生物制藥復(fù)習(xí)思考題:

核心復(fù)習(xí)題

1.藥物研究與開發(fā)的基本過程？

確定疾病一分離出引起疾病的蛋白（2—5年）一找到針對疾病蛋白的有效藥物

（2—5年）一臨床前實驗（1—3年）一擴大生產(chǎn)一提法一人體臨床試驗（2—10

年）一FDA批準(zhǔn)（2—3年）

2.生物技術(shù)制藥的定義、分類？

定義：采用現(xiàn)代生物技術(shù)、借助某些微生物、植物、動物生產(chǎn)醫(yī)藥品。

分類方法有三種：

按藥物的化學(xué)本質(zhì)和特性分類：（1）氨基酸及其衍生生類藥物（2）多肽及蛋白

質(zhì)類藥物（3）酶與輔酶類藥物（4）核酸及其降解物和衍生物類藥物（5）糖類

藥物（6）脂類藥物（7）細(xì)胞生長因子類（8）生物制品類

按原料來源分類：（1）人類組織來源的生物藥物（2）動物組織來源的生物藥物

（3）植物組織來源的生物藥物（4）微生物來源的生物藥物（5）海洋生物來源

的生物藥物

按生理功能和臨床用途分類：（1）治療藥物：腫瘤、愛滋病、心腦血管疾病等

（2）預(yù)防藥物：傳染性強的疾病，菌苗、疫苗、類毒素等（3）診斷藥物：免疫

診斷、酶診斷、放射性診斷、基因診斷試劑（4）其它生物醫(yī)藥用品

3.簡述生物藥物的定義、來源及特性？

定義：運用生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、生物化學(xué)等研究成果，從生物體、生物組織、細(xì)胞、

體液等，綜合利用物理學(xué)、化學(xué)、生物化學(xué)、生物技術(shù)、藥學(xué)等學(xué)科的原理和方

法制造的一類用于預(yù)防、治療和診斷的制品。

來源：（1）天然生物材料：人體、動物、植物、微生物和各種海洋生物等。（2）

人工生物材料

特性：（1）藥理學(xué)特性：治療的針對性強、藥理活性高、毒副作用小，營養(yǎng)價

值高，生理副作用常用有發(fā)生；（2）在生產(chǎn)、制備中特殊性；（3）檢驗上的特

殊性。

4.基因工程技術(shù)生產(chǎn)藥物的優(yōu)點及生產(chǎn)的基本過程?

優(yōu)點：（1）大量生產(chǎn)難以獲得的生理活性蛋白質(zhì)和多肽；（2）提供足夠數(shù)量的

生理活性物質(zhì)，以便對其生理、生化和結(jié)構(gòu)進行深入的研究，從而擴大這些物質(zhì)

的應(yīng)用范圍；（3）發(fā)現(xiàn)，挖掘更多的內(nèi)源性生理活性物質(zhì)；（4）改造和去除內(nèi)

源生理活性物質(zhì)在作為藥物使用存在的不足之處；（5）獲得新型化合物，擴大

藥物篩選來源。

生產(chǎn)的基本過程：

基本方法：將目的基因用DNA重組的方法連接在載體上，然后將載體導(dǎo)入靶細(xì)

胞（微生物、哺乳動物細(xì)胞或人體組織靶

從自然界分離的菌種

細(xì)胞），使目的基因在靶細(xì)胞中得到表達,?----------1------------1

透支育種基因工程細(xì)胞工程

最后將表達的目的蛋白提純及做成制劑，

從而成為蛋白類藥物或疫苗。

①獲得目的基因

②組建重組質(zhì)粒

③構(gòu)建基因工程菌（細(xì)胞）

④培養(yǎng)工程菌發(fā)酵條件控制

⑤產(chǎn)物分離純化分寓提純

⑥除菌過濾

⑦半成品檢定ri

⑧成品檢定微生—產(chǎn)物

⑨包裝產(chǎn)品

5.獲得藥用目的基因的方法？

（1）逆轉(zhuǎn)錄法：先分離純化目的基因的mRNA,再反轉(zhuǎn)錄成cDNA,然后進行cDNA

的克隆表達。

mRNA的純化一cDNA第一鏈的合成一cDNA第二鏈的合成一cDNA克隆

一將重組體導(dǎo)入宿主細(xì)胞一cDNA文庫的鑒定一目的cDNA克隆的分離

和鑒定

（2）逆轉(zhuǎn)錄——聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法：mRNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈一在特

