液相色譜儀操作規(guī)程標準化手冊前言本手冊旨在規(guī)范液相色譜儀的操作流程，確保儀器分析過程的準確性、精密性與安全性，保障實驗數(shù)據(jù)的可靠性，并延長儀器使用壽命。凡使用本實驗室液相色譜儀的人員，均須仔細閱讀并嚴格遵守本規(guī)程。本手冊適用于常規(guī)分析操作，特殊分析方法可在此基礎上制定補充規(guī)程。一、適用范圍本規(guī)程適用于本實驗室所配置的[此處可填寫具體品牌型號，若為通用手冊可省略或表述為“常規(guī)高效液相色譜儀”]及其配套的檢測器（如紫外-可見檢測器、二極管陣列檢測器等）、自動進樣器、柱溫箱等模塊。二、職責1.操作人員：負責按照本規(guī)程進行儀器的日常操作、樣品分析、數(shù)據(jù)記錄與初步處理，以及實驗后儀器的清潔與整理。2.儀器管理員：負責儀器的定期維護保養(yǎng)、性能核查、故障報修，以及本規(guī)程的宣貫與修訂。3.實驗室負責人：監(jiān)督本規(guī)程的執(zhí)行情況，確保實驗安全與質量。三、操作流程3.1操作前準備與檢查1.環(huán)境檢查：確認實驗室溫度、濕度在儀器要求范圍內，無強烈震動、腐蝕性氣體及易燃易爆物品。2.電源檢查：檢查供電系統(tǒng)是否穩(wěn)定，接地是否良好。3.流動相準備：*根據(jù)分析方法要求，選用色譜純或分析純以上級別的溶劑，并確保其在有效期內。*流動相需經(jīng)合適孔徑的濾膜（如水相用有機相濾膜，有機相用有機相濾膜，混合相根據(jù)比例選擇或分別過濾后混合）真空過濾，以去除顆粒物。*對需要脫氣的流動相，進行超聲脫氣或在線脫氣處理，以避免氣泡對泵和檢測的影響。注意超聲脫氣時應將容器蓋子松開，防止溶劑揮發(fā)或容器爆裂。*檢查流動相的組成、配比是否正確，標簽是否清晰完整，注明名稱、濃度、配制日期及配制人。4.樣品準備：*樣品需按照分析方法進行預處理（如溶解、萃取、稀釋、過濾等）。*確保樣品溶液澄清，必要時通過0.45μm或更小孔徑的濾膜過濾，避免污染色譜柱和儀器流路。*將處理好的樣品注入進樣瓶，蓋緊瓶蓋，做好清晰標記。5.儀器部件檢查：*色譜柱：根據(jù)分析方法選擇合適的色譜柱，檢查色譜柱型號、規(guī)格是否與方法一致，柱身有無破損，接頭是否完好。新色譜柱使用前需查閱說明書進行活化，舊色譜柱需確認其是否適用于當前分析條件。*檢測器：檢查檢測池是否清潔，光路是否正常（如紫外檢測器的氘燈能量）。*自動進樣器：檢查樣品盤是否清潔，進樣針是否通暢、有無彎曲損壞，廢液瓶是否需要清空。*溶劑瓶：檢查溶劑瓶是否清潔，瓶蓋及管路連接處是否密封良好，溶劑過濾頭是否清潔、無堵塞。3.2開機與系統(tǒng)平衡1.安裝流動相：將配制好的流動相正確裝入溶劑瓶，確保管路過濾器完全浸入液面以下。若更換了不同種類的溶劑，應先用新溶劑沖洗溶劑瓶和管路過濾器。2.連接色譜柱：小心將色譜柱安裝到柱溫箱中，注意流向標識，確保連接方向正確。連接時避免過度用力，以防損壞螺紋或色譜柱接口。若系統(tǒng)久未使用或更換了流動相體系，建議先斷開色譜柱與檢測器的連接，用兩通代替，待流動相流經(jīng)色譜柱后再連接檢測器，以避免污染檢測池。