本文件描述了青稞苗和皮大麥苗及其制品中總黃酮含量測(cè)定的分光光度法。本文件適用于青稞苗和皮大麥苗及其固體制品中含量不低于0.0060%以及液體制品中含量不低于0.00060%的總黃酮含量測(cè)定。僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和實(shí)驗(yàn)方法3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。青稞苗制品hullessbarleys以青稞苗為主要原料，添加或不添加其它的輔料以及食品添加劑，經(jīng)加工而成的產(chǎn)品。以皮大麥苗為主要原料，添加或不添加其它的輔料以及食品添加劑，經(jīng)加工而成的產(chǎn)品。4原理與皂草黃苷標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行比較，對(duì)試樣中總黃酮含量進(jìn)行定量測(cè)定。5.1試劑工25.2.1乙醇溶液(60%)5.2.2三乙胺溶液(1%)移取1mL三乙胺(5.1.2)至100mL容量瓶，加水定容至刻度，搖勻。皂草黃苷標(biāo)準(zhǔn)品(C?H??O,CAS號(hào)：20310-89-8):純度≥98.0%。準(zhǔn)確稱(chēng)取12.5mg(精確至0.00001g)皂草黃苷標(biāo)準(zhǔn)品(5.3),用無(wú)水乙醇(5.1.1)超聲溶解準(zhǔn)確移取2.00mL皂草黃苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(500μg/mL),用乙醇溶液(60%)(5.2.1)定容至10πL,6.1分析天平：感量0.001g、0.0001g和0.00001g。6.7電熱鼓風(fēng)干燥箱：溫度40℃~303將青稞苗和皮大麥苗置60℃電熱鼓風(fēng)干燥箱(6.7)中烘干至恒重，記錄水分含量。取有代表性烘干試樣20g～50g,粉碎機(jī)(6.5)粉碎后，過(guò)不銹鋼金屬篩(6.6),置干燥器中常溫密封避光保存，待用。取有代表性試樣，過(guò)不銹鋼金屬篩(6.6),必要時(shí)經(jīng)粉碎后再過(guò)篩。對(duì)于粘性高無(wú)法過(guò)篩的樣品，可不過(guò)篩，但應(yīng)保證樣品粉碎均勻且滿足提取要求。常溫密封避光保存。7.2試樣提取稱(chēng)取固體試樣0.5g(精確至0.0001g),置于150mL磨口三角瓶中，準(zhǔn)確加入30mL60%乙醇溶液(5.2.1),稱(chēng)定質(zhì)量，90℃回流45min,冷卻至室溫，用60%乙醇溶液(5.2.1)補(bǔ)足質(zhì)量，搖勻，8000r/min離心5min,取上清液稱(chēng)取混勻的液體試樣10g(精確至0.001g),置于50mL容量瓶中，加入15mL無(wú)水乙醇(5.1.1),超聲30min,冷卻至室溫，用無(wú)水乙醇(5.1.1)稀釋至刻度，搖勻，10000r/min離心5min,取上清液待用。7.3標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制移取100μg/mL的皂草黃苷標(biāo)準(zhǔn)中間液(5.4.2)0mL、0.05mL、0.1mL、0.3mL、0.5mL、0.7mL于25mL具塞試管中，加60%乙醇補(bǔ)至2.5mL,搖勻，加1%三乙胺2.5mL搖勻，放置30min,得作液，以濃度為0的工作液作為空白參比，在398nm處測(cè)定吸光度，以皂草黃苷質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。分別移取相同體積的2份樣品提取液(7.2)適量(對(duì)于高含量的樣品，可用60%乙醇溶液(5.2.1)適當(dāng)稀釋后再移取),置于25mL具塞試管中，一份用作樣品空白試驗(yàn)，加60%乙醇補(bǔ)至2.5mL,搖勻，再加2.5mL水，搖勻，放置30min;另一份作為樣品測(cè)試液，加入60%乙醇補(bǔ)至2.5mL,搖勻，再加1%三乙胺2.5mL搖勻，放置30min,以樣品空白作為參比，于398nm處測(cè)定吸光度。8結(jié)果計(jì)算和表述試樣中總黃酮含量按公式(1)計(jì)算，計(jì)算結(jié)果保留3位有效數(shù)字：4式中：X-—試樣中總黃酮的含量(以皂草黃苷計(jì)),單位為克每一百克(g/100g);c—一標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣液中總黃酮的質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升(μg/πL);5-—試樣顯色后的體積；V-一用來(lái)顯色移取的試樣溶液體積，單位為毫升(mL);m—一稱(chēng)取試樣的質(zhì)量，單位為克(g