《GB/T35519-2017化學(xué)品穩(wěn)定轉(zhuǎn)染人雌激素受體轉(zhuǎn)錄活性試驗雌激素激動活性法》(2025年)實施指南目錄02040608100103050709化學(xué)品穩(wěn)定轉(zhuǎn)染人雌激素受體轉(zhuǎn)錄活性試驗的原理是什么?深度剖析標(biāo)準(zhǔn)中關(guān)鍵機制及如何規(guī)避試驗原理認(rèn)知誤區(qū)試驗操作流程如何精準(zhǔn)把控?對照GB/T35519-2017步驟,解析關(guān)鍵操作節(jié)點與易出錯環(huán)節(jié)的解決方案與國際同類標(biāo)準(zhǔn)有何差異?對比分析后,看我國標(biāo)準(zhǔn)在行業(yè)競爭中的優(yōu)勢與改進方向標(biāo)準(zhǔn)實施過程中常見疑點如何破解?針對試驗重復(fù)性、結(jié)果偏差等問題,提供專家級解決方案如何確保標(biāo)準(zhǔn)長期有效落地?從人員培訓(xùn)到質(zhì)量控制,構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)持續(xù)實施的保障體系為何說GB/T35519-2017是化學(xué)品雌激素激動活性檢測的

“行業(yè)標(biāo)尺”?專家視角解析標(biāo)準(zhǔn)核心價值與未來5年應(yīng)用趨勢對試驗材料有哪些硬性要求?從細(xì)胞株到試劑耗材,全面梳理標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定及選擇時的熱點考量試驗數(shù)據(jù)該如何科學(xué)分析與判定?依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)要求,詳解數(shù)據(jù)處理方法及結(jié)果有效性判斷的核心要點未來幾年化學(xué)品雌激素激動活性檢測技術(shù)將如何發(fā)展?結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)預(yù)判技術(shù)革新方向及對標(biāo)準(zhǔn)實施的影響在不同行業(yè)的應(yīng)用有何側(cè)重?以醫(yī)藥、

日化為例,解讀標(biāo)準(zhǔn)在各領(lǐng)域的實踐要點一、為何說GB/T35519-2017是化學(xué)品雌激素激動活性檢測的

“行業(yè)標(biāo)尺”？專家視角解析標(biāo)準(zhǔn)核心價值與未來5年應(yīng)用趨勢（一）GB/T35519-2017成為

“行業(yè)標(biāo)尺”

的核心依據(jù)是什么？該標(biāo)準(zhǔn)明確了化學(xué)品雌激素激動活性檢測的統(tǒng)一方法，解決了此前檢測方法不統(tǒng)一、結(jié)果可比性差的問題。它規(guī)定了試驗的原理、材料、流程等關(guān)鍵內(nèi)容，確保

檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠，為行業(yè)提供了統(tǒng)一的評判標(biāo)準(zhǔn)，是其成為

“行業(yè)標(biāo)尺”

的核心依據(jù)。（二）從專家視角看，標(biāo)準(zhǔn)的核心價值體現(xiàn)在哪些方面？專家認(rèn)為，標(biāo)準(zhǔn)核心價值一是保障化學(xué)品安全性評估的科學(xué)性，為識別具有雌激素激動活性的化學(xué)品提供可靠手段；二是推動行業(yè)規(guī)范化發(fā)展，統(tǒng)一檢測流程與

判定標(biāo)準(zhǔn)，減少企業(yè)間檢測差異；三是為監(jiān)管部門提供技術(shù)支撐，助力化學(xué)品安全監(jiān)管決策。（三）未來5年，該標(biāo)準(zhǔn)在行業(yè)中的應(yīng)用趨勢會如何變化？未來5年，隨著人們對化學(xué)品安全關(guān)注度提升，標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用范圍將擴大，從傳統(tǒng)化工領(lǐng)域延伸至醫(yī)藥、

日化等更多行業(yè)。

同時，標(biāo)準(zhǔn)可能會結(jié)合新技術(shù)進行優(yōu)化，

其在化學(xué)品進出口檢驗、新產(chǎn)品研發(fā)中的應(yīng)用頻率也將大幅增加。二、化學(xué)品穩(wěn)定轉(zhuǎn)染人雌激素受體轉(zhuǎn)錄活性試驗的原理是什么？深度剖析標(biāo)準(zhǔn)中關(guān)鍵機制及如何規(guī)避試驗原理認(rèn)知誤區(qū)（一）標(biāo)準(zhǔn)中明確的試驗核心原理是怎樣的？試驗原理為將人雌激素受體基因及含雌激素反應(yīng)元件的報告基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染至宿主細(xì)胞，

