pcr考試大題及答案

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的中文全稱(chēng)是（）A.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)B.核酸內(nèi)切酶反應(yīng)C.基因擴(kuò)增反應(yīng)D.蛋白質(zhì)合成反應(yīng)答案：A2.PCR反應(yīng)體系中不包含以下哪種成分（）A.引物B.dNTPC.DNA模板D.限制性?xún)?nèi)切酶答案：D3.以下哪種酶常用于PCR反應(yīng)（）A.TaqDNA聚合酶B.反轉(zhuǎn)錄酶C.堿性磷酸酶D.溶菌酶答案：A4.PCR反應(yīng)的基本步驟不包括（）A.變性B.退火C.延伸D.轉(zhuǎn)化答案：D5.引物設(shè)計(jì)時(shí)，其長(zhǎng)度一般為（）A.5-10bpB.15-30bpC.30-50bpD.50-100bp答案：B6.提高PCR反應(yīng)特異性的關(guān)鍵是（）A.提高退火溫度B.增加引物濃度C.優(yōu)化引物設(shè)計(jì)D.加大模板量答案：C7.PCR反應(yīng)中，退火溫度一般比引物的Tm值低（）A.1-2℃B.3-5℃C.5-10℃D.10-15℃答案：B8.在PCR實(shí)驗(yàn)中，污染的主要來(lái)源不包括（）A.模板核酸B.實(shí)驗(yàn)室環(huán)境C.實(shí)驗(yàn)器材D.操作人員的正常呼吸答案：D9.實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)不能用于（）A.基因表達(dá)水平的定量分析B.病原體核酸定量檢測(cè)C.基因分型D.蛋白質(zhì)含量測(cè)定答案：D10.以下哪種物質(zhì)可以作為PCR反應(yīng)的陽(yáng)性對(duì)照（）A.水B.已知目的基因的模板C.不含模板的反應(yīng)體系D.只含引物的體系答案：B二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域包括（）A.基因克隆B.疾病診斷C.法醫(yī)鑒定D.物種進(jìn)化研究答案：ABCD2.影響PCR反應(yīng)的因素有（）A.引物質(zhì)量B.模板濃度C.Mg2?濃度D.反應(yīng)溫度和時(shí)間答案：ABCD3.設(shè)計(jì)PCR引物時(shí)需要考慮的因素有（）A.引物的長(zhǎng)度B.引物的GC含量C.引物自身及引物之間是否存在互補(bǔ)序列D.引物的特異性答案：ABCD4.PCR反應(yīng)體系中包含的成分有（）A.緩沖液B.引物C.dNTPD.DNA聚合酶答案：ABCD5.下列屬于PCR技術(shù)特點(diǎn)的是（）A.靈敏度高B.特異性強(qiáng)C.快速簡(jiǎn)便D.能擴(kuò)增未知序列答案：ABC6.實(shí)時(shí)熒光定量PCR的常用熒光化學(xué)方法有（）A.熒光染料法B.熒光探針?lè)–.化學(xué)發(fā)光法D.放射性核素標(biāo)記法答案：AB7.PCR實(shí)驗(yàn)中防止污染的措施有（）A.嚴(yán)格分區(qū)操作B.定期清潔實(shí)驗(yàn)儀器和環(huán)境C.使用一次性耗材D.設(shè)立陰性對(duì)照答案：ABCD8.巢式PCR的優(yōu)點(diǎn)包括（）A.提高擴(kuò)增的特異性B.提高擴(kuò)增的靈敏度C.可用于擴(kuò)增較長(zhǎng)片段D.減少引物二聚體的形成答案：AB9.不對(duì)稱(chēng)PCR的應(yīng)用有（）A.制備單鏈DNAB.測(cè)序模板制備C.基因表達(dá)分析D.突變檢測(cè)答案：AB10.熱啟動(dòng)PCR的作用是（）A.減少非特異性擴(kuò)增B.提高擴(kuò)增效率C.增加引物的穩(wěn)定性D.降低引物二聚體的產(chǎn)生答案：ABD三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)可以擴(kuò)增任意長(zhǎng)度的DNA片段。（）答案：錯(cuò)誤2.引物的GC含量越高，其退火溫度越高。（）答案：正確3.TaqDNA聚合酶具有3'→5'外切酶活性。（）答案：錯(cuò)誤4.PCR反應(yīng)中模板DNA的濃度越高越好。（）答案：錯(cuò)誤5.熒光定量PCR可以對(duì)基因進(jìn)行絕對(duì)定量和相對(duì)定量分析。（）答案：正確6.引物在PCR反應(yīng)中只起引導(dǎo)DNA合成起始的作用。