湖南pcr上崗證考試題及答案

一、單項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的基本原理是（）A.基因重組B.核酸分子雜交C.酶切反應(yīng)D.體外酶促合成特異DNA片段答案：D2.在PCR反應(yīng)中，引物的作用是（）A.提供起始的3'-OHB.提供起始的5'-OHC.提供終止信號D.提供模板答案：A3.PCR反應(yīng)體系中，最關(guān)鍵的成分是（）A.dNTPB.引物C.模板D.Taq酶答案：C4.以下哪種物質(zhì)不是PCR反應(yīng)的原料（）A.ATPB.dATPC.dCTPD.dGTP答案：A5.通常PCR反應(yīng)的變性溫度是（）A.90-95℃B.70-75℃C.50-55℃D.30-35℃答案：A6.關(guān)于PCR產(chǎn)物的特異性，下列說法正確的是（）A.只與引物有關(guān)B.只與模板有關(guān)C.與引物和模板都有關(guān)D.與反應(yīng)體系中的酶有關(guān)答案：C7.在進(jìn)行PCR檢測時，防止污染的關(guān)鍵措施不包括（）A.嚴(yán)格分區(qū)操作B.定期清潔儀器設(shè)備C.增加反應(yīng)循環(huán)數(shù)D.使用一次性耗材答案：C8.PCR反應(yīng)中，退火溫度主要取決于（）A.引物的長度和GC含量B.模板的長度和GC含量C.酶的活性D.dNTP的濃度答案：A9.以下哪種情況可能導(dǎo)致PCR假陰性結(jié)果（）A.引物濃度過高B.模板量過多C.反應(yīng)體系中有抑制物D.循環(huán)數(shù)過多答案：C10.用于檢測PCR產(chǎn)物大小的常用方法是（）A.瓊脂糖凝膠電泳B.蛋白質(zhì)印跡法C.酶聯(lián)免疫吸附試驗D.熒光定量PCR答案：A二、多項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的應(yīng)用包括（）A.基因診斷B.基因克隆C.核酸序列分析D.基因表達(dá)研究答案：ABCD2.影響PCR反應(yīng)的因素有（）A.模板質(zhì)量B.引物設(shè)計C.酶的活性D.反應(yīng)溫度和時間答案：ABCD3.以下屬于PCR防污染措施的是（）A.物理分隔實驗室區(qū)域B.采用UNG-dUTP防污染體系C.嚴(yán)格實驗操作規(guī)范D.對實驗環(huán)境進(jìn)行定期監(jiān)測答案：ABCD4.一個良好的PCR引物應(yīng)具備的特點(diǎn)有（）A.特異性高B.長度合適C.GC含量適中D.避免二級結(jié)構(gòu)答案：ABCD5.PCR反應(yīng)中，dNTP的作用包括（）A.提供合成DNA的原料B.影響反應(yīng)的準(zhǔn)確性C.影響反應(yīng)速度D.提供能量答案：ABC6.在PCR檢測中，陽性對照的作用有（）A.驗證實驗體系是否有效B.檢測試劑是否正常C.評估實驗操作是否正確D.確定檢測下限答案：ABC7.下列關(guān)于Taq酶的描述正確的是（）A.具有熱穩(wěn)定性B.催化DNA合成方向為5'→3'C.是一種RNA聚合酶D.活性受鎂離子濃度影響答案：ABD8.以下哪些情況可能需要重新優(yōu)化PCR反應(yīng)條件（）A.出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增B.結(jié)果重復(fù)性差C.檢測靈敏度不夠D.引物二聚體形成較多答案：ABCD9.PCR產(chǎn)物的分析方法有（）A.電泳法B.測序法C.雜交法D.酶切分析法答案：ABCD10.對于PCR實驗室人員的要求包括（）A.經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)B.具備相關(guān)理論知識C.熟練掌握操作技能D.嚴(yán)格遵守實驗室規(guī)范答案：ABCD三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)中，模板可以是DNA也可以是RNA。（）答案：正確2.引物越長，PCR特異性越高。（）答案：錯誤3.Taq酶在PCR反應(yīng)的每個循環(huán)都需要重新加入。（）答案：錯誤4.只要有合適的引物，任何DNA片段都能通過PCR擴(kuò)增。（）答案：錯誤5.PCR反應(yīng)的延伸溫度一般低于退火溫度。（）答案：錯誤6.反應(yīng)體系中dNTP濃度越高，PCR反應(yīng)效果越好。（）答案：錯誤7.在PCR實驗室，不同區(qū)域的工作服可以混穿。（）答案：錯誤8.熒光定量PCR只能檢測DNA。（）答案：錯誤9.引物二聚體的形成會影響PCR反應(yīng)的特異性。（）答案：正確10.PCR反應(yīng)不需要鎂離子參與。（）答案：錯誤四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述PCR技術(shù)的基本步驟。答案：PCR技術(shù)的基本步驟包括變性、退火和延伸。變性是將模板DNA加熱至90-95℃，使雙鏈解開成為單鏈；退火是將溫度降至適宜溫度（一般50-55℃左右，取決于引物），使引物與模板單鏈結(jié)合；延伸是在72℃左右，Taq酶以dNTP為原料，按照模板鏈合成新的DNA鏈。2.如何設(shè)計一個好的PCR引物？答案：設(shè)計好的PCR引物要考慮特異性，避免與非靶序列結(jié)合；長度合適，一般18-25個核苷酸；GC含量適中，40%-60%為宜；避免引物自身形成二級結(jié)構(gòu)；引物之間不能形成二聚體等。3.說出至少三種PCR防污染的方法。答案：物理分隔實驗室為試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)；采用UNG-dUTP防污染體系；使用一次性耗材；嚴(yán)格實驗操作規(guī)范，如避免氣溶膠產(chǎn)生等。4.簡述PCR假陽性結(jié)果產(chǎn)生的原因。答案：PCR假陽性結(jié)果產(chǎn)生的原因包括標(biāo)本間交叉污染、試劑污染、PCR產(chǎn)物污染、氣溶膠污染等。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論P(yáng)CR技術(shù)在疾病診斷中的優(yōu)勢與局限性。答案：優(yōu)勢：特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速簡便，可檢測微量病原體核酸用于早期診斷。局限性：易受污染產(chǎn)生假陽性，對實驗條件和人員要求高，不能區(qū)分死菌和活菌等。2.如何提高PCR反應(yīng)的特異性？答案：優(yōu)化引物設(shè)計，提高引物特異性；調(diào)整退火溫度，合適的退火溫度可提高特異性；減少模板量、酶量和循環(huán)數(shù)等避免非特異性擴(kuò)增。3.在PCR實驗室管理方面，你認(rèn)為最