朔州市中醫(yī)院「干細(xì)胞凍存與復(fù)蘇」技術(shù)規(guī)范考核一、單選題（每題2分，共20題）1.干細(xì)胞凍存過(guò)程中常用的冷凍保護(hù)劑是？A.甘油B.DMSO（二甲基亞砜）C.乙二醇D.乙醇2.干細(xì)胞凍存時(shí)，理想的細(xì)胞活力損失率應(yīng)控制在？A.20%以上B.10%-20%C.5%以下D.30%以上3.朔州市中醫(yī)院干細(xì)胞凍存過(guò)程中，通常采用哪種降溫速率？A.1℃/分鐘B.0.5℃/分鐘C.10℃/分鐘D.5℃/分鐘4.干細(xì)胞復(fù)蘇過(guò)程中，首次解凍應(yīng)使用哪種溫度的培養(yǎng)基？A.37℃B.4℃C.25℃D.0℃5.干細(xì)胞凍存管標(biāo)注應(yīng)包含哪些信息？（多選）A.樣本編號(hào)B.凍存日期C.細(xì)胞類(lèi)型D.冷凍保護(hù)劑濃度6.朔州市中醫(yī)院規(guī)定，干細(xì)胞凍存管的儲(chǔ)存溫度范圍是？A.-20℃B.-80℃C.-40℃D.-100℃7.干細(xì)胞凍存過(guò)程中，細(xì)胞損傷的主要原因是？A.低溫凍傷B.冷凍保護(hù)劑毒性C.復(fù)蘇操作不當(dāng)D.以上都是8.干細(xì)胞凍存管在儲(chǔ)存前需進(jìn)行哪種處理？A.高壓滅菌B.真空干燥C.低溫預(yù)處理D.環(huán)氧乙烷消毒9.朔州市中醫(yī)院干細(xì)胞凍存過(guò)程中，細(xì)胞濃度應(yīng)控制在？A.1×10^6-1×10^8/mLB.1×10^9-1×10^11/mLC.1×10^3-1×10^5/mLD.1×10^12-1×10^14/mL10.干細(xì)胞凍存過(guò)程中，pH值應(yīng)控制在？A.6.5-7.0B.7.0-7.5C.5.5-6.0D.8.0-8.5二、多選題（每題3分，共10題）11.干細(xì)胞凍存過(guò)程中，影響細(xì)胞活力的因素包括？A.冷凍保護(hù)劑濃度B.降溫速率C.凍存溫度D.解凍時(shí)間12.朔州市中醫(yī)院干細(xì)胞凍存操作中，需使用的設(shè)備包括？A.生物安全柜B.超低溫冰箱C.離心機(jī)D.恒溫培養(yǎng)箱13.干細(xì)胞凍存過(guò)程中，細(xì)胞損傷的類(lèi)型包括？A.脂肪變性B.細(xì)胞膜破裂C.代謝紊亂D.DNA損傷14.干細(xì)胞復(fù)蘇過(guò)程中，常見(jiàn)的并發(fā)癥包括？A.細(xì)胞死亡B.細(xì)胞污染C.細(xì)胞活力下降D.冷凍保護(hù)劑殘留15.朔州市中醫(yī)院干細(xì)胞凍存操作規(guī)范中，需遵循的原則包括？A.無(wú)菌操作B.標(biāo)準(zhǔn)化流程C.雙人核對(duì)D.環(huán)境監(jiān)測(cè)16.干細(xì)胞凍存過(guò)程中，常用的冷凍保護(hù)劑組合包括？A.DMSO+培養(yǎng)基B.甘露醇+生理鹽水C.乙二醇+蔗糖D.甘油+PBS17.干細(xì)胞凍存管的儲(chǔ)存條件需滿(mǎn)足？A.恒定低溫B.避光保存C.防震防凍D.定期檢查18.干細(xì)胞凍存過(guò)程中，細(xì)胞活力的評(píng)價(jià)指標(biāo)包括？A.MTT法B.臺(tái)盼藍(lán)染色法C.流式細(xì)胞術(shù)D.番紅染色法19.朔州市中醫(yī)院干細(xì)胞凍存操作中，需記錄的數(shù)據(jù)包括？A.凍存日期B.細(xì)胞濃度C.冷凍保護(hù)劑濃度D.解凍時(shí)間20.干細(xì)胞凍存過(guò)程中，質(zhì)量控制的關(guān)鍵點(diǎn)包括？