異引物的協(xié)助下，用PCR法進行擴增，特異地合成目的cDNA鏈

（3）化學(xué)合成法

前提：較小的蛋白質(zhì)或多肽的編碼基因

先決條件：目的基因的核甘酸排列順序/蛋白質(zhì)的氨基酸順序已知

限制：1.不能合成太長的基因（60-80bp）

2.遺傳密碼的簡并性

3.費用高

用途：PCR引物、測序引物、定點突變、核酸雜交探針

6.真核基因在大腸桿菌中的表達方式？

（1）以融合蛋白的形式表達藥物基因：融合蛋白氨基端是原核序列，較基端是

真核序列。優(yōu)點：操作簡便，蛋白質(zhì)在菌體內(nèi)比較穩(wěn)定；易高效表達；但只能做

抗原，一般不做人體注射用藥。

（2）以非融合蛋白的形式表達藥物基因：易被蛋白酶破壞；N端有甲硫氨酸，

易引起免疫反應(yīng)。

（3）分泌型表達蛋白藥物基因：外源基因融合到原核蛋白信號肽序列的下游。

7.影響目的基因在大腸桿菌中表達的因素？

（1）外源基因的拷貝數(shù)：高拷貝數(shù)的表達質(zhì)粒；

（2）外源基因的表達效率

①啟動子的強弱：轉(zhuǎn)錄水平的高低

常用強啟動子：lac、trp、九PL、tac、bla等

②核糖體結(jié)合位點的有效性

③SD序列和起始密碼子ATG的間距：翻譯效率

④密碼子組成：“偏愛”大腸桿菌

（3）表達產(chǎn)物的穩(wěn)定性：組建融合蛋白；利用信號肽；特異性突變；位點特異

突變，改變二硫鍵位置；宿主蛋白酶缺陷

（4）細(xì)胞的代謝負(fù)荷：宿主細(xì)胞的生長與外源基因的表達

（5）工程菌的培養(yǎng)條件：host---Vector---cloninggene

8.基因工程藥物的表達體系有那些，它們有什么優(yōu)缺點？

（1）原核表達體系：如大腸桿菌

優(yōu)點：強啟動子；翻譯調(diào)控序列；多接頭克隆位點。

缺點：缺乏轉(zhuǎn)錄加工機制；缺乏翻譯后加工機制；表達產(chǎn)物形成不溶性包涵體;

很難表達大量可溶性蛋白；表達產(chǎn)物不穩(wěn)定，易被細(xì)菌蛋白酶降解。

（2）真核表達體系：如酵母、昆蟲及哺乳動物細(xì)胞和植物細(xì)胞

優(yōu)點：可適當(dāng)修飾表達的蛋白質(zhì)；一般具有天然活性；表達產(chǎn)物分區(qū)積累。

缺點：操作技術(shù)難、費時、不經(jīng)濟。

9.基因工程菌的發(fā)酵工藝與傳統(tǒng)的微生物發(fā)酵工藝有什么異

同？

基因工程菌發(fā)酵傳統(tǒng)微生物發(fā)酵

生物材料（微生物）帶外源基因重組載體不含外源基因

獲得微生物自身基因表

獲得大量外源基因表達

生產(chǎn)目的達所產(chǎn)生的初級或次級

產(chǎn)物

代謝產(chǎn)物

10.基因工程藥物建立分離純化工藝的依據(jù)及分離純化的基本過

程？

依據(jù)：（1）含目的產(chǎn)物的起始物料的特點：

①菌種類型及其代謝特性

②原材料和培養(yǎng)基的來源及其質(zhì)量

③生產(chǎn)工藝和條件

④初始物料的物理、化學(xué)和生物學(xué)特性

（2）物料中雜質(zhì)的種類和性質(zhì)

（3）目的產(chǎn)物特性

（4）產(chǎn)品質(zhì)量的要求

基本過程：

一般不應(yīng)超過4—5個步驟

細(xì)胞破碎

固液分離

濃縮與初步純化

高度純化直至得到純品以及成品加工

11.根據(jù)藥物的不同特性，分離純化蛋白質(zhì)類藥物的常用方法有

那些，簡述其原理?

