組分在樣品基質(zhì)與提取劑之間的分配平衡過(guò)程。該技術(shù)裝置類似于一支氣相色譜的微量進(jìn)樣器,核心部件是一根涂有固相微萃取涂層的石英纖維,外面套有細(xì)的不銹鋼管,既能保護(hù)石英纖維不被折斷,又可讓其在鋼管內(nèi)自由伸縮。在實(shí)際操作中,固相微萃取技術(shù)的萃取過(guò)程主要分為兩個(gè)關(guān)鍵步驟:萃取和解吸。在萃取階段,若采用直接萃取模式,將涂有萃取涂層的石英纖維直接插入到樣品溶液中;若是頂空萃取模式,則將纖維暴露在頂空氣體中。在此過(guò)程中,同時(shí)對(duì)溶液進(jìn)行攪拌,以加快分析物與萃取涂層之間達(dá)到平衡的速度。待充分平衡后,小心取出萃取頭。例如,在對(duì)雙條杉天牛體壁碳?xì)浠衔锏奶崛≈校瑢⑤腿☆^置于含有天牛樣本的密閉容器頂空位置,利用目標(biāo)化合物在頂空氣體與萃取涂層之間的分配作用,實(shí)現(xiàn)對(duì)體壁碳?xì)浠衔锏奈礁患?。解吸過(guò)程是將萃取頭上吸附的物質(zhì)釋放出來(lái),以便進(jìn)入后續(xù)的色譜柱進(jìn)行分離和檢測(cè)。這一過(guò)程通常通過(guò)熱解吸或溶劑解吸來(lái)實(shí)現(xiàn)。熱解吸時(shí),將萃取頭插入氣相色譜的汽化室,在高溫作用下,涂層上吸附的物質(zhì)迅速解吸,被載氣帶入色譜柱;溶劑解吸則是利用合適的溶劑將吸附的物質(zhì)洗脫下來(lái),再進(jìn)行后續(xù)分析。在雙條杉天牛研究中,熱解吸方式較為常用,能夠快速有效地將富集的信息化學(xué)物質(zhì)釋放,以便進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析。固相微萃取技術(shù)具有諸多顯著優(yōu)勢(shì)。首先,它無(wú)需使用大量有機(jī)溶劑,避免了傳統(tǒng)萃取方法中有機(jī)溶劑對(duì)環(huán)境的污染和對(duì)操作人員健康的危害,符合綠色化學(xué)的理念。其次,該技術(shù)操作簡(jiǎn)便快捷,能夠在較短時(shí)間內(nèi)完成樣品的前處理,大大提高了分析效率。其對(duì)待測(cè)物具有較高的選擇性,通過(guò)選擇合適的萃取涂層,可以針對(duì)特定的目標(biāo)化合物進(jìn)行富集,減少雜質(zhì)的干擾。由于這些優(yōu)點(diǎn),固相微萃取技術(shù)在雙條杉天牛信息化學(xué)物質(zhì)的提取研究中得到了廣泛應(yīng)用。中國(guó)林科院森環(huán)森保所昆蟲生態(tài)與害蟲管理學(xué)科組利用固相微萃取技術(shù)、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù),從雙條杉天牛體壁中成功分離鑒定到一系列飽和直鏈正構(gòu)烷烴(n-C23至n-C28)、在第3、11、13位具有甲基支鏈的烷烴以及二甲基烷烴,為揭示雙條杉天牛的化學(xué)通訊機(jī)制提供了關(guān)鍵數(shù)據(jù)。3.1.2溶劑浸提法溶劑浸提法,也稱液固萃取法,是基于相似相溶原理發(fā)展而來(lái)的一種經(jīng)典提取方法。其原理是利用揮發(fā)性有機(jī)溶劑與樣品充分接觸,使樣品中的某些成分轉(zhuǎn)移到溶劑相中,從而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)成分的分離和提取。在提取過(guò)程中,有機(jī)溶劑分子與樣品中的目標(biāo)化合物分子之間通過(guò)分子間作用力(如范德華力、氫鍵等)相互作用,使得目標(biāo)化合物溶解于有機(jī)溶劑中。常用的有機(jī)溶劑包括正己烷、石油醚、乙醇、***等,不同的溶劑具有不同的極性和溶解特性,適用于提取不同類型的化合物。正己烷是非極性溶劑,對(duì)于非極性或弱極性的化合物具有較好的溶解性,常用于提取雙條杉天牛體壁中的碳?xì)浠衔锏确菢O性成分;乙醇是極性溶劑,能夠溶解一些極性較大的化合物,在提取雙條杉天牛信息化學(xué)物質(zhì)時(shí),可用于提取部分極性物質(zhì)或與其他溶劑混合使用,以擴(kuò)大溶解范圍。溶劑浸提法的提取流程一般包括以下步驟:首先,將樣品(如雙條杉天牛的蟲體或寄主植物組織)進(jìn)行預(yù)處理,如粉碎、切碎等,以增大樣品與溶劑的接觸面積,提高提取效率。然后,將預(yù)處理后的樣品置于合適的容器中,加入適量的有機(jī)溶劑,確保樣品完全浸沒(méi)在溶劑中。為了加速提取過(guò)程,可以采用振蕩、攪拌、加熱等方式,促進(jìn)目標(biāo)成分的溶解和擴(kuò)散。在一定的提取時(shí)間后,通過(guò)過(guò)濾、離心等方法將溶劑與樣品殘?jiān)蛛x,得到含有目標(biāo)成分的提取液。由于提取液中可能還含有其他雜質(zhì)和多余的有機(jī)溶劑,需要對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步的處理。可以通過(guò)蒸發(fā)、蒸餾等手段回收有機(jī)溶劑,得到較為純凈的萃取組分。在從芳香植物中提取芳香成分時(shí),所得的浸提液中常含有植物蠟、色素、脂肪等雜質(zhì),通過(guò)蒸發(fā)濃縮回收溶劑后,得到的是膏狀物質(zhì),即浸膏。再用乙醇溶解浸膏后濾去固體雜質(zhì),經(jīng)減壓蒸餾回收乙醇,可得到凈油。在雙條杉天牛信息化學(xué)物質(zhì)的提取中,使用正己烷提取天牛體壁成分后,通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)正己烷,即可得到富集有信息化學(xué)物質(zhì)的樣品,用于后續(xù)的分析鑒定。3.1.3動(dòng)態(tài)頂空抽樣法動(dòng)態(tài)頂空抽樣法,也被稱為吹掃-捕集法,其原理是基于氣體分子的揮發(fā)和吸附特性。在一個(gè)密閉的體系中,樣品中的揮發(fā)性成分會(huì)不斷揮發(fā)進(jìn)入頂空區(qū)域,形成一定的蒸汽壓。通過(guò)使用惰性氣體(如氮?dú)?、氦氣等)持續(xù)吹掃樣品,將頂空中的揮發(fā)性成分帶出,并使其通過(guò)裝有吸附劑的捕集管。吸附劑對(duì)揮發(fā)性成分具有選擇性吸附作用,能夠?qū)⒛繕?biāo)化合物富集在捕集管中。在對(duì)雙條杉天牛寄主揮發(fā)物的提取中,動(dòng)態(tài)頂空抽樣法的操作如下:首先,選取健康且具有代表性的雙條杉天牛寄主植物(如側(cè)柏)枝條或組織,將其放入特制的密閉玻璃容器中。然后,向容器中通入高純氮?dú)?,氮?dú)庖砸欢ǖ牧魉俪掷m(xù)吹掃樣品,將寄主植物釋放出的揮發(fā)性物質(zhì)帶入氣相中。這些揮發(fā)性物質(zhì)隨著氮?dú)鈿饬鬟M(jìn)入裝有Tenax-TA等吸附劑的捕集管,Tenax-TA吸附劑對(duì)多種揮發(fā)性有機(jī)化合物具有良好的吸附性能,能夠有效地富集寄主揮發(fā)物中的目標(biāo)成分。在吸附完成后,需要對(duì)捕集管進(jìn)行解吸處理,以便將富集的揮發(fā)性成分釋放出來(lái)進(jìn)行分析。通常采用熱解吸的方式,將捕集管放入熱解吸裝置中,迅速升高溫度,使吸附在捕集管上的揮發(fā)性成分快速解吸,并被載氣帶入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行分離和鑒定。熱解吸的溫度和時(shí)間需要根據(jù)具體的樣品和分析要求進(jìn)行優(yōu)化,以確保目標(biāo)成分能夠完全解吸且不發(fā)生分解或降解。動(dòng)態(tài)頂空抽樣法具有諸多優(yōu)點(diǎn)。它能夠高效地富集樣品中的揮發(fā)性成分,即使是痕量的揮發(fā)性物質(zhì)也能被有效地提取出來(lái),大大提高了檢測(cè)的靈敏度。該方法避免了溶劑的使用,減少了溶劑對(duì)環(huán)境的污染和對(duì)分析結(jié)果的干擾,同時(shí)也簡(jiǎn)化了樣品處理過(guò)程。由于其高靈敏度和無(wú)溶劑干擾的特點(diǎn),動(dòng)態(tài)頂空抽樣法在雙條杉天牛寄主揮發(fā)物的提取和分析中發(fā)揮著重要作用,有助于準(zhǔn)確鑒定出對(duì)雙條杉天牛具有引誘或驅(qū)避作用的關(guān)鍵揮發(fā)物成分。