A.冷凍保護(hù)劑配制B.降溫速率控制C.細(xì)胞計(jì)數(shù)D.凍存管密封性三、判斷題（每題1分，共20題）21.干細(xì)胞凍存過(guò)程中，冷凍保護(hù)劑濃度越高越好。22.朔州市中醫(yī)院干細(xì)胞凍存操作需由兩名以上專(zhuān)業(yè)人員完成。23.干細(xì)胞凍存管可重復(fù)使用。24.干細(xì)胞凍存過(guò)程中，降溫速率應(yīng)均勻一致。25.干細(xì)胞復(fù)蘇后需立即接種培養(yǎng)。26.干細(xì)胞凍存過(guò)程中，細(xì)胞活力損失率低于10%為合格。27.干細(xì)胞凍存管的標(biāo)簽應(yīng)清晰、耐久。28.干細(xì)胞凍存過(guò)程中，pH值應(yīng)控制在7.0-7.5。29.朔州市中醫(yī)院干細(xì)胞凍存操作需定期進(jìn)行環(huán)境檢測(cè)。30.干細(xì)胞凍存過(guò)程中，細(xì)胞污染的主要來(lái)源是操作環(huán)境。31.干細(xì)胞凍存管的儲(chǔ)存溫度應(yīng)穩(wěn)定在-80℃。32.干細(xì)胞凍存過(guò)程中，細(xì)胞濃度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致凍存失敗。33.干細(xì)胞復(fù)蘇后需進(jìn)行細(xì)胞活力檢測(cè)。34.干細(xì)胞凍存管的密封性對(duì)細(xì)胞活力影響不大。35.干細(xì)胞凍存過(guò)程中，冷凍保護(hù)劑需預(yù)冷至-20℃。36.朔州市中醫(yī)院干細(xì)胞凍存操作需遵循GMP標(biāo)準(zhǔn)。37.干細(xì)胞凍存過(guò)程中，細(xì)胞損傷主要發(fā)生在解凍階段。38.干細(xì)胞凍存管的儲(chǔ)存環(huán)境需避光。39.干細(xì)胞凍存過(guò)程中，細(xì)胞活力損失率低于5%為優(yōu)秀。40.干細(xì)胞凍存管的標(biāo)簽需包含樣本編號(hào)、細(xì)胞類(lèi)型等信息。四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共5題）41.簡(jiǎn)述朔州市中醫(yī)院干細(xì)胞凍存操作的基本步驟。42.干細(xì)胞凍存過(guò)程中，如何控制細(xì)胞損傷？43.干細(xì)胞復(fù)蘇過(guò)程中，常見(jiàn)的并發(fā)癥有哪些？如何避免？44.朔州市中醫(yī)院干細(xì)胞凍存操作中，需記錄哪些關(guān)鍵數(shù)據(jù)？45.干細(xì)胞凍存管的儲(chǔ)存條件有哪些要求？五、論述題（每題10分，共2題）46.結(jié)合朔州市中醫(yī)院實(shí)際情況，論述干細(xì)胞凍存與復(fù)蘇技術(shù)的質(zhì)量控制要點(diǎn)。47.分析干細(xì)胞凍存過(guò)程中，影響細(xì)胞活力的關(guān)鍵因素及優(yōu)化措施。答案與解析一、單選題答案與解析1.B解析：DMSO是干細(xì)胞凍存中最常用的冷凍保護(hù)劑，能有效降低細(xì)胞內(nèi)結(jié)冰率，減少細(xì)胞損傷。2.B解析：理想的細(xì)胞活力損失率應(yīng)控制在10%-20%，過(guò)高會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞無(wú)法用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)或治療。