2018-05-30實施2018-05-30實施新疆維吾爾自治區(qū)質量技術監(jiān)督局發(fā)布I標準下載本標準參照GB/T1.1-2009《標準化工作導則第1部分：標準的結構和編寫》的規(guī)定進行編寫。本標準由新疆維吾爾自治區(qū)畜牧總站提出。本標準由新疆維吾爾自治區(qū)畜牧廳歸口。本標準起草單位：新疆畜牧總站、新疆天山畜牧生物工程股份有限公司。本標準起草人：耿娟、衛(wèi)新璞、譚世新、王玉欽、楊楠、王愛芳、孫巖、鄧強、熱孜亞·買買提、程黎明、賈旭升、田曉陽、王永力、陳蕾。標準下載1本標準適用于各品種羊的冷凍精液產(chǎn)品(以下簡稱凍精)。件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T2828.2計數(shù)抽樣檢驗程序第2部分：按極限質量LQ檢索的孤立批檢驗抽樣方案GB/T2828.5計數(shù)抽樣檢驗程序第5部分：按接收質量限(AQL)檢索的逐批序貫抽樣檢驗系統(tǒng)GB/T2828.11計數(shù)抽樣檢驗程序第11部分：小總體聲稱質量水平的評定程序GB4789.2食品安全國家標準食品微生物學檢驗菌落總數(shù)測定NY/T1236-2006綿、山羊生產(chǎn)性能測定技術前進運動精子數(shù)progressivemotility3.22經(jīng)特殊方法處理的精液超低溫冷凍后在液氮中(-196℃)長期保存。精子畸形率≤20%。細菌菌落數(shù)≤800個。標準下載3生產(chǎn)方和使用方為質量保證概率把關，按照GB/T2828.2確定抽檢公羊(凍精)的樣本量。質量監(jiān)督抽樣檢驗按照GB/T2828.11中的規(guī)定確定抽檢公羊(凍精)的樣本量。抽取樣本應在監(jiān)督總體(一群投產(chǎn)羊)中隨機抽取，按照監(jiān)督抽樣方案已知抽檢羊的樣本(只)數(shù)，用目測法，其結果應符合4.3的規(guī)定。解凍方法及精子活力、前進運動精子數(shù)、精子畸形率、細菌數(shù)的檢驗按附錄A規(guī)定的方法，其結果應分別符合4.5中的規(guī)定。檢驗項目和檢驗周期見表1。檢驗項目外觀、解凍后活力型式檢驗外觀、解凍后活力、呈前進運動精子數(shù)、畸形率、細菌數(shù)生產(chǎn)方為質量保證每2個月為一抽檢周期，在周期內進行一次抽檢該群公羊(凍精)質4樣品所檢驗項目中任何1項不合格，則判為不合格。樣品所檢驗項目中任何1項不合格，則判為不合格。通過對抽取樣本檢驗按GB/T2828.5的規(guī)定進行判定。通過對抽取樣本檢驗按GB/T2828.11的規(guī)定進行判定。種公羊的品種可用代號。代號為該品種第1、第2個漢字的漢語拼音大寫字母。示例：陶賽特羊的品種代號“TS”。細管凍精用專用的塑料管25支包裝，再裝入滅菌紗布袋，每1包裝量不得超過100份。標準下載5A.1抽樣按本標準5.1.1確定樣本數(shù)。按本標準5.1.2確定樣本數(shù)。對確定取樣的公羊，從其凍精貯藏容器中隨機抽取一個包裝量(不得少于25份)的凍精。液氮中。取放樣品時在空中暴露時間不得超過10s。由專人保管樣品，樣品6取三支細管凍精自然解凍后剪去兩端，把精液倒入一小試管內，用1.0mL吸管準確吸取精液，并檢測其精液量。三支凍精的劑量平均數(shù)為樣品的劑量按式(A.1)計算：Q————劑量值，mL;n?————第三支樣品劑量，mL。A.3精子活力的檢查A.3.1主要儀器和器材顯微鏡或顯微電視裝置、恒溫水浴箱、5.0mL試管、載玻片或精液性狀板、蓋玻片(18×18)、顯微鏡保溫箱或恒溫裝置、滴管。