當(dāng)化學(xué)品具有雌激素激動活性時，會與細(xì)胞內(nèi)雌激素受體結(jié)合，激活雌激

素反應(yīng)元件，促使報告基因表達，通過檢測報告基因表達產(chǎn)物來判斷化學(xué)品的雌激素激動活性。（二）如何深度理解試驗中的關(guān)鍵作用機制？關(guān)鍵機制包括受體結(jié)合、信號傳導(dǎo)、基因表達三個環(huán)節(jié)?；瘜W(xué)品先與雌激素受體特異性結(jié)合，形成復(fù)合物后進入細(xì)胞核，與雌激素反應(yīng)元件結(jié)合，啟動報告基因

轉(zhuǎn)錄，進而翻譯可檢測的蛋白質(zhì)，通過檢測該蛋白質(zhì)含量反映化學(xué)品活性。（三）在試驗原理認(rèn)知上，常見誤區(qū)有哪些？如何規(guī)避？常見誤區(qū)是認(rèn)為只要化學(xué)品與受體結(jié)合就一定有活性，忽略后續(xù)信號傳導(dǎo)和基因表達環(huán)節(jié)。規(guī)避方法是深入學(xué)習(xí)標(biāo)準(zhǔn)中原理的完整表述，結(jié)合實際試驗案例，理

解各環(huán)節(jié)的關(guān)聯(lián)性，避免孤立看待某一環(huán)節(jié)。三、GB/T35519-2017對試驗材料有哪些硬性要求？從細(xì)胞株到試劑耗材，全面梳理標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定及選擇時的熱點考量（一）標(biāo)準(zhǔn)對試驗所用細(xì)胞株有哪些具體要求？標(biāo)準(zhǔn)要求細(xì)胞株需穩(wěn)定轉(zhuǎn)染人雌激素受體基因和報告基因，且具有良好的生長穩(wěn)定性和反應(yīng)特異性。細(xì)胞株需經(jīng)過鑒定，確保無支原體污染，且在規(guī)定的培養(yǎng)條

件下能正常生長和發(fā)揮功能。（二）針對試驗中的試劑，標(biāo)準(zhǔn)有哪些硬性規(guī)定？試劑方面，標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定所用培養(yǎng)基、血清、抗生素等需符合細(xì)胞培養(yǎng)要求，純度達到規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。雌激素標(biāo)準(zhǔn)品需溯源至國家認(rèn)可的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，試劑儲存和使用需遵

循特定條件，避免因試劑問題影響試驗結(jié)果。（三）選擇試驗耗材時，標(biāo)準(zhǔn)有何隱含要求？選擇過程中的熱點考量因素是什么？耗材需無毒、無干擾，如培養(yǎng)板需適合細(xì)胞貼壁生長，移液器吸頭需無RNA酶和DNA酶污染。熱點考量因素包括耗材的兼容性、穩(wěn)定性以及成本，需在滿足

標(biāo)準(zhǔn)要求的前提下，選擇性價比高的產(chǎn)品。四、試驗操作流程如何精準(zhǔn)把控？對照GB/T35519-2017步驟，解析關(guān)鍵操作節(jié)點與易出錯環(huán)節(jié)的解決方案(一)GB/T35519-2017規(guī)定的試驗操作流程主要分為哪幾個階段?主要分為細(xì)胞準(zhǔn)備、樣品處理、加樣培養(yǎng)、報告基因檢測四個階段。細(xì)胞準(zhǔn)備包括細(xì)胞復(fù)蘇、傳代培養(yǎng);樣品處理涉及化學(xué)品濃度稀釋;加樣培養(yǎng)需控制培養(yǎng)條

件;報告基因檢測則是獲取試驗數(shù)據(jù)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。0102（二）在各操作階段中，關(guān)鍵操作節(jié)點有哪些？如何精準(zhǔn)把控？細(xì)胞準(zhǔn)備階段，關(guān)鍵節(jié)點是細(xì)胞復(fù)蘇后的活力檢測，需確保細(xì)胞活力達90%以上；樣品處理時，關(guān)鍵是精準(zhǔn)稀釋化學(xué)品濃度，采用梯度稀釋法并做好質(zhì)量控制；

加樣培養(yǎng)中，需嚴(yán)格控制溫度、CO2濃度等培養(yǎng)條件；檢測階段，關(guān)鍵是按照儀器操作規(guī)程進行檢測，確保儀器精度。易出錯環(huán)節(jié)是樣品加樣時的交叉污染和培養(yǎng)條件波動。解決方案是加樣時使用專用移液器,定期校準(zhǔn)儀器,操作過程中避免反復(fù)打開培養(yǎng)箱;采用具有穩(wěn)定控溫、

