DB2301哈爾濱市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由中國(guó)科學(xué)院東北地理與農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所農(nóng)業(yè)技術(shù)中1高效大豆根瘤菌菌株篩選技術(shù)規(guī)程GB15618土壤環(huán)境質(zhì)量農(nóng)用地土壤污染風(fēng)險(xiǎn)管控標(biāo)準(zhǔn)NY/T1536微生物肥料田間試驗(yàn)技術(shù)規(guī)程及肥效評(píng)價(jià)指南NY/T1735根瘤菌生產(chǎn)菌株質(zhì)量評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范存活能力強(qiáng)、具有高效固氮能力、競(jìng)爭(zhēng)結(jié)瘤能力，接種后使大豆顯著增產(chǎn)的大豆根瘤菌菌株。凈后，選取4至6個(gè)新鮮的顆粒飽滿、深紅色的大2將采集的根瘤用0.1%升汞溶液表面滅菌3min，無(wú)菌水沖洗8次~10次。在無(wú)菌條件下，用鑷子將根瘤壓碎，擠出汁液涂布在根瘤菌瓊脂培養(yǎng)基上，26℃~28℃暗培養(yǎng)，快生菌培養(yǎng)3d~4d，慢生菌培養(yǎng)5d~7d，將長(zhǎng)出的單菌落采用劃線培養(yǎng)法分離。根瘤菌瓊脂培養(yǎng)基配方應(yīng)符合NY410中的規(guī)定?？沙醪酱_定為大豆根瘤菌，菌體和菌落特征應(yīng)符合NY4瘤菌液體培養(yǎng)基中，在180r?min-1和28℃的恒溫?fù)u床中培大豆接種驗(yàn)證：選擇當(dāng)?shù)刂鲗?dǎo)大豆品種。大豆種子表面消毒后催芽，種芽長(zhǎng)1mm~2mm時(shí)用純菌株接種液浸泡1min~2min，然后移植到試管根瘤菌瓊脂斜面上。設(shè)不接種的陰性對(duì)照和接種已知菌的陽(yáng)性對(duì)照，每個(gè)處理重復(fù)≥3次，在20℃~25℃下培養(yǎng)，光強(qiáng)7000lx~8000lx，每天光照時(shí)間12h~13h。10d~20d后觀察大豆結(jié)瘤情況。如不接種的陰性對(duì)照結(jié)瘤，試驗(yàn)需要重試驗(yàn)沒(méi)有污染，在10-5稀釋度中70%植株結(jié)有效瘤，用刀片將根瘤切開(kāi)，若根瘤內(nèi)部為粉紅色、紅色或褐色為有效根瘤，白色或綠色為無(wú)效根瘤，即確定接種菌為大豆根瘤菌蛭石采用間歇性高壓濕熱滅菌2次，每次121℃1h，然后置于陰涼通風(fēng)處2d~3d。盆缽用5%次氯酸鈉或0.1%高錳酸鉀溶液消毒，并用無(wú)菌水沖洗，將滅菌蛭石裝入盆缽中，澆適量無(wú)菌水備用。選擇當(dāng)?shù)刂鲗?dǎo)大豆品種。將4.2中確定的大豆根瘤菌菌株，制備成菌體數(shù)量≥1.0×10-9cfu/mL的接種液，證（待測(cè)根瘤菌接種將已表面滅菌的大豆種子在待測(cè)根瘤菌接種液中浸泡1min~2min，移植到滅菌后的蛭石中。然后在20℃~25℃下培養(yǎng)，光強(qiáng)7000lx~8000lx，每天光照時(shí)間12h~13h。每盆定植1株~2株大豆，不施肥或只施無(wú)氮營(yíng)養(yǎng)液。5.3大豆根瘤菌與大豆品種的共生匹配性和固氮量。植株含氮量測(cè)定及其增加量的計(jì)算應(yīng)執(zhí)行NY/T比，收獲大豆植株總氮量增加≥20%，統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)達(dá)到顯著水平，確定3個(gè)重復(fù)，