方法原理

離子交換色譜通過帶電的溶質(zhì)分子與離子交換劑中可交換的離子進行交換，

IEC從而達到分離的目的

疏水色譜HIC根據(jù)蛋白質(zhì)疏水性的差異來分離純化的

親和色譜AC利用固定化配基與目的蛋白質(zhì)之間特異的生物親和力進行吸附

以具有空隙大小一定的多孔性凝膠作為分離介質(zhì)，小分子能進

凝膠過濾色譜入孔內(nèi)，在柱中緩慢移動，而大分子不能進入孔內(nèi)，快速移動，

利用這種移動差別可使大分子與小分子分開

12.重組蛋白質(zhì)藥物目標(biāo)產(chǎn)品的質(zhì)量控制項目？

（1）重組蛋白的鑒別（序列）（2）重組蛋白的純度（雜質(zhì)的類型）（3）重組

蛋白的活性（檢測方法）（4）重組蛋白的安全性（5）重組蛋白的穩(wěn)定性（6）

重組蛋白的一致性（構(gòu)象與構(gòu)型）

原核細(xì)菌表達的重組蛋白產(chǎn)物的質(zhì)量檢測項目與方法

檢測項目檢測方法

產(chǎn)品是否含內(nèi)毒素家兔熱原法

蛋白質(zhì)是否變異肽譜、HPLCv等電聚焦、毛細(xì)管電泳

甲硫氨酸是否被甲?；淖V'質(zhì)譜、HPLCsEdman分析

蛋白質(zhì)是否變性、聚合、脫氨基SDS-PAGE、凝膠層析'等電聚焦'質(zhì)

譜'HPLC、毛細(xì)管電泳、Edman分析

配體是否脫落SDS-PAGEv免疫分析

氨基酸是否發(fā)生取代氨基酸分析、肽譜、質(zhì)譜、毛細(xì)管電泳

是否被細(xì)菌、病毒、支原體等污染微生物學(xué)檢測

13.基因治療的基本程序、臨床應(yīng)用及展望？

基本程序：（1）治療性基因的選擇（2）基因載體的選擇（病毒載體、非病毒載

體）（3）靶細(xì)胞的選擇（體細(xì)胞、生殖細(xì)胞）（4）基因轉(zhuǎn)移（間接體內(nèi)療法、

直接體內(nèi)療法）（5）外源基因表達的篩選（利用在體中的標(biāo)記基因）（6）回輸

體內(nèi)

臨床應(yīng)用：（1）ADA（腺昔酸脫氨酶）缺乏癥，T細(xì)胞受損，聯(lián)合免疫缺陷

（2）乙型血友病，逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)移IX因子

（3）腫瘤的基因治療，細(xì)胞因子，自然基因

展望：（1）進一步尋找切實有效的基因（2）精密調(diào)控外源基因在人體內(nèi)的表達

（3）體細(xì)胞移植和重建的生物學(xué)研究（4）減少外源基因?qū)C體的不利影響

14.動物細(xì)胞的培養(yǎng)條件及其大規(guī)模培養(yǎng)的方法？

培養(yǎng)條件：（1）所有的與細(xì)胞接觸的設(shè)備、器材和溶液都必須保持絕對無菌，

避免污染（2）必須有足夠的營養(yǎng)保證，絕對不可有有害的物質(zhì)，避免有害離子

（3）保證有適量的氧氣供應(yīng)（4）需隨時清除細(xì)胞代謝中的有害產(chǎn)物（5）有良

好的適于生存的外界環(huán)境，滲透壓、離子濃度和酸度（6）及時分種，保持合適

的細(xì)胞密度

溫度、PH、氣體、滲透壓、營養(yǎng)要求

培養(yǎng)方法：

根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞可分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng);

根據(jù)培養(yǎng)容器和方式可分為靜止培養(yǎng)、旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)、攪拌培養(yǎng)、微載體培養(yǎng)、中空