3.D解析：朔州市中醫(yī)院干細(xì)胞凍存過(guò)程中，通常采用5℃/分鐘的降溫速率，既能防止細(xì)胞快速結(jié)晶，又能保證冷凍效率。4.A解析：干細(xì)胞復(fù)蘇過(guò)程中，首次解凍應(yīng)使用37℃的培養(yǎng)基，以快速稀釋冷凍保護(hù)劑，減少細(xì)胞損傷。5.A、B、C解析：干細(xì)胞凍存管標(biāo)注應(yīng)包含樣本編號(hào)、凍存日期、細(xì)胞類(lèi)型等信息，冷凍保護(hù)劑濃度可在操作記錄中體現(xiàn)。6.B解析：朔州市中醫(yī)院規(guī)定，干細(xì)胞凍存管的儲(chǔ)存溫度范圍是-80℃，以保證細(xì)胞長(zhǎng)期保存且活力不受影響。7.D解析：干細(xì)胞凍存過(guò)程中，細(xì)胞損傷主要由低溫凍傷、冷凍保護(hù)劑毒性、復(fù)蘇操作不當(dāng)?shù)榷喾N因素引起。8.C解析：干細(xì)胞凍存管在儲(chǔ)存前需進(jìn)行低溫預(yù)處理，以適應(yīng)后續(xù)的快速冷凍和解凍。9.A解析：朔州市中醫(yī)院干細(xì)胞凍存過(guò)程中，細(xì)胞濃度應(yīng)控制在1×10^6-1×10^8/mL，以保證凍存和復(fù)蘇效率。10.A解析：干細(xì)胞凍存過(guò)程中，pH值應(yīng)控制在6.5-7.0，以維持細(xì)胞代謝穩(wěn)定。二、多選題答案與解析11.A、B、C、D解析：冷凍保護(hù)劑濃度、降溫速率、凍存溫度、解凍時(shí)間都會(huì)影響細(xì)胞活力，需嚴(yán)格把控。12.A、B、C、D解析：朔州市中醫(yī)院干細(xì)胞凍存操作中，需使用生物安全柜、超低溫冰箱、離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱等設(shè)備。13.A、B、C、D解析：干細(xì)胞凍存過(guò)程中，細(xì)胞損傷類(lèi)型包括脂肪變性、細(xì)胞膜破裂、代謝紊亂、DNA損傷等。14.A、B、C、D解析：干細(xì)胞復(fù)蘇過(guò)程中，常見(jiàn)并發(fā)癥包括細(xì)胞死亡、細(xì)胞污染、細(xì)胞活力下降、冷凍保護(hù)劑殘留等。15.A、B、C、D解析：朔州市中醫(yī)院干細(xì)胞凍存操作規(guī)范中，需遵循無(wú)菌操作、標(biāo)準(zhǔn)化流程、雙人核對(duì)、環(huán)境監(jiān)測(cè)等原則。16.A、C解析：常用的冷凍保護(hù)劑組合包括DMSO+培養(yǎng)基、甘露醇+生理鹽水。17.A、B、C、D解析：干細(xì)胞凍存管的儲(chǔ)存條件需滿(mǎn)足恒定低溫、避光保存、防震防凍、定期檢查等要求。18.A、B、C解析：干細(xì)胞凍存過(guò)程中，細(xì)胞活力的評(píng)價(jià)指標(biāo)包括MTT法、臺(tái)盼藍(lán)染色法、流式細(xì)胞術(shù)等。19.A、B、C、D解析：朔州市中醫(yī)院干細(xì)胞凍存操作中，需記錄凍存日期、細(xì)胞濃度、冷凍保護(hù)劑濃度、解凍時(shí)間等數(shù)據(jù)。20.A、B、C、D解析：干細(xì)胞凍存過(guò)程中，質(zhì)量控制的關(guān)鍵點(diǎn)包括冷凍保護(hù)劑配制、降溫速率控制、細(xì)胞計(jì)數(shù)、凍存管密封性等。三、判斷題答案與解析21.×解析：冷凍保護(hù)劑濃度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞毒性增加，應(yīng)根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型優(yōu)化濃度。