DB63青海省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件起草單位：青海省動物疫病預(yù)防控制中心，貴德縣動物疫病預(yù)防控1無漿體病防控技術(shù)規(guī)范NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運輸技術(shù)規(guī)范無漿體（Anaplasma），隸屬于立克次體目（Ri（Anaplasma），是通過蜱等吸血昆蟲傳播的一類專性細(xì)胞內(nèi)寄生病原體，其主要4病原2色陰性，姬姆薩（Giemsa）染色呈紫紅色，在宿主紅細(xì)胞內(nèi)寄生時呈單個或多個存在，常位于紅細(xì)胞5.2傳播途徑主要是通過媒介昆蟲叮咬動物皮膚感染。媒介昆蟲主要是蜱，還包括牛虻、蠅和蚊等多種吸血昆蟲。被污染且消毒不徹底的手術(shù)器械、注射器、針頭等也可機(jī)械性傳播潛伏期為20d～30d。病畜體溫升高至40℃~42℃、衰弱無力、貧血、黃疸、萎頓、厭食、消瘦、根據(jù)流行病學(xué)、臨床癥狀、病理剖檢變化做出8.2.1.1采集可疑病畜靜脈血制作血涂片，姬姆薩染色紅細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)單個或多個無漿體，對紅細(xì)胞的8.2.1.2血液檢查發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞總數(shù)減少，血紅蛋白和紅細(xì)胞比容降無菌抗凝管采集疑似患病畜血液1ml，4℃保存，立即3將蜱浸泡于75%酒精，15min，1倍磷酸鹽緩沖液或0.9%NaCl溶液洗3次，置于干凈的濾紙上吸水緩沖液250μL研磨至勻漿狀，4℃保存?zhèn)溆?。血?200μL)無需處理可緩沖液、1倍Tris-EDTA緩沖液配置方取上述樣本的勻漿液或血液樣本200μL加入200μLDNA提取液充分混勻，沸水浴8min(誤差不超過1min)，1200r/min離心10min，取上清作為模板備用?；虬凑丈唐坊⒘緿NA提取試劑盒說明書操作提取DNA，保存于-20℃?zhèn)溆谩NA提取9綜合防控9.1.1飼養(yǎng)管理9.1.2消毒滅蜱在蜱活躍季節(jié)，對畜群體表、圈舍及圈舍周圍環(huán)境定期進(jìn)行消毒滅蜱，消毒滅蜱方法見附9.1.3調(diào)運管理調(diào)運動物時應(yīng)對該病及其體表可能存在的傳播媒介進(jìn)行檢查，排除4A.1.2向燒杯中加入約800ml的去離子水，用玻璃棒攪拌或使用磁力攪拌器攪拌，使藥品完全溶解；A.1.3調(diào)節(jié)pH值至7.2-7.A.1.4將溶液定容至1000ml后，高溫高壓滅菌，室溫保存，備用。A.2.1取1MTris-HClBufferPH=8.0，5ml和0.5MEDTA，PH=8.0，1ml；A.2.3將溶液定容到500ml后，高溫高壓滅菌，室溫保存，備用。A.3DNA提取液A.3.1配制提取液之前，先配制母液母液（滅菌）：1MTris-HCl(12.11gTris-HCl+ddH2O至10EDTA-Na2.2H2O(37.22g+ddH2O至200ml，用NaOHA.3.2提取液配方MNaCl28ml，PVP1g，β-巰基乙醇1ml，加雙蒸水定容至100ml，備先配制50倍Tris-乙酸-EDTA緩沖液，用時稀釋成1倍工作液。50倍Tris-乙酸-EDTA緩沖液的配制方法為：取Tris242g，EDTAmL的醋酸，充分?jǐn)嚢?，加去離子水將溶液定容至1L后，室溫保存；1倍Tris-乙酸-EDTA緩沖液，取50倍Tris-乙酸-EDTA緩沖液20ml，加ddH2O定容至1L，備用。5PCR擴(kuò)增rpoBgeneAna-rpoBR制備1%瓊脂糖凝膠，將核酸擴(kuò)增產(chǎn)物及DNAMaker加入膠孔，將凝膠放入電泳槽中，加入足量的16陰性對照、空白對照未出現(xiàn)條帶，陽性對照在525bp有擴(kuò)增條帶增產(chǎn)物電泳檢測結(jié)果未出現(xiàn)預(yù)期大小的擴(kuò)增條帶，則判定該檢測樣本的PCR檢測結(jié)果為陰性；如待檢樣品PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳檢測出現(xiàn)525bp的擴(kuò)增條帶，則判定該檢測樣本的PCR檢測結(jié)果為7消毒滅蜱8//生素C注射液／內(nèi)服氰碘柳胺鈉和阿維菌和阿維菌素）1次。維菌素3mg。9[1]Dahmani,M.,Davoust,B.,Rousseau,F.,Raoult,D.,Fenollar,F.,Mediannikov,O.,2017.NaturinfectioninRhipicephalusbursatickscollectedfromsheepintheFrenchBas[2]He,Y.,Chen,W.,MLi,Y.(2021).MoleculardetectionofAnaplasmaspp.,Babesiaspp.andTheileriaspand