乙型肝炎病毒實驗室檢測技術規(guī)范（2025年修訂版）（征求意見稿）第一章總則1.1制定目的與依據(jù)為規(guī)范乙型肝炎病毒（HBV）實驗室檢測行為，提升檢測質(zhì)量與結果解讀準確性，支撐乙肝預防、診斷與治療管理，依據(jù)《中華人民共和國傳染病防治法》《病毒性肝炎防治方案》等法律法規(guī)，結合HBV病原學特性及檢測技術發(fā)展現(xiàn)狀，制定本規(guī)范。本規(guī)范適用于各級疾病預防控制機構、醫(yī)療機構、采供血機構、婦幼保健機構及第三方醫(yī)學檢測實驗室開展HBV相關檢測工作。1.2核心原則分級檢測導向：建立“基礎篩查-精準診斷-治療監(jiān)測”三級體系，基礎篩查聚焦血清學標志物，精準診斷結合核酸與基因型分析，治療監(jiān)測涵蓋病毒載量與新型標志物。技術適配性原則：根據(jù)檢測目的選擇適配技術，常規(guī)篩查優(yōu)先選擇快速便捷方法，診斷與療效評估采用高靈敏度、特異性技術。生物安全底線：所有檢測活動符合《實驗室生物安全通用要求》（GB19489），樣本處理、廢棄物處置執(zhí)行生物安全二級（BSL-2）實驗室標準。結果整合解讀：單一檢測指標需結合臨床背景，血清學、核酸及新型標志物結果協(xié)同分析，避免孤立解讀導致誤判。1.3適用范圍本規(guī)范涵蓋HBV血清學標志物檢測、核酸檢測、基因型與耐藥檢測、新型標志物檢測等技術，適用于：人群篩查（如體檢、術前、孕期、采供血準入等）；感染診斷（急性/慢性乙肝、隱匿性乙肝、母嬰傳播評估）；治療監(jiān)測（抗病毒療效評價、復發(fā)預警、耐藥監(jiān)測）；流行病學調(diào)查與疫情報告；疫苗免疫效果評估。第二章核心檢測技術與方法2.1HBV血清學標志物檢測2.1.1基礎標志物檢測（乙肝兩對半）檢測指標：乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、表面抗體（抗-HBs）、e抗原（HBeAg）、e抗體（抗-HBe）、核心抗體（抗-HBc，含總抗體及IgM亞型）。推薦方法：化學發(fā)光微粒子免疫分析法（CMIA）：批量檢測首選，靈敏度≤0.05IU/mL，定量檢測HBsAg可評估疾病分期；酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）：經(jīng)典方法，適用于基層篩查，定性結果判讀需嚴格遵循S/CO臨界值標準；快速免疫層析法：現(xiàn)場檢測或急診適用，15-20分鐘出結果，需通過國家藥品監(jiān)督管理局認證。結果解讀核心規(guī)則：模式HBsAg抗-HBsHBeAg抗-HBe抗-HBc臨床意義1+-+-+急性乙肝早期，病毒復制活躍2+--++慢性乙肝，復制受抑3-+--+既往感染康復，有免疫力4----+既往感染或窗口期抗-HBcIgM陽性提示急性感染或慢性乙肝急性發(fā)作，低水平陽性需結合臨床判斷。2.1.2新型血清學標志物檢測抗-HBc定量檢測：采用雙抗原夾心法，免疫清除期患者水平顯著高于耐受期，可預測干擾素療效，與肝臟炎癥程度正相關。乙肝核心相關抗原（HBcrAg）：包含HBcAg、HBeAg等復合抗原，反映肝細胞內(nèi)cccDNA轉錄活性，用于療效評估與肝癌風險預測。2.2HBV核酸（HBVDNA）檢測2.2.1定量檢測適用場景：病毒復制活性評估、抗病毒治療指征判斷、療效監(jiān)測（每3-6個月1次）、母嬰傳播風險評估。技術要求：推薦方法：實時熒光定量PCR、數(shù)字PCR，低拷貝檢測下限≤20IU/mL，檢測范圍20-10?IU/mL；結果判讀：<1000IU/mL為低復制，103-10?IU/mL為中復制，>10?IU/mL為高復制。臨床意義：治療目標為HBVDNA持續(xù)低于檢測下限；治療中若較基線下降<1log??IU/mL或反彈至>1000IU/mL，提示療效不佳。2.2.2定性檢測適用場景：隱匿性乙肝診斷（HBsAg陰性但抗-HBc陽性者）、抗病毒治療終點確認、特殊人群篩查。技術要求：采用巢式PCR或高靈敏度實時熒光PCR，檢測下限≤10IU/mL，陽性提示存在活動性感染。2.3HBV基因型與耐藥檢測2.3.1基因型檢測適用場景：流行病學調(diào)查、個體化治療方案制定（不同基因型對藥物敏感性有差異）。推薦方法：Sanger測序法、實時熒光PCR分型法，可區(qū)分A-H共8種基因型，我國以B、C型為主。