ICS13.020.40CCSB6034DB34/T5227—2025陸生野生脊椎動(dòng)物種質(zhì)資源樣本采集規(guī)范Specificationforthecollectionofgermplasmresourcessampleofterrestrialwildvertebrates2025-05-06發(fā)布2025-06-06實(shí)施安徽省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布IDB34/T5227—2025本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由黃山學(xué)院提出。本文件由安徽省林業(yè)局歸口。本文件起草單位：黃山學(xué)院、安徽省林業(yè)局野生動(dòng)植物保護(hù)處、安徽省野生動(dòng)物疫源疫病監(jiān)測(cè)總站、安徽揚(yáng)子鱷國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)管理局。本文件主要起草人：呂順清、吳月龍、劉嵩、于超、邴曉慧、王德青、李偉、姜賀、周永康。DB34/T5227—20251陸生野生脊椎動(dòng)物種質(zhì)資源樣本采集規(guī)范本文件規(guī)定了陸生野生脊椎動(dòng)物種質(zhì)資源樣本采集的目標(biāo)與原則、采集對(duì)象、采集許可、采集前準(zhǔn)備、采集、采集后處置、樣本運(yùn)輸保存。本文件適用于陸生野生脊椎動(dòng)物（兩棲類(lèi)、爬行類(lèi)、鳥(niǎo)類(lèi)、哺乳類(lèi)）種質(zhì)資源樣本的采集。其它類(lèi)群野生動(dòng)物種質(zhì)資源樣本采集可參照?qǐng)?zhí)行。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。LY/T2359陸生野生動(dòng)物疫源疫病監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范《中華人民共和國(guó)野生動(dòng)物保護(hù)法》（2022年12月30日）《中華人民共和國(guó)生物安全法》（2020年10月17日）《中華人民共和國(guó)自然保護(hù)區(qū)條例》（2017年10月7日）《陸生野生動(dòng)物疫源疫病監(jiān)測(cè)防控管理辦法》（國(guó)家林業(yè)局令2013第31號(hào)）《高致病性動(dòng)物病原微生物菌（毒）種或者樣本運(yùn)輸包裝規(guī)范》（農(nóng)業(yè)部公告第503號(hào)）《國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)野生動(dòng)物名錄》（2021年1月4日）《有重要生態(tài)、科學(xué)、社會(huì)價(jià)值的陸生野生動(dòng)物名錄》（2023年6月26日）《安徽省重點(diǎn)保護(hù)野生動(dòng)物名錄》（2023年2月22日）3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1陸生野生脊椎動(dòng)物terrestrialwildvertebrate本文件指除了魚(yú)類(lèi)和無(wú)脊椎動(dòng)物以外的其他野生動(dòng)物，包括兩棲類(lèi)、爬行類(lèi)、鳥(niǎo)類(lèi)和哺乳類(lèi)。