控CO2功能的培養(yǎng)箱,實時監(jiān)測培養(yǎng)環(huán)境參數(shù)。(三)試驗操作中易出錯的環(huán)節(jié)是什么?對應(yīng)的解決方案有哪些?五、試驗數(shù)據(jù)該如何科學(xué)分析與判定？依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)要求，詳解數(shù)據(jù)處理方法及結(jié)果有效性判斷的核心要點（一）標(biāo)準(zhǔn)要求的試驗數(shù)據(jù)處理方法有哪些？具體如何操作？數(shù)據(jù)處理方法包括空白對照校正、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制、樣品活性計算。先扣除空白對照的本底值，再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度與檢測信號值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，最后依據(jù)樣品檢測

信號值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品的雌激素激動活性。（二）

怎樣依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)判斷試驗結(jié)果的有效性？核心要點是什么？結(jié)果有效性判斷核心要點包括陽性對照的響應(yīng)值需達到規(guī)定范圍，

陰性對照無明顯活性，試驗重復(fù)性符合要求（同一樣品多次檢測結(jié)果偏差不超過10%）

。只

有滿足這些條件，試驗結(jié)果才被視為有效。（三）

當(dāng)數(shù)據(jù)出現(xiàn)異常時，該如何排查原因并處理？先排查試劑是否過期、儀器是否故障，再檢查操作步驟是否符合標(biāo)準(zhǔn)。若因樣品問題導(dǎo)致異常，需重新制備樣品；若因操作失誤，需重新進行試驗，確保數(shù)據(jù)異

常時能精準(zhǔn)定位原因并妥善處理。六、GB/T35519-2017與國際同類標(biāo)準(zhǔn)有何差異？對比分析后，看我國標(biāo)準(zhǔn)在行業(yè)競爭中的優(yōu)勢與改進方向（一）

國際上常用的化學(xué)品雌激素激動活性檢測標(biāo)準(zhǔn)有哪些？國際上常用的有OECDTG455（穩(wěn)定轉(zhuǎn)染雌激素受體轉(zhuǎn)錄激活試驗）

、EPAOPPTS890.1300等標(biāo)準(zhǔn)，這些標(biāo)準(zhǔn)在試驗設(shè)計、數(shù)據(jù)判定等方面各有特點。（二）GB/T35519-2017與這些國際標(biāo)準(zhǔn)在核心內(nèi)容上有何差異？在細(xì)胞株選擇上，我國標(biāo)準(zhǔn)明確指定人源細(xì)胞株，部分國際標(biāo)準(zhǔn)允許使用其他物種細(xì)胞株；數(shù)據(jù)判定閾值方面，我國標(biāo)準(zhǔn)設(shè)定更符合國內(nèi)化學(xué)品特性，

國際標(biāo)準(zhǔn)

閾值更具通用性；試驗周期上，我國標(biāo)準(zhǔn)優(yōu)化了部分步驟，縮短了試驗周期。（三）我國標(biāo)準(zhǔn)在行業(yè)競爭中的優(yōu)勢是什么？未來的改進方向有哪些？優(yōu)勢在于更貼合國內(nèi)化學(xué)品生產(chǎn)和使用實際，能更好地服務(wù)國內(nèi)企業(yè)需求，且在試驗成本控制上更具優(yōu)勢。改進方向可借鑒國際標(biāo)準(zhǔn)的先進經(jīng)驗，進一步完善數(shù)

據(jù)溯源體系，加強與國際標(biāo)準(zhǔn)的協(xié)調(diào)互認(rèn)。七、未來幾年化學(xué)品雌激素激動活性檢測技術(shù)將如何發(fā)展？結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)預(yù)判技術(shù)革新方向及對標(biāo)準(zhǔn)實施的影響（一）

當(dāng)前化學(xué)品雌激素激動活性檢測技術(shù)存在哪些不足？當(dāng)前技術(shù)存在檢測周期較長、部分低活性化學(xué)品檢測靈敏度不足、

自動化程度有待提升等問題，這些不足限制了檢測效率和結(jié)果準(zhǔn)確性的進一步提高。（二）結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)，預(yù)判未來幾年檢測技術(shù)的革新方向是什么？革新方向包括開發(fā)高靈敏度檢測方法，提高低活性化學(xué)品的檢出率；

引入自動化檢測設(shè)備，實現(xiàn)試驗流程的自動化操作，縮短檢測周期；結(jié)合分子生物學(xué)技術(shù)，

深入研究化學(xué)品與受體相互作用的分子機制，提升檢測的特異性。（三）技術(shù)革新將對GB/T35519-2017的實施產(chǎn)生哪些影響？技術(shù)革新可能促使標(biāo)準(zhǔn)對檢測方法進行更新，納入更先進的檢測技術(shù)；