2.3.2耐藥突變檢測適用場景：治療失敗或病毒反彈患者、長期抗病毒治療者（每12個月監(jiān)測1次）。檢測內(nèi)容：覆蓋逆轉錄酶區(qū)（RT區(qū)）和蛋白酶區(qū)，重點檢測拉米夫定耐藥相關的M204V/I突變、恩替卡韋耐藥相關的L180M+M204V組合突變等。結果應用：根據(jù)耐藥譜調(diào)整方案，如M204V突變者換用丙酚替諾福韋或干擾素。2.4其他關聯(lián)檢測肝功能關聯(lián)指標：丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、總膽紅素（TBil）、γ-谷氨酰轉移酶（γ-GT）等，需與HBV檢測同步開展，評估肝臟損傷程度；肝癌篩查指標：甲胎蛋白（AFP），HBV感染者每6-12個月聯(lián)合腹部超聲檢測，用于肝細胞癌預警。第三章檢測流程與操作規(guī)范3.1樣本采集與處理3.1.1樣本類型及技術要求檢測項目推薦樣本類型采集量保存條件運輸要求血清學標志物靜脈血（血清）2-3mL2-8℃保存7天，-20℃冷凍1年冷藏運輸（2-8℃）HBVDNA檢測EDTA抗凝血3-5mL4℃保存24小時，-70℃長期保存干冰運輸（<-20℃）基因型/耐藥檢測EDTA抗凝血5mL-70℃保存，避免反復凍融干冰運輸快速檢測指尖全血2-3滴即時檢測無需運輸，結果需復核3.1.2生物安全操作樣本采集使用一次性真空采血管，操作人員佩戴手套、口罩，避免針刺傷；樣本處理在生物安全柜內(nèi)進行，醫(yī)療廢棄物經(jīng)高壓滅菌后按感染性廢物處置；發(fā)生職業(yè)暴露后，立即擠血沖洗，24小時內(nèi)注射乙肝免疫球蛋白并接種疫苗（未免疫者）。3.2常規(guī)檢測流程3.2.1篩查與診斷流程初篩階段：采用CMIA或ELISA檢測乙肝兩對半，HBsAg陽性者進入診斷階段；診斷階段：同步開展HBVDNA定量、肝功能檢測，必要時加做HBcrAg或基因型檢測；疑難病例處理：HBsAg陰性但抗-HBc陽性者，加做HBVDNA定性檢測排除隱匿性感染。3.2.2治療監(jiān)測流程基線評估：治療前檢測HBVDNA定量、乙肝兩對半定量、肝功能、AFP及腹部超聲；治療中監(jiān)測：每3個月檢測HBVDNA定量與肝功能，每6個月檢測乙肝兩對半定量；停藥后隨訪：停藥后前3個月每月檢測，之后每3-6個月檢測，持續(xù)至少12個月。3.3特殊場景檢測規(guī)范3.3.1母嬰傳播防控檢測孕婦孕24-28周檢測HBVDNA定量，>2×10?IU/mL者啟動抗病毒干預；新生兒出生后24小時內(nèi)檢測HBsAg與HBVDNA，評估阻斷效果。3.3.2采供血機構檢測采用高靈敏度HBsAg試劑（檢測下限≤0.01IU/mL）與HBVDNA聯(lián)合篩查，雙重陰性方可供血。第四章質(zhì)量控制與實驗室管理4.1室內(nèi)質(zhì)量控制日常質(zhì)控：每批檢測設置陰性對照、陽性對照及室內(nèi)質(zhì)控品（定值），HBVDNA檢測需包含低、中、高三個濃度水平質(zhì)控品；方法驗證：新試劑啟用前驗證精密度（CV≤15%）、準確度（回收率90%-110%）及線性范圍；人員資質(zhì)：檢測人員需經(jīng)省級疾控中心培訓合格，持《病毒性肝炎檢測技術合格證》上崗，每年繼續(xù)教育不少于12學時。4.2室間質(zhì)量評價（EQA）各級機構需參加國家或省級EQA計劃，每年至少2次，血清學標志物檢測合格率≥95%，HBVDNA檢測合格率≥90%；未通過EQA者需1個月內(nèi)整改，整改期間暫停檢測資質(zhì)，復核合格后方可恢復。4.3結果報告與數(shù)據(jù)管理報告時限：血清學篩查結果24小時內(nèi)反饋，HBVDNA及耐藥檢測結果3-5個工作日內(nèi)反饋；報告內(nèi)容：包含檢測指標、方法、結果、參考范圍、臨床建議，HBVDNA結果需注明檢測下限；數(shù)據(jù)上報：慢性乙肝病例確診后24小時內(nèi)錄入全國傳染病信息網(wǎng)絡報告系統(tǒng)。第五章附則5.1檢測費用與服務疾控中心為高危人群（如靜脈吸毒者、性工作者）提供免費乙肝兩對半篩查；收費項目價格：血清學定性檢測30-80元/套，HBVDNA定量檢測200-500元，耐藥檢測800-1500元，具體執(zhí)行當?shù)蒯t(yī)療服務定價標準。5.2