種質(zhì)資源樣本germplasmresourcessample可現(xiàn)場(chǎng)直接采集、包含有個(gè)體全部或部分遺傳信息的生物材料，包括但不限于生物體的細(xì)胞、組織、器官、整體，無(wú)需經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)室復(fù)雜程序提取或培養(yǎng)即可長(zhǎng)期保存，用于動(dòng)物學(xué)研究，或用于未來(lái)種質(zhì)遺傳資源的繁育和利用。DNA提取樣本sampleforDNAextraction保存質(zhì)量能夠滿足全基因組（包括線粒體基因組）提取的樣本。3.4RNA提取樣本sampleforRNAextraction2DB34/T5227—2025保存質(zhì)量能夠滿足RNA提取的樣本。3.5細(xì)胞培養(yǎng)樣本sampleforcellculture保存質(zhì)量能夠滿足細(xì)胞培養(yǎng)的樣本。3.6標(biāo)本specimen樣本采集的動(dòng)物體，包括但不限于活體動(dòng)物、死亡動(dòng)物全部或部分尸體、博物館或機(jī)構(gòu)保存的野生動(dòng)物標(biāo)本等。3.7非損傷動(dòng)物樣本采集法Non-invasiveAnimalSampling在采集動(dòng)物樣本的過(guò)程中，不對(duì)動(dòng)物造成傷害或應(yīng)激，不影響其自然行為和生存狀態(tài)的方法。微損傷動(dòng)物樣本采集法Mini-invasiveAnimalSampling在采集動(dòng)物樣本的過(guò)程中，對(duì)動(dòng)物造成微小傷害或應(yīng)激、不足以影響其自然行為和生存狀態(tài)的方法。規(guī)范陸生野生脊椎動(dòng)物種質(zhì)資源樣本采集，為動(dòng)物種質(zhì)遺傳資源的保存、研究、保護(hù)和利用提供技術(shù)規(guī)范。4.2原則4.2.1合法性原則樣本采集須符合生物安全管理規(guī)范，取得主管部門(mén)許可。到自然保護(hù)區(qū)采集或采集《國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)野生動(dòng)物名錄》、《有重要生態(tài)、科學(xué)、社會(huì)價(jià)值的陸生野生動(dòng)物名錄》、《安徽省重點(diǎn)保護(hù)野生動(dòng)物名錄》中的物種，按照《中華人民共和國(guó)野生動(dòng)物保護(hù)法》、《中華人民共和國(guó)自然保護(hù)區(qū)條例》的規(guī)定執(zhí)行。4.2.2科學(xué)性原則樣本采集須由專(zhuān)業(yè)人員或經(jīng)過(guò)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)的人員承擔(dān)，按照技術(shù)規(guī)范操作。4.2.3安全性原則樣本采集過(guò)程中須注重環(huán)境、人員、動(dòng)物及標(biāo)本等的安全控制。采集和運(yùn)輸有傳染性或人畜共患病風(fēng)險(xiǎn)的樣本，按照《中華人民共和國(guó)生物安全法》、《陸生野生動(dòng)物疫源疫病監(jiān)測(cè)防控管理辦法》、《高致病性動(dòng)物病原微生物菌（毒）種或者樣本運(yùn)輸包裝規(guī)范》及LY/T2359的規(guī)定執(zhí)行。4.2.4動(dòng)物福利原則盡量減少動(dòng)物及樣本的采集量；活體動(dòng)物應(yīng)優(yōu)先使用非損傷或微損傷采集方式；采集方式應(yīng)減少動(dòng)物的驚嚇、精神壓力或痛苦；處死動(dòng)物盡可能減輕動(dòng)物的痛苦。