同時，

自動化設(shè)備的應(yīng)用將改變傳統(tǒng)操作模式，標(biāo)準(zhǔn)需對相關(guān)操作規(guī)范進行調(diào)整，

以適應(yīng)

技術(shù)發(fā)展，確保標(biāo)準(zhǔn)的時效性和適用性。八、標(biāo)準(zhǔn)實施過程中常見疑點如何破解？針對試驗重復(fù)性、結(jié)果偏差等問題，提供專家級解決方案（一）標(biāo)準(zhǔn)實施中，關(guān)于試驗重復(fù)性差的疑點有哪些？專家級解決方案是什么？疑點包括同一操作人員多次試驗結(jié)果差異大、不同實驗室間結(jié)果不一致。解決方案是統(tǒng)一操作人員培訓(xùn)標(biāo)準(zhǔn)，確保操作手法一致；規(guī)范實驗室環(huán)境和儀器設(shè)備，

定期進行實驗室間比對試驗，提高試驗重復(fù)性。(二)試驗結(jié)果出現(xiàn)偏差時,常見原因有哪些?如何依據(jù)專家建議破解?常見原因有試劑批次差異、細(xì)胞狀態(tài)不穩(wěn)定、儀器校準(zhǔn)不及時。專家建議建立試劑批次評估機制,選擇穩(wěn)定性好的試劑;加強細(xì)胞質(zhì)量控制,定期檢測細(xì)胞活性

和純度;按照規(guī)定周期校準(zhǔn)儀器,確保儀器性能穩(wěn)定。0102（三）在標(biāo)準(zhǔn)條款理解上，還有哪些易產(chǎn)生疑問的地方？如何準(zhǔn)確解讀？易疑問條款為

“試驗結(jié)果判定的邊界值設(shè)定依據(jù)”

。準(zhǔn)確解讀需結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)制定時的試驗數(shù)據(jù)，理解邊界值是基于大量試驗驗證，綜合考慮安全性和檢測靈敏度確定

的，

同時可參考標(biāo)準(zhǔn)編制說明，獲取更詳細(xì)的解讀。0102九、GB/T35519-2017在不同行業(yè)的應(yīng)用有何側(cè)重？

以醫(yī)藥、

日化為例，解讀標(biāo)準(zhǔn)在各領(lǐng)域的實踐要點（一）GB/T35519-2017在醫(yī)藥行業(yè)的應(yīng)用側(cè)重是什么？醫(yī)藥行業(yè)側(cè)重檢測藥物及其代謝產(chǎn)物是否具有雌激素激動活性，避免藥物因該活性產(chǎn)生不良反應(yīng)，如影響內(nèi)分泌系統(tǒng)。在新藥研發(fā)階段，需依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)開展檢測，

確保藥物安全性。（二）在日化行業(yè)，標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用有哪些實踐要點？日化行業(yè)中，標(biāo)準(zhǔn)主要用于檢測化妝品、洗滌劑中的化學(xué)成分，防止含有雌激素激動活性的物質(zhì)對人體造成危害。實踐中需重點關(guān)注原料檢測，從源頭控制風(fēng)險，

同時對成品進行抽樣檢測，確保產(chǎn)品符合安全標(biāo)準(zhǔn)。（三）不同行業(yè)在應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)時，如何根據(jù)自身特點調(diào)整試驗方案？醫(yī)藥行業(yè)可根據(jù)藥物特性調(diào)整樣品處理方法，如針對脂溶性藥物選擇合適的溶劑；

日化行業(yè)可增加樣品前處理步驟，去除雜質(zhì)干擾。調(diào)整需在不違背標(biāo)準(zhǔn)核心要

求的前提下，結(jié)合行業(yè)產(chǎn)品特點進行。十、如何確保標(biāo)準(zhǔn)長期有效落地？從人員培訓(xùn)到質(zhì)量控制，構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)持續(xù)實施的保障體系(一)人員培訓(xùn)在標(biāo)準(zhǔn)落地中起到什么作用?如何構(gòu)建完善的培訓(xùn)體系?人員培訓(xùn)是確保標(biāo)準(zhǔn)正確執(zhí)行的關(guān)鍵,能提高操作人員的專業(yè)素養(yǎng)和操作技能。培訓(xùn)體系可分為崗前培訓(xùn)和定期培訓(xùn),崗前培訓(xùn)涵蓋標(biāo)準(zhǔn)條款、試驗操作等內(nèi)容,定期培訓(xùn)則包括技術(shù)更新、

問題研討,同時建立培訓(xùn)考核機制,確保培訓(xùn)效果。0102（二）質(zhì)量