宿遷市中醫(yī)院原位雜交技術(shù)考核一、單選題（每題2分，共20題）1.原位雜交技術(shù)中，標記探針最常用的放射性同位素是？A.32PB.3HC.3?SD.3?SiE.3?Cl2.在原位雜交實驗中，雜交后洗脫探針的目的是？A.增加探針與靶序列的結(jié)合B.去除未結(jié)合的探針C.增強雜交信號D.使探針變性E.提高雜交效率3.宿遷市中醫(yī)院常用的原位雜交固定液是？A.甲醇-冰醋酸混合液（3:1）B.乙醇-冰醋酸混合液（5:1）C.丙酮-冰醋酸混合液（2:1）D.乙醇-甲醇混合液（4:1）E.乙酸-乙醇混合液（1:2）4.原位雜交實驗中，預(yù)雜交溶液通常包含哪些成分？A.探針、雜交緩沖液、RNA酶B.探針、雜交緩沖液、DNaseC.探針、阻斷劑、雜交緩沖液D.探針、RNA酶、阻斷劑E.探針、DNase、阻斷劑5.原位雜交實驗中，雜交溫度的選擇主要依據(jù)？A.探針的長度B.樣本的類型C.實驗?zāi)康腄.以上都是E.以上都不是6.宿遷市中醫(yī)院病理科常用的原位雜交信號檢測方法是？A.免疫熒光法B.免疫組化法C.放射自顯影法D.化學(xué)發(fā)光法E.以上都是7.原位雜交實驗中，封閉未結(jié)合位點的主要目的是？A.增強雜交信號B.防止非特異性結(jié)合C.去除探針D.提高洗脫效率E.增加探針穩(wěn)定性8.原位雜交實驗中，探針的標記方法不包括？A.放射性標記B.生物素標記C.地高辛標記D.苂光標記E.化學(xué)發(fā)光標記9.宿遷市中醫(yī)院原位雜交實驗中，常用的染色劑是？A.蘇木素B.吉姆薩染色劑C.DAB顯色劑D.鈾核黃素染色劑E.以上都是10.原位雜交實驗中，雜交緩沖液的主要作用是？A.提供離子環(huán)境B.保護探針結(jié)構(gòu)C.促進探針與靶序列結(jié)合D.以上都是E.以上都不是二、多選題（每題3分，共10題）1.原位雜交技術(shù)的優(yōu)勢包括？A.高特異性B.高靈敏度C.可在組織切片上檢測基因表達D.操作簡單E.可重復(fù)性強2.宿遷市中醫(yī)院原位雜交實驗中，常用的阻斷劑有？A.50%蔗糖溶液B.100%乙醇C.50%福爾馬林溶液D.1%牛血清白蛋白E.0.1MPBS緩沖液3.原位雜交實驗中，影響雜交效率的因素包括？A.探針濃度B.雜交溫度C.樣本固定方式D.雜交時間E.洗脫條件4.原位雜交實驗中，常用的固定方法包括？A.甲醇-冰醋酸混合液固定B.乙醇-冰醋酸混合液固定C.甲醛固定D.戊二醛固定E.丙酮固定5.宿遷市中醫(yī)院病理科常用的原位雜交檢測靶序列是？A.DNAB.RNAC.蛋白質(zhì)D.脂質(zhì)E.糖類6.原位雜交實驗中，雜交后的洗脫條件包括？A.溫度B.洗脫液濃度C.洗脫時間D.洗脫次數(shù)E.洗脫緩沖液類型7.原位雜交實驗中，常用的熒光標記探針有？A.熒光素B.地高辛C.生物素D.Cy3E.Cy58.宿遷市中醫(yī)院原位雜交實驗中，常用的組織處理方法包括？A.固定B.脫水C.透明D.包埋E.切片9.原位雜交實驗中，常用的信號放大方法包括？A.免疫熒光放大B.APA法C.PAP法D.直接熒光法E.放射自顯影法10.原位雜交技術(shù)的局限性包括？A.操作復(fù)雜B.耗時較長C.信號不穩(wěn)定D.特異性較低E.適用于所有樣本類型三、判斷題（每題2分，共10題）1.原位雜交技術(shù)可以檢測活細胞內(nèi)的基因表達。（×）2.宿遷市中醫(yī)院病理科常用的原位雜交探針是放射性同位素標記的。（√）3.原位雜交實驗中，雜交溫度越高，雜交效率越高。（×）4.原位雜交技術(shù)可以用于檢測病毒基因組。（√）5.原位雜交實驗中，探針的標記方法只有放射性標記一種。（×）6.宿遷市中醫(yī)院原位雜交實驗中，常用的染色劑是蘇木素。（×）7.原位雜交技術(shù)可以檢測組織切片中的RNA表達。（√）8.原位雜交實驗中，雜交緩沖液的主要成分是SSC溶液。（√）9.原位雜交技術(shù)可以用于檢測細胞外的基因表達。（×）10.