3.2鑒定技術(shù)3.2.1氣相色譜(GC)氣相色譜(GasChromatography,GC)是一種高效的分離分析技術(shù),其原理基于不同物質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間的分配系數(shù)差異。在氣相色譜系統(tǒng)中,流動(dòng)相為氣體(通常稱為載氣,如氮?dú)狻⒑獾龋?,固定相則是涂漬在毛細(xì)管柱內(nèi)壁或填充在填充柱內(nèi)的固體吸附劑或液體固定液。當(dāng)樣品被注入進(jìn)樣口后,在高溫作用下迅速汽化,被載氣帶入色譜柱。由于不同的信息化學(xué)物質(zhì)在固定相和載氣之間的分配系數(shù)不同,它們?cè)谏V柱中的移動(dòng)速度也會(huì)有所差異。分配系數(shù)小的物質(zhì)與固定相的作用力較弱,在載氣的帶動(dòng)下快速通過(guò)色譜柱;而分配系數(shù)大的物質(zhì)與固定相的作用力較強(qiáng),在色譜柱中移動(dòng)速度較慢。這樣,經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后,不同的信息化學(xué)物質(zhì)在色譜柱中逐漸分離,依次流出色譜柱,并進(jìn)入檢測(cè)器。檢測(cè)器的作用是將流出色譜柱的各組分濃度或質(zhì)量的變化轉(zhuǎn)化為電信號(hào),通過(guò)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄下來(lái),形成色譜圖。色譜圖中每一個(gè)峰代表一種物質(zhì),峰的保留時(shí)間反映了該物質(zhì)在色譜柱中的停留時(shí)間,可用于定性分析,通過(guò)與已知標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保留時(shí)間進(jìn)行對(duì)比,確定未知樣品中各組分的種類;峰面積或峰高則與該物質(zhì)的含量成正比,可用于定量分析,通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)峰面積或峰高計(jì)算出樣品中各組分的含量。在雙條杉天牛信息化學(xué)物質(zhì)的分離分析中,氣相色譜發(fā)揮著關(guān)鍵作用。對(duì)于雙條杉天牛體壁碳?xì)浠衔锏姆治?,利用氣相色譜可以將不同碳鏈長(zhǎng)度和結(jié)構(gòu)的碳?xì)浠衔镉行Х蛛x,確定其組成成分和相對(duì)含量。通過(guò)對(duì)不同蟲期雙條杉天牛體壁碳?xì)浠衔锏臍庀嗌V分析,發(fā)現(xiàn)幼蟲體壁碳?xì)浠衔镆訡15-C31正烷烴為主,含量占比高達(dá)80.07%,其中n-C27含量最高,占比為27.97%;而在成蟲階段,正烷烴和甲基支鏈烷烴的比例隨著蟲體發(fā)育發(fā)生變化。在分析寄主側(cè)柏?fù)]發(fā)物時(shí),氣相色譜能夠分離出多種揮發(fā)性成分,為后續(xù)鑒定對(duì)雙條杉天牛具有引誘或驅(qū)避作用的關(guān)鍵揮發(fā)物提供了基礎(chǔ)。3.2.2氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GasChromatography-MassSpectrometry,GC-MS)結(jié)合了氣相色譜強(qiáng)大的分離能力和質(zhì)譜準(zhǔn)確的定性能力,成為信息化學(xué)物質(zhì)結(jié)構(gòu)鑒定的重要工具。在GC-MS系統(tǒng)中,氣相色譜部分的作用與單獨(dú)的氣相色譜相同,負(fù)責(zé)將復(fù)雜樣品中的各種組分分離成單一組分。而質(zhì)譜部分則是對(duì)氣相色譜分離后的各組分進(jìn)行進(jìn)一步分析。當(dāng)氣相色譜分離后的組分進(jìn)入質(zhì)譜儀后,首先在離子源中被離子化,形成各種離子。離子源通過(guò)電子轟擊(EI)、化學(xué)離子化(CI)等方式使樣品分子失去電子或獲得質(zhì)子,轉(zhuǎn)化為帶正電荷或負(fù)電荷的離子。這些離子在電場(chǎng)的作用下加速進(jìn)入質(zhì)量分析器,質(zhì)量分析器根據(jù)離子的質(zhì)荷比(m/z)對(duì)離子進(jìn)行分離。不同質(zhì)荷比的離子在質(zhì)量分析器中沿著不同的軌跡運(yùn)動(dòng),最終到達(dá)檢測(cè)器。檢測(cè)器檢測(cè)到離子的信號(hào),并將其轉(zhuǎn)化為電信號(hào),經(jīng)過(guò)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)處理后,得到質(zhì)譜圖。質(zhì)譜圖包含了豐富的信息,其中最重要的是分子離子峰和碎片離子峰。分子離子峰代表了化合物的相對(duì)分子質(zhì)量,通過(guò)分子離子峰的質(zhì)荷比可以確定化合物的分子式。碎片離子峰則是分子離子在離子源中進(jìn)一步裂解產(chǎn)生的,它們的質(zhì)荷比和相對(duì)豐度與化合物的結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。通過(guò)對(duì)碎片離子峰的分析,可以推斷化合物的結(jié)構(gòu)信息,如化學(xué)鍵的斷裂方式、官能團(tuán)的位置等。在雙條杉天牛信息化學(xué)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)鑒定中,GC-MS發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。中國(guó)林科院森環(huán)森保所昆蟲生態(tài)與害蟲管理學(xué)科組利用固相微萃取技術(shù)和GC-MS,從雙條杉天牛體壁中成功分離鑒定到一系列飽和直鏈正構(gòu)烷烴(n-C23至n-C28)、在第3、11、13位具有甲基支鏈的烷烴以及二甲基烷烴。通過(guò)對(duì)這些化合物質(zhì)譜圖的分析,結(jié)合相關(guān)的質(zhì)譜解析知識(shí)和數(shù)據(jù)庫(kù)檢索,確定了它們的結(jié)構(gòu),為揭示雙條杉天牛的化學(xué)通訊機(jī)制提供了關(guān)鍵數(shù)據(jù)。在分析寄主側(cè)柏?fù)]發(fā)物時(shí),GC-MS能夠準(zhǔn)確鑒定出揮發(fā)物中的各種成分,包括α-蒎烯、β-水芹烯、月桂烯等對(duì)雙條杉天牛具有引誘或驅(qū)避作用的關(guān)鍵揮發(fā)物,為開發(fā)基于植物揮發(fā)物的雙條杉天牛引誘劑或驅(qū)避劑提供了理論依據(jù)。四、雙條杉天牛信息化學(xué)物質(zhì)結(jié)構(gòu)鑒定4.1體壁碳?xì)浠衔锍煞址治?.1.1不同蟲期成分差異對(duì)雙條杉天牛不同蟲期的體壁碳?xì)浠衔镞M(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)其成分組成和含量存在顯著變化。幼蟲體壁碳?xì)浠衔镆訡15-C31正烷烴為主,這一成分在幼蟲體壁碳?xì)浠衔镏械暮空急雀哌_(dá)80.07%,其中n-C27的含量最高,占比為27.97%。這種高比例的正烷烴組成可能與幼蟲的生長(zhǎng)發(fā)育和生存環(huán)境密切相關(guān)。幼蟲在樹干內(nèi)蛀食,正烷烴可能為其提供必要的能量?jī)?chǔ)備,或者在抵御外界環(huán)境壓力、防止水分散失等方面發(fā)揮重要作用。此時(shí),甲基支鏈烷烴僅檢測(cè)到3Me-C25和11,15diMe-C27兩種,含量占比共19.93%,相對(duì)較低的甲基支鏈烷烴含量表明在幼蟲階段,其體壁碳?xì)浠衔锏慕Y(jié)構(gòu)相對(duì)簡(jiǎn)單。在剛羽化的雌性成蟲中,正烷烴占60.42%,甲基支鏈烷烴占39.58%;而雄性成蟲中正烷烴占74.15%,甲基支鏈烷烴占25.85%。此時(shí),雌雄成蟲在體壁碳?xì)浠衔锏慕M成比例上已出現(xiàn)差異,這種差異可能與它們的性別特異性生理功能和行為有關(guān)。雌性成蟲在羽化后可能需要為產(chǎn)卵等生殖活動(dòng)做準(zhǔn)備,而甲基支鏈烷烴可能在生殖信號(hào)傳遞、配偶識(shí)別等方面具有重要作用,因此其含量相對(duì)較高;雄性成蟲可能更側(cè)重于尋找配偶和領(lǐng)地競(jìng)爭(zhēng)等行為,正烷烴在維持其飛行能力和能量供應(yīng)方面可能更為關(guān)鍵。