3.開機順序：通常建議先開啟泵和柱溫箱，待系統(tǒng)壓力穩(wěn)定、柱溫達到設定值后，再開啟檢測器和工作站軟件。具體順序可參考儀器說明書。4.排氣泡：*打開purge閥（或松開泵頭排氣螺絲），設定較低流速（如5mL/min左右，具體參照儀器說明），啟動泵，讓流動相流經(jīng)管路，直至管路中無氣泡排出。*關閉purge閥（或擰緊泵頭排氣螺絲），觀察系統(tǒng)壓力是否平穩(wěn)。5.設置參數(shù)：在工作站軟件中設置或調用分析方法，包括流動相組成（比例或梯度程序）、流速、柱溫、檢測波長（或其他檢測參數(shù)）、進樣量、運行時間等。6.系統(tǒng)平衡：啟動泵，以分析流速運行流動相，對色譜柱進行平衡。觀察基線變化，直至基線平穩(wěn)（噪音和漂移在可接受范圍內），通常需要至少30分鐘，對于某些特殊色譜柱或流動相體系，可能需要更長時間。平衡過程中，檢測器應處于開啟狀態(tài)。3.3樣品分析1.樣品裝載：將準備好的樣品瓶按順序放入自動進樣器的樣品盤中，并在軟件中正確設置樣品位置信息。2.方法確認：再次核對工作站中當前調用或設置的分析方法參數(shù)是否與實驗要求一致。3.空白與標準品運行：*通常先注入空白樣品（如流動相或樣品溶劑），檢查系統(tǒng)是否有干擾峰。*然后注入標準品溶液，進行系統(tǒng)適用性試驗，檢查理論塔板數(shù)、分離度、重復性、拖尾因子等是否符合方法要求。若不符合，需查找原因并解決后方可進行樣品分析。4.樣品測定：按照設定的序列或手動進樣方式，啟動樣品分析程序。5.過程監(jiān)控：分析過程中，密切關注工作站軟件顯示的壓力曲線、基線、色譜峰形等，如有異常（如壓力突然升高或降低、基線劇烈波動、峰形異常等），應及時暫停實驗，查明原因并處理。6.數(shù)據(jù)記錄：確保工作站軟件正確記錄所有樣品的色譜圖及相關數(shù)據(jù)。3.4關機程序1.實驗結束確認：所有樣品分析完成后，確認數(shù)據(jù)已正確保存。2.沖洗系統(tǒng)：*反相色譜：若流動相中含有緩沖鹽，應先使用不含鹽的過渡流動相（如甲醇/水或乙腈/水，比例與原流動相近）沖洗系統(tǒng)和色譜柱（通常需沖洗至少15-30個柱體積），以去除色譜柱中的鹽類，防止鹽析出堵塞色譜柱或管路。然后再用純有機溶劑（如甲醇或乙腈）沖洗色譜柱（通常10-15個柱體積），以保護色譜柱。*正相色譜：根據(jù)所用流動相和色譜柱的要求，選擇合適的溶劑進行沖洗和保存。*沖洗過程中，可適當提高流速，但不宜超過色譜柱的最大耐受流速。沖洗時檢測器可關閉或置于備用狀態(tài)。3.停泵與關閉模塊：*沖洗完成后，停止泵運行。*依次關閉檢測器、柱溫箱等模塊的電源。4.關閉工作站與總電源：退出工作站軟件，關閉計算機。最后關閉儀器主電源及實驗室總電源（若有必要）。5.拆卸色譜柱（如需要）：若儀器長時間不使用，可將色譜柱從儀器上拆下，兩端用堵頭密封，妥善保存于規(guī)定環(huán)境中。3.5實驗后整理1.清理實驗臺面：及時清理實驗過程中產生的廢液、廢棄物，保持臺面整潔。