纖維培養(yǎng)、固定床和流化床培養(yǎng)；

實際生產(chǎn)可分為懸浮培養(yǎng)、貼壁培養(yǎng)和貼壁-懸浮培養(yǎng)。

微載體培養(yǎng)技術(shù)、中空纖維培養(yǎng)技術(shù)、微囊化技術(shù)

15.轉(zhuǎn)基因動物的技術(shù)路線及其在醫(yī)藥行業(yè)中的應(yīng)用？

技術(shù)路線：（1）通過手術(shù)從已交配的供體羊的輸卵管中采集受精卵（2）用顯微

注射法向受精卵細(xì)胞核搗入人工構(gòu)建的藥物蛋白基因（3）經(jīng)外科手術(shù)將受精卵

移入同步發(fā)情的受體母羊的輸卵管內(nèi)（4）讓受精卵在母羊體內(nèi)發(fā)育至分娩出生。

胚胎或幼齡動物的組織器官

剪碎J胰蛋白酶

單個細(xì)胞

加培養(yǎng)液J制成

細(xì)胞懸浮液

原代培養(yǎng)|傳代培養(yǎng)

細(xì)胞株

傳代培養(yǎng)J遺傳物質(zhì)改變

細(xì)胞系

在醫(yī)藥行業(yè)的應(yīng)用：（1）人類疾病造模（2）藥物產(chǎn)品的生產(chǎn)（3）異種移植

16.影響植物次級代謝產(chǎn)物產(chǎn)生和累積的因素有哪些？

（1）生物條件：外植體、季節(jié)、休眠、分化等

（2）物理條件：溫度、光（光照時間、強度、光質(zhì)）、通氣（氧氣）、酸度和

滲透壓

（3）化學(xué)條件：無機鹽（N、P、K等）、碳源、物質(zhì)生長調(diào)節(jié)劑、維生素、氨

基酸、核酸、抗生素、天然物質(zhì)和前體等

（4）工業(yè)培養(yǎng)條件：培養(yǎng)罐類型、通氣、攪拌和培養(yǎng)方式

17.轉(zhuǎn)基因植物在制藥工業(yè)上的應(yīng)用？

（1）生產(chǎn)天然藥物：人參細(xì)胞培養(yǎng)、紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)、丹參發(fā)根生物反應(yīng)器大

規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)、紫草細(xì)胞培養(yǎng)（2）生產(chǎn)抗體、重組疫苗、多肽類藥物

18.免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)及功能分區(qū)？

結(jié)構(gòu)：

抗體分子由一對輕、重鏈組成

輕鏈：一個V區(qū)、一個C區(qū)

重鏈：一個V區(qū)、3個C區(qū)

同一類型抗體的C區(qū)序列保守

V區(qū)序列則隨抗原識別特異性不同而不同

互補決定區(qū)（CDR）

骨架區(qū)（FR）

基本結(jié)構(gòu)（四肽鏈結(jié)構(gòu)）

兩條相同的重鏈（heavychain,H鏈）

兩條相同的輕鏈（lightchain,L鏈）

功能分區(qū)：

VH-VL—結(jié)合抗原的部位

CHI-CL—遺傳標(biāo)記所在

CH2—具有補體結(jié)合部位

CH3—與細(xì)胞表面Fc受體結(jié)合

錢鏈區(qū)一在CH1和CH2之間，富含脯氨酸，

易伸展彎曲，易被蛋白酶水解

超變區(qū)(hypervariableregion,HVR)

可變區(qū)中一些特定位置的氨基酸顯示更大的變

異性，構(gòu)建了抗體分子和抗原分子發(fā)生特異性結(jié)合的關(guān)鍵

部位，故稱超變區(qū)，又稱互補決定區(qū)(complementarity-determiningregion,CDR)