5采集對(duì)象DB34/T5227—202535.1陸生野生脊椎動(dòng)物類(lèi)別陸生野生脊椎動(dòng)物包括如下四類(lèi)：b)爬行類(lèi)；5.2種質(zhì)資源樣本類(lèi)別種質(zhì)資源樣本包括如下四類(lèi)：a)動(dòng)物體（活體、尸體、標(biāo)本等）；b)器官（睪丸、卵巢、心臟等）；c)組織（皮膚、肌肉、血液等）；d)細(xì)胞（生殖細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞等）。6采集許可樣本采集須取得政府主管部門(mén)許可或按照相關(guān)法律法規(guī)執(zhí)行。7采集前準(zhǔn)備7.1儀器設(shè)備主要包括但不限于：交通運(yùn)輸工具（車(chē)輛）、車(chē)載超低溫冰箱（-80℃)、車(chē)載普通冰箱（-20℃)、顯微鏡、液氮罐等（見(jiàn)附錄A）。7.2器材器具主要包括但不限于：解剖刀、手術(shù)剪、鑷子、凍存管、凍存盒、防護(hù)服、工作服、口罩、乳膠手套、脫脂棉、紗布、急救箱、計(jì)量工具、記錄工具等（見(jiàn)附錄B）。器材器具須清洗、消毒，分類(lèi)整齊擺放于專(zhuān)用工具箱中。7.3藥品試劑主要包括但不限于：RNA保存液、RNase抑制劑、細(xì)胞培養(yǎng)液、精液稀釋液、乙醇、去離子水、麻醉劑等（見(jiàn)附錄C）。藥品試劑須封裝于專(zhuān)用容器中，分類(lèi)擺放于試劑箱（柜）中。8采集8.1信息采集8.1.1活體或死亡標(biāo)本信息活體或死亡標(biāo)本信息包括但不限于以下內(nèi)容：a)標(biāo)本號(hào)（自行命名，但需確保編碼原則統(tǒng)一性、編碼唯一性）；DB34/T5227—20254b)分類(lèi)學(xué)信息：中文名、學(xué)名、種下名稱(chēng)（即亞種名，若有則須添加）、種上名稱(chēng)（綱、目、科，中文名和學(xué)名）、鑒定人等；海拔（黃海高程）、生境類(lèi)型、氣候因子（溫度、濕度）等；d)標(biāo)本信息：采集人（標(biāo)本具體采集人或團(tuán)隊(duì)等）、采集時(shí)間（日期格式保持一致）、采集方式（直接抓捕、網(wǎng)捕、燈誘、陷阱等）、個(gè)體信息（性別、年齡或發(fā)育階段、健康狀況等）、保藏單位（保藏單位全稱(chēng)）等。信息記錄見(jiàn)附錄D。8.1.2館藏標(biāo)本信息標(biāo)本號(hào)、標(biāo)本屬性（正模、配模、副模、地模、普通等）、鑒定人、制作人、制作日期、保藏方式（浸泡、干制、冰凍等）、實(shí)物狀態(tài)（完整、破損等。非完整標(biāo)本可簡(jiǎn)單描述破損部位）、保藏單位、聯(lián)系人（包括單位、地址、郵編、電話、電子信箱等）。8.1.3圖像信息8.1.3.1圖像信息采集總則圖像信息采集分門(mén)別類(lèi)進(jìn)行；同一地點(diǎn)或同一次采集的所有圖像保存于同一個(gè)存儲(chǔ)設(shè)備（移動(dòng)硬盤(pán)、U盤(pán)），移交給保藏單位，同時(shí)做好備份。8.1.3.2生境圖像信息活體或野外死亡標(biāo)本需要拍攝生境圖像，要求盡可能體現(xiàn)采集地地貌、植被、水源等多項(xiàng)信息。每個(gè)采集地拍攝照片不少于4張（前、后、左、右），分辨率1500萬(wàn)像素（4896×3264）以上，保存格式為“jpg”或“tif”格式；拍攝視頻不少于15秒，拍攝內(nèi)容不少于照片部分，分辨率不小于4K（3840×2160），保持格式為“mov”。所有生境圖像自行命名，但需確保統(tǒng)一性、唯一性，保存于同一個(gè)文件夾內(nèi)。