ICS65.020.01DB23黑龍江省市場監(jiān)督管理局發(fā)布IDB23/T2514—2019本標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)GB/T1.1-2009的編寫規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由黑龍江省市場監(jiān)督管理局提出。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：黑龍江伊藍(lán)生物科技有限公司、伊春市九天生物科技有限公司、伊春市豐林縣人才驛站本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：韋慶和、史福忠、于海鷗、馬軍、安曉莉、楊柳、劉桂森、郝文鵬、許廣明、李云哲、王春英、劉龍、張慶、馬學(xué)文、劉佳。DB23/T2514—20191藍(lán)靛果組培微插育苗技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了藍(lán)靛果（Loniceracaerulea）組培微插育苗的術(shù)語和定義、培養(yǎng)基制備、外植體選擇與處理、誘導(dǎo)分化與繼代增殖增壯、扦插、移植撫育和生產(chǎn)檔案。本標(biāo)準(zhǔn)適用于藍(lán)靛果組培微插育苗。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T8321（所有部分）農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則NY/T496肥料合理使用準(zhǔn)則通則NY/T1276農(nóng)藥安全使用規(guī)范總則LY/T1882林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義組培微插育苗組培瓶苗經(jīng)煉苗，去除培養(yǎng)基，截成1cm～2cm長的微小插穗，經(jīng)激素處理，扦插在配制的培養(yǎng)基上進(jìn)行生根的苗木繁殖方法。4培養(yǎng)基制備4.1培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基：MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.2mg/L+瓊脂7.0g/L+蔗糖30g/L，pH值調(diào)至5.8；繼代增殖培養(yǎng)基：MS+6-BA2.0mg/L+IBA0.3mg/L+瓊脂7.0g/L+蔗糖30g/L，pH值調(diào)至5.8；增壯培養(yǎng)基：MS+6-BA0.3mg/L+IBA0.1mg/L+瓊脂7.0g/L+蔗糖30g/L，pH值調(diào)至5.8。4.2培養(yǎng)基制備按LY/T1882執(zhí)行。4.3培養(yǎng)基保存按LY/T1882執(zhí)行。5外植體選擇與處理5.1外植體的選擇DB23/T2514—20192選擇生長健壯、無病蟲害的優(yōu)良母株，春季新芽長至1cm～2cm時(shí)選用葉芽作外植體，休眠期可水培芽作外植體，也可在新枝長至半木質(zhì)化時(shí)剪取2cm～4cm嫩莖作外植體。5.2外植體處理外植體用洗滌劑作表面清洗，流水沖洗30min，放入消毒瓶中，消毒瓶用75%的酒精棉擦拭后放入超凈工作臺，打開裝有外植體的消毒瓶，倒入75%酒精并搖晃，浸泡消毒5s～10s，倒去酒精，用無菌水沖洗外植體3次～4次；再用5%次氯酸鈉加幾滴吐溫20或吐溫80浸泡10min～12min，無菌水沖洗4次～5次，無菌濾紙吸干外植體表面水分，兩端各剪去2mm以上，保持莖段長度0.5cm～1.0cm，接種至誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基中。6誘導(dǎo)分化與繼代增殖增壯6.1培養(yǎng)條件培養(yǎng)室的溫度控制在25℃±2℃,空氣相對濕度控制在70%～80%，光照強(qiáng)度為27μmol?m-2?s-1～36μmol?m-2?s-1，光照時(shí)間為12h/d～14h/d。6.2誘導(dǎo)分化將培養(yǎng)瓶的封口膜取下，培養(yǎng)瓶口傾斜在酒精燈外焰上旋轉(zhuǎn)灼燒消毒。用槍式鑷子在酒精燈上灼燒消毒冷卻后，將切割好的外植體放入不定芽分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每個(gè)培養(yǎng)瓶放2個(gè)～3個(gè)外植體，蓋上封口膜，標(biāo)注日期。6.3增殖培養(yǎng)外植體經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)后，單株苗剪段，叢生芽分芽，轉(zhuǎn)接至繼代增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)。培養(yǎng)35d后再重復(fù)進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)。6.4增壯培養(yǎng)增殖繼代培養(yǎng)中部分叢生芽弱，將其接種到增壯培養(yǎng)基中，培養(yǎng)3周后繼續(xù)繼代增殖培養(yǎng)或瓶外生根扦插。7扦插7.1煉苗將瓶苗移到日光溫室中，自然散射光下煉苗，溫度控制在18℃~25℃,每天中午在培養(yǎng)瓶周圍噴灑霧水，封口煉苗1d～3d，松口煉苗1d～2d，開口煉苗2h～5h即可扦插。7.2作基質(zhì)床在溫室內(nèi)作基質(zhì)床，床寬110cm，作床高10cm，步道40cm。床面上鋪5cm～7cm厚腐殖土，上面再鋪3cm～4cm篩過的細(xì)河沙，床面整平，扦插前5d用0.5%高錳酸鉀溶液消毒。7.3扦插將瓶苗取出，剪去培養(yǎng)基，截成1cm～2cm長的插穗，在生根液中速浸撈出，用鑷子輕輕夾著插穗按3cm×2.5cm的株行距劃溝扦插到床面上，深度為插穗長度的1/2～1/3，不能倒插，插后澆透水，用多菌靈800倍液噴施消毒。DB23/T2514—201937.4插后管理扦插后搭設(shè)小拱棚覆膜加蓋遮陽網(wǎng)，控制溫度15℃~28℃、濕度在70%rh～90%rh、光照2500LX~8000LX。適當(dāng)通風(fēng)、噴水，保持插穗葉面濕潤。每7d噴一次殺菌劑，生根后結(jié)合殺菌消毒7d噴一次0.1%磷酸二氫鉀和硫酸銨肥，逐步撤除遮陽網(wǎng)和小拱棚，降低濕度到60%rh，增加光照。8移植撫育8.1移植當(dāng)扦插苗長至8cm以上時(shí)可移植到室外培育大苗，春、秋兩季均可移植。將扦插苗木按培養(yǎng)要求以10cm～20cm×20cm～30cm株行距進(jìn)行移植培育，移植后距地面5cm處剪去主莖。8.2撫育管理定期澆水、除草、松土，施肥按NY/T496執(zhí)行，防病蟲，農(nóng)藥使用符合GB/T832