骨架區(qū)：可變區(qū)中變化較小的部分

抗原結(jié)合部位(antigenbindingsite)：輕鏈和重鏈的可變部分的20—30個氨基

酸組成的囊裝或裂隙狀分子構(gòu)象

*抗體的特異性決定于結(jié)合部位的構(gòu)象

*兩臂為抗原結(jié)合片斷，Y的柄部為結(jié)晶片斷

19.雜交瘤技術(shù)的原理及制備單克隆抗體的技術(shù)路線？

雜交瘤技術(shù)原理:雜交瘤技術(shù)的基本原理是通過融合兩種細(xì)胞而同時保持兩者的

主要特征。這兩種細(xì)胞分別是經(jīng)擴原免疫的小鼠和小鼠骨髓瘤細(xì)胞。被特異性抗

原免疫的小鼠脾細(xì)胞(B淋巴細(xì)胞)的主要特征是它的抗體分泌功能。但不能在

體外連續(xù)培養(yǎng)，小鼠骨髓瘤細(xì)胞則可在培養(yǎng)條件下無限分裂、增殖，即具有所謂

永生性。在選擇培養(yǎng)基的作用下，只有B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合的雜交細(xì)胞才

能具有持續(xù)培養(yǎng)的能力，形成同時具備抗體分泌功能和保持永生性的兩種特征

的細(xì)胞的克隆。

選擇培養(yǎng)(HAT培養(yǎng)基)原理：選擇性培養(yǎng)基常用HAT培養(yǎng)基(次黃喋吟H、

氨基蝶吟A及胸腺喀咤T配成)--氨基蝶吟能阻斷DNA合成的主要途徑，瘤-

瘤融合細(xì)胞和瘤細(xì)胞因不能合成DNA而死亡;脾-脾融合細(xì)胞在培養(yǎng)幾天后也會

死亡，而雜交瘤細(xì)胞則可以存活。

純化抗原SP2/詢胞

工

BALB/c小鼠=>I取脾細(xì)胞|=>PEG融合

HAT、HT選擇性培養(yǎng)

單

ELISA檢測抗體（篩選）\Z

克陽性雜交痛

隆I有限稀釋法克隆一

多次亞克

抗ELISA檢測抗體（篩選）

體陽性孔

制

備100%陽性J]

誘導(dǎo)小鼠生長腹水|<=>建株，京大培養(yǎng)

路

線

凍存

用抗原免疫小鼠骨髓瘤細(xì)胞的培養(yǎng)「乂選擇培養(yǎng)（HAT培養(yǎng)基）

ro。@O??2

由人人人人人人

未融合的細(xì)胞死亡，雜交瘤細(xì)胞存活

--

陽性克隆的瓦選及克隆化

■■

。,/?

在PEG作用下融合成雜交瘤細(xì)胞

克隆擴增及大量制備McAb

20.噬菌體展示技術(shù)的原理和技術(shù)流程？

原理：將抗體通過與噬菌體外殼蛋白融合表達在噬菌體的表面，進而經(jīng)親和富集

法篩選表達有特異活性的抗體，是噬菌體抗體庫技術(shù)的核心

■噬菌體抗體在膜表面表達，是通過Fab段或SCFV與單鏈?zhǔn)删w外殼蛋白

形成融合蛋白而完成

■既可識別相應(yīng)的抗原并與其結(jié)合，又能夠感染宿主菌進行再擴增

■利用其可再擴增的特性，以靶抗原通過親和吸附+洗脫+擴增，可篩選

到靶分子的配體肽鏈，再經(jīng)突變和鏈置換方法改進抗體親和力，最終便獲

得高親和力的特異性抗體

技術(shù)流程：

（1）獲取目的基因：提取mRNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄PCR獲取抗體某一特定基因區(qū)段，