4.3.2檢查方法三支細管分別直接置于37℃水浴中解凍，取解凍三支混合后精液約50μL(微升)置于載玻片上加蓋玻片立即在載物臺溫度保持38℃的情況下用200～400倍顯微鏡下觀察活力，也可通過電視顯微裝置在熒光屏上觀察活力。每樣片觀察3個視野，并應觀察不同液層內的精子運動狀態(tài)，進行全面評定。三個視野活力評價值的平均數(shù)按式(A.2)計算：…n?————第一視野活力；n?————第二視野活力；n?————第三視野活力。A.4每劑量有效精子數(shù)檢查A.4.1主要器材血球計數(shù)板、血色素管、1mL吸管、小試管、計數(shù)器、顯微鏡或電視顯微裝置、滴管、3.0%氯化7A.4.2檢查方法細管精液用血色素管準確吸取20μL解凍精液(也可使用2已檢查后的樣品),注入盛有0.48mL的3.0%氯化鈉溶液的試管內，混勻，使之成為50倍稀釋的稀釋精液。將備好的血球計數(shù)板用血蓋片將計數(shù)室蓋好，用小吸管吸取一滴稀釋精液于血蓋片邊緣，使精液自行流入計數(shù)室，均勻充滿，不允許有氣泡或厚度過大，然后在顯微鏡下或電視熒光屏上觀察計數(shù)。A.4.3計算A.4.3.1每劑量中精子數(shù)按式(A.3)計算：A————每劑量精子數(shù)，萬個；b————5個中方格精子數(shù)，個；c————劑量值A.4.3.2每劑量中呈前進運動精子數(shù)按式(A.4)計算；C————每劑量中前進運動精子數(shù)，個；s————每劑量中精子數(shù)，個；A.5精子畸型率的檢查A.5.1主要器材和材料顯微鏡、載玻片、血球分類計數(shù)器、小吸管、蒸餾水、姬姆薩染料、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、甲醛、甲醇、甘油、所用試劑為AR。A.5.2試劑配制精子畸形率檢查試劑配制如下：a)磷酸鹽緩沖液雙蒸餾水定容至100ml。b)中性福爾馬林固定液40%甲醛HCHO(使用前經(jīng)碳酸鎂中和過濾)磷酸二氫鈉(NaH?PO?2H?0)用0.89%氯化鈉約50.0mL溶解后加入8.0mL中和后的甲醛，再加0.89%氯化鈉溶液定容至c)姬姆薩原液姬姆薩染料8溫繼續(xù)溶解4h,再加甲醇充分溶解混勻，過濾后貯于棕色瓶中待用，貯存時間越久染色效果越d)姬姆薩染液a)抹片取解凍后精液一滴滴于載玻將樣品均勻地拖布于載玻片上，自然風干(約5min),每樣品制作二個抹片；b)固定在已風干的抹片上滴上1.0mL～2.0mL中性福爾馬林，固定15min后用清水緩緩沖去d)鏡檢將制備好的抹片在顯微鏡(400倍～600倍)下觀察，每個抹片觀察200個以上的精子(分左、右兩個區(qū)),取二片的平均值，二片的變異系數(shù)不得大于20%,若超過應重新制片；A————畸形率，%;爐)、培養(yǎng)皿、水浴箱、pH試紙(5.5～9.0)、棉花、羊皮紙、記號筆、棉繩、紗布、放大鏡、羊肉用蒸餾水1000mL溶解后加瓊脂粉20g加溫融解。9矯正pH至7.4～7.6并用脫脂棉過濾，分裝于三角燒瓶中經(jīng)高壓滅菌(0.1MPa,20min)。也可使用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基其質量應符合GB4789.2的要求。A.6.3檢查方法滅菌平皿事先標號。細管凍精37℃水浴解凍，用酒精棉球消毒以無菌操作，一支直接注于一個滅菌平皿內；把已涼至50℃左右的普通瓊脂以無菌操作傾