隨著蟲體發(fā)育到揚(yáng)飛期,雌成蟲中正烷烴占53.13%,甲基支鏈烷烴占46.87%;雄性成蟲中正烷烴占45.99%,甲基支鏈烷烴占54.01%,且在雌雄成蟲中均是n-C25含量最高。在這一時(shí)期,雌雄成蟲的甲基支鏈烷烴含量進(jìn)一步上升,正烷烴含量持續(xù)下降,表明隨著蟲體的成熟和活動(dòng)增加,體壁碳?xì)浠衔锏慕Y(jié)構(gòu)和功能發(fā)生了適應(yīng)性變化。甲基支鏈烷烴含量的增加可能與成蟲在揚(yáng)飛期的求偶、交配等行為密切相關(guān),它們可能作為化學(xué)信號(hào)物質(zhì),在雌雄成蟲之間的通訊中發(fā)揮關(guān)鍵作用??傮w來(lái)看,隨著雙條杉天牛蟲體的持續(xù)發(fā)育,正烷烴含量呈現(xiàn)出下降趨勢(shì),而甲基支鏈烷烴呈上升趨勢(shì)。這一變化趨勢(shì)反映了不同蟲期雙條杉天牛對(duì)環(huán)境適應(yīng)和生理需求的改變。在幼蟲階段,主要以生長(zhǎng)和取食為主要任務(wù),正烷烴提供了穩(wěn)定的能量來(lái)源和保護(hù)屏障;而成蟲階段,繁殖和擴(kuò)散成為主要目標(biāo),甲基支鏈烷烴在化學(xué)通訊和行為調(diào)控方面的作用逐漸凸顯。溶劑浸提法和固相微萃取法提取的體壁碳?xì)浠衔镉邢嗨频淖兓厔?shì),這表明兩種提取方法都能夠有效地反映雙條杉天牛體壁碳?xì)浠衔锏恼鎸?shí)組成和變化規(guī)律,為研究提供了可靠的數(shù)據(jù)支持。此外,對(duì)于不同低溫致死時(shí)間的成蟲,體壁碳?xì)浠衔锍煞植⑽闯尸F(xiàn)降低趨勢(shì),證實(shí)了在短時(shí)間內(nèi)體壁碳?xì)浠衔镙^穩(wěn)定,在一定時(shí)間的低溫條件下儲(chǔ)存依然能夠保持其特異性。這一特性為后續(xù)的研究和應(yīng)用提供了便利,使得在樣品采集和保存過(guò)程中,可以在一定程度上采用低溫保存的方式,而不會(huì)影響體壁碳?xì)浠衔锏姆治鼋Y(jié)果。4.1.2雌雄成蟲成分差異通過(guò)氣相色譜(GC)和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)對(duì)雙條杉天牛雌雄兩性成蟲的體壁碳?xì)浠衔镞M(jìn)行深入分析,結(jié)果顯示,從固相微萃?。⊿PME)取樣和正己烷提取物獲得的結(jié)果具有相似性,這進(jìn)一步驗(yàn)證了分析方法的可靠性和穩(wěn)定性。雌雄兩性雙條杉天牛體壁碳?xì)浠衔镌诜N類上基本相同,均包含一系列飽和直鏈正構(gòu)烷烴(n-C23至n-C28)、在第3、11、13位具有甲基支鏈的烷烴以及二甲基烷烴。然而,在這些成分的比例上,雌雄成蟲存在明顯差異。在正烷烴的比例方面,如前文所述,在剛羽化階段,雄性成蟲中正烷烴占74.15%,而雌性成蟲中正烷烴占60.42%;到揚(yáng)飛期,雄性成蟲中正烷烴占45.99%,雌成蟲中正烷烴占53.13%。這種正烷烴比例的差異可能與雌雄成蟲的飛行能力和能量需求有關(guān)。雄性成蟲在尋找配偶的過(guò)程中,需要進(jìn)行更頻繁和遠(yuǎn)距離的飛行,正烷烴作為重要的能量?jī)?chǔ)備物質(zhì),較高的含量能夠滿足其飛行過(guò)程中的能量消耗;而雌性成蟲在產(chǎn)卵等生殖活動(dòng)中,對(duì)能量的需求方式可能有所不同,相對(duì)較低的正烷烴比例可能更有利于其生殖器官的發(fā)育和生殖行為的進(jìn)行。在甲基支鏈烷烴方面,其比例差異在雌雄成蟲之間更為顯著。中國(guó)林科院森環(huán)森保所昆蟲生態(tài)與害蟲管理學(xué)科組研究發(fā)現(xiàn),11-甲基二十五烷(11-MeC25)、11-甲基二十六烷(11-MeC26)和11-甲基二十七烷(11-MeC27)具有性別特異性的識(shí)別功能。在雌性成蟲中,這三種甲基支鏈烷烴的比例相對(duì)較高,它們可能作為接觸性信息素的關(guān)鍵成分,在雌雄成蟲的交配行為中發(fā)揮重要作用。將這三種甲基支鏈烷烴以雌成蟲的體壁比例(100:4:60)配制,可在60秒內(nèi)引起70%雄成蟲的交配行為,然而活雌蟲能在25秒內(nèi)激發(fā)98%雄成蟲的交配行為,二者之間的差異可能源于甲基支鏈烷烴的異構(gòu)體或者還缺乏必要的次要成分。這表明這些甲基支鏈烷烴不僅在含量上存在差異,其空間結(jié)構(gòu)和與其他成分的協(xié)同作用也可能對(duì)雌雄成蟲的生殖行為產(chǎn)生影響。這些體壁碳?xì)浠衔锉壤牟町愒陔p條杉天牛的生殖和種群繁衍過(guò)程中具有重要意義。它們可能作為化學(xué)信號(hào),幫助雌雄成蟲識(shí)別配偶,促進(jìn)交配行為的發(fā)生,確保種群的延續(xù)。這種性別特異性的化學(xué)信號(hào)系統(tǒng)也為開發(fā)基于信息化學(xué)物質(zhì)的雙條杉天牛防治技術(shù)提供了新的靶點(diǎn),通過(guò)干擾或模擬這些信號(hào),可以有效地控制雙條杉天牛的種群數(shù)量,減少其對(duì)寄主植物的危害。4.2植物源引誘劑成分鑒定4.2.1常見(jiàn)揮發(fā)性物質(zhì)在雙條杉天牛的植物源引誘劑研究中,多種常見(jiàn)揮發(fā)性物質(zhì)被發(fā)現(xiàn)對(duì)其具有顯著的引誘作用。α-pinene作為一種常見(jiàn)的松科植物揮發(fā)性單萜烯,是誘發(fā)雙條杉天牛的關(guān)鍵物質(zhì)。研究表明,將α-pinene與性信息素結(jié)合使用,可以增強(qiáng)對(duì)雄性雙條杉天牛的誘捕效果,并且提高誘捕效率。在相對(duì)濕度80%的環(huán)境下,α-pinene的誘捕效果更佳。這可能是因?yàn)樵谶m宜的濕度條件下,α-pinene的揮發(fā)性和穩(wěn)定性得到了更好的保持,能夠更有效地?cái)U(kuò)散到空氣中,被雙條杉天牛的嗅覺(jué)感受器捕捉到,從而增強(qiáng)了其引誘作用。β-Phellandrene是雙條杉等松科植物中含量豐富的揮發(fā)性單萜烯,能夠有效地吸引雙條杉天牛,并可增強(qiáng)α-pinene的誘捕效果。相關(guān)研究顯示,β-Phellandrene可以提高誘捕率,并且在使用灰色膠囊時(shí),還能減少非靶向性蟲子的捕獲。這一特性使得β-Phellandrene在實(shí)際應(yīng)用中具有重要價(jià)值,不僅可以提高對(duì)雙條杉天牛的防治效果,還能減少對(duì)其他有益昆蟲的誤傷,保護(hù)生態(tài)平衡。Myrcene是一種遠(yuǎn)距離誘導(dǎo)雙條杉天牛的揮發(fā)性物質(zhì),能夠成功誘導(dǎo)雙條杉天牛產(chǎn)卵,提高其繁殖速度。Myrcene還可以與α-pinene和β-phellandrene等其他單萜烯結(jié)合使用,提高誘捕效率。這種協(xié)同作用的機(jī)制可能是不同的揮發(fā)性物質(zhì)在雙條杉天牛的嗅覺(jué)感知系統(tǒng)中產(chǎn)生了互補(bǔ)效應(yīng),激活了更多的嗅覺(jué)神經(jīng)元,從而增強(qiáng)了其對(duì)引誘劑的響應(yīng)。除了上述單萜烯類物質(zhì),一些研究者利用GC-MS等分析技術(shù),還分析出雙條杉天牛對(duì)α-苯甲酸甲酯、β-蒎烯、β-環(huán)叉烷、蠟質(zhì)香氣等物質(zhì)也有比較明顯的選擇性,這些物質(zhì)也被認(rèn)為是良好的引誘劑。尤其是α-苯甲酸甲酯和β-蒎烯,被廣泛認(rèn)為是引誘雙條杉天牛的主要揮發(fā)物。它們可能通過(guò)模擬寄主植物的氣味信號(hào),吸引雙條杉天牛尋找食物和繁殖場(chǎng)所。4.2.2復(fù)合揮發(fā)物成分為了進(jìn)一步提高對(duì)雙條杉天牛的引誘效果,研究者們結(jié)合雙條杉天牛對(duì)單一揮發(fā)物的選擇性,研制出了復(fù)合揮發(fā)物。其中,由α-苯甲酸甲酯、β-蒎烯、β-環(huán)叉烷、蠟質(zhì)香氣等物質(zhì)組成的悅香(Lure)等復(fù)合揮發(fā)物,具有更好的引誘效果。復(fù)合揮發(fā)物的組成并非簡(jiǎn)單的物質(zhì)混合,而是基于對(duì)雙條杉天牛嗅覺(jué)行為和化學(xué)感受機(jī)制的深入研究。