8.1.3.3工作圖像信息工作圖像信息要求體現(xiàn)工作場(chǎng)景、工作方式等。每個(gè)采集地拍攝照片3-4張，照片精度要求在1000萬(wàn)（2775×3700）像素值以上，保存格式為“jpg”或“tif”格式；拍攝視頻不少于15秒，拍攝內(nèi)容不少于照片部分，分辨率不小于4K（3840×2160），保持格式為“mov”。所有工作圖像自行命名，但需確保統(tǒng)一性、唯一性，保存于同一個(gè)文件夾內(nèi)。8.1.3.4標(biāo)本圖像信息所有被采集樣本的個(gè)體（活體、尸體、標(biāo)本）均須拍攝形態(tài)圖像，要求盡可能體現(xiàn)個(gè)體全貌及主要鑒別特征。擺拍最好在原產(chǎn)地進(jìn)行，盡可能還原其生境，并做好防逃逸措施；拍照前在適當(dāng)位置放置一個(gè)刻度尺作為個(gè)體大小參考。每個(gè)個(gè)體拍攝1-3張全身入鏡照片（至少1張含有個(gè)體標(biāo)簽或信息卡）、4后、背、側(cè)）、鑒別特征局部特寫(xiě)照片1-3張，分辨率1500萬(wàn)像素（4896×3264）以上，保存格式為“jpg”或“tif”格式；拍攝視頻不少于15秒，拍攝內(nèi)容不少于照片部分，分辨率不小于4K（3840×2160），保持格式為“mov”。所有圖像自行命名，但需確保統(tǒng)一性、唯一性，同一個(gè)體的所有圖像保存于同一個(gè)文件夾內(nèi)。8.2樣本采集DB34/T5227—202558.2.1樣本采集總則8.2.1.1樣本正式采集前，應(yīng)根據(jù)采集需求及條件確定采樣數(shù)量和地點(diǎn)；穿著工作服或防護(hù)服（采集個(gè)體可能患有高傳染性疾病或不明原因死亡）、乳膠手套、口罩；做好樣本編碼和保存器具（凍存管等）標(biāo)記；根據(jù)動(dòng)物體、器官、組織、細(xì)胞分門(mén)別類(lèi)進(jìn)行采集；采集器材器具盡量不重復(fù)使用，有必要重復(fù)使用時(shí)必須規(guī)范清洗、消毒；及時(shí)登記樣本采集相關(guān)信息（見(jiàn)附錄4）。8.2.1.2動(dòng)物體體采集和器官采集僅適用于小型動(dòng)物（蝌蚪、小型蛙類(lèi)等），視其體型與凍存管比例而定；細(xì)胞樣本采集僅適用于兩棲類(lèi)卵細(xì)胞，且不能用于凍存后復(fù)蘇繁育。8.2.2動(dòng)物體樣本動(dòng)物體樣本采集應(yīng)遵循以下流程：a)活體動(dòng)物應(yīng)采用盡可能減輕動(dòng)物痛苦的方法處死；動(dòng)物尸體須用生理鹽水沖洗干凈；b)將樣本置于凍存管內(nèi)，直接置于液氮罐中保存。若不具備該條件時(shí)，DNA提取樣本用乙醇保存，RNA提取樣本用RNA保存液保存，細(xì)胞培養(yǎng)樣本則用細(xì)胞培養(yǎng)液保存。8.2.3器官樣本器官樣本采集應(yīng)遵循以下流程：a)活體動(dòng)物應(yīng)采用盡可能減輕動(dòng)物痛苦的方法處死；b)用解剖器具（手術(shù)剪、鑷子等）摘取目標(biāo)器官置于凍存管內(nèi)，直接置于液氮罐中保存。若不具備該條件時(shí)，DNA提取樣本用乙醇保存，RNA提取樣本用RNA保存液保存，細(xì)胞培養(yǎng)樣本則用細(xì)胞培養(yǎng)液保存。8.2.4組織樣本8.2.4.1固態(tài)組織樣本固態(tài)組織樣本采集應(yīng)遵循以下流程：a)優(yōu)先選擇非損傷或微損傷方法，死亡個(gè)體優(yōu)先選擇肌肉、內(nèi)臟器官和生殖器官，采樣的同時(shí)應(yīng)做好備份；b)樣本置于凍存管內(nèi)，直接置于液氮罐中保存。