PCR室的考試題簡答題及答案

一、單項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應體系中不包括以下哪種成分（）A.模板DNAB.dNTPC.限制性內(nèi)切酶D.Taq酶2.PCR技術(shù)的中文全稱是（）A.聚合酶鏈式反應B.核酸雜交技術(shù)C.基因克隆技術(shù)D.蛋白質(zhì)印跡技術(shù)3.進行PCR實驗時，引物的作用是（）A.提供模板B.催化DNA合成C.引導DNA合成的起始D.降解模板DNA4.PCR反應的變性溫度一般為（）A.55℃左右B.72℃左右C.94℃左右D.4℃左右5.Taq酶的特點是（）A.耐高溫B.耐低溫C.特異性切割DNAD.連接DNA片段6.以下哪種物質(zhì)不是PCR反應所必需的（）A.Mg2+B.緩沖液C.蛋白酶D.引物7.一個完整的PCR循環(huán)不包括以下哪個步驟（）A.變性B.退火C.延伸D.轉(zhuǎn)錄8.PCR產(chǎn)物的長度主要由（）決定A.模板長度B.引物長度C.引物之間的距離D.Taq酶活性9.用于PCR的模板DNA可以是（）A.基因組DNAB.mRNAC.tRNAD.rRNA10.以下關(guān)于PCR技術(shù)的說法錯誤的是（）A.可以擴增特定的DNA片段B.靈敏度高C.特異性不強D.操作簡便答案：1.C2.A3.C4.C5.A6.C7.D8.C9.A10.C二、多項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的應用領(lǐng)域包括（）A.基因診斷B.法醫(yī)鑒定C.基因克隆D.疾病治療2.影響PCR反應的因素有（）A.引物設(shè)計B.模板質(zhì)量C.反應溫度D.Taq酶用量3.以下屬于PCR反應體系成分的有（）A.dATPB.dCTPC.dGTPD.dTTP4.引物設(shè)計的基本原則包括（）A.長度適宜B.避免自身互補C.堿基分布均勻D.與模板特異性結(jié)合5.PCR反應中可能出現(xiàn)的問題有（）A.非特異性擴增B.引物二聚體形成C.擴增效率低D.模板降解6.高質(zhì)量的模板DNA應滿足（）A.純度高B.無降解C.濃度適宜D.有特定修飾7.用于PCR的儀器設(shè)備有（）A.離心機B.移液器C.擴增儀D.凝膠成像系統(tǒng)8.以下哪些情況可能導致PCR結(jié)果失?。ǎ〢.引物錯誤B.反應體系污染C.退火溫度過高D.延伸時間過長9.實時熒光定量PCR的應用有（）A.基因表達分析B.病原體定量檢測C.單核苷酸多態(tài)性分析D.甲基化檢測10.巢式PCR的優(yōu)點包括（）A.提高特異性B.提高靈敏度C.降低非特異性擴增D.操作簡單答案：1.ABC2.ABCD3.ABCD4.ABCD5.ABCD6.ABC7.ABC8.ABC9.AB10.ABC三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)可以直接擴增RNA。（）2.Taq酶具有3'-5'外切酶活性。（）3.引物的GC含量越高，退火溫度越低。（）4.PCR反應的延伸時間主要取決于模板長度。（）5.模板DNA濃度越高，PCR結(jié)果越好。（）6.非特異性擴增主要是引物設(shè)計不合理導致的。（）7.實時熒光定量PCR可以對DNA進行絕對定量。（）8.進行PCR實驗時，所有試劑都需要在冰上操作。（）9.引物二聚體不會影響PCR結(jié)果。（）10.PCR技術(shù)只能擴增已知序列的DNA片段。（）答案：1.×2.×3.×4.√5.×6.√7.√8.√9.×10.×四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述PCR技術(shù)的基本原理利用DNA半保留復制的特性，在體外通過高溫變性使雙鏈DNA解開為單鏈，低溫退火讓引物與模板鏈結(jié)合，適溫延伸在Taq酶作用下以dNTP為原料合成新的DNA鏈，經(jīng)過多次循環(huán)擴增特定DNA片段。2.引物設(shè)計需要注意哪些要點長度一般18-25bp；避免自身互補和形成引物二聚體；堿基分布均勻，GC含量40%-60%；與模板特異性結(jié)合，Tm值在55-65℃。3.如何避免PCR反應中的非特異性擴增優(yōu)化引物設(shè)計，提高特異性；調(diào)整反應條件如退火溫度、時間、循環(huán)次數(shù)；控制模板、引物、酶等濃度；確保反應體系無污染。4.簡述實時熒光定量PCR的原理在PCR反應體系中加入熒光基團，隨著PCR擴增，熒光信號強度與擴增產(chǎn)物數(shù)量相關(guān)，通過檢測熒光信號實時監(jiān)測PCR進程，實現(xiàn)對起始模板量的定量分析。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論PCR技術(shù)在疾病診斷中的優(yōu)勢與局限性優(yōu)勢在于靈敏度高、特異性強、快速，能檢測低豐度病原體和特定基因變異。局限性有易污染致假陽性，對儀器和技術(shù)人員要求高，某些復雜樣本處理困難，且對檢測的基因或病原體需有一定了解。2.若PCR擴增結(jié)果出現(xiàn)引物二聚體，應如何解決重新設(shè)計引物，避免引物間互補；降低引物濃度；適當提高退火溫度；優(yōu)化Mg2+濃度；增加模板量競爭引物結(jié)合；檢查試劑是否污染，必要時更換新試劑重新擴增。3.闡述在PCR實驗中保證實驗結(jié)果準確性的關(guān)鍵因素關(guān)鍵因素包括優(yōu)質(zhì)模板DNA的制備，合理設(shè)計引物，準確配置反應體系，嚴格控制反應溫度、時間等條件，規(guī)范操