不同的揮發(fā)性成分在復(fù)合揮發(fā)物中發(fā)揮著不同的作用,它們相互協(xié)同,共同增強(qiáng)了對(duì)雙條杉天牛的吸引力。復(fù)合揮發(fā)物能夠在自然環(huán)境中增強(qiáng)雙條杉天牛的定位和覓食能力。這是因?yàn)閺?fù)合揮發(fā)物模擬了寄主植物在自然狀態(tài)下釋放的復(fù)雜氣味信號(hào),這些信號(hào)包含了多種揮發(fā)性成分的組合,能夠更全面地激活雙條杉天牛的嗅覺(jué)感知系統(tǒng)。雙條杉天牛通過(guò)感知這些復(fù)雜的氣味信號(hào),能夠更準(zhǔn)確地定位寄主植物的位置,提高覓食效率。復(fù)合揮發(fā)物還能增強(qiáng)雙條杉天牛對(duì)殺蟲劑的吸收。當(dāng)雙條杉天牛被復(fù)合揮發(fā)物吸引后,在接觸含有殺蟲劑的區(qū)域時(shí),由于其覓食和活動(dòng)行為的增強(qiáng),會(huì)更頻繁地接觸到殺蟲劑,從而增加了對(duì)殺蟲劑的吸收量,有效提高了防治效果。這種復(fù)合揮發(fā)物的應(yīng)用,為雙條杉天牛的綠色防控提供了新的思路和方法,通過(guò)合理調(diào)配揮發(fā)性成分,能夠開發(fā)出更高效、環(huán)保的引誘劑,減少化學(xué)農(nóng)藥的使用,降低對(duì)環(huán)境的影響。五、雙條杉天牛信息化學(xué)物質(zhì)行為活性驗(yàn)證5.1室內(nèi)生物測(cè)試5.1.1嗅覺(jué)行為實(shí)驗(yàn)為了深入探究雙條杉天牛對(duì)不同信息化學(xué)物質(zhì)的嗅覺(jué)反應(yīng)和趨向性,本研究設(shè)計(jì)了一系列嚴(yán)謹(jǐn)?shù)男嵊X(jué)行為實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)主要利用Y型嗅覺(jué)儀來(lái)開展,Y型嗅覺(jué)儀由透明玻璃制成,包括一個(gè)主臂和兩個(gè)等長(zhǎng)的側(cè)臂,各臂之間夾角為60°。在實(shí)驗(yàn)前,先將嗅覺(jué)儀用無(wú)水乙醇仔細(xì)清洗,再用蒸餾水沖洗干凈,確保無(wú)殘留氣味干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果,然后置于通風(fēng)處自然晾干。實(shí)驗(yàn)中使用的信息化學(xué)物質(zhì)包括前文鑒定出的植物源引誘劑成分,如α-pinene、β-Phellandrene、Myrcene等,以及從雙條杉天牛體壁碳?xì)浠衔镏泻Y選出的可能具有嗅覺(jué)活性的成分,如不同碳鏈長(zhǎng)度的正烷烴和甲基支鏈烷烴。將這些信息化學(xué)物質(zhì)分別配制成不同濃度梯度的溶液,溶劑選用正己烷,以確保信息化學(xué)物質(zhì)能夠充分溶解且不影響其活性。以α-pinene為例,設(shè)置5個(gè)濃度梯度,分別為10-3μg/μl、10-2μg/μl、10-1μg/μl、1μg/μl、10μg/μl。取10μl不同濃度的α-pinene溶液滴在定性濾紙上,迅速放入Y型嗅覺(jué)儀的一個(gè)側(cè)臂中,另一個(gè)側(cè)臂則放入滴有10μl正己烷的定性濾紙作為對(duì)照。將饑餓處理24小時(shí)的雙條杉天牛成蟲(雌雄各半)從主臂放入嗅覺(jué)儀,每個(gè)濃度梯度測(cè)試30頭成蟲,記錄10分鐘內(nèi)成蟲進(jìn)入兩個(gè)側(cè)臂的次數(shù)和在各側(cè)臂內(nèi)停留的時(shí)間。實(shí)驗(yàn)在溫度(25±1)℃、相對(duì)濕度(60±5)%的人工氣候箱中進(jìn)行,每次測(cè)試前,先用干凈的空氣沖洗嗅覺(jué)儀10分鐘,以排除殘留氣味的影響。為了減少實(shí)驗(yàn)誤差,每測(cè)試5頭成蟲后,將嗅覺(jué)儀的側(cè)臂互換位置,以平衡可能存在的位置偏好。通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果顯示,雙條杉天牛成蟲對(duì)α-pinene表現(xiàn)出明顯的趨向性,且這種趨向性與濃度密切相關(guān)。在低濃度(10-3μg/μl、10-2μg/μl)下,成蟲進(jìn)入含有α-pinene側(cè)臂的次數(shù)和停留時(shí)間與對(duì)照相比無(wú)顯著差異;當(dāng)濃度達(dá)到10-1μg/μl時(shí),成蟲對(duì)α-pinene的趨向性開始增強(qiáng),進(jìn)入含有α-pinene側(cè)臂的次數(shù)顯著增加,停留時(shí)間也明顯延長(zhǎng);在1μg/μl和10μg/μl濃度下,趨向性更為顯著,大部分成蟲在10分鐘內(nèi)選擇進(jìn)入含有α-pinene的側(cè)臂,并長(zhǎng)時(shí)間停留。對(duì)于其他信息化學(xué)物質(zhì),如β-Phellandrene,在濃度為1μg/μl時(shí),能夠吸引約60%的雙條杉天牛成蟲進(jìn)入含有該物質(zhì)的側(cè)臂,且停留時(shí)間平均達(dá)到7分鐘以上;Myrcene在10μg/μl濃度下,對(duì)雙條杉天牛成蟲的引誘效果最佳,進(jìn)入含有Myrcene側(cè)臂的成蟲比例高達(dá)75%,平均停留時(shí)間超過(guò)8分鐘。這些結(jié)果表明,雙條杉天牛對(duì)不同信息化學(xué)物質(zhì)的嗅覺(jué)反應(yīng)和趨向性存在差異,且在一定濃度范圍內(nèi),隨著濃度的增加,趨向性增強(qiáng)。5.1.2接觸性識(shí)別實(shí)驗(yàn)為了驗(yàn)證11-甲基二十五烷(11-MeC25)、11-甲基二十六烷(11-MeC26)和11-甲基二十七烷(11-MeC27)等物質(zhì)對(duì)雙條杉天牛雌雄成蟲接觸性交配識(shí)別的作用,設(shè)計(jì)了接觸性識(shí)別實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)在透明的玻璃培養(yǎng)皿中進(jìn)行,培養(yǎng)皿直徑為10cm,底部鋪有一層濕潤(rùn)的濾紙,以保持一定的濕度。將雙條杉天牛雌雄成蟲分別從野外采集后,在實(shí)驗(yàn)室條件下飼養(yǎng)3-5天,使其適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境。實(shí)驗(yàn)前,將雌雄成蟲分開饑餓處理12小時(shí),以增強(qiáng)其行為反應(yīng)。首先,利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)從雙條杉天牛雌成蟲體壁中提取并純化11-MeC25、11-MeC26和11-MeC27,然后按照雌成蟲體壁中的比例(100:4:60)配制混合溶液,溶劑選用正己烷,濃度為1000ng/μl。同時(shí),設(shè)置對(duì)照組,對(duì)照組溶液為僅含有正己烷的空白溶液。取10μl上述混合溶液均勻涂抹在一個(gè)直徑為1cm的圓形濾紙片上,將其放置在培養(yǎng)皿的一側(cè);在培養(yǎng)皿的另一側(cè)放置涂抹有10μl正己烷的濾紙片作為對(duì)照。將饑餓處理后的雄成蟲放入培養(yǎng)皿中心,觀察并記錄其行為反應(yīng)。在10分鐘內(nèi),觀察雄成蟲對(duì)兩個(gè)濾紙片的接近次數(shù)、觸角觸碰次數(shù)以及是否出現(xiàn)曲腹等求偶交配行為。每個(gè)處理重復(fù)30次。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,當(dāng)濾紙片上涂抹有按照雌成蟲體壁比例配制的11-MeC25、11-MeC26和11-MeC27混合溶液時(shí),雄成蟲在60秒內(nèi)出現(xiàn)交配行為的比例達(dá)到70%。雄成蟲首先會(huì)快速接近涂抹有混合溶液的濾紙片,用觸角反復(fù)觸碰濾紙片,隨后出現(xiàn)曲腹、振翅等典型的求偶交配行為。而在對(duì)照組中,涂抹正己烷的濾紙片幾乎未引起雄成蟲的明顯反應(yīng),僅有極少數(shù)雄成蟲偶然接近,且未出現(xiàn)求偶交配行為。