抗體基因的組合形式多為單鏈抗體

（2）抗體庫技術(shù)的載體：噬菌體載體具有噬菌體和質(zhì)粒的共同特點

（3）淘篩：抗原固相化后，對噬菌粒群的吸附、洗滌和洗脫后再感染擴增，與

輔助噬菌體超感染獲得大容量次級文庫，反復(fù)使目的克隆大量擴增

（4）表達與鑒定：目的克隆經(jīng)過鑒定后，再導(dǎo)入感受態(tài)菌，進行可溶性表達

21.抗體診斷試劑和抗體治療藥物有哪幾類？

抗體診斷試劑：（1）熒光抗體診斷試劑，直接法、間接法

（2）免疫酶抗體診斷技術(shù)（3）放射免疫用抗體診斷試劑

抗體治療藥物：（1）放射性核標(biāo)記的抗體治療藥物（2）抗癌藥物偶聯(lián)的抗體藥

物（3）毒素偶聯(lián)的抗體藥物

22.疫苗的基本成分，常規(guī)疫苗及新型疫苗有哪些類型？

基本成分：（1）抗原：滅活的細(xì)菌或病毒，通過多次傳代得到的減毒細(xì)菌或病毒，病毒

或細(xì)菌的提純物，有效的蛋白成分，類病毒，細(xì)菌多糖，合成多肽，以及近年來發(fā)展的DNA

疫苗等（2）佐劑：能夠增強抗原的特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)（3）防腐劑:保證疫苗

在儲存期不會被微生物污染（化學(xué)防腐劑）（4）穩(wěn)定劑:保證抗原能夠存活和維持

其免疫活性穩(wěn)定的物質(zhì)，（糖類，如乳糖、山梨醇等）（5）適當(dāng)?shù)木彌_劑、鹽類等

無活性的成分

f疫苗（活疫苗、死疫苗）

f常規(guī)疫苗1普鬣苗

亞單位疫苗

人工自動免疫1（化學(xué)疫苗

多肽疫苗

I新型疫苗1基因工程疫苗

基因疫苗

I抗抗體疫苗

23.酶在醫(yī)藥領(lǐng)域的四個方面的應(yīng)用？

（1）疾病診斷方面：葡萄糖氧化酶；測定血糖含量；診斷糖尿病

（2）疾病治療方面：透明質(zhì)酸；治療肝炎；肝硬化

（3）藥物生產(chǎn)方面：青霉素酰化酶，作用于耐藥性菌株，生產(chǎn)廣譜青霉素

（4）酶與生物醫(yī)學(xué)工程：人工腎臟；尿激酶微囊；裝置可降低血液中尿素達80%

二.名詞解釋

生物技術(shù)制藥真核表達載體質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定

連續(xù)培養(yǎng)種子批系統(tǒng)高密度發(fā)酵

肽圖分析基因補償性治療"自殺基因"的基因治療

抗原決定隨表位互補決定區(qū)/超變區(qū)單鏈抗體

抗體融合蛋白細(xì)胞內(nèi)抗體競爭法ELISA

亞單位疫苗DNA疫苗肽疫苗

接觸抑制中空纖維式生物反應(yīng)器冠瘦組織培養(yǎng)

生物技術(shù)制藥:采用現(xiàn)代生物技術(shù)、借助某些微生物、植物、動物生產(chǎn)醫(yī)藥

品。

真核表達載體：用真核細(xì)胞作載體表達，如酵母、昆蟲及哺乳動物細(xì)胞和植

物細(xì)胞

質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)不穩(wěn)'定:外源基因從質(zhì)粒上丟失或堿基重排、缺失所致工程菌

性能的改變。

連續(xù)培養(yǎng)：連續(xù)培養(yǎng)又叫開放培養(yǎng)，是相對分批培養(yǎng)或密閉培養(yǎng)而言的。連

續(xù)培養(yǎng)是采用有效的措施讓微生物在某特定的環(huán)境中保持旺盛生長狀態(tài)的培養(yǎng)

方法。

和1子撲匕系統(tǒng):不含致癌因子，無細(xì)菌、病毒、真菌和支原體等污染，由原始

種子批建立生產(chǎn)用工作細(xì)胞庫，原始種子批須確定克隆基因DNA序列，詳細(xì)敘

述種子批來源、方式、保存以預(yù)計使用期，保存與復(fù)蘇時宿主載體表達系統(tǒng)。

高密度發(fā)酵：指培養(yǎng)液中工程菌的菌體濃度在50gDCW/L以上，理論上的最

高值可達200gDCW/Lo

肽圖分析：用酶法或化學(xué)法降解目的蛋白質(zhì)，對生成的肽段進行分離分析。

基因未卜償'性治療：指將目的基因?qū)氩∽兗?xì)胞或其它細(xì)胞，不去除異常基因,

而是通過目的基因的非定點整合，使其表達產(chǎn)物補償缺陷基因的功能或使原有的

功能得以加強。目前基因治療多采用此種策略。