若不具備該條件時(shí)，DNA提取樣本用乙醇保存，RNA提取樣本用RNA保存液保存，細(xì)胞培養(yǎng)樣本則用細(xì)胞培養(yǎng)液保存。8.2.4.2血液樣本血液樣本采集應(yīng)遵循以下流程：a)采用全麻或盡可能減輕動(dòng)物痛苦的方法，盡可能不處死動(dòng)物；b)用抗凝采血管采集動(dòng)物靜脈血或肢、尾端動(dòng)脈血（視動(dòng)物體大小采集0.5-5mL不等）；c)將采血管上下緩慢顛倒混勻后在2-8℃條件下（冷藏）暫存，并盡快運(yùn)輸至保藏單位；d)若暫存加運(yùn)輸時(shí)間超過(guò)1周，血液樣本須-20℃（冷凍）或更低溫度暫存并盡快運(yùn)輸至保藏單位。8.2.4.3精液樣本精液樣本采集應(yīng)遵循以下流程：a)挑選健康的雄性成體；b)哺乳動(dòng)物盡可能使用假臺(tái)畜和人工陰道采集精液；不適用假臺(tái)畜法的動(dòng)物則采用電極刺激或人工擠出采集精液；DB34/T5227—20256c)取適量精液涂片，顯微鏡下觀察精子濃度、活力和形態(tài)，以確認(rèn)精液質(zhì)量；d)根據(jù)精液質(zhì)量，利用精液稀釋液將其稀釋到一定濃度，分裝到加有冷凍保護(hù)劑的凍存管中；e)將裝有精液的凍存管放入液氮罐中暫存，并盡快運(yùn)輸至保藏單位。8.2.5細(xì)胞樣本細(xì)胞樣本采集應(yīng)遵循以下流程：a)自然排卵或人工擠出采集卵細(xì)胞（包括受精和胚胎細(xì)胞），盡可能不處死動(dòng)物；b)樣本置于凍存管內(nèi)，直接置于液氮罐中保存。若不具備該條件時(shí)，DNA提取樣本用乙醇保存，RNA提取樣本用RNA保存液保存，細(xì)胞培養(yǎng)樣本則用細(xì)胞培養(yǎng)液保存。9采集后處置樣本采集后處置應(yīng)遵循以下要求：a)非損傷或微損傷方法采集后的動(dòng)物，須立即原地釋放；b)使用麻醉方式采集后的動(dòng)物，則需要等待其蘇醒。若動(dòng)物在預(yù)計(jì)時(shí)間內(nèi)沒(méi)有蘇醒，則需要注射麻醉拮抗劑以解除麻醉狀態(tài)。動(dòng)物蘇醒后觀察一定時(shí)間，確認(rèn)其完全恢復(fù)正常后原地釋放；c)采集前已經(jīng)死亡或處死的動(dòng)物，樣本采集后的部分如果可以做成標(biāo)本的，則需及時(shí)安全運(yùn)輸?shù)綐?biāo)本制作場(chǎng)所；若不具備任何價(jià)值，則須及時(shí)做焚燒、深埋等無(wú)害化處理，以免污染環(huán)境、傳播疾病。10樣本運(yùn)輸保存樣本運(yùn)輸應(yīng)遵循如下要求：a)樣本采集完成、存放于臨時(shí)保存設(shè)備后，須盡快送到保藏單位進(jìn)行長(zhǎng)期保存；b)運(yùn)送樣本的車(chē)輛，滿足安全需求，樣本保存設(shè)備須完全固定；c)須有專(zhuān)業(yè)人員跟車(chē)，定時(shí)對(duì)樣本保存設(shè)備進(jìn)行檢查，確保設(shè)備運(yùn)行正常；d)樣本到達(dá)保藏單位，須第一時(shí)間移交，同時(shí)確保移交手續(xù)記錄完整。DB34/T5227—20257儀器設(shè)備表樣本采集所需儀器設(shè)備名錄（包括但不限于）見(jiàn)表A.1。表A.1儀器設(shè)備表1DB34/T5227—20258器材器具表樣本采集所需器材器具名錄（包括但不限于）見(jiàn)表B.1。表B.1器材器具表DB34/T5227—20259藥品試劑表樣本采集所需藥品試劑名錄（包括但不限于）見(jiàn)表C.1。表C.1藥品試劑表DB34/T5227—2025樣本信息采集表樣本信息記錄單見(jiàn)表