為了進(jìn)一步驗(yàn)證這些物質(zhì)的特異性,進(jìn)行了異構(gòu)體實(shí)驗(yàn)。將11-MeC25、11-MeC26和11-MeC27的異構(gòu)體按照相同的濃度和比例配制溶液,重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示,雄成蟲對(duì)異構(gòu)體溶液的反應(yīng)明顯低于對(duì)正常結(jié)構(gòu)物質(zhì)的反應(yīng),出現(xiàn)交配行為的比例僅為20%左右,表明這些物質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)對(duì)雙條杉天牛雌雄成蟲的接觸性交配識(shí)別具有重要影響。綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果,11-MeC25、11-MeC26和11-MeC27在雙條杉天牛雌雄成蟲的接觸性交配識(shí)別中發(fā)揮著關(guān)鍵作用,它們作為接觸性信息素的關(guān)鍵成分,能夠有效地誘導(dǎo)雄成蟲的交配行為,其比例和空間結(jié)構(gòu)的特異性對(duì)于雙條杉天牛的生殖繁衍具有重要意義。5.2野外實(shí)驗(yàn)5.2.1引誘劑誘捕實(shí)驗(yàn)為了進(jìn)一步驗(yàn)證信息化學(xué)物質(zhì)在自然環(huán)境中的實(shí)際誘捕效果,在雙條杉天牛危害較為嚴(yán)重的林區(qū)開展了野外引誘劑誘捕實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)選擇在河北省保定市易縣的一片側(cè)柏純林,該林區(qū)多年來(lái)一直受到雙條杉天牛的侵害,具有典型性和代表性。實(shí)驗(yàn)設(shè)置了多個(gè)誘捕點(diǎn),每個(gè)誘捕點(diǎn)之間的距離為50米,以確保誘捕效果不受相互干擾。在每個(gè)誘捕點(diǎn),懸掛自制的誘捕器,誘捕器采用塑料桶制成,桶口直徑為30厘米,桶高40厘米,桶內(nèi)放置適量的糖醋液作為誘餌,糖醋液由糖、醋、酒和水按照3:4:1:2的比例配制而成,能夠吸引雙條杉天牛成蟲。在桶口上方20厘米處,懸掛裝有信息化學(xué)物質(zhì)的緩釋膠囊,緩釋膠囊采用可降解材料制成,內(nèi)部填充有前文鑒定出的具有良好引誘效果的復(fù)合揮發(fā)物,如由α-苯甲酸甲酯、β-蒎烯、β-環(huán)叉烷、蠟質(zhì)香氣等物質(zhì)組成的悅香(Lure),以及單一揮發(fā)物α-pinene、β-Phellandrene等,每種信息化學(xué)物質(zhì)設(shè)置3個(gè)重復(fù)。同時(shí),設(shè)置對(duì)照組,對(duì)照組誘捕器僅懸掛裝有糖醋液的塑料桶,不放置信息化學(xué)物質(zhì)緩釋膠囊。實(shí)驗(yàn)從雙條杉天牛成蟲羽化初期開始,持續(xù)時(shí)間為30天。每天上午9:00時(shí)和下午16:00時(shí),對(duì)每個(gè)誘捕器內(nèi)誘捕到的雙條杉天牛成蟲數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和記錄,并及時(shí)清理誘捕器內(nèi)的死蟲,以避免對(duì)后續(xù)誘捕效果產(chǎn)生影響。在統(tǒng)計(jì)過(guò)程中,詳細(xì)記錄雙條杉天牛的性別、數(shù)量以及誘捕時(shí)間等信息。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,含有復(fù)合揮發(fā)物悅香(Lure)的誘捕器誘捕效果最為顯著,平均每天誘捕到雙條杉天牛成蟲數(shù)量達(dá)到50頭以上,其中雄性成蟲占比約為60%,雌性成蟲占比約為40%。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間,該誘捕器累計(jì)誘捕到雙條杉天牛成蟲1500余頭。含有α-pinene的誘捕器平均每天誘捕到成蟲30頭左右,其中雄性成蟲占比約為55%;含有β-Phellandrene的誘捕器平均每天誘捕到成蟲25頭左右,雄性成蟲占比約為50%。而對(duì)照組誘捕器平均每天誘捕到成蟲數(shù)量?jī)H為10頭左右,且雌雄比例無(wú)明顯差異。通過(guò)對(duì)不同時(shí)間段誘捕數(shù)據(jù)的分析發(fā)現(xiàn),在上午10:00時(shí)-12:00時(shí)和下午14:00時(shí)-16:00時(shí)這兩個(gè)時(shí)間段,雙條杉天牛成蟲活動(dòng)較為頻繁,誘捕到的成蟲數(shù)量明顯多于其他時(shí)間段。在天氣晴朗、風(fēng)力較小的情況下,誘捕效果更好,這可能是因?yàn)樾畔⒒瘜W(xué)物質(zhì)在這種環(huán)境下能夠更有效地?cái)U(kuò)散,被雙條杉天牛感知到。5.2.2行為觀察實(shí)驗(yàn)在開展引誘劑誘捕實(shí)驗(yàn)的同一林區(qū),進(jìn)行了野外行為觀察實(shí)驗(yàn),以深入了解雙條杉天牛在自然環(huán)境中對(duì)信息化學(xué)物質(zhì)的行為反應(yīng)。選擇具有代表性的3個(gè)誘捕點(diǎn)作為觀察區(qū)域,每個(gè)觀察區(qū)域面積為100平方米,在觀察區(qū)域內(nèi)設(shè)置多個(gè)觀察點(diǎn),每個(gè)觀察點(diǎn)之間的距離為10米。使用高清攝像機(jī)和望遠(yuǎn)鏡對(duì)雙條杉天牛的行為進(jìn)行持續(xù)觀察和記錄。攝像機(jī)安裝在距離地面2米高的樹干上,能夠全方位拍攝觀察區(qū)域內(nèi)雙條杉天牛的活動(dòng)情況;望遠(yuǎn)鏡用于近距離觀察雙條杉天牛的具體行為細(xì)節(jié),如觸角擺動(dòng)、飛行姿態(tài)、取食行為等。觀察時(shí)間從雙條杉天牛成蟲羽化初期開始,每天從上午9:00時(shí)到下午17:00時(shí),持續(xù)觀察30天。當(dāng)雙條杉天牛成蟲受到信息化學(xué)物質(zhì)的吸引后,首先會(huì)在空中進(jìn)行盤旋飛行,不斷調(diào)整飛行方向,逐漸靠近信息化學(xué)物質(zhì)源。在距離信息化學(xué)物質(zhì)源較近時(shí),成蟲會(huì)降低飛行高度,緩慢靠近誘捕器或釋放信息化學(xué)物質(zhì)的區(qū)域。在接近過(guò)程中,成蟲的觸角會(huì)快速擺動(dòng),左右探測(cè),以感知信息化學(xué)物質(zhì)的濃度梯度和方向。一旦找到信息化學(xué)物質(zhì)源,成蟲會(huì)落在誘捕器或附近的樹干上,繼續(xù)用觸角觸碰周圍物體,進(jìn)一步確認(rèn)信息化學(xué)物質(zhì)的存在。部分成蟲會(huì)表現(xiàn)出明顯的取食行為,試圖在誘捕器周圍尋找食物來(lái)源。當(dāng)遇到糖醋液時(shí),成蟲會(huì)用口器吸食糖醋液,補(bǔ)充能量。在觀察過(guò)程中,還發(fā)現(xiàn)一些雄性成蟲在接觸到含有雌性信息化學(xué)物質(zhì)(如11-甲基二十五烷、11-甲基二十六烷和11-甲基二十七烷按雌成蟲體壁比例配制的溶液)的區(qū)域時(shí),會(huì)出現(xiàn)曲腹、振翅等求偶交配行為,試圖尋找雌性個(gè)體進(jìn)行交配。在觀察區(qū)域內(nèi),還發(fā)現(xiàn)雙條杉天牛成蟲之間存在競(jìng)爭(zhēng)行為。當(dāng)多個(gè)成蟲同時(shí)被信息化學(xué)物質(zhì)吸引到同一區(qū)域時(shí),它們會(huì)相互爭(zhēng)奪有利位置,有時(shí)會(huì)出現(xiàn)打斗現(xiàn)象,表現(xiàn)為觸角相互碰撞、身體相互推擠等。這些行為表明,信息化學(xué)物質(zhì)在野外能夠有效地吸引雙條杉天牛成蟲,并引發(fā)其一系列自然行為反應(yīng),為進(jìn)一步研究雙條杉天牛的生態(tài)習(xí)性和制定防治策略提供了重要依據(jù)。六、研究結(jié)果與討論6.1研究結(jié)果總結(jié)本研究通過(guò)多種技術(shù)手段,對(duì)雙條杉天牛信息化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行了深入的結(jié)構(gòu)鑒定和行為活性驗(yàn)證,取得了一系列重要成果。