2.流動相處理：剩余流動相應妥善保存或按規(guī)定處理，不得隨意傾倒。3.進樣器清潔：若使用手動進樣器，實驗結束后應用適當溶劑沖洗進樣針和進樣閥。自動進樣器按儀器維護要求定期清潔。4.填寫記錄：認真填寫儀器使用記錄，包括使用日期、時間、樣品名稱、分析方法、儀器運行狀況、有無異常等。四、注意事項1.安全第一：*操作有機試劑時，應在通風櫥內進行，避免吸入揮發(fā)氣體。*佩戴適當?shù)膫€人防護用品，如實驗服、護目鏡、手套等。*注意防火防爆，遠離火源，妥善保管易燃易爆溶劑。2.流動相相關：*避免使用會引起色譜柱損傷或檢測器響應異常的溶劑。*混合流動相時，注意混合順序，防止因混合放熱或溶解度變化產生沉淀。*含鹽流動相應現(xiàn)用現(xiàn)配，避免長期放置產生微生物或沉淀。3.色譜柱保護：*避免劇烈震動和撞擊色譜柱。*嚴格控制樣品的pH值范圍，避免超出色譜柱的耐受范圍。*避免將大量不溶性微?；驈姳Ａ粑镔|注入色譜柱。*色譜柱在不使用時應兩端密封，存放于合適溫度和濕度環(huán)境中。4.壓力監(jiān)控：操作過程中密切關注系統(tǒng)壓力，若壓力突然升高，可能是管路堵塞或色譜柱堵塞，應立即停泵檢查，排除故障后方可繼續(xù)使用，嚴禁強行升壓。若壓力突然下降，可能是漏液或泵故障。5.檢測器維護：*紫外檢測器應避免強光直射，氘燈有一定使用壽命，應注意更換。*保持檢測池清潔，避免污染。6.數(shù)據(jù)管理：實驗數(shù)據(jù)應及時備份，妥善保存，確保數(shù)據(jù)的完整性和可追溯性。7.異常處理：儀器發(fā)生故障時，應立即停止使用，及時報告儀器管理員或實驗室負責人，不得擅自拆卸或維修。五、日常維護與保養(yǎng)1.每日維護：*檢查溶劑瓶中溶劑余量，及時補充。*清理廢液瓶，避免廢液溢出。*檢查儀器各連接部位是否有漏液現(xiàn)象。*記錄儀器運行狀態(tài)。2.每周/每月維護（根據(jù)使用頻率調整）：*沖洗溶劑過濾頭（可用稀硝酸或有機溶劑超聲清洗）。*檢查進樣針是否堵塞或損壞，必要時清洗或更換。*清潔自動進樣器樣品盤和針座。*檢查柱溫箱內是否潔凈。3.定期維護：*根據(jù)儀器說明書要求，定期更換泵密封墊、單向閥等易損件。*定期對檢測器進行性能校驗。*色譜柱按其說明書進行維護和保存，定期進行柱效測試。六、故障應急處理（簡述）1.系統(tǒng)無壓力或壓力過低：檢查溶劑是否用盡、管路是否連接松動或破裂、過濾器是否堵塞、泵是否正常工作、purge閥是否關閉。2.系統(tǒng)壓力過高：檢查色譜柱是否堵塞、保護柱是否堵塞、管路是否打折或堵塞、流動相是否未脫氣產生氣泡（有時氣泡也會導致壓力不穩(wěn)或升高）。3.基線噪音大或漂移嚴重：檢查流動相是否純凈或已變質、檢測器是否有故障（如氘燈能量不足）、色譜柱是否污染、系統(tǒng)是否有氣泡、實驗室電壓是否穩(wěn)定、溫度是否波動過大。4.不出峰或峰面積過?。簷z查進樣是否正常、樣品是否制備有誤、檢測器參數(shù)設置是否正確、色譜柱是否與樣品不匹配或損壞。5.峰形異常（拖尾、前伸、分叉等）：檢查色譜柱是否污染或損壞