宿遷市中醫(yī)院病理科常用的原位雜交信號檢測方法是免疫熒光法。（√）四、簡答題（每題5分，共5題）1.簡述原位雜交技術(shù)的原理。2.宿遷市中醫(yī)院原位雜交實驗中，常用的固定液有哪些？其作用是什么？3.原位雜交實驗中，如何提高雜交信號的特異性？4.原位雜交實驗中，常用的熒光標記探針有哪些？其優(yōu)缺點是什么？5.原位雜交技術(shù)在醫(yī)學(xué)診斷中的主要應(yīng)用有哪些？五、論述題（每題10分，共2題）1.結(jié)合宿遷市中醫(yī)院的實際情況，論述原位雜交技術(shù)在病理診斷中的意義。2.比較放射性與非放射性探針在原位雜交實驗中的優(yōu)缺點，并說明宿遷市中醫(yī)院應(yīng)如何選擇探針類型。答案與解析一、單選題答案與解析1.A放射性同位素標記的探針最常用的是32P，因其半衰期適中、靈敏度高且易于檢測。2.B洗脫探針的目的是去除未結(jié)合的探針，避免非特異性信號干擾結(jié)果。3.A宿遷市中醫(yī)院常用的原位雜交固定液是甲醇-冰醋酸混合液（3:1），能有效固定細胞結(jié)構(gòu)并保持核酸完整性。4.C預(yù)雜交溶液通常包含阻斷劑（如鮭魚精DNA）以減少非特異性結(jié)合。5.D雜交溫度需根據(jù)探針長度、樣本類型和實驗?zāi)康木C合選擇。6.C宿遷市中醫(yī)院病理科常用放射自顯影法檢測放射性探針信號。7.B封閉未結(jié)合位點可避免非特異性結(jié)合，提高特異性。8.E化學(xué)發(fā)光標記不屬于原位雜交探針的標記方法。9.D鈾核黃素染色劑常用于熒光原位雜交（FISH）的信號檢測。10.D雜交緩沖液提供離子環(huán)境、保護探針結(jié)構(gòu)并促進結(jié)合。二、多選題答案與解析1.A、B、C原位雜交技術(shù)具有高特異性、高靈敏度和組織原位檢測能力。2.D、E常用的阻斷劑包括1%牛血清白蛋白和0.1MPBS緩沖液。3.A、B、C、D、E影響雜交效率的因素包括探針濃度、雜交溫度、樣本固定方式、雜交時間和洗脫條件。4.A、B、C、D常用的固定方法包括甲醇-冰醋酸、乙醇-冰醋酸、甲醛和戊二醛固定。5.A、B原位雜交檢測靶序列主要是DNA和RNA。6.A、B、C洗脫條件包括溫度、洗脫液濃度和時間。7.A、D、E常用的熒光標記探針包括熒光素、Cy3和Cy5。8.A、B、C、D常用的組織處理方法包括固定、脫水、透明和包埋。9.A、B、C常用的信號放大方法包括免疫熒光放大、APA法和PAP法。10.A、B、C原位雜交技術(shù)的局限性包括操作復(fù)雜、耗時較長和信號不穩(wěn)定。三、判斷題答案與解析1.×原位雜交技術(shù)通常需要固定樣本，活細胞檢測需采用其他方法。2.√宿遷市中醫(yī)院病理科常用放射性探針（如32P）。3.×雜交溫度過高可能導(dǎo)致探針變性，降低效率。4.√原位雜交可檢測病毒基因組。5.×探針標記方法包括放射性、熒光和生物素等。6.×常用染色劑是鈾核黃素，蘇木素用于常規(guī)染色。7.√原位雜交可檢測RNA表達（如FISH）。8.√雜交緩沖液常用SSC溶液。9.×原位雜交需固定樣本，無法檢測細胞外基因表達。10.√宿遷市中醫(yī)院常用免疫熒光法檢測熒光信號。四、簡答題答案與解析1.原位雜交技術(shù)原理：利用標記的核酸探針（DNA或RNA）與組織切片中的靶序列（DNA或RNA）互補結(jié)合，通過檢測探針信號（如熒光或放射性）確定靶序列的位置和分布。2.固定液及作用：甲醇-冰醋酸（3:1）和乙醇-冰醋酸（5:1）是常用固定液，作用是固定細胞結(jié)構(gòu)、保存核酸完整性并增強探針結(jié)合。3.提高雜交信號特異性：優(yōu)化探針設(shè)計、使用特異性阻斷劑（如鮭魚精DNA）、提高探針濃度、選擇合適的雜交條件（溫度、時間）等。4.熒光標記探針及優(yōu)缺點：熒光素（高靈敏度但易淬滅）、Cy3/Cy5（穩(wěn)定性好但成本高）。5.醫(yī)學(xué)診斷應(yīng)用：腫瘤基因檢測、病原體檢測、基因表達研