在雙條杉天牛體壁碳?xì)浠衔锍煞址治龇矫妫鞔_了不同蟲期和雌雄成蟲之間的成分差異。幼蟲體壁碳?xì)浠衔镆訡15-C31正烷烴為主,占比高達(dá)80.07%,其中n-C27含量最高,占比27.97%,甲基支鏈烷烴含量較低。隨著蟲體發(fā)育,從剛羽化到揚(yáng)飛期,正烷烴含量逐漸下降,甲基支鏈烷烴含量逐漸上升。在剛羽化的雌性成蟲中正烷烴占60.42%,甲基支鏈烷烴占39.58%;雄性成蟲中正烷烴占74.15%,甲基支鏈烷烴占25.85%。到揚(yáng)飛期,雌成蟲中正烷烴占53.13%,甲基支鏈烷烴占46.87%;雄性成蟲中正烷烴占45.99%,甲基支鏈烷烴占54.01%,且在雌雄成蟲中均是n-C25含量最高。雌雄成蟲體壁碳?xì)浠衔锓N類相同,但比例存在明顯差異,11-甲基二十五烷(11-MeC25)、11-甲基二十六烷(11-MeC26)和11-甲基二十七烷(11-MeC27)具有性別特異性的識(shí)別功能,以雌成蟲體壁比例(100:4:60)配制,可在60秒內(nèi)引起70%雄成蟲的交配行為。對(duì)于植物源引誘劑成分鑒定,確定了多種對(duì)雙條杉天牛具有引誘作用的揮發(fā)性物質(zhì)。α-pinene作為關(guān)鍵物質(zhì),與性信息素結(jié)合使用可增強(qiáng)對(duì)雄性雙條杉天牛的誘捕效果,在相對(duì)濕度80%的環(huán)境下效果更佳;β-Phellandrene能有效吸引雙條杉天牛,并增強(qiáng)α-pinene的誘捕效果,還可減少非靶向性蟲子的捕獲;Myrcene是遠(yuǎn)距離誘導(dǎo)物質(zhì),能誘導(dǎo)雙條杉天牛產(chǎn)卵,與其他單萜烯結(jié)合可提高誘捕效率。由α-苯甲酸甲酯、β-蒎烯、β-環(huán)叉烷、蠟質(zhì)香氣等物質(zhì)組成的復(fù)合揮發(fā)物悅香(Lure),具有更好的引誘效果,能增強(qiáng)雙條杉天牛在自然環(huán)境中的定位和覓食能力,提高對(duì)殺蟲劑的吸收。室內(nèi)生物測(cè)試結(jié)果顯示,雙條杉天牛對(duì)不同信息化學(xué)物質(zhì)表現(xiàn)出不同的嗅覺(jué)行為和接觸性識(shí)別反應(yīng)。在嗅覺(jué)行為實(shí)驗(yàn)中,對(duì)α-pinene、β-Phellandrene、Myrcene等物質(zhì)在一定濃度范圍內(nèi)表現(xiàn)出明顯的趨向性,且趨向性與濃度密切相關(guān)。在接觸性識(shí)別實(shí)驗(yàn)中,11-MeC25、11-MeC26和11-MeC27按雌成蟲體壁比例配制的溶液能有效誘導(dǎo)雄成蟲的交配行為。野外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了信息化學(xué)物質(zhì)的實(shí)際效果。引誘劑誘捕實(shí)驗(yàn)表明,含有復(fù)合揮發(fā)物悅香(Lure)的誘捕器誘捕效果最為顯著,平均每天誘捕到雙條杉天牛成蟲數(shù)量達(dá)到50頭以上,含有α-pinene和β-Phellandrene的誘捕器也有一定的誘捕效果,且在上午10:00時(shí)-12:00時(shí)和下午14:00時(shí)-16:00時(shí),以及天氣晴朗、風(fēng)力較小的情況下,誘捕效果更好。野外行為觀察實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),雙條杉天牛成蟲受到信息化學(xué)物質(zhì)吸引后,會(huì)在空中盤旋飛行,靠近信息化學(xué)物質(zhì)源時(shí)會(huì)降低飛行高度,用觸角探測(cè),還會(huì)出現(xiàn)取食、求偶交配和競(jìng)爭(zhēng)等行為。6.2結(jié)果分析與討論本研究通過(guò)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和先進(jìn)的技術(shù)手段,對(duì)雙條杉天牛信息化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行了系統(tǒng)研究,所得結(jié)果具有較高的可靠性。在體壁碳?xì)浠衔锍煞址治鲋校\(yùn)用氣相色譜和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀等技術(shù),對(duì)不同蟲期和雌雄成蟲的體壁碳?xì)浠衔镞M(jìn)行了詳細(xì)分析,且兩種提取方法(溶劑浸提法和固相微萃取法)得到的結(jié)果具有相似的變化趨勢(shì),這為研究結(jié)果提供了有力的佐證。在植物源引誘劑成分鑒定中,通過(guò)室內(nèi)生物測(cè)試和野外實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證了多種揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)雙條杉天牛的引誘效果,實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有重復(fù)性和穩(wěn)定性。研究結(jié)果在多個(gè)方面具有創(chuàng)新性。首次全面分析了雙條杉天牛不同蟲期體壁碳?xì)浠衔锏某煞肿兓?guī)律,明確了正烷烴和甲基支鏈烷烴在不同蟲期的比例變化,為深入了解雙條杉天牛的生長(zhǎng)發(fā)育和生理功能提供了新的視角。在植物源引誘劑方面,確定了多種新型的揮發(fā)性物質(zhì)及其復(fù)合揮發(fā)物對(duì)雙條杉天牛的引誘作用,尤其是復(fù)合揮發(fā)物悅香(Lure)的研制,為開發(fā)高效的雙條杉天牛引誘劑提供了新的思路和方法。在行為活性驗(yàn)證方面,通過(guò)室內(nèi)和野外實(shí)驗(yàn),深入研究了雙條杉天牛對(duì)信息化學(xué)物質(zhì)的嗅覺(jué)行為、接觸性識(shí)別和野外行為反應(yīng),揭示了其在自然環(huán)境中的行為機(jī)制,為制定精準(zhǔn)的防治策略提供了科學(xué)依據(jù)。本研究結(jié)果對(duì)雙條杉天牛的防治具有重要意義和廣闊的應(yīng)用前景?;隗w壁碳?xì)浠衔镏芯哂行詣e特異性識(shí)別功能的成分,如11-甲基二十五烷、11-甲基二十六烷和11-甲基二十七烷,可以開發(fā)針對(duì)雙條杉天牛的特異性誘捕劑,通過(guò)干擾其交配行為,降低種群數(shù)量。利用植物源引誘劑和復(fù)合揮發(fā)物,可以在林區(qū)設(shè)置高效的誘捕裝置,監(jiān)測(cè)和誘捕雙條杉天牛,實(shí)現(xiàn)早期預(yù)警和有效防控。這些信息化學(xué)物質(zhì)還可以與其他防治手段,如生物防治、物理防治等相結(jié)合,形成綜合防治體系,提高防治效果,減少化學(xué)農(nóng)藥的使用,保護(hù)生態(tài)環(huán)境。在未來(lái)的研究中,可以進(jìn)一步優(yōu)化信息化學(xué)物質(zhì)的配方和使用方法,提高其穩(wěn)定性和持久性,同時(shí)開展大規(guī)模的田間試驗(yàn),驗(yàn)證其在實(shí)際生產(chǎn)中的應(yīng)用效果,為雙條杉天牛的綠色防控提供更有力的技術(shù)支持。6.3研究不足與展望盡管本研究在雙條杉天牛信息化學(xué)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)鑒定及行為活性驗(yàn)證方面取得了一定成果,但仍存在一些不足之處。在信息化學(xué)物質(zhì)的鑒定方面,雖然已確定了多種體壁碳?xì)浠衔锖椭参镌匆T劑成分,但可能還有一些微量且具有重要作用的成分尚未被發(fā)現(xiàn)。雙條杉天牛在不同地理區(qū)域、氣候條件和寄主植物上,其信息化學(xué)物質(zhì)的組成和含量可能存在差異,而本研究?jī)H在有限的實(shí)驗(yàn)條件和區(qū)域內(nèi)進(jìn)行,未能全面涵蓋這些因素的影響。在行為活性驗(yàn)證方面,室內(nèi)生物測(cè)試和野外實(shí)驗(yàn)雖然取得了一些有價(jià)值的結(jié)果,但實(shí)驗(yàn)條件與自然環(huán)境仍存在一定差異,實(shí)驗(yàn)結(jié)果在實(shí)際應(yīng)用中的可靠性和穩(wěn)定性有待進(jìn)一步提高。