（）答案：錯(cuò)誤7.降落PCR可以提高PCR反應(yīng)的特異性。（）答案：正確8.只要PCR反應(yīng)結(jié)果出現(xiàn)條帶，就說(shuō)明擴(kuò)增成功。（）答案：錯(cuò)誤9.實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中的核酸氣溶膠不會(huì)導(dǎo)致PCR假陽(yáng)性結(jié)果。（）答案：錯(cuò)誤10.多重PCR可以在一個(gè)反應(yīng)體系中同時(shí)擴(kuò)增多個(gè)目的基因。（）答案：正確四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共4題）1.簡(jiǎn)述PCR技術(shù)的基本原理。答案：PCR基于DNA半保留復(fù)制原理。在高溫下模板DNA變性解鏈，低溫時(shí)引物與模板互補(bǔ)退火結(jié)合，適宜溫度下Taq酶以dNTP為原料，沿引物3'端延伸合成新的DNA鏈，經(jīng)多輪循環(huán)實(shí)現(xiàn)特定DNA片段擴(kuò)增。2.簡(jiǎn)述引物設(shè)計(jì)的基本原則。答案：長(zhǎng)度15-30bp；GC含量40%-60%；避免引物自身及引物間互補(bǔ)形成二聚體；引物3'端不能有連續(xù)3個(gè)以上相同堿基；具有特異性，與模板準(zhǔn)確互補(bǔ)結(jié)合。3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR與普通PCR的主要區(qū)別是什么？答案：普通PCR主要是定性檢測(cè)，在反應(yīng)結(jié)束后通過(guò)電泳等方法判斷是否擴(kuò)增出目的片段。實(shí)時(shí)熒光定量PCR則在反應(yīng)過(guò)程中實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)，可對(duì)起始模板進(jìn)行定量分析，能更準(zhǔn)確測(cè)定核酸含量。4.簡(jiǎn)述PCR反應(yīng)中可能出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增的原因及解決方法。答案：原因有引物設(shè)計(jì)不當(dāng)、退火溫度過(guò)低、模板不純等。解決方法包括優(yōu)化引物設(shè)計(jì)，提高退火溫度，確保模板質(zhì)量，適當(dāng)降低引物和模板濃度，使用熱啟動(dòng)PCR等減少非特異性產(chǎn)物。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論在臨床診斷中，PCR技術(shù)相較于傳統(tǒng)診斷方法的優(yōu)勢(shì)與局限性。答案：優(yōu)勢(shì)在于靈敏度高，能檢測(cè)微量病原體；特異性強(qiáng)，準(zhǔn)確識(shí)別目標(biāo)核酸；快速簡(jiǎn)便，短時(shí)間出結(jié)果。局限性有易受污染致假陽(yáng)性；對(duì)儀器和技術(shù)人員要求高；有些病原體變異快，引物設(shè)計(jì)困難，可能漏檢。2.假如要擴(kuò)增一個(gè)未知序列的基因片段，在引物設(shè)計(jì)方面需要考慮哪些特殊因素？答案：因序列未知，需參考近緣物種相似基因設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物，增加引物與模板結(jié)合可能性。同時(shí)要設(shè)計(jì)多組引物，擴(kuò)大篩選范圍。還要結(jié)合基因保守區(qū)域設(shè)計(jì)，提高引物通用性，后續(xù)通過(guò)篩選優(yōu)化得到合適引物。3.討論在進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，如何確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。答案：要規(guī)范操作，嚴(yán)格分區(qū)避免污染；優(yōu)化反應(yīng)體系，準(zhǔn)確配置各成分濃度；設(shè)計(jì)合適引物保證特異性；設(shè)置陰性、陽(yáng)性對(duì)照監(jiān)控實(shí)驗(yàn)過(guò)程；對(duì)儀器定期校準(zhǔn)維護(hù)；重復(fù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果，出現(xiàn)異常及時(shí)分析調(diào)整。4