22.√解析：朔州市中醫(yī)院規(guī)定，干細(xì)胞凍存操作需由兩名以上專(zhuān)業(yè)人員完成，確保操作規(guī)范。23.×解析：干細(xì)胞凍存管需一次性使用，不可重復(fù)使用，以避免交叉污染。24.√解析：干細(xì)胞凍存過(guò)程中，降溫速率應(yīng)均勻一致，防止細(xì)胞快速結(jié)晶損傷。25.×解析：干細(xì)胞復(fù)蘇后需在37℃培養(yǎng)箱中孵育30分鐘以上，待冷凍保護(hù)劑完全稀釋后再接種培養(yǎng)。26.√解析：干細(xì)胞凍存過(guò)程中，細(xì)胞活力損失率低于10%為合格，過(guò)高會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞無(wú)法用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)或治療。27.√解析：干細(xì)胞凍存管的標(biāo)簽應(yīng)清晰、耐久，包含樣本編號(hào)、細(xì)胞類(lèi)型等信息。28.√解析：干細(xì)胞凍存過(guò)程中，pH值應(yīng)控制在7.0-7.5，以維持細(xì)胞代謝穩(wěn)定。29.√解析：朔州市中醫(yī)院干細(xì)胞凍存操作需定期進(jìn)行環(huán)境檢測(cè)，確保無(wú)菌條件。30.√解析：干細(xì)胞凍存過(guò)程中，細(xì)胞污染的主要來(lái)源是操作環(huán)境，需嚴(yán)格無(wú)菌操作。31.√解析：朔州市中醫(yī)院規(guī)定，干細(xì)胞凍存管的儲(chǔ)存溫度應(yīng)穩(wěn)定在-80℃，以保證細(xì)胞長(zhǎng)期保存且活力不受影響。32.√解析：干細(xì)胞凍存過(guò)程中，細(xì)胞濃度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致凍存失敗，需優(yōu)化細(xì)胞濃度。33.√解析：干細(xì)胞復(fù)蘇后需進(jìn)行細(xì)胞活力檢測(cè)，確保細(xì)胞質(zhì)量。34.×解析：干細(xì)胞凍存管的密封性對(duì)細(xì)胞活力影響很大，需確保無(wú)泄漏。35.×解析：干細(xì)胞凍存過(guò)程中，冷凍保護(hù)劑需預(yù)冷至-80℃，以減少細(xì)胞損傷。36.√解析：朔州市中醫(yī)院干細(xì)胞凍存操作需遵循GMP標(biāo)準(zhǔn)，確保操作規(guī)范。37.√解析：干細(xì)胞凍存過(guò)程中，細(xì)胞損傷主要發(fā)生在解凍階段，需嚴(yán)格把控。38.√解析：干細(xì)胞凍存管的儲(chǔ)存環(huán)境需避光，以防止冷凍保護(hù)劑降解。39.√解析：干細(xì)胞凍存過(guò)程中，細(xì)胞活力損失率低于5%為優(yōu)秀，表明操作規(guī)范。40.√解析：干細(xì)胞凍存管的標(biāo)簽需包含樣本編號(hào)、細(xì)胞類(lèi)型等信息，以便追溯。四、簡(jiǎn)答題答案與解析41.朔州市中醫(yī)院干細(xì)胞凍存操作的基本步驟-細(xì)胞準(zhǔn)備：計(jì)數(shù)細(xì)胞濃度，調(diào)整細(xì)胞密度至1×10^6-1×10^8/mL。-冷凍保護(hù)劑配制：按比例加入DMSO等冷凍保護(hù)劑，混勻。-凍存液制備：將細(xì)胞與冷凍保護(hù)劑混合，調(diào)整pH值至6.5-7.0。-快速冷凍：將凍存管置于-80℃凍存箱中，首次降溫速率控制在5℃/分鐘。