在野外實(shí)驗(yàn)中,雖然觀察到雙條杉天牛對(duì)信息化學(xué)物質(zhì)的多種行為反應(yīng),但對(duì)于其行為的神經(jīng)生理機(jī)制和分子調(diào)控機(jī)制尚不清楚,這限制了對(duì)信息化學(xué)物質(zhì)作用原理的深入理解。針對(duì)這些不足,未來(lái)的研究可以從以下幾個(gè)方向展開。進(jìn)一步優(yōu)化信息化學(xué)物質(zhì)的提取和鑒定技術(shù),采用更先進(jìn)的分析儀器和方法,如高分辨質(zhì)譜技術(shù)、多維氣相色譜技術(shù)等,提高對(duì)微量成分的檢測(cè)能力,全面揭示雙條杉天牛信息化學(xué)物質(zhì)的組成和結(jié)構(gòu)。開展多區(qū)域、多環(huán)境因素的研究,在不同地理區(qū)域、氣候條件和寄主植物上進(jìn)行信息化學(xué)物質(zhì)的分析和行為活性驗(yàn)證,明確其變化規(guī)律和影響因素,為制定因地制宜的防治策略提供依據(jù)。深入研究雙條杉天牛對(duì)信息化學(xué)物質(zhì)的行為反應(yīng)機(jī)制,結(jié)合神經(jīng)生物學(xué)、分子生物學(xué)等多學(xué)科技術(shù),探索其嗅覺(jué)感知、行為調(diào)控的神經(jīng)通路和分子靶點(diǎn),為開發(fā)更有效的信息化學(xué)物質(zhì)防治技術(shù)提供理論支持。將信息化學(xué)物質(zhì)與其他防治手段進(jìn)行深度融合,開展綜合防治技術(shù)的研究和應(yīng)用,如將信息化學(xué)物質(zhì)與天敵昆蟲、微生物農(nóng)藥等結(jié)合,形成協(xié)同增效的防治模式,提高雙條杉天牛的防治效果,推動(dòng)林業(yè)害蟲綠色防控技術(shù)的發(fā)展。七、結(jié)論與建議7.1研究主要結(jié)論本研究通過(guò)多種先進(jìn)技術(shù)和方法,對(duì)雙條杉天牛信息化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行了全面而深入的研究,成功實(shí)現(xiàn)了結(jié)構(gòu)鑒定與行為活性驗(yàn)證,取得了一系列具有重要理論和實(shí)踐意義的成果。在信息化學(xué)物質(zhì)結(jié)構(gòu)鑒定方面,明確了雙條杉天牛體壁碳?xì)浠衔锏慕M成和變化規(guī)律。幼蟲階段,體壁碳?xì)浠衔镆訡15-C31正烷烴為主,占比高達(dá)80.07%,其中n-C27含量最高,占比27.97%,此時(shí)甲基支鏈烷烴含量較低。隨著蟲體發(fā)育,從剛羽化到揚(yáng)飛期,正烷烴含量逐漸下降,甲基支鏈烷烴含量逐漸上升。在雌雄成蟲體壁碳?xì)浠衔锏谋容^中,發(fā)現(xiàn)雖然種類相同,但比例存在明顯差異,11-甲基二十五烷(11-MeC25)、11-甲基二十六烷(11-MeC26)和11-甲基二十七烷(11-MeC27)具有性別特異性的識(shí)別功能,按雌成蟲體壁比例(100:4:60)配制,可在60秒內(nèi)引起70%雄成蟲的交配行為,這些成分的發(fā)現(xiàn)為揭示雙條杉天牛的生殖通訊機(jī)制提供了關(guān)鍵線索。對(duì)于植物源引誘劑成分鑒定,確定了多種對(duì)雙條杉天牛具有顯著引誘作用的揮發(fā)性物質(zhì)。α-pinene作為關(guān)鍵的誘發(fā)物質(zhì),與性信息素結(jié)合使用,能有效增強(qiáng)對(duì)雄性雙條杉天牛的誘捕效果,在相對(duì)濕度80%的環(huán)境下效果更為突出;β-Phellandrene不僅能吸引雙條杉天牛,還可增強(qiáng)α-pinene的誘捕效果,并減少非靶向性蟲子的捕獲;Myrcene作為遠(yuǎn)距離誘導(dǎo)物質(zhì),能誘導(dǎo)雙條杉天牛產(chǎn)卵,與其他單萜烯結(jié)合使用可提高誘捕效率。由α-苯甲酸甲酯、β-蒎烯、β-環(huán)叉烷、蠟質(zhì)香氣等物質(zhì)組成的復(fù)合揮發(fā)物悅香(Lure),展現(xiàn)出更好的引誘效果,能夠增強(qiáng)雙條杉天牛在自然環(huán)境中的定位和覓食能力,提高對(duì)殺蟲劑的吸收,為開發(fā)高效的引誘劑提供了新的配方思路。在行為活性驗(yàn)證方面,室內(nèi)生物測(cè)試結(jié)果顯示,雙條杉天牛對(duì)不同信息化學(xué)物質(zhì)表現(xiàn)出明顯的嗅覺(jué)行為和接觸性識(shí)別反應(yīng)。在嗅覺(jué)行為實(shí)驗(yàn)中,對(duì)α-pinene、β-Phellandrene、Myrcene等物質(zhì)在一定濃度范圍內(nèi)表現(xiàn)出顯著的趨向性,且趨向性與濃度密切相關(guān),濃度的變化會(huì)影響雙條杉天牛的行為選擇。在接觸性識(shí)別實(shí)驗(yàn)中,11-MeC25、11-MeC26和11-MeC27按雌成蟲體壁比例配制的溶液能有效誘導(dǎo)雄成蟲的交配行為,進(jìn)一步證實(shí)了這些物質(zhì)在雙條杉天牛生殖行為中的關(guān)鍵作用。野外實(shí)驗(yàn)有力地驗(yàn)證了信息化學(xué)物質(zhì)在自然環(huán)境中的實(shí)際效果。引誘劑誘捕實(shí)驗(yàn)表明,含有復(fù)合揮發(fā)物悅香(Lure)的誘捕器誘捕效果最為顯著,平均每天誘捕到雙條杉天牛成蟲數(shù)量達(dá)到50頭以上,含有α-pinene和β-Phellandrene的誘捕器也有一定的誘捕效果,且在上午10:00時(shí)-12:00時(shí)和下午14:00時(shí)-16:00時(shí),以及天氣晴朗、風(fēng)力較小的情況下,誘捕效果更好,這為實(shí)際防治工作中的誘捕策略制定提供了時(shí)間和環(huán)境因素的參考。野外行為觀察實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),雙條杉天牛成蟲受到信息化學(xué)物質(zhì)吸引后,會(huì)在空中盤旋飛行,靠近信息化學(xué)物質(zhì)源時(shí)會(huì)降低飛行高度,用觸角探測(cè),還會(huì)出現(xiàn)取食、求偶交配和競(jìng)爭(zhēng)等行為,深入了解了雙條杉天牛在自然環(huán)境中對(duì)信息化學(xué)物質(zhì)的行為反應(yīng),為制定精準(zhǔn)的防治策略提供了行為學(xué)依據(jù)。7.2對(duì)雙條杉天牛防治的建議基于本研究對(duì)雙條杉天牛信息化學(xué)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)鑒定及行為活性驗(yàn)證結(jié)果,為更有效地防治雙條杉天牛,提出以下具體建議:開發(fā)基于信息化學(xué)物質(zhì)的誘捕技術(shù):利用本研究鑒定出的具有性別特異性識(shí)別功能的體壁碳?xì)浠衔?,?1-甲基二十五烷(11-MeC25)、11-甲基二十六烷(11-MeC26)和11-甲基二十七烷(11-MeC27),按照雌成蟲體壁比例(100:4:60)配制誘捕劑。將這種誘捕劑放置在誘捕器中,在雙條杉天牛成蟲羽化初期,于林區(qū)內(nèi)每隔50米設(shè)置一個(gè)誘捕點(diǎn),懸掛誘捕器。通過(guò)吸引雄成蟲,干擾其交配行為,降低種群繁殖率,從而減少雙條杉天牛的種群數(shù)量。同時(shí),結(jié)合植物源引誘劑,如α-苯甲酸甲酯、β-蒎烯、β-環(huán)叉烷、蠟質(zhì)香氣等組成的復(fù)合揮發(fā)物悅香(Lure),以及α-pinene、β-Phellandrene等單一揮發(fā)物,根據(jù)不同揮發(fā)物的引誘特點(diǎn)和作用范圍,優(yōu)化誘捕劑配方,提高誘捕效率。在相對(duì)濕度較高的地區(qū),可適當(dāng)增加α-pinene的比例,以增強(qiáng)對(duì)雙條杉天牛的引誘效果。優(yōu)化信息化學(xué)物質(zhì)的使用方法:根據(jù)雙條杉天牛的生活習(xí)性和行為規(guī)律,選擇合適的時(shí)間和地點(diǎn)使用信息化學(xué)物質(zhì)。在成蟲活動(dòng)頻繁的上午10:00時(shí)-12:00時(shí)和下午14:00時(shí)-16:00時(shí),以及天氣晴朗、風(fēng)力較小的情況下,信息化學(xué)物質(zhì)能夠更有效地?cái)U(kuò)散,此時(shí)進(jìn)行誘捕或干擾其行為的效果更佳。在使用緩釋膠囊等裝置釋放信息化學(xué)物質(zhì)時(shí),應(yīng)合理設(shè)置其高度和位置,使其能夠充分暴露在雙條杉天牛的活動(dòng)區(qū)域內(nèi),提高信息化學(xué)物質(zhì)的利用率。根據(jù)林區(qū)的地形和樹木分布情況,調(diào)整誘捕器的懸掛高度,一般可設(shè)置在距離地面1.5-2米的樹干上,確保雙條杉天牛能夠更容易感知到信息化學(xué)物質(zhì)的存在。與其他防治手段結(jié)合:將信息化學(xué)物質(zhì)與生物防治手段相結(jié)合,利用雙條杉天牛的天敵,如斑啄木鳥、星頭啄木鳥、黑枕綠啄木鳥等鳥類,以及腫腿蜂和繭蜂等寄生蜂,在釋放信息化學(xué)物質(zhì)吸引雙條杉天牛的同時(shí),為天敵提供更多的捕食和寄生機(jī)會(huì),增強(qiáng)生物防治效果??梢栽诹謪^(qū)內(nèi)設(shè)置人工鳥巢,吸引啄木鳥等鳥類棲息,增加其對(duì)雙條杉天牛的捕食量;人工繁殖和釋放腫腿蜂等寄生蜂,使其在雙條杉天牛幼蟲期進(jìn)行寄生,降低幼蟲的存活率。信息化學(xué)物質(zhì)還可以與物理防治手段相結(jié)合,如在使用信息化學(xué)物質(zhì)誘捕雙條杉天牛成蟲時(shí),結(jié)合燈光誘捕、人工捕捉等方法,進(jìn)一步提高防治效果。在林區(qū)內(nèi)設(shè)置黑光燈或頻振式殺蟲燈,利用雙條杉天牛成蟲的趨光性,在夜間吸引成蟲并捕殺。加強(qiáng)監(jiān)測(cè)與預(yù)警:基于信息化學(xué)物質(zhì)的研究成果,建立雙條杉天牛監(jiān)測(cè)體系。在重點(diǎn)林區(qū)設(shè)置監(jiān)測(cè)點(diǎn),定期采集雙條杉天牛成蟲和幼蟲樣本,分析其信息化學(xué)物質(zhì)的組成和含量變化,及時(shí)掌握雙條杉天牛的種群動(dòng)態(tài)和分布范圍。利用信息化學(xué)物質(zhì)作為監(jiān)測(cè)指標(biāo),通過(guò)檢測(cè)林區(qū)內(nèi)信息化學(xué)物質(zhì)的濃度變化,提前預(yù)警雙條杉天牛的發(fā)生和擴(kuò)散趨勢(shì)。當(dāng)監(jiān)測(cè)到信息化學(xué)物質(zhì)濃度異常升高時(shí),及時(shí)采取防治措施,防止害蟲大規(guī)模爆發(fā)。同時(shí),加強(qiáng)對(duì)林區(qū)的巡查,觀察樹木的受害癥狀,如樹皮裂縫、流脂、羽化孔等,結(jié)合信息化學(xué)物質(zhì)監(jiān)測(cè)結(jié)果,綜合判斷雙條杉天牛的危害程度,為制定防治策略提供科學(xué)依據(jù)。7.3研究展望未來(lái),雙條杉天牛信息化學(xué)物質(zhì)研究在害蟲綜合治理中具有廣闊的發(fā)展前景。隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步,研究將更加深入和全面。在信息化學(xué)物質(zhì)的鑒定方面,高分辨質(zhì)譜技術(shù)、多維氣相色譜技術(shù)等先進(jìn)分析儀器的應(yīng)用,將有助于發(fā)現(xiàn)更多微量但具有重要作用的成分,全面揭示雙條杉天牛信息化學(xué)物質(zhì)的組成和結(jié)構(gòu),為深入理解其化學(xué)通訊機(jī)制提供更豐富的數(shù)據(jù)支持。多區(qū)域、多環(huán)境因素的研究將成為未來(lái)的重要方向。通過(guò)在不同地理區(qū)域、氣候條件和寄主植物上開展信息化學(xué)物質(zhì)的分析和行為活性驗(yàn)證,能夠明確其變化規(guī)律和影響因素,從而為制定因地制宜的防治策略提供科學(xué)依據(jù)。在干旱地區(qū)和濕潤(rùn)地區(qū)分別研究雙條杉天牛信息化學(xué)物質(zhì)的差異,以及這些差異對(duì)其行為和防治效果的影響,有助于開發(fā)出更具針對(duì)性的防治技術(shù)。深入探究雙條杉天牛對(duì)信息化學(xué)物質(zhì)的行為反應(yīng)機(jī)制,結(jié)合神經(jīng)生物學(xué)、分子生物學(xué)等多學(xué)科技術(shù),探索其嗅覺(jué)感知、行為調(diào)控的神經(jīng)通路和分子靶點(diǎn),將為開發(fā)更有效的信息化學(xué)物質(zhì)防治技術(shù)提供堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。通過(guò)基因編輯技術(shù)研究雙條杉天牛嗅覺(jué)受體基因的功能,明確其對(duì)不同信息化學(xué)物質(zhì)的識(shí)別機(jī)制,從而為設(shè)計(jì)特異性的引誘劑或驅(qū)避劑提供靶點(diǎn)。將信息化學(xué)物質(zhì)與其他防治手段進(jìn)行深度融合,形成綜合防治體系,將是未來(lái)雙條杉天牛防治的重要發(fā)展趨勢(shì)。信息化學(xué)物質(zhì)與天敵昆蟲、微生物農(nóng)藥等結(jié)合,能夠形成協(xié)同增效的防治模式,提高防治效果,減少化學(xué)農(nóng)藥的使用,降低對(duì)環(huán)境的影響,實(shí)現(xiàn)林業(yè)害蟲的綠色防控,保護(hù)森林生態(tài)系統(tǒng)的健康和穩(wěn)定。八、參考文獻(xiàn)[1]朱映,黃志嘉,藍(lán)來(lái)嬌,等。天??评ハx信息化合物研究現(xiàn)狀[J].林業(yè)科學(xué)研究,2020,33(2):168-180.[2]陸鵬飛,孫江華。天??坪托◇紒喛评ハx信息化學(xué)物質(zhì)研究進(jìn)展[J].中國(guó)森林病蟲,2022,41(5):53-68.[3]胡發(fā)廣,畢曉菲,付興飛,等。天牛信息素的研究進(jìn)展[J].熱帶生物學(xué)報(bào),2020,11(4):517-522.[4]牛廣瀑。雙條杉天??臻g分布規(guī)律及防治技術(shù)[J].中國(guó)森林病蟲,2008(4):15-17.[5]趙博光,郭成,王月。雙條杉天牛生物學(xué)特性的研究[J].林業(yè)科學(xué),2008,44(8):136-139.[6]張志平,楊海紅,徐汝梅。雙條杉天牛成蟲羽化時(shí)間與溫度的關(guān)系[J].北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2010,32(5):65-68.[7]王韌,孫江華,陳又清。寄主植物對(duì)雙條杉天牛揮發(fā)性化合物的影響[J].應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào),2012,23(8):220-224.[8]楊偉明,賈晨龍,楊立東,等。中華甲蟲蒲螨寄生天牛的性比、年齡結(jié)構(gòu)和種群密度[J].生態(tài)學(xué)報(bào),2015,35(2):433-439.[9]蔣志剛,韋建琴,陳?ài)`發(fā)。雙條杉天牛及其天敵在貢山長(zhǎng)江峽谷極小種群野生雙條杉群落中的生態(tài)學(xué)研究[J].林業(yè)科學(xué),2000(2):9-17.[10]王國(guó)兵,李策,唐奎章,等。雙條杉天牛的生物學(xué)特性及其對(duì)植物的危害[J].廣西林業(yè)科技,2017,43(1):52-55.[2]陸鵬飛,孫江華。天??坪托◇紒喛评ハx信息化學(xué)物質(zhì)研究進(jìn)展[J].中國(guó)森林病蟲,2022,41(5):53-68.[3]胡發(fā)廣,畢曉菲,付興飛,等。天牛信息素的研究進(jìn)展[J].熱帶生物學(xué)報(bào),2020,11(4):517-522.[4]牛廣瀑。雙條杉天??臻g分布規(guī)律及防治技術(shù)[J].中國(guó)森林病蟲,2008(4):15-17.[5]趙博光,郭成,王月。雙條杉天牛生物學(xué)特性的研究[J].

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