-長(zhǎng)期儲(chǔ)存：將凍存管轉(zhuǎn)移至-80℃超低溫冰箱中儲(chǔ)存。42.干細(xì)胞凍存過(guò)程中，如何控制細(xì)胞損傷-優(yōu)化冷凍保護(hù)劑濃度：根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型選擇合適的DMSO等冷凍保護(hù)劑濃度。-控制降溫速率：采用5℃/分鐘的降溫速率，防止細(xì)胞快速結(jié)晶損傷。-避免細(xì)胞污染：嚴(yán)格無(wú)菌操作，使用無(wú)菌設(shè)備。-預(yù)冷冷凍保護(hù)劑：將冷凍保護(hù)劑預(yù)冷至-80℃，減少細(xì)胞損傷。43.干細(xì)胞復(fù)蘇過(guò)程中，常見(jiàn)的并發(fā)癥及避免措施-細(xì)胞死亡：首次解凍使用37℃培養(yǎng)基，快速稀釋冷凍保護(hù)劑。-細(xì)胞污染：嚴(yán)格無(wú)菌操作，使用無(wú)菌設(shè)備。-細(xì)胞活力下降：優(yōu)化復(fù)蘇流程，減少操作時(shí)間。-冷凍保護(hù)劑殘留：充分洗滌細(xì)胞，去除殘留冷凍保護(hù)劑。44.朔州市中醫(yī)院干細(xì)胞凍存操作中，需記錄的關(guān)鍵數(shù)據(jù)-樣本編號(hào)、細(xì)胞類(lèi)型、凍存日期、冷凍保護(hù)劑濃度、降溫速率、儲(chǔ)存溫度、解凍時(shí)間、細(xì)胞活力檢測(cè)結(jié)果等。45.干細(xì)胞凍存管的儲(chǔ)存條件要求-恒定低溫：儲(chǔ)存溫度應(yīng)穩(wěn)定在-80℃，避免溫度波動(dòng)。-避光保存：冷凍保護(hù)劑在光照下易降解，需避光保存。-防震防凍：避免凍存管碰撞或凍裂，導(dǎo)致細(xì)胞損傷。-定期檢查：定期檢查凍存管密封性及儲(chǔ)存溫度。五、論述題答案與解析46.結(jié)合朔州市中醫(yī)院實(shí)際情況，論述干細(xì)胞凍存與復(fù)蘇技術(shù)的質(zhì)量控制要點(diǎn)-朔州市中醫(yī)院干細(xì)胞凍存與復(fù)蘇技術(shù)的質(zhì)量控制需從以下幾個(gè)方面進(jìn)行：1.操作規(guī)范：遵循GMP標(biāo)準(zhǔn)，由專(zhuān)業(yè)人員進(jìn)行操作，確保無(wú)菌條件。2.設(shè)備管理：定期校準(zhǔn)超低溫冰箱、生物安全柜等設(shè)備，確保運(yùn)行穩(wěn)定。3.細(xì)胞質(zhì)量：優(yōu)化細(xì)胞濃度、冷凍保護(hù)劑濃度等參數(shù)，減少細(xì)胞損傷。4.數(shù)據(jù)記錄：詳細(xì)記錄操作過(guò)程及關(guān)鍵數(shù)據(jù)，便于追溯和分析。5.環(huán)境監(jiān)測(cè)：定期檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境，確保無(wú)污染風(fēng)險(xiǎn)。6.應(yīng)急預(yù)案：制定應(yīng)急處理方案，應(yīng)對(duì)突發(fā)問(wèn)題。47.分析干細(xì)胞凍存過(guò)程中，影響細(xì)胞活力的關(guān)鍵因素及優(yōu)化措施-干細(xì)胞凍存過(guò)程中，影響細(xì)胞活力的關(guān)鍵因素包括：1.冷凍保護(hù)劑濃度：過(guò)高或過(guò)低都會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞損傷